-氨基-α-(3-三氟甲基苯基)-O,O-二(2-烷氧基乙基)亞膦酸酯對小麥赤霉病原菌的抑制活性及作用機制的初步探究.pdf

第1 8 卷第6 期 2 0 0 9 年1 2 月 激光生物學報 A C T AL A S E RB I O L O G YS I N I C A V 0 1 1 8N o 6 D e c 2 0 0 9 基礎研究 N 4 甲基 2 氨基苯并噻唑 0 氨基 0 t 3 g 甲基苯基 一0 O 二 2 烷氧基乙基 亞膦酸酯對小麥赤霉病原菌的抑制活性 及作用機制的初步探究 黃銀久k 2 劉芳2 吳守偉1 趙莉1 1 蚌埠醫(yī)學院生物科學系 安徽蚌埠2 3 3 0 3 0 2 貴州大學精細化工研究開發(fā)中心 綠色農藥與生物工程 教育部重點實驗宣 貴州貴陽5 5 0 0 2 5 3 藥明康德 上海2 0 0 1 3 1 摘要 實驗室條件下采用生長速率法測定化合物N 4 一甲基 2 氨基苯并噻唑 i 3 t 氨皋 d 一 3 三氟甲皋苯基 一 0 0 二 2 烷氧基乙基 亞膦酸酯對小麥赤霉病原菌 F u s a r i u mg r a m i n e a r u m 的離體抑制效果 并初步研究了其 抑制小麥赤霉病原菌作用機制 實驗結果表明 該化合物對小麥赤霉病原菌的E c 為4 6 0 5 斗s m L 當化合物 濃度為5 0 斗g m L 時 對該病原芮的抑制率就達到了6 0 5 以濃度為2 5 0 斗g m L 的該供試化合物處理小麥 赤霉病原菌菌絲2 4h 后 其細胞膜通透性增強 菌體內還原糖 幾丁糖和可溶性蛋自含量及幾丁質酶活性在短 時間內均出現(xiàn)先升高然后下降的趨勢 關鍵詞 N 4 甲基 2 氨基苯并噻唑 僅 氨基 儀 3 三氟甲基苯基 O O 一二 2 一烷氧基乙基 亞膦酸酯 小麥赤霉病原菌 抑菌活性 作用機制 中圖分類號 T Q 4 6 0 1 文獻標識碼 A 文章編號 1 0 0 7 7 1 4 6 2 0 0 9 0 6 0 7 6 5 0 6 T h eA n t i f u n g a lA c t i v i t ya n dA c t i o nM e c h a n i s mo fN 4 m e t h y l 2 a m i n o b e n z o t h i a z o l e o c a m i n o a 3 t r i f l u o r o m e t h y l p h e n y i O 0 d i 2 a l k o x y e t h y i P h o s p h i n a t et oF u s a r i u mg r a m i n e a r u m H U A N GY i n j i u L I UF a n 9 2 一 W US h o u w e i l Z H A OL i l 1 B i o s c i e n c eD e p a r t m e n to fB e n g b uM e d i c a lC o l l e g e B e n g b u2 3 3 0 0 0 A n h u i C h i n a 2 K e yL a b o r a t o r yo fG r e e nP e s t i c i d ea n dB i o e n g i n e e r i n g M i n i s t r yo fE d u c a t i o n R e s e a r c ha n dD e v e l o p m e n tC e n t r ef o r F i n eC h e m i c a l s G u i z h o uU n i v e r s i t y G u i y a n g5 5 0 0 2 5 G u i z h o u C h i n a 3 W u x iA p p T e cC o S h a n g h a i2 0 0 1 3 1 C h i n a A b s t r a c t U s i n gt h em y c e l i a t 當x o s t hr a t em e t h o di nt h el a b o r a t o r y t h ei n h i b i t o r e f f e c t sa n da c t i o nm e c h a n i s m so f c o m p o u n dN 4 m e t h y l 2 a m i n o b e n z o t h i a z o l e 俚 a m i n o O t 3 t r i f l u o r o m e t h y l p h e n y i 一O O d i 2 a l k o x y e t h y l