手機(jī)上細(xì)菌的分離與鑒定.doc

手機(jī)上細(xì)菌的分離與鑒定單位：燕山大學(xué)建筑與環(huán)境化學(xué)工程系09級(jí)生物制藥2班秦皇島市河北大街438號(hào)，郵編：066004摘要： 隨著信息技術(shù)的發(fā)展，手機(jī)交流已成為人們溝通的主要方式，但手機(jī)與我們的皮膚接觸頻繁，如果手機(jī)上存在細(xì)菌，這就成為一種病原體傳播的途徑，對(duì)人們的皮膚等健康問(wèn)題構(gòu)成不同程度的傷害。為了證明手機(jī)上存在有對(duì)我們使用者健康有危害的細(xì)菌，經(jīng)由細(xì)菌提取、培養(yǎng)、觀察、分離、純化、計(jì)數(shù)、鑒定（糖發(fā)酵試驗(yàn)、硫化氫實(shí)驗(yàn)、大分子水解實(shí)驗(yàn)和IMViC實(shí)驗(yàn)）以及保存等一系列步驟，從手機(jī)表面分離得到兩種細(xì)菌并對(duì)其進(jìn)行了鑒定分析，得出了結(jié)論：手機(jī)上確實(shí)存在大量的細(xì)菌，它們對(duì)人類(lèi)的健康構(gòu)成了一定的危害，所以我們應(yīng)該特別注重平時(shí)的衛(wèi)生習(xí)慣，如勤洗手。Abstract：With the development of information technology, mobile communication has become the main way people communicate, but handset frequent skin contact with us, if the phone is there bacteria, which become a kind of pathogen transmission, such as on peoples skin and pose health problems varying degrees of damage. In order to prove the existence of mobile phone users of our health hazards of bacteria by bacterial extraction, training, observation, the separation, purification, counting, appraisal ( sugar fermentation tests ，hydrogen sulphide experiment, macromolecules,and IMViC experiment) and the preservation of and a series of steps, from cell phones and two types of bacteria isolated from the surface was carried out identification , a conclusion: the existence of the phone number of bacteria, they constitute a certain human health hazards, we should pay special attention usual health habits, such as washing hands frequently.關(guān)鍵詞：手機(jī)；健康；病原體傳播；細(xì)菌提??；鑒定分析Keywords：cellphone；health； bacterial extrac；pathogen transmission； identification and analysis1.引言 現(xiàn)在手機(jī)已成為我們生活中不可缺少的一部分，但是人們卻忽略了它們給我們帶來(lái)的危害。我們的手機(jī)表面有大量的細(xì)菌，我們很少去關(guān)注，且很少對(duì)其進(jìn)行一定的清潔工作。手機(jī)表面上存在大量的細(xì)菌，通過(guò)與手的接觸，加上不良好的衛(wèi)生習(xí)慣，很可能導(dǎo)致病從口入。專(zhuān)家還指出，蠕動(dòng)的致命細(xì)菌接觸到面部等部位，可能引致暗瘡、肺炎、腦膜炎，甚至超級(jí)病毒金黃色葡萄球菌。我們此次試驗(yàn)的目的就是通過(guò)對(duì)手機(jī)表面細(xì)菌的研究，確定其所含菌的數(shù)量和種屬，確定它們的存在及危害，從而引起人們的關(guān)注。