結(jié)核感染T細胞檢測PPT課件.ppt

T-SPOT.TB 結(jié)核感染T細胞檢測 （免疫斑點法）,列入歐美等20多個國家結(jié)核診療指南,1,內(nèi)容,結(jié)核病基礎(chǔ)概念 T-SPOT.TB 產(chǎn)品知識 T-SPOT.TB 臨床應(yīng)用 病例分享,2,內(nèi)容,結(jié)核病基礎(chǔ)概念 T-SPOT.TB 產(chǎn)品知識 T-SPOT.TB 臨床應(yīng)用 病例分享,3,2000-2008年我國肺結(jié)核報告發(fā)病情況,結(jié)核分枝桿菌（MTB）是結(jié)核病的致病菌，通過呼吸道傳播，可以侵入人體全身各種器官，主要感染肺部 全世界約三分之一的人群感染了結(jié)核分枝桿菌，2012年全球結(jié)核病報告顯示，在2011年有870萬新發(fā)病例， 140萬人死于結(jié)核病,4,活動性結(jié)核與潛伏性結(jié)核,新發(fā)TB病例來自潛伏性結(jié)核感染人群 潛伏性結(jié)核感染（hidden epidemic）人群數(shù)量巨大“定時炸彈” 若想控制活動性TB，必須先控制潛伏性結(jié)核感染 鑒別高危人群 預(yù)防性治療 免疫接種,活動性TB 全球每年900萬新發(fā)病例 僅為冰山一角,Latent TB - “hidden epidemic” - 2 billion people infected,5,活動性結(jié)核與潛伏性結(jié)核,接觸活動性結(jié)核病患者,暴露程度不足，結(jié)核桿菌被機體免疫力清除,沒有癥狀,結(jié)核桿菌仍舊存在而不能被偵測 X-光/ CT 掃描顯示正常 沒有抗體應(yīng)答 診斷困難 傳統(tǒng)的結(jié)核感染檢測只有PPD,機體被感染,受免疫抑制 沒有臨床癥狀,終身處于感染狀態(tài),潛伏性結(jié)核,有臨床癥狀 具有傳染性,結(jié)核桿菌可以通過涂片、培養(yǎng)檢測出 胸部的 X-光或 CT 掃描顯示異常 肺外結(jié)核難以診斷(特別是兒童),活動性結(jié)核-結(jié)核病,5%,5%,再次激活,？,6,LTBI活動的危險因素,Erkens J ERJ 2010,7,結(jié)核病常規(guī)診斷技術(shù),耗時長 涂陰PTB檢出低 肺外結(jié)核難,結(jié)核 診斷,X射線,分子診斷,接觸史,涂片 鏡檢,細菌培養(yǎng),特異性差 主觀 肺外結(jié)核難,操作復(fù)雜 技術(shù)要求高 涂陰PTB檢出低 肺外結(jié)核難,不能區(qū)分NTM PTB近半陰性 肺外結(jié)核難,試劑靈敏度低； 不能區(qū)分既往感 染和發(fā)病病人,抗體檢測,8,WHO關(guān)于血清學(xué)檢測聲明,2011年7月20日，世界衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)出正式聲明，要求禁止將血清學(xué)檢測方法（抗原，抗體，蛋白芯片等）用于肺結(jié)核和肺外結(jié)核的診斷。 WHO warns against the use of inaccurate commercial serological tests for pulmonary and extra-pulmonary TB,9,小結(jié),活動性結(jié)核病與潛伏性結(jié)核感染的區(qū)別 LTBI危險因素 結(jié)核中有20%左右的肺外結(jié)核，診斷困難 傳統(tǒng)結(jié)核診斷方法不能滿足臨床需要,10,內(nèi)容,結(jié)核病基礎(chǔ)概念 T-SPOT.TB 產(chǎn)品知識 T-SPOT.TB 臨床應(yīng)用 病例分享,11,T-SPOT.TB原理,T-SPOT.TB原理：結(jié)核感染者體內(nèi)存在特異的效應(yīng)T淋巴細胞，效應(yīng)T淋巴細胞再次受到結(jié)核抗原（ESAT-6，CFP 10）刺激時會分泌多種細胞因子（ IFN- ）。