p h o s p h i n a t et oF u s a r i u mg r a m i n e a r u mi nv i t r ow e r es t u d i e d T h eb i o a s s a yr e s u l t ss h o w e dt h a tt h ec o m p o u n dh a dh i g ha n t i f u n g a l a c t i v i t yo nt h eg r o w t ho fF u s a r i u mg r a m i n e a r u m w i t ht h ev a l u eo fE C 如4 6 0 5I L L g m L W h e nt h ec o n c e n t r a t i o no ft h e c o m p o u n dw a ga t5 0I z g m L t h ei n h i b i t i o n r a t er e a c h e d6 0 5 W h e nPg r a m i n e a r u mw a st r e a t e dw i t ht h ec o m 收稿日期 2 0 0 9 0 4 2 7 修回日期 2 0 0 9 0 9 1 0 基金項目 安徽省教育廳自然科學研究項目 2 0 0 6 K J l 2 4 C 作者簡介 黃銀久 1 9 7 4 一 男 講師 碩士 從事手性藥物與新作用機制研究 電話 1 5 8 5 5 7 7 9 4 8 8 電子郵箱 f l y w i t h w i n d h y j 16 3 c o m 萬方數(shù)據(jù) 7 6 6激光生物學報 第1 8 卷 p o u n da t2 5 0p g m Lf o r2 4h o u m t h ep e r m e a b i l i t yo fc e l tm e m b r a n er i s e d T h em y c e l i a lr e d u c i n gs u g a r D G I c N A c c o n t e n t t h es o l u b l ep r o t e i nc o n t e n ta n dt h ec h i t i n a s ea c t i v i t ya l lr i s e da tt h eb e g i n n i n gt h e nd e c l i n e d K e yw o r d s N 4 m e t h y l 2 a m i n o b e n z o t h i a z o l e O t a m i n o a 一 3 t r i n u o l D m e t h y l p h e n y l O O d i 2 a l k o x y e t h y l p h o s p h i n a t e f u s a r i u mg r a m i n e a r u m f u n g i c i d a la c t i v i t y a c t i o nm e c h a n i s m o t 一氨基膦酸及其酯作為天然氨基酸的類似物 自2 0 世紀5 0 年代末H o r i g u c h i 從動物體內分離以 來 其合成方法和生物活性受到很多科學家的關注 1 9 9 9 年盧水明等 合成了1 6 個新的1 3 4 噻 二唑的d 一氨基膦酸酯衍生物 并對部分化合物進行 了牛物活性測定 結果表明 它們對小麥赤霉病菌 水稻紋枯病菌 棉花立枯病菌 甜菜褐班病菌 蘆筍 褐斑病菌均具有一定的抑制作用 同年 A h m e t 等 2 1 向磷酯中引入1 5 個雜環(huán)基網(wǎng) 牛物活性測試表 明 當R l 為哌啶基團 R 為異丁基團時 對腸球菌 葡萄球菌等表現(xiàn)出較好的活性 2 0 0 2 年汪焱鋼等 3 制備出1 2 個尚未見報道的 S c h i f f 堿 將其再與亞磷酸二乙酯加成 合成出1 2 個 新的含四唑基的O t 一氨基烴皋膦酸酯 生物測試實驗 證明 含四唑環(huán)的d 氨基烴摹膦酸酯具有較好的植 物生長調節(jié)活性 尤其是一些化合物的生長素活性 特別好 當膦酸酯巾A r 為二氯代芳基或吲哚基時 其生長素活性接近常用的牛長素品種口引哚乙酸 2 0 0 3 年宋寶安等一 采用活性基團拼接法將氟原 子引入a 一氨基烷基膦酸酯中 合成了一系列含氟芳 基僅一氨基烷基膦酸酯類新化合物并進行了抑制煙草 花葉病毒 T M V 田間生物測試 結果表明 該類化 合物具有良好的抑制T M V 活性 其中4d 化合物在 5 0 0I 山g m L 濃度下對煙草花葉病毒 T M V 防效達 到了6 7 