建議人們對(duì)手機(jī)進(jìn)行定期的衛(wèi)生工作，如使用手機(jī)時(shí)可用除菌紙巾定期擦拭，定期消毒，以減少我們受手機(jī)感染的機(jī)會(huì)，勤洗手是最基本的衛(wèi)生習(xí)慣。 2.材料方法2.1.材料：2.1.1 實(shí)驗(yàn)器材：手機(jī)2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器：普通光學(xué)顯微鏡、接種環(huán)、酒精燈、培養(yǎng)皿、載玻片、鑷子、燒杯、試管、移液管、德漢氏小管、恒溫培養(yǎng)箱、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺等2.1.3 培養(yǎng)基種類(lèi)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（牛肉膏，蛋白胨，氯化鈉，瓊脂，蒸餾水）油脂培養(yǎng)基（蛋白胨，牛肉膏，氯化鈉，香油，1.6%中性紅水溶液，瓊脂，蒸餾水）淀粉培養(yǎng)基（蛋白胨，氯化鈉，牛肉膏，可溶性淀粉，蒸餾水，瓊脂）蛋白胨水培養(yǎng)基（蛋白胨，氯化鈉，蒸餾水）明膠培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨液，明膠）糖發(fā)酵培養(yǎng)基（蛋白胨水培養(yǎng)基，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，20%糖溶液（葡萄糖，乳糖，蔗糖）檸檬酸鹽培養(yǎng)基（磷酸二氫銨，磷酸氫二鉀，氯化鈉，硫酸鎂，檸檬酸鈉，瓊脂，蒸餾水，1%溴香草酚藍(lán)乙醇液）醋酸鉛培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨瓊脂，硫代硫酸鈉，10%醋酸鉛水溶液）石蕊牛奶培養(yǎng)基（牛奶粉，石蕊，水）尿素瓊脂培養(yǎng)基（尿素，瓊脂，氯化鈉，磷酸二氫鉀，蛋白胨，酚紅，蒸餾水）2.2.方法2.2.1.細(xì)菌的提取分離 （1）細(xì)菌的提?。河谜河猩睇}水的消毒棉簽在手機(jī)表面一平方厘米的范圍內(nèi)涂抹，然后將該棉簽浸入到盛有一毫升生理鹽水的試管中，配成原倍數(shù)的菌懸液，然后再配成稀釋十倍的菌懸液。（2）細(xì)菌的培養(yǎng)：用滅菌后的移液管移取菌懸液，將1-2滴滴入培養(yǎng)皿中，用涂布棒將菌分布均勻，每種菌分別做兩個(gè)平板，放在37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。（3）細(xì)菌的計(jì)數(shù)：取出培養(yǎng)好的平板，觀察菌落的多少，記下菌落數(shù)的多少（4）細(xì)菌的純化：挑取菌落上的細(xì)菌，用三段劃線法對(duì)其進(jìn)行純化。放入37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直至所得菌落為單個(gè)菌落。2.2.2. 細(xì)菌的觀察 （1）細(xì)菌的形態(tài)大小觀察：無(wú)菌操作取菌，制成菌懸液。滴一滴到載玻片上，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察其形態(tài)。校正目鏡測(cè)微尺計(jì)算出在不同放大倍數(shù)下，目鏡測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度，然后觀察細(xì)菌的大小。 （2）革蘭氏染色：制片初染（結(jié)晶紫染色12min,傾去染液）媒染（碘液覆蓋1min,傾去碘液）脫色（95%乙醇脫色2030s）復(fù)染（復(fù)紅染色2min,水洗）鏡檢2.2.3.糖發(fā)酵試驗(yàn)：（1）用記號(hào)筆在各試管外壁上分別標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基的名稱(chēng)和所接種的細(xì)菌菌名。（2）取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，分別接入兩種菌，第三只不接種，作為對(duì)照。另取乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，同樣接入兩種菌，第三只不接種，作為對(duì)照。蔗糖發(fā)酵同上。