GB 5413.18-2010發(fā)布稿 嬰幼兒食品和乳品中維生素C的測定 發(fā)布稿.pdf

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5413.182010中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部 發(fā)布 2010-03-26 發(fā)布 2010-06-01 實(shí)施食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素 C 的測定 National food safety standard Determination of vitamin C in foods for infants and young children, milk and milk products GB 5413.182010 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T 5413.18-1997嬰幼兒配方食品和乳粉 維生素C的測定。 本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T 5413.18-1997相比，主要變化如下： 明確了酶的活力單位； 改變了鄰苯二胺溶液濃度； 含淀粉試樣處理進(jìn)行了改變； 增加了加入硼酸乙酸鈉溶液后的反應(yīng)時(shí)間； 增加了加入鄰苯二胺溶液后的反應(yīng)時(shí)間。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： GB 5413-1985、GB/T 5413.18-1997。 GB 5413.182010 1 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素 C 的測定 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中維生素 C 的測定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中維生素 C 的測定。本標(biāo)準(zhǔn)測定的是還原型維生素 C 和氧化型維生素 C 的總量。 2 規(guī)范性引用文件 本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 3 原理 維生素 C（抗壞血酸）在活性炭存在下氧化成脫氫抗壞血酸，它與鄰苯二胺反應(yīng)生成熒光物質(zhì)，用熒光分光光度計(jì)測定其熒光強(qiáng)度，其熒光強(qiáng)度與維生素 C 的濃度成正比，以外標(biāo)法定量。 4 試劑和材料 除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的三級(jí)水。 4.1 淀粉酶：酶活力 1.5 U/mg，根據(jù)活力單位大小調(diào)整用量。 4.2 偏磷酸乙酸溶液 A：稱取 15 g 偏磷酸及 40 mL 乙酸（36 %） 于 200 mL 水中，溶解后稀釋至 500 mL 備用。 4.3 偏磷酸乙酸溶液 B：稱取 15 g 偏磷酸及 40 mL 乙酸（36 %）于 100 mL 水中，溶解后稀釋至 250 mL 備用。 4.4 酸性活性炭：稱取粉狀活性炭（化學(xué)純，80 目200 目）約 200 g，加入 1 L 體積分?jǐn)?shù)為 10 的鹽酸， 加熱至沸騰， 真空過濾， 取下結(jié)塊于一個(gè)大燒杯中， 用水清洗至濾液中無鐵離子為止， 在 110120 烘箱（5.3）中干燥約 10 h 后使用。 檢驗(yàn)鐵離子的方法：普魯士藍(lán)反應(yīng)。將20 g/L亞鐵氰化鉀與體積分?jǐn)?shù)為1 %的鹽酸等量混合，將上述洗出濾液滴入，如有鐵離子則產(chǎn)生藍(lán)色沉淀。 4.5 乙酸鈉溶液：用水溶解 500 g 三水乙酸鈉，并稀釋至 1 L。 4.6 硼酸乙酸鈉溶液：稱取 3.0 g 硼酸，用乙酸鈉溶液（4.5）溶解并稀釋至 100 mL，臨用前配制。 4.7 鄰苯二胺溶液（400 mg/L）：稱取 40 mg 鄰苯二胺，用水溶解并稀釋至 100 mL，臨用前配制。 GB 5413.182010 2 4.8 維生素 C 標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 g/mL）：稱取 0.050 g 維生素 C 標(biāo)準(zhǔn)品，用偏磷酸乙酸溶液 A（4.2）溶解并定容至 50 mL，再準(zhǔn)確吸取 10.0 mL 該溶液用偏磷酸乙酸溶液 A（4.2）稀釋并定容至 100 mL，臨用前配制。 5 儀器和設(shè)備 5.1 熒光分光光度計(jì)。 