0 3 多項研究都表明O t 氨基膦酸及其酯具有抗腫瘤 活性 抗植物病毒 植物生長調節(jié) 除草 殺蟲和殺菌 等葦要的生物活性L s 7 但關于僅 氨基膦酸酯類化合 物抗菌方面作用機制的研究較少 據(jù)此 本研究通過 簡單而有效的方法合成出o L 氨基膦酸酯類衍生物N 一 4 甲基 2 氨基苯并噻唑 a 一氨基 僅一 3 一三氟甲基苯 基 一0 0 一二 2 烷氧基乙基 亞膦酸酯 生物活性測 試結果表明該化合物對小麥赤霉病原菌具有較高的 抑菌活性 E C 為4 6 0 5p g m L 因此 本文以小麥 赤霉病原菌為研究對象 進行了毒力測試及藥物處 理后菌體內相關生理指標的測定工作 旨在探討其 抑制病原菌生長的作用機制 為新農藥的創(chuàng)制奠定 更好的基礎 1 材料與方法 1 1 材料 1 1 1 供試藥劑N 一 4 一甲基 2 一氨基一苯并噻唑 I t 氨基 d 3 三氟甲基苯基 一0 0 一二 2 一烷氧基乙基 業(yè)膦酸酯 自編號2 0 0 6 1 2 2 貴州大學精細化工研 究開發(fā)中心研制 考馬斯亮藍 B 1 0 一R A D 公司 對一N N 二甲基氨基苯甲醛 D M A B 天津市科密歐 化學試劑開發(fā)中心 3 5 二硝基水楊酸 D N S 中 國醫(yī)藥上?；瘜W試劑公司 三羥甲基氨基甲烷 T r i s 北京鼎國生物技術有限責任公司 小牛血 清白蛋白 B A S 北京鼎國生物技術有限公司 1 1 2 實驗儀器生物潔凈安全柜B H C 一1 3 0 0 I I A B 2 江蘇 調溫調濕培養(yǎng)箱3 0 2 A 型 上海 紫外分 光光度計U V 2 1 0 0 型 尤尼柯 超級水浴恒溫振蕩 器H Z S H 型 哈爾濱東聯(lián) 高速冷凍離心機S i g m a 2 K 1 5 型 德國 電子天平S a f l o f i u sB a s i c 德國 精 密P H 計P H S 3 C 型 上海 光學顯微鏡O l y m p u s 日 本 1 1 3 供試菌株小麥赤霉病原菌F u s a r i u mg r a m i n e a r u m 由南開大學元素有機化學研究所饋贈 本 實驗竄保存 1 2 實驗方法 1 2 1 離體抑菌活性測定 采用生長速率法 8 j 沿培養(yǎng)3d 5d 的新鮮小麥赤霉病菌菌落邊緣打取 直徑為0 4c m 的菌餅 移植于含藥P D A 平板中央 每處理重復3 次 置于2 5 一2 8 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 至對照菌絲牛長接近平皿三分之二處開始觀測 十 字交叉法測量菌落直徑 取平均值 計算抑制率 用 最小二乘法求出毒力回歸方程及E C 抑制率公式 如下 r 一個 抑制率 七南 1 0 0 J U t c 代表對照組菌落直徑大小 T 代表處理組菌 落直徑大小 1 2 2 對病原菌細胞膜通透性的影響一1 將培 養(yǎng)數(shù)天的菌絲過濾 并用二次水清洗數(shù)遍 然后加入 到濃度為2 5 0 g m L 的藥液中 另設溶劑對照 立 即測定電導率的本底值J o 然后分別于0 1 0m i n 3 0 萬方數(shù)據(jù) 第6 期黃銀久等 N 4 甲基 2 氡基苯并噻畦 q 氨基咀 3 三氟甲基苯基 0 二 2 畿氧基乙基 亞臃酸睹對小麥赤霉病原菌的抑制活性及作用機割的初步探究7 6 7 r a i n 6 0m i n 9 0r a i n t1 2 0m i n 1 8 0m i n 2 4 0 m i n 3 6 0 r a i n 后測定電導率 每處理三個平行 最后將三組處 理于沸水中煮沸1 5m i n 待冷卻至室溫 測定電導率 J s 相對電導率計算方法 某時間的相對滲透率 某時間的電導率 J 一零時間的電導率 J o 煮沸后的電導率 i s 一零時問的電導率 J o 1 0 0 1 2 3 茵體細胞內上清液的提取無菌條件下 在已培養(yǎng)幾天的新鮮小麥赤霉病原蔭菌落邊緣打取 直徑為0 4c m 的菌碟 按每瓶8 個菌碟接于9 0m L 查氏培養(yǎng)基一1 中 放人溫度為 2 6 1 的調溫保 濕培養(yǎng)箱內培養(yǎng)2 5d 一3 0d 后 加入藥劑至終濃度 為2 5 0 斗g m L 分別于藥劑處理0 5h lh 3h 6h 1 2h 2 4h 過濾收集菌絲 用蒸餾水反復沖洗后再用 濾紙充分吸千 并稱重記錄 一2 0 儲存?zhèn)溆?