因此，檢測效應(yīng)T淋巴細胞可用于結(jié)核病或結(jié)核潛伏感染者的診斷 列入美國、英國等歐美20多個國家結(jié)核診療指南 美國CDC推薦：BCG接種人群結(jié)核感染檢測首選 國內(nèi)風(fēng)濕科/消化科指南,12,T-SPOT.TB原理,由于效應(yīng)T細胞存活時間很短（6周左右），而且具有特異性，因此可以作為機體是否正處于被感染的指標(biāo)，無論是否有臨床癥狀,13,結(jié)核桿菌特異抗原,14,T-SPOT.TB 準(zhǔn)確、可信、快速,特異性好 只針對結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群敏感，與絕大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌和卡介苗（BCG）無交叉反應(yīng) 美國FDA數(shù)據(jù)：特異性97.1%(297/306) 國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：特異性94.1%(478/508) 靈敏度高 基本不受免疫力低下/受抑制影響，在肺外結(jié)核患者中有很高的檢出率 美國FDA數(shù)據(jù)：靈敏度95.6%(175/183) 國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：靈敏度95.3%(624/655) 快速簡便 簡單的血液檢測，隔天報告結(jié)果,陰性預(yù)測值：93.9%（478/509） 陽性預(yù)測值：95.4%（624/654）,15,16,國外文獻匯總靈敏度,16,國外文獻匯總特異性,17,實驗效果圖,18,報告單,19,根據(jù)抗原A或/和抗原B孔的反應(yīng)判斷結(jié)果: 檢測結(jié)果為“有反應(yīng)性”，參照以下標(biāo)準(zhǔn)： 空白對照孔斑點數(shù)為0-5個時且（抗原A或抗原B孔的斑點數(shù)）-（空白對照孔斑點數(shù)）6 空白對照孔斑點數(shù)大于6個時且（抗原A或抗原B孔的斑點數(shù)）2（空白對照孔斑點數(shù)） 如果上述標(biāo)準(zhǔn)不符合且陽性質(zhì)控對照孔正常時檢測結(jié)果為“無反應(yīng)性”,實驗結(jié)果判斷,20,斑點數(shù)的意義活動性or潛伏性,多少個斑點是活動性結(jié)核？ 結(jié)果陽性說明患者結(jié)核感染，是潛伏性還是活動性需要結(jié)合臨床癥狀。因個體差異，沒有具體的斑點數(shù)字可以依據(jù)。但斑點數(shù)越多越傾向于活動性結(jié)核,Chee et al Eur J Clin Microbiol Infect Dis (2008)（IF=3.02）,活動性與潛伏性結(jié)核感染患者中，T-SPOT.TB斑點數(shù)比較,Janssens et al ERJ (2007)（IF=6.35）,活動性與潛伏性患者中T-SPOT.TB斑點數(shù)的比較(TST+和 TST-),21,斑點數(shù)的意義現(xiàn)癥感染,之前得過結(jié)核治愈了，T-SPOT結(jié)果如何？ T-SPOT檢測的是現(xiàn)癥感染。如果徹底治愈，體內(nèi)無結(jié)核分枝桿菌，則結(jié)果陰性；如果結(jié)果是陽性，則說明患者體內(nèi)還存在結(jié)核分枝桿菌，還在結(jié)核感染中 陳舊性結(jié)核體內(nèi)會存在記憶T細胞，但記憶T細胞在全血中的數(shù)量非常少，而且抗原再次激活孵育時間遠遠超過24h，不會因為記憶細胞的存在而產(chǎn)生斑點 文獻顯示，大概只有38%左右的活動性結(jié)核患者經(jīng)過治療，T-SPOT結(jié)果會轉(zhuǎn)陰 Chee et al. , AJRCCM (2006)（IF=11.04）,22,Ribeiro S, Dooley K, et al. BMC Infect Dis, 2009 （IF=3.02）,方法：在肺結(jié)核治療中，用T-SPOT.TB方法評估治療效果。在治療開始前，治療16周和24周后，分別計數(shù)ESAT-6和CFP-10刺激產(chǎn)生的斑點數(shù),圖1. 所有研究對象ESAT-6, CFP-10和總RD1在治療前，16周后和24周后的平均斑點數(shù)（n=58）,在24周完整療程后，ESAT-6, CFP-10和總RD1產(chǎn)生的平均SFCs分別從42.7, 41.2和83.8降到23.3, 23.2和46.5 ，有顯著性差異,結(jié)論：T-SPOT.TB試驗中檢測的由RD1特異T細胞產(chǎn)生的-干擾素與肺結(jié)核患者在治療中的結(jié)核桿菌量直接相關(guān),斑點數(shù)的意義治療前后變化,23,注意事項,采血量：6-10ml 采血管：肝素抗凝 樣本保存：當(dāng)天送樣，常溫運輸 注意：PET-CT與輸血,24,方法學(xué)優(yōu)點,特異性95%左右，不受卡介苗（BCG）接種與環(huán)境分枝桿菌影響 