動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒說明書

磁珠法動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒磁珠法動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒MagBeads Tissues Gen DNA Extraction Kit【目 錄 號】TGDE-5005、TGDE-5030【運(yùn)輸條件】225；【保存條件】磁珠懸浮液 28，其它組分室溫保存；【試劑盒組成】Kit Component試劑盒組成TGDE-5005（50T）TGDE-5030（300T） TGDE-Buffer 1裂解液 120 mL120 mL TGDE-Buffer 2裂解液 210 mL60 mL TGDE Magnetic Beads磁珠懸浮液5 mL30 mL Wash Buffer清洗液35 mL210 mL Dealcohol Buffer 除醇液20mL120mL Elute Buffer洗脫液5 mL30 mL【注意事項(xiàng)】1. 磁珠懸浮液嚴(yán)禁反復(fù)凍融和離心，使用前請充分混勻；2. 使用前請檢查裂解液1和裂解液2是否出現(xiàn)結(jié)晶，如有結(jié)晶請置于65水浴重新溶解；3. 在使用本試劑盒前，請用戶自配80%乙醇；4. 如需去除RNA請自備RNase A溶液（100mg/mL, 分散液10mMTris-HCl, 1mMEDTA, pH值8.0）；5. 本操作指南經(jīng)本公司反復(fù)驗(yàn)證，使用前請仔細(xì)閱讀，并且按照操作指南的建議操作?！井a(chǎn)品簡介】本產(chǎn)品適用于從各種動(dòng)物組織以或者細(xì)胞樣本中提取基因組DNA。試劑盒采用具有獨(dú)特分離作用的納米磁珠和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)。特殊技術(shù)包埋的納米磁珠在特定條件下對核酸具有極強(qiáng)的親和力，而當(dāng)條件改變時(shí)可以釋放所吸附的核酸，從而達(dá)到快速分離純化核酸的目的。本試劑盒提取所得基因組DNA產(chǎn)物得量高、純度好，適用于各種下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，如：酶切、PCR、QPCR、文庫構(gòu)建、Southern 雜交、芯片檢測和高通量測序等。本試劑盒可配合核自動(dòng)化酸提取儀或工作站使用，實(shí)現(xiàn)高通量操作。【試劑盒說明】組織樣本類型樣本量（mg）核酸得量（g）動(dòng)物哺乳動(dòng)物腦3520-30 心臟3520-30肝臟3530-50脾臟3550-70腎3530-50肺3550-70肌肉組織555-15毛發(fā)250根0.1-3其它組織魚類555-15蝦類555-15貝類5530-60【自備儀器、耗材及試劑】儀器自動(dòng)版研缽（或組織研磨機(jī)、勻漿機(jī)）、英芮誠ETP-300型全自動(dòng)核酸提取儀、核酸提取儀配套用磁棒套、水浴鍋或金屬浴、渦旋振蕩儀、96孔方孔圓底板、80%乙醇、異丙醇、液氮。手動(dòng)版研缽（或組織研磨機(jī)、勻漿機(jī)）、水浴鍋或金屬浴、渦旋振蕩儀、真空干燥箱、80%乙醇、異丙醇、2.0mL離心管、離心管配套用磁力架、液氮。1【儀器自動(dòng)版操作步驟】本操作以英芮誠ETP-300型全自動(dòng)核酸提取儀為例，同步可完成32個(gè)樣本的提取。1 準(zhǔn)備96孔板參照下表向96孔板各孔位中分別加入相應(yīng)試劑：樣本孔位1、72、83、94、105、116、12試劑磁珠懸浮液80L清洗液600L裂解液2 200L異丙醇 300L80%乙醇600L80%乙醇600L除醇液400L洗脫液100L 注：1）每次吸取磁珠懸浮液前盡量搖晃均勻；2）為提高效率建議使用排槍。