未加 藥劑處理菌絲作為對照 用時取冰凍菌絲 置于預 冷研缽中 按每克菌絲5m L 的比例加入T r i s H C l 浸 提液 0 0 5m o l L p H 7 5 和少量石英砂 在冰 浴中研磨至糊狀 轉入離心管中 4 1 50 0 0g 離心 3 0m i n 取f 清液 一2 0 儲存?zhèn)溆?1 0 1 1 2 4 對病原菌還原糖含量的影響取菌體上清 液0 1m L 加入0 1m LT r i s H c l 緩沖液 混勻 再加 入2m LD N S 沸水浴5m i n 取出市即放入盛冷水的 燒杯中 冷卻至室溫 再加蒸餾水Im L 混勻 用 T r i s H C I 緩沖液調零 于波長5 4 0n m 下測O D 值 實 驗重復3 次 同時 以葡萄糖為標樣 繪制標準曲 線 將測得O D 值轉換為樣品中葡萄糖含量 m s m L 以葡萄糖含量 m s m L 為縱坐標 藥劑處理 時間 T i m e h 為橫坐標 繪制菌絲體內還原糖含量 隨藥劑處理時間變化曲線 1 2 5 對茵體內幾丁糖含量的影響 1取菌體 上清液0 2m L 加0 2m L 硼酸鉀 0 8m o L L 沸水 浴3m i n 冷卻 加3m L 質量分數(shù)為1 的D M A B 3 6 保溫2 0m i n 冷卻 用T r i s H C I 緩沖液調零 于 波長5 4 4n m 測O D 值 實驗重復3 次 同時 繪制N 乙酰葡萄糖胺標準曲線 D G I c N A c 將測得O D 值 轉換為樣品中D G I c N A c 含量 m g m L 以D G l c N A c 含量 m g m L 為縱坐標 藥劑處理時間 T i m e h 為橫坐標 繪制菌體內D G I c N A c 含量隨藥劑處理 時間變化曲線 1 2 6 化合物對病原茵體內可溶性蛋白的影 響 1采用考馬斯亮藍G 2 5 0 染色法 取菌體上 清液0 0 5m L 用T r i s H C I 緩沖液稀釋l O 倍 再分別 取稀釋液0 1m L 于1 5m L 離心管中 再加入3m L 考 馬斯亮藍G 2 5 0 溶液 搖勻 靜置2r a i n 用T r i s H C l 緩沖液調零 于波長5 9 5n m 下測O D 值 實驗重復三 次 用牛血清白蛋白 B S A 為標樣 繪制可溶性蛋 白含量標準曲線 將測得O D 值轉換為樣品中可溶 性蛋白含量 m g m L 以藥劑處理菌絲時間 T i m e h 為橫坐標 可溶性蛋白含量 m m L 為縱 坐標 繪制菌體內可溶性蛋白含量隨藥劑處理時間 變化曲線 1 2 7 化合物對茵體內幾丁質酶活性的影響0 1 2 0 5 膠體幾丁質溶液的配制 稱取幾丁質粉末 8 0g 緩慢加入3 2 0m L 預冷的濃H C I 中 在磁力攪拌 器E 迅速攪拌 待幾丁質粉末均勻分散后 在水浴 中輕輕攪拌并緩慢加熱至3 7 混合物的黏度迅速 增加 幾分鐘后黏度開始下降 混合物逐漸變得清 亮 當幾丁質基本上溶解時 將幾丁質溶液倒入3 2 0 m L 預冷的蒸餾水中 繼續(xù)攪拌 幾分鐘后 溶液出 現(xiàn)沉淀 變得渾濁 3 0m i n 后停止攪拌 將懸浮液置 于4 冰箱保存過夜 倒掉上清液 沉淀用蒸餾水洗 滌數(shù)次 反復離心 留取沉淀 繼續(xù)洗滌 直至p H 接 近5 0 時 用1m o L LN a O H 滴定 使溶液顯中性 將 此中性沉淀物加到2 0 0m L 的蒸餾水中 劇烈攪拌至 懸浮 即為幾丁質膠體溶液 向1 5m L 離心管中加4 0 0 L 菌絲提取液 再加 入2 0 0t r L0 5 膠狀幾丁質 3 7 保溫1h 煮沸 5m i n 滅活 對照管保溫前先煮沸5r a i n 滅活 50 0 0r m i n 離心1 0m i n 取上清液4 0 0 斗L 加到1 5m L 離心管中 加入2 0 0 斗L 硼酸鉀 0 8m o V L 沸水浴 3m i n 立即冷卻 加3m L1 的D M A B 試劑 3 6 保溫2 0m i n 立即冷卻 與波長5 4 4n m 下測O D 值 通過N 乙酰葡萄糖胺含量變化標準方程 將O D 值 轉換為每小時內幾丁質酶水解幾丁質生成的N 一乙酰 葡萄糖胺含量的變化 m g m L h 2 結果與分析 2 1 離體抑菌效果 由表1 可見 N 一 4 一甲基 2 氨基一苯并噻唑 0 氨 基 0 一 3 三氟甲基苯基 一O 0 二 2 一烷氧基乙基 亞 膦酸酯對小麥赤霉病原菌的離體抑菌活性較高 供 試化合物濃度為5 0 斗g m L 時 對小麥赤霉病原菌的 抑制率為6 0 5 0 用最小二乘法求得其毒力回歸 方程為Y 0 6 7 1 x 3 8 8 4 E C 5 0 為4 6 0 5 斗r m L 實際效果見圖1 萬方數(shù)據(jù) 7 6 8激光生物學報第1 8 卷 表1化合物2 0 0 6 1 2 2 對小麥赤霉菌菌絲徑向生長的抑制效果 T a b 1 I n h i b i t o r ye f