（3）將接過(guò)種和作為對(duì)照的6支試管均置37中培養(yǎng)24-48h。（4）觀察各試管顏色變化及德漢式小管中有無(wú)氣泡。2.2.4.大分子水解實(shí)驗(yàn)： 淀粉水解實(shí)驗(yàn)（1）將固體淀粉培養(yǎng)基溶化后冷卻至50左右，無(wú)菌操作制成平板。（2）用記號(hào)筆在平板底部劃成2部分。（3）將兩種菌分別在不同的部分劃線接種，在平板的反面分別寫(xiě)上兩種菌的標(biāo)號(hào)。（4）將平板倒置在37溫箱中培養(yǎng)24h。（5）取出平板，觀察菌苔顏色。 石蕊牛奶實(shí)驗(yàn)：（1）取兩只石蕊牛奶培養(yǎng)基試管，用記號(hào)筆標(biāo)明各管欲接種的菌名。（2）分別接種兩種菌。（3）將接種后的試管置35中培養(yǎng)24-48h。（4）觀察培養(yǎng)基顏色變化。 .明膠水解實(shí)驗(yàn)：（1）取兩只明膠培養(yǎng)基試管，用記號(hào)筆標(biāo)明各試管欲接種的菌名。（2）用接種針?lè)謩e穿刺接種兩種菌。（3）將接種后的試管置20中培養(yǎng)2-5d。（4）觀察明膠液化情況。 油脂水解實(shí)驗(yàn)：（1）將熔化的固體油脂培養(yǎng)基冷卻至50左右時(shí)，充分搖蕩，使油脂均勻分布，無(wú)菌操作倒入平板，待凝。（2）用記號(hào)筆在平板底部劃成兩部分，分別在兩部分標(biāo)上軍的標(biāo)號(hào)。（3）用無(wú)菌操作將兩種菌分別劃十字線接種于平板的相應(yīng)部分的中心。（4）將平板倒置，37溫箱中培養(yǎng)24h。（5）取出平板，觀察菌苔顏色。 尿素試驗(yàn)：（1）取兩只尿素培養(yǎng)基斜面試管，用記號(hào)筆標(biāo)明各管欲接種的菌名。（2）分別接種兩種菌。（3）將接種后的試管置35中培養(yǎng)24-48h。（4）觀察培養(yǎng)基顏色變化。2.2.5.IMViC實(shí)驗(yàn) 吲哚試驗(yàn)：將兩種菌分別接入2支蛋白胨水培養(yǎng)基中，置37培養(yǎng)48h。于培養(yǎng)48h后的蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)加入3-4滴乙醚，搖動(dòng)數(shù)次，靜置1min，待乙醚上升后，沿試管壁徐徐加入2滴吲哚試劑。在乙醚和培養(yǎng)物之間產(chǎn)生紅色環(huán)狀物為陽(yáng)性反應(yīng)。 甲基紅實(shí)驗(yàn)：將兩種菌分別接入2支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，置37培養(yǎng)48h。培養(yǎng)48h后，將1支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基培養(yǎng)物內(nèi)加入甲基紅試劑2滴，培養(yǎng)基變?yōu)榧t色者為陽(yáng)性，變?yōu)辄S色者為陰性。 伏-普實(shí)驗(yàn)：將甲基紅實(shí)驗(yàn)中的另一支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物內(nèi)加入5-10滴40%KOH，然后加入等量的5%-萘酚溶液，用力震蕩，再放入37溫箱中保溫15-30min.，以加快反應(yīng)速度，若培養(yǎng)物呈紅色者，為伏-普反應(yīng)陽(yáng)性。 檸檬酸鹽實(shí)驗(yàn)：將兩種菌分別接入2支檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基中，置37培養(yǎng)48h。培養(yǎng)48h后觀察檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基上有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)和是否變色，藍(lán)色為陽(yáng)性，綠色為陰性。 2.2.6.硫化氫實(shí)驗(yàn)：用接種針將兩種菌分別穿刺接入2支醋酸鉛培養(yǎng)基中，置37培養(yǎng)基48h。觀察黑色硫酸鉛是否產(chǎn)生。3.結(jié)果3.1.通過(guò)對(duì)細(xì)菌的分離純化及培養(yǎng)，我們得到兩種菌的菌落。稀釋十倍的菌懸液通過(guò)平板計(jì)數(shù)法記錄菌落數(shù)為42個(gè)。