2 樣本前處理組織樣本：取適量組織樣本，液氮研磨至粉末狀。盡可能轉(zhuǎn)移至2.0mL離心管中，加入400L裂解液1，渦旋振蕩13min，至組織粉末呈云霧狀；注：針對毛發(fā)樣本，可剪除毛發(fā)根部，毛干部分剪成15mm長度。細(xì)胞樣本：用離心管收集組織細(xì)胞（細(xì)胞個(gè)數(shù)：5*1015*107），PBS清洗2次，向收集好的細(xì)胞中加入400L裂解液1重懸細(xì)胞，渦旋振蕩13min。3 樣本裂解將離心管置于65水浴鍋中溫浴15min，每隔5min顛倒混勻一次。結(jié)束后將離心管12000rpm室溫（勿低于15）離心5min，待用。注：如需去除RNA，請額外加入5L RNase A。4 上機(jī)提取將裂解完畢離心管中所有上清液轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的96孔板第2、8列孔位，然后將96孔板放入ETP-300型核酸提取儀中，插入磁棒套，打開儀器操作軟件，調(diào)用“動(dòng)物組織DNA提取實(shí)驗(yàn)方法”程序，單擊“運(yùn)行”執(zhí)行程序。5 核酸轉(zhuǎn)移程序運(yùn)行完畢，取下96孔板，將洗脫液轉(zhuǎn)移至干凈的離心管或者PCR板中，做好標(biāo)記，-20保存?zhèn)溆茫藭r(shí)可以棄去96孔板。“動(dòng)物組織DNA提取實(shí)驗(yàn)方法”程序各參數(shù)設(shè)置如下，如果原程序不慎丟失，可自行設(shè)定：步驟編號孔位運(yùn)行類型振蕩時(shí)間(秒)分離時(shí)間(秒)揮發(fā)時(shí)間(秒)振蕩幅度振蕩 強(qiáng)度一組溫度()二組溫度()三組溫度()四組溫度()11磁珠轉(zhuǎn)移2205強(qiáng)000022DNA結(jié)合240204中000031清洗1180205強(qiáng)000042DNA結(jié)合480204中000051清洗1180205強(qiáng)00006380%乙醇180205強(qiáng)00007480%乙醇120205強(qiáng)000085除醇0203強(qiáng)000096洗脫3602002中60606060103棄磁珠10005強(qiáng)0000【手動(dòng)版操作步驟】1. 樣本前處理、裂解參考【儀器自動(dòng)版操作步驟】步驟2、步驟3操作。2. 核酸結(jié)合將裂解完畢離心管中所有上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入80L磁珠懸浮液以及300L異丙醇，顛倒混勻，渦旋振蕩6min，靜置2min。3. 磁性分離將離心管置于磁力架上靜置20s至磁珠吸附完全；如果離心管內(nèi)蓋有磁珠，可保持離心管在磁力架上，整體上下顛倒23次至磁珠被完全吸附。保持離心管固定于磁力架上，用移液槍吸棄上清液，期間避免接觸磁珠。4. 清洗 1) 將離心管從磁力架上取下，加入600L清洗液，高速渦旋振蕩1min，重新置于磁力架上磁性分離（參考步驟4操作）。2) 使用600L 80%乙醇，參考步驟5(1)操作2遍。5. 除醇除醇（如下方法任選其一）方法1：將除盡上清液后的離心管置于磁力架上，一同放入45真空干燥箱中，干燥約10min至無明顯乙醇味。注：亦可置于通風(fēng)櫥通風(fēng)或電風(fēng)扇直吹約10min，具體時(shí)間以磁珠干透無乙醇味為準(zhǔn)。方法2：將除盡上清后的離心管保持在磁力架上，加入400L除醇液，快速手搖潤洗吸附的磁珠表面，之后快速棄去除醇液。注：該步驟操作時(shí)間不宜過長，且不可吹散磁珠，否則影響核酸得量。6. 洗脫取出離心管，加入100L洗脫液，用移液槍吹散磁珠，65溫浴10min，每隔3min渦旋振蕩30s，確保磁珠與核酸洗脫完全。7. 核酸轉(zhuǎn)移4洗脫完畢后，