f e c to fc o m p o u n d 2 0 0 6 12 2o nt h e r a d i a lg r o w t ho fF u s a r i u mg r a m i n e a r u m N o t e C K u n t r e a t m e n t N o t e 1 6a n dC Kw e r e3 1 2 5I L g m L 6 2 5t L g m L 1 2 5 斗g m L 2 5p g m L 5 0I 山g m L 1 0 0p s m Lt r e a t m e n ta n du n t r e a t m e n tr e s p e c t i v e l y 圖l化合物2 0 0 6 1 2 2 對小麥赤霉菌的抑制效果 F i g 1I n h i b i t o r ye f f e c to fc o m p o u n d 2 0 0 612 2o nF u s a r i l g mg r a m i n e a r u m 2 2 菌體細胞膜通透性的變化 2 5 2 0 1 j j 1 0 5 0 C o n t r o l 卜 2 0 0 6 1 2 2 O1 2 0 03 4 0 0 T i m e r a i n 圖2 化合物2 0 0 6 1 2 2 對小麥赤霉茵細胞膜通透性 的影響 F i g 2 T h ee f f e c to fc o m p o u n d 2 0 0 612 2o nm e m b m n ep e r m e a b i l i t yo fF g r a m i n e a r u m 由圖2 可見 藥劑作用于小麥赤霉菌絲體后 病原菌 細胞膜通透性增大 藥劑處理3 6 0m i n 后 小麥赤霉 病菌細胞膜通透性比對照高出5 4 8 P 0 0 5 2 3 菌體內還原糖含量的變化 霎 l o 8 o 6 0 4 C o n t r o l 一2 0 0 6 1 2 2 圖3茵體內還原糖含量的變化 F i g 3C h a n g e so fm y c e l i a lr e d u c i n gs u g a rc o n t e n t 由圖3 可見 化合物處理小麥赤霉病原菌菌體 后 菌體內還原糖含量在前2h 先升高 2h 后開始 呈現(xiàn)出不斷下降的趨勢 處理菌絲2 4h 后還原糖含 量比對照組降低了4 2 9 P 0 0 5 2 4 茵體內幾丁糖含量的變化 由圖4 可見 化合物處理小麥赤霉病原菌體后 在1 8h 內菌體內N 一乙酰葡萄糖胺含量出現(xiàn)起伏不 定的變化 且含量高于對照 2h 后菌體內N 一乙酰葡 萄糖胺含量比對照組高3 5 3 P 0 0 5 1 8h 后 開始出現(xiàn)下降趨勢 處理2 4h 后菌體內N 乙酰葡萄 糖胺含量比對照組低1 2 9 P 0 0 5 2 5 茵體內可容性蛋白含量的變化 由圖5 可見 化合物處理小麥赤霉病原菌后 菌 體內可溶性蛋白含量在短時間內出現(xiàn)先升高而后降 低的趨勢 在藥劑處理3h 后菌體內可溶性蛋白含量 萬方數(shù)據(jù) 第6 期黃銀久等 N 4 甲基 2 氨摹苯并噻畦 n 囊基噸 3 三氟甲基苯基 m O 二 2 I 烷氧基乙基 亞磷酸酯對小麥赤霉病原菌的抑制活性及作用機嗣的初步探究 7 6 9 冒 蠶耄 口 8 一 0 t r D l 一2 0 0 6 1 2 2 圖4 茵體內幾丁糖含量的變化 F i g 4C h a n g e so fm y c e l i a lD G I c N A cc o n t e n t 比對組照高4 2 9 P 0 0 5 1 0h 后菌體內可 溶性蛋白含量的變化趨勢接近對照組且一直低于對 照組 L 2 暑 L O S 鼉 昌套0 8 a 3 毒重啪 萎 0 2 C o n t r o l 一2 0 0 6 1 2 2 圖5茵體內可溶性蛋白含量變化 F i g 5C h a n g e so fm y c e l i a ls o l u b l ep r o t e i nc o n t e n t 2 6 茵體內幾丁質酶活性的變化 亳 呈 羈 oo p h 善耄 C o n t r o l 一2 0 1 2 2 T i m e h 圖6 茵體內幾丁質酶活性的變化 F i g 6C h a n g e so fm y c e l i a lc h i t i n a s ea c t i v i t y 由圖6 可見 化合物處理小麥赤霉病原菌菌體 后 在開始的一段時間里菌體內幾丁質酶活性比對 照組高 但在處理9h 后 菌體內幾丁質酶的活性開 始降低 而對照組幾丁質酶活性開始升高 處理菌 絲2 4h 后幾丁質酶活性比對照組低2 6 