靈敏度95%左右，幾乎不受個體免疫功能低下影響 快速，24小時報告結(jié)果 國內(nèi)外指南推薦，多篇文獻數(shù)據(jù)支持 斑點數(shù)意義：斑點越多越傾向活動性結(jié)核、現(xiàn)癥感染、能反應(yīng)療效 送樣的注意事項,25,方法學(xué)缺點,不能夠提示臨床患者的病變部位，需要結(jié)合臨床的判斷 目前還不能夠根據(jù)斑點數(shù)量的多少來判斷患者是活動性結(jié)核病或是潛伏感染者,26,內(nèi)容,結(jié)核病基礎(chǔ)概念 T-SPOT.TB 產(chǎn)品知識 T-SPOT.TB 臨床應(yīng)用 病例分享,27,肺外結(jié)核,結(jié)核分枝桿菌能侵染全身大部分器官，其中有20%發(fā)生在肺外,28,臨床應(yīng)用,29,臨床應(yīng)用,30,國內(nèi)外文獻舉例,T-SPOT.TB的靈敏度為94.7%(71/75)，肺疾病組和肺外疾病組中分別為95.6%和93.3%，特異性為84.1%(90/107)，肺疾病組和肺外疾病組中分別為69.2%和88.9%。 馮云, 張文宏等. PLOS ONE, 2012（IF=3.73） 北京協(xié)和醫(yī)院感染內(nèi)科2004年至2010年收治的997例不明原因發(fā)熱患者的病因分析顯示，感染性疾病一直是最主要的病因，占479例(48.0%)，其中結(jié)核病占45.3%(217/479) 侍效春, 劉曉清等. Chin Med J, 2013（IF=0.901）,31,國內(nèi)外文獻舉例,在84例CD或ITB患者中，T-SPOT是診斷ITB一個很好的指標(biāo)，其靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別是84.2%、75.4%、50.0%和94.2%。 李玥, 錢家鳴等. J Crohns Colitis, 2012（IF=2.566） 在60 例CD 以及34 例ITB 患者中，T-SPOT.TB 和PCR 方法的鑒別診斷效能： 雷媛, 夏冰. Journal of Digestive Diseases, 2013（IF=1.853）,32,國內(nèi)外文獻舉例,293例懷疑結(jié)核病的非洲兒童，T-SPOT在年齡小于3歲、HIV感染和營養(yǎng)不良的兒童中靈敏度分別是85%、73%和78%。如果結(jié)合TST的結(jié)果，T-SPOT的靈敏度達到91% Liebeschuetz S, et al. Lancet, 2004（IF=39.06） 在77名結(jié)核病和51名健康兒童中，T-SPOT靈敏度為89.2%，特異性為94.1%，明顯高于TST（靈敏度77.0%，特異性70.6%），卡介苗是否接種對結(jié)果沒有顯著影響。 孫琳, 申阿東等. Chin Med J, 2010（IF=0.901）,33,消化科-國內(nèi)外指南,IBD診斷：在結(jié)核高流行區(qū)域要排除腸結(jié)核，方法包括PPD和-干擾素測定（T-SPOT.TB試驗） CD排除腸結(jié)核的相關(guān)檢查：胸部X線片，PPD試驗，有條件時可行IFN-釋放試驗（T-SPOT.TB試驗）,World Gastroenterology Organization Practice Guidelines for the Diagnosis and Management of IBD in 2010 世界胃腸病學(xué)組織（WGO），2010,2012年炎癥性腸病診斷與治療的共識意見（2012廣州） 中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會炎癥性腸病學(xué)組，2012,34,依那西普治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和強直性脊柱炎的專家建議 中華內(nèi)科雜志2010年6月第49卷第6期 英夫利西單抗治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和強直性脊柱炎的參考意見 中華內(nèi)科雜志2012年12月第51卷第12期,生物制劑使用前，為排除活動性結(jié)核病(包括肺結(jié)核和肺外結(jié)核)及結(jié)核潛伏感染者?？捎玫妮o助診斷方法可考慮用結(jié)核抗原特異性IFN-釋放試驗(IGRA)。其中以T-SPOT敏感性(88)和特異性(82)最高。對T-SPOT陽性者，高度懷疑結(jié)核感染的可能，應(yīng)予抗結(jié)核