5.2 天平：感量為 0.1 mg。 5.3 烘箱：溫度可調(diào)。 5.4 培養(yǎng)箱：45 1 。 6 分析步驟 6.1 試樣處理 6.1.1 含淀粉的試樣：稱取約 5 g（精確至 0.0001 g）混合均勻的固體試樣或約 20 g（精確至 0.0001 g）液體試樣（含維生素 C 約 2 mg）于 150 mL 三角瓶中，加入 0.1 g 淀粉酶（4.1），固體試樣加入 50 mL 45 50 的蒸餾水， 液體試樣加入 30mL 45 50 的蒸餾水， 混合均勻后， 用氮?dú)馀懦恐锌諝?，蓋上瓶塞，置于 45 1 培養(yǎng)箱（5.4）內(nèi) 30 min，取出冷卻至室溫，用偏磷酸乙酸溶液 B（4.3）轉(zhuǎn)至 100 mL 容量瓶中定容。 6.1.2 不含淀粉的試樣：稱取混合均勻的固體試樣約 5 g（精確至 0.0001 g），用偏磷酸乙酸溶液 A（4.2）溶解，定容至 100 mL。或稱取混合均勻的液體試樣約 50 g（精確至 0.0001 g），用偏磷酸乙酸溶液 B（4.3）溶解，定容至 100 mL。 6.2 待測液的制備 6.2.1 將上述試樣（6.1.1，6.1.2）及維生素 C 標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.8）轉(zhuǎn)至放有約 2 g 酸性活性炭（4.4）的250 mL 三角瓶中，劇烈振動(dòng)，過濾（棄去約 5 mL 最初濾液），即為試樣及標(biāo)準(zhǔn)溶液的濾液。然后準(zhǔn)確吸取 5.0 mL 試樣及標(biāo)準(zhǔn)溶液的濾液分別置于 25 mL 及 50 mL 放有 5.0 mL 硼酸乙酸鈉溶液（4.6）的容量瓶中，靜置 30 min 后，用蒸餾水定容。以此作為試樣及標(biāo)準(zhǔn)溶液的空白溶液。 6.2.2 在此30 min內(nèi)， 再準(zhǔn)確吸取5.0 mL試樣及標(biāo)準(zhǔn)溶液的濾液于另外的25 mL及50 mL放有5.0 mL乙酸鈉溶液（4.5）和約 15 mL 水的容量瓶中，用水稀釋至刻度。以此作為試樣溶液及標(biāo)準(zhǔn)溶液。 6.2.3 試樣待測液：分別準(zhǔn)確吸取 2.0 mL 試樣溶液（6.2.2）及試樣的空白溶液(6.2.1)于 10.0 mL 試管中，向每支試管中準(zhǔn)確加入 5.0 mL 鄰苯二胺溶液（4.7），搖勻，在避光條件下放置 60 min 后待測。 6.2.4 標(biāo)準(zhǔn)系列待測液：準(zhǔn)確吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.2.2）0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL 和 2.0 mL，分別置于 10 mL 試管中，再用水補(bǔ)充至 2.0 mL。同時(shí)準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液的空白溶液（6.2.1）2.0 mL 于 10 mL試管中。向每支試管中準(zhǔn)確加入 5.0 mL 鄰苯二胺溶液（4.7），搖勻，在避光條件下放置 60 min 后待測。 6.3 測定 6.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將標(biāo)準(zhǔn)系列待測液（6.2.4）立刻移入熒光分光光度計(jì)的石英杯中，于激發(fā)波長 350 nm，發(fā)射波長430 nm 條件下測定其熒光值。以標(biāo)準(zhǔn)系列熒光值分別減去標(biāo)準(zhǔn)空白熒光值為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的維生素 C質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 6.3.2 試樣待測液的測定 GB 5413.182010 3 將試樣待測液（6.2.3）按（6.3.1）的方法分別測其熒光值，試樣溶液熒光值減去試樣空白溶液熒光值后在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得對(duì)應(yīng)的維生素 C 質(zhì)量濃度。 7 分析結(jié)果的表述 試樣中維生素 C 的含量按式(1)計(jì)算： 1000100=mfVcX(1) 式中： X試樣中維生素 C 的含量，單位為毫克每百克（mg/100 g） ； V試樣的定容體積，單位為毫升（mL）； c由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的試樣測定液中維生素 C