又對(duì)其進(jìn)行細(xì)菌的大小、形態(tài)觀察及革蘭氏染色，觀察結(jié)參表一表一 細(xì)菌的觀察結(jié)果菌名形態(tài)大小顏色革蘭氏染色號(hào)邊緣整齊，濕潤(rùn)，表面光滑，圓形0.8m淡黃色紅色號(hào)邊緣整齊，濕潤(rùn)，表面光滑，金黃色0.6m金黃色藍(lán)紫色稀釋十倍的菌懸液培養(yǎng)后所得菌落如圖一，簡(jiǎn)單染色如圖二 圖一：稀釋十倍的菌懸液菌落 圖二：簡(jiǎn)單染色3.2 糖酵解實(shí)驗(yàn)絕大多數(shù)細(xì)菌能利用糖類(lèi)作為碳源，但是它們?cè)诜纸馓穷?lèi)物質(zhì)的能力上有很大差異，有些細(xì)菌能分解某種糖產(chǎn)生有機(jī)酸和氣體，有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。發(fā)酵培養(yǎng)基含有蛋白胨、指示劑、倒置的德漢氏小管和不同的糖類(lèi)。當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí)，溴甲酚紫指示劑可有紫色變?yōu)辄S色。氣體的產(chǎn)生可由倒置的德漢氏小管中有無(wú)氣泡來(lái)證明。結(jié)果如下表二表二 糖酵解實(shí)驗(yàn)結(jié)果糖類(lèi)發(fā)酵號(hào)號(hào)對(duì)照葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣3.3 大分子水解實(shí)驗(yàn)微生物對(duì)大分子物質(zhì)如淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須依靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解后，才能吸收利用。 淀粉水解實(shí)驗(yàn)：淀粉酶水解淀粉為小分子糊精、雙糖和單糖，淀粉遇碘會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色，但細(xì)菌水解淀粉的區(qū)域，用碘測(cè)定時(shí)不再產(chǎn)生藍(lán)色，表明細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶。號(hào)菌周?chē)鸁o(wú)現(xiàn)象，號(hào)菌周?chē)型该鞴馊Α，F(xiàn)象如圖三圖三：淀粉水解實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象 油脂水解實(shí)驗(yàn)：脂肪酶水解脂肪為甘油和脂肪酸，脂肪水解后產(chǎn)生脂肪酸，可以改變培養(yǎng)基的pH值，使pH降低，加入培養(yǎng)基的中性紅指示劑會(huì)使培養(yǎng)基從淡紅色轉(zhuǎn)變?yōu)樯罴t色，說(shuō)明細(xì)胞外存在脂肪酶?，F(xiàn)象：號(hào)菌苔周?chē)霈F(xiàn)紅色斑點(diǎn)，為陽(yáng)性；號(hào)菌苔周?chē)渤霈F(xiàn)紅色斑點(diǎn)，為陽(yáng)性。 明膠水解實(shí)驗(yàn)：明膠是由膠原蛋白水解產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，在25以下可維持凝膠狀態(tài)，以固體形式存在，而在25以上明膠會(huì)液化。有些微生物可產(chǎn)生一種稱(chēng)作明膠酶的胞外酶，水解這種蛋白質(zhì)，而使明膠液化，甚至在4仍能保持液化狀態(tài)?，F(xiàn)象：兩種菌都使明膠液化，均為陽(yáng)性。 石蕊牛奶實(shí)驗(yàn)：有些微生物能水解牛奶中的蛋白質(zhì)酪素，酪素的水解可用石蕊牛奶來(lái)檢測(cè)。石蕊牛奶培養(yǎng)基由脫脂牛奶和石蕊配制而成，是渾濁的藍(lán)色，酪素水解成氨基酸和肽后，培養(yǎng)基會(huì)變得透明。兩培養(yǎng)基都為白色，均為陽(yáng)性。 尿素實(shí)驗(yàn)：尿素是有大多數(shù)哺乳動(dòng)物消化蛋白質(zhì)后分泌在尿液中的廢物。尿素酶能分解尿素釋放出氨。尿素瓊脂含有尿素、葡萄糖和酚紅，酚紅在pH6.8時(shí)為黃色，而在培養(yǎng)過(guò)程中，產(chǎn)生尿素酶的細(xì)菌將分解尿素產(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基的pH升高，在pH升至8.4時(shí)，指示劑就轉(zhuǎn)變?yōu)樯罘奂t色。