3 5 P 0 0 5 3 討論 早期關于a 氨基膦酸酯類化合物生物活性作用 機制的研究表明 該類化合物可以通過生物酶抑制 活性 3 j 植物生長調節(jié)劑活性 J4 超氧物歧化酶 S O D 過氧化物酶 P O D 抑制活性 細胞膜破壞效 應發(fā)揮作用 川 本研究中的Q 一氨基膦酸酯類化合物N 一 4 一甲基一 2 一氨基 苯并噻唑 q 一氨基 僅 3 一三氟甲基苯基 O 0 一二 2 一烷氧基乙基 亞膦酸酯對小麥赤霉病原菌 表現(xiàn)出較好的離體抑制效果 抑制中濃度為4 6 0 5 卜g m L 菌體細胞膜通透性研究表明 隨著化合物作用 的延長 2 0 0 6 1 2 2 對菌絲細胞膜的破壞作用加強 表 現(xiàn)出時間依賴性 圖2 供試化合物處理后 與對照相比 菌體內還原糖 含量表現(xiàn)出先急劇升高后降低的趨勢 圖3 說明 2 0 0 6 1 2 2 可能干擾菌體糖的吸收或代謝 導致菌體細 胞能量供應不足 從而抑制菌體細胞的生長 但究 竟是藥劑通過抑制菌體對培養(yǎng)液中葡萄糖的吸收 還是促進糖的不斷代謝轉化 有待研究 與對照相比 2 0 0 6 1 2 2 處理后 菌體內幾丁質酶 活性顯著升高 而后降低 圖6 這可能由于菌體 葡萄糖饑餓時 可引起細胞壁水解酶活性的升高 并 引起褶關細胞壁水解酶基因的表達 l 引 因此可認 為 2 0 0 6 1 2 2 處理病原菌后 菌體細胞產生糖饑餓現(xiàn) 象 刺激幾丁質酶活性的升高 不斷降解細胞壁組 分 進一步導致膜透性增加 圖2 隨著糖饑餓現(xiàn) 象的加劇 乙酰葡萄糖胺可繼續(xù)脫氨生成葡萄糖 來 供給菌體對能量的需求 因此表現(xiàn)為菌體內測得的 乙酰葡萄糖胺含量升高而后下降的趨勢 圖4 化合物2 0 0 6 1 2 2 處理小麥赤霉病原菌后 初期 菌體內的可溶性蛋白含量高于對照組 而后緩慢下 降至對照水平 圖5 這暗示該化合物可能在短時 間內誘導了菌體抗性相關蛋白增加 以此來抵御藥 劑對菌體細胞的傷害 因此表現(xiàn)為可溶性蛋白含量 短時間內出現(xiàn)增加 隨著藥劑處理時間的延長 可 溶性蛋白含量開始降低 1 0h 后含量接近對照水平 之后變化不再明顯 暗示干擾蛋白質生物合成可能 不是藥劑發(fā)揮抑菌作用主要途徑 萬方數(shù)據(jù) 7 7 0 2 3 4 5 6 7 8 激光生物學報 第1 8 卷 R e f e r e n c e s J f 水明 陳茹玉 1 3 4 一噻二嘩的o t 氨睡膦酸酯衍生物的 合成及其乍物活性 J 合成化學 1 9 9 9 7 3 2 7 0 2 7 4 L US h u i m i n g C H E NR u y u S y n t h e s i so faA m i n o p h o s p h o n a t e D e r i v a t i v e so fl 3 4T h i a d i a z o l ea n dT h e i rB i o l o g i c a lA c t i v i t i e s J C h i n e s eJ o u r n a lo fS y n t h e t i cC h e m i s t r y 1 9 9 9 7 3 2 7 0 2 7 4 A H M E TM S A D I Y ES H A S A NK e ta 1 S y n t h e s i so fS o m e H e t e r o e y e l i cP h o s p h o n a t e sa n dT h e i rA n t i b a c t e r i a la n dA n t i f a n g a la c t i v i t i e s J I n d i a nJC h e mB 1 9 9 9 3 8 B 2 1 9 7 2 0 0 汪焱鋼 盧冰熙 葉義法 等 僅 5 I q 唑基 氨基烴基膦酸 酯的合成及其生物活性 J 有機化學 2 0 0 2 l l 2 2 8 6 2 8 6 6 W A N GY a n g a n g L UB i n g x i Y EW e n f a e ta 1 S y n t h e s i s a n dB i o l o g i c a lA c t i v i t yo fd 一 5 T e t r a z o l y l 一a m i n o a l k y lP h o s p h o n a t e s J C h i n e s eJ o u r n a lo fO r g a n i cC h e m i s t r y 2 0 0 2 ll 2 2 8 6 2 8 6 6 宋寶安 蔣木庚 吳揚蘭 等 N 