號(hào)菌培養(yǎng)基由黃色變?yōu)榧t色，為陽(yáng)性；號(hào)菌沒(méi)變，為陰性。表三 大分子水解實(shí)驗(yàn)結(jié)果細(xì)菌淀粉水解實(shí)驗(yàn)油脂水解實(shí)驗(yàn)明膠水解實(shí)驗(yàn)石蕊牛奶實(shí)驗(yàn)?zāi)蛩貙?shí)驗(yàn)號(hào)陰性陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性號(hào)陽(yáng)性陰性陽(yáng)性陽(yáng)性陰性3.4 IMViC和硫化氫實(shí)驗(yàn) 吲哚實(shí)驗(yàn)：有些細(xì)菌產(chǎn)生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，產(chǎn)生吲哚和丙酮酸。吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，形成紅色的玫瑰吲哚。現(xiàn)象：號(hào)菌培養(yǎng)基與乙醚之間有紅色，為陽(yáng)性；號(hào)菌培養(yǎng)基與乙醚之間無(wú)紅色，為陰性。 甲基紅實(shí)驗(yàn)：細(xì)菌代謝糖產(chǎn)生酸時(shí)，培養(yǎng)基就會(huì)變酸，使加入培養(yǎng)基中的甲基紅指示劑由橙黃色轉(zhuǎn)變成紅色?，F(xiàn)象：兩種菌的培養(yǎng)基均由橙黃色變?yōu)辄S色，為陽(yáng)性。 伏普實(shí)驗(yàn)：某些菌可以利用葡萄糖產(chǎn)生非酸性或中性末端產(chǎn)物，如丙酮酸。丙酮酸進(jìn)行縮合、脫羧生成乙酰甲基乙醇，此化合物能在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物。現(xiàn)象：號(hào)菌無(wú)變化，為陰性；號(hào)菌變?yōu)榧t色，為陰性。 檸檬酸鹽實(shí)驗(yàn)：有些細(xì)菌利用檸檬酸鹽作為碳源，有些則不能。細(xì)菌在分解檸檬酸鹽及培養(yǎng)基中的磷酸銨后，產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基的pH升高，當(dāng)加入1%溴麝香草酚藍(lán)指示劑時(shí)，培養(yǎng)基就會(huì)由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)樯钏{(lán)色。現(xiàn)象：兩種菌的培養(yǎng)基均由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)樯钏{(lán)色，為陽(yáng)性。 硫化氫實(shí)驗(yàn)：有些細(xì)菌能分解含硫的有機(jī)物如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸等產(chǎn)生硫化氫，硫化氫一遇培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽等，就形成黑色的硫化鉛或硫化亞鐵沉淀物?，F(xiàn)象：號(hào)菌無(wú)明顯變化，為陰性；號(hào)菌有黑色沉淀，為陽(yáng)性。表四 IMViC實(shí)驗(yàn)和硫化氫實(shí)驗(yàn)細(xì)菌IMViC實(shí)驗(yàn)硫化氫實(shí)驗(yàn)吲哚實(shí)驗(yàn)甲基紅實(shí)驗(yàn)伏普實(shí)驗(yàn)檸檬酸鹽實(shí)驗(yàn)號(hào)陽(yáng)性陽(yáng)性陰性陽(yáng)性陰性號(hào)陰性陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性4.結(jié)論 由以上實(shí)驗(yàn)可知，手機(jī)上含有的菌至少包括大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，并且含菌量為：42個(gè)菌落每平方厘米。由于所做的實(shí)驗(yàn)有限，手機(jī)上可能含有的其它菌類(lèi)未能全部驗(yàn)證出來(lái)，但至少證明了手機(jī)上含有對(duì)人類(lèi)有害的細(xì)菌，且菌量非常大