對三氟甲基苯基一a 一氬基烷 蘑膦酸酯的合成 晶體結構及生物活性 J 有機化學 2 0 0 3 2 3 9 9 6 7 9 7 2 S O N GB a o a n J I A N GM u g e n g W UY a n g l a n da 1 S y n t h e s i s S t r u c t u r ea n dB i o a c t i v i t yo fN 一 p T r i f u r o m e t h y l p h e n y l d a m i n o p h o s p h o n a t e s J C h i n e s eJ o u r n a lo fO r g a n i cC h e m i s t r y 2 0 0 3 2 3 9 9 6 7 9 7 2 D USC F A I G E RH B E L A K H O VV e ta 1 T o w a r d st h eD e v e l o p m e n to fN o v e lA n t i b i o t i c s S y r n t h e s i sa n dE v a l u a t i o no fa M e c h a n i s m b a s e dI n h i b i t o ro fK d o S PS y n t h a s e J B i o o r g a n M e dC h e m 1 9 9 9 7 1 2 2 6 7 1 2 6 8 2 Z O M O V AAM M O L O D Y K HZV K U D R Y A V T S E V ALA 以 a 1 A n t i m i c r o b i a lA c t i v i t yo f0 O d i e t h y iN a l k y l a m i n o m e t h y l p h o s p h o n a t e s a n d O e t h y lN a l k y l a m i n o m e t h y l p h o s p h o n i c A c i d s J P h a r mC h e mJ 1 9 8 6 2 0 1 1 7 7 4 7 7 7 J I NLH S O N GBA Z H A N GGP e ta 1 S y n t h e s h X r a y C r y s t a l l o g r a p h i cA n a l y s i s a n dA n t i t u m o rA c t i v i t yo fN 一 b e n z o t h i a z o l e 2 一y 1 l 一 f l u o r o p h e n y l 0 0 一d i a l k y l a a m i n o p h o s p h o n a r e s J B i o o r gM e dC h e mL e t t 2 0 0 6 1 6 6 1 5 3 7 1 5 4 3 黃國洋 農藥試驗技術與評價方法 M 北京 農業(yè)出版 社 2 0 0 0 3 0 3 1 H U A N GG u o y a n g P e s t i c i d eT e s tT e c h n o l o g ya n dE v a l u a t i o n M e t h o d M B e i j i n g A g r i c u l t u r eP u b l i s h i n gH o u s e 2 0 0 0 3 0 3 1 9 黃青春 周明國 葉鐘音 拌種疋對柑桔潰瘍病菌菌體細胞 活性的影響 J 南京農業(yè)大學 學撤 2 0 0 1 2 4 3 2 3 2 6 H U A N GQ i n g c h u n Z H O UG u o m i n g Y EZ h o n g y i n E f f e c to f A m i c a r t h i a z o lt ot h eC e l l o fX a n t h o m o n a sc i t r i JJ J o u r n a lo f N a n j i n gA 酣 u h u r a lU n i v e r s i t y 2 0 0 1 2 4 3 2 3 2 6 1 0 石志琦 沈壽闊 徐朗萊 等 蛇床子素對植物病原真菌抑 制機制的初步研究 J 農藥學學報 2 0 0 4 6 4 2 8 3 2 S H IZ h i q i S H E NS h o u g u o X UL a n g l a i e ta 1 I n h i b i t i o n M e c h a n i s mo fO s t h o lt oP l a n tF u n g u sP a t h o g e n s J C h i n e s e J o u r n a lo fP e s t i c i d eS c i e n c e 2 0 0 4 6 4 2 8 3 2 1 1 李合生 植物生理生化實驗原理和技術 M 北京 高等教 育m 版社 2 0 0 0 1 9 4 L IH e s h e n g P l a n tP h y s i l o l g i c a la n dB i o c h e m i c a lE x p e r i m e n t T h e o r ya n dT e c h n o l o g y M B e i j i n g H i g h e rE d m a t l o nP r e s s 2 0 0 0 1 9 4 1 2 馮俊麗 朱旭芬 微生物幾丁質酶的分子生物學研究 J 浙江大學學報 2 0 0 4 3 0 1 1 0 2 1 0 8 F E N GJ u n l i Z H UX u f e n M o l e c u l a rB i o l o g yo fM i c r o b i a l C h i t i n a s e J J o u r n a lo fZ h e j i a n gU n i v e r s i t y 2 0 0 4 3 0 i 1 0 2 1 0 8 1 3 譚宏亮 袁均林 賀紅武 膦酸酯單鈉鹽對丙酮酸脫氧酶活 性的影響 J 化學與生物科學 2 0 0 5 2 2 6 4 擊 T A NH a n g l i a n g Y U A NJ u n l i n H EH a n g w n E f f e c t so f M e t h y l p h o s p h o n a t e M o n o s o d i u mo n P y r u v a t eD e h y d r e g e n a s e J C h e m i s t r y B i o e n g i n e e r i n g 2 0 0 5 2 2 6 4 6 1 4 劉緒峰 一 4 氯一1 萘氧基乙酰氧基 烴基膦酸酯的合成與 植調活性 J 應用化學 2 0 0 5 2 2 1 4 0 塒 L I UX u f c n g S y n t h e s i sa n dP l a n tG r o w t hR e g u l a t i o nA c t i v i t yo f 儀一 4 C h l o m l n a p h t h y l o x yA c e t o x y A l k y lP h o s p h o n a t e s J C h i n e s eJ o u r n a lo fA p p l i e dC h e m i s t r y 2 2 1 4 0 4 4 1 5 S A R A P U KJ B I E I E C K IK T R E L Az I n f l u e n c eo fS o m eN e w A m i n o p h o 叩h o n a t e so nE l e c t r i c a lP r o p e r t i e sa n dS t a b i l i t yo fP l a s m aM e m b r a n e so fP l a n tC e l l s J A c t ss B a tP a l 2 0 0 2 7 1 3 2 2 3 2 2 6 16 B R U N OGB D O N Z E L L IG I n t e r a c t i o no fA m o n i u m R e d u c i n g S u g a ra n dC h i t i nR e g u l a t e st h eE x p r e s s i o no fC e l lW a UD e g r a d i n gE n z y m e si nT r i e h o d e r m aA t r o v i r i d eS t r a i nP I J A p p lE n v i r e nM i c r o b 2 0 0 1 6 7 5 6 4 3 5 6 4 7 萬方數(shù)據(jù) N 4 甲基 2 氨基苯并噻唑 氨基 3 三氟甲基苯基 N 4 甲基 2 氨基苯并噻唑 氨基 3 三氟甲基苯基 O O 二 2 烷氧基乙基 亞膦酸酯對小麥赤霉病原菌的抑制活O O 二 2 烷氧基乙基 亞膦酸酯對小麥赤霉病原菌的抑制活 性及作用機制的初步探究性及作用機制的初步探究 作者 黃銀久 劉芳 吳守偉 趙莉 HUANG Yin jiu LIU Fang WU Shou