有機(jī)酸檢測(cè)方法.doc

甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、檸檬酸、蘋果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、苯乙酸、阿魏酸甲酸、乙酸、丙酸、 檸檬酸、蘋果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、儀器與設(shè)備waters2695 Alliance SeparationsModule高效液相色譜儀;waters2996 PhatadiodeArray二極管陣列檢測(cè)器;Heraeus離心機(jī);HORIBApH計(jì)。色譜分析(1)混標(biāo)配置。分別準(zhǔn)確稱取適量上述10種有機(jī)酸并用超純水溶解或稀釋,以孔徑0. 45m的微孔濾膜過(guò)濾,轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中,定容,配制濃度為100mg/L的儲(chǔ)備液,保存于4冰箱中。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)液的配置:根據(jù)紫外吸收靈敏度,將草酸、酒石酸、蘋果酸、甲酸、丙二酸、乳酸、乙酸、檸檬酸、琥珀酸、丙酸按照0. 22. 55552. 55555的比例配制混標(biāo),逐級(jí)稀釋,配制成A、B、C、D、E五個(gè)濃度級(jí)別的標(biāo)準(zhǔn)溶液,以繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其中A級(jí)別標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0. 2; 2. 5, 5, 5, 5, 2. 5, 5, 5, 5, 5(g/mL);B、C、D分別為上一個(gè)級(jí)別濃度的5倍稀釋,E級(jí)為D級(jí)的2倍稀釋。并將這10中有機(jī)酸編號(hào)為:OA01-OA10。(3)色譜條件。反相C18柱CAPCellPAK C18MG 4. 6mm250mm, 5um, pH范圍: 210,流動(dòng)相: 0. 1%H3PO4的去離子水和乙腈(V/V)982;檢測(cè)器波長(zhǎng): 210nm;流速: 1mL/min;進(jìn)樣量: 20u;l柱溫: 35;(4)流動(dòng)相配置。取1mLH3PO4用超純水稀釋至1000mL,經(jīng)孔徑為0. 45m的微孔濾膜過(guò)濾,超聲脫氣后備用。乙腈(色譜純)超聲脫氣備用。阿魏酸阿魏酸的測(cè)定:稱取風(fēng)干樣品1.0000g置50ml量瓶中，加入乙酸乙酯約45ml，超聲處理30min并靜置過(guò)夜，加乙酸乙酯到刻度，搖勻，過(guò)濾，吸取濾液25ml水浴蒸干，殘?jiān)蛹姿崛芙獠⒁迫?0ml容量瓶，定容之后用熒光分析儀測(cè)定。實(shí)驗(yàn)儀器KQ-360DE型數(shù)控超聲波清洗器、玻璃儀器烘干器、TDI5-WS多管架自動(dòng)離心機(jī)、電子天平、RF-540熒光分光光度計(jì)。實(shí)驗(yàn)藥品乙醇、乙酸乙酯、1%碳酸氫鈉、2%碳酸鈉等試劑均為分析純,水為亞沸高純?nèi)ルx子水,阿魏酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào): 0773-9910)。激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)的選擇精密稱取阿魏酸對(duì)照品12. 00 mg,置100 mL容量瓶中,加2%碳酸鈉溶解,室溫下對(duì)不同濃度的阿魏酸對(duì)照溶液在200-600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行激發(fā)波長(zhǎng)掃描,阿魏酸的最大激發(fā)波長(zhǎng)(ex)為343 nm,固定該激發(fā)波長(zhǎng),掃描得發(fā)射譜圖,得到其發(fā)射波長(zhǎng)(em)為463 nm,且隨著阿魏酸濃度的增加其波長(zhǎng)沒(méi)有偏移,熒光強(qiáng)度隨著阿魏酸濃度的增加而增大,因此,選擇該最大激發(fā)波長(zhǎng)和最大發(fā)射波長(zhǎng)(即ex/em為343 nm/463 nm)作為后繼測(cè)定的工作條件。標(biāo)準(zhǔn)曲線精密量取適量的阿魏酸對(duì)照品溶液,分別稀釋成濃度為0. 3、0. 6、1. 2、1. 8、2. 4、3g/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液,選定激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)條件下,測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以阿魏酸對(duì)照品溶液的濃度為橫標(biāo)軸(x),以熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)軸(y),得回歸方程為y=19.469x +4805 8,r=0.997,結(jié)果表明進(jìn)樣量在0. 3-3g/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。樣品測(cè)定精密稱取當(dāng)歸藥材0. 5 g,置具塞三角瓶中,加1%碳酸氫鈉25mL,超聲提取30min,離心10min,取上清,加稀鹽酸調(diào)pH值至2-3,用乙酸乙酯10 mL萃取3次,取上清液合并為30 mL乙酸乙酯液,再加2%碳酸鈉20 mL,萃取3次4。取下層溶液用2%碳酸鈉定容至100 mL,微孔濾膜濾過(guò)液取1 mL,加2%碳酸鈉溶液稀釋至10 mL。即作為供試品溶液高效液相色譜法測(cè)定阿魏酸的含量潘成學(xué) 賈欣 申小靜鄭州大學(xué)藥學(xué)院鄭州市450052 23 摘要 目的建立婦科調(diào)經(jīng)片q-阿魏酸含量測(cè)定方法：方法 采用HPLC法，使用C。 柱，流動(dòng)相為甲醇一01 磷酸溶液(30：70)，流速10 mlmin，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)313 nm。結(jié)果 阿魏酸線性范圍0038803104 tzg，平均回收率9716 ：結(jié)論所建立的方法穩(wěn)定可靠、靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，可用于該制劑的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞 婦科調(diào)經(jīng)片 阿魏酸HPLC中圖分類號(hào)：119272 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：16723422(2005)18-0023-02Determination of Content of Ferulic Acid by HPLCPAN Chengxue，JIA Xin。SHEN XiaojingSchool of Pharmacy，Zhengzhou Universit)，Zhengzhou，450052，ChinaABSTRACT Objective To establish a RPHPLC method for determinating content of ferulicacid in Fuketiaojing tabletMethods The content was determined by HPLCThe analysis was carriedon C 1 8 column，the mobile phase was consisted of methanol一01 phosphoric acid(30：70)withthe flow rate at 1Omlmin and the UV detection wavelength was at 3 1 3 nmResults The linear regression for Fuketiaojing tablet was over the range of 0038803104 Ixg(r=09999)The averagerecovery rate of Fuketiaojing tablet was 9716(RSD =017 n：5)Conclusion This methodwas sensitive，accurate，reproducible and exclusiveKEY WoRDS Fuketiaojing tablet：Ferulic acid：HPLC已有文獻(xiàn) 采用高效液相色譜法對(duì)婦科調(diào)經(jīng)顆粒中芍藥苷的含量測(cè)定的報(bào)道；對(duì)于婦科調(diào)經(jīng)片，文獻(xiàn)一 采用HPLC方法對(duì)阿魏酸進(jìn)行了含量測(cè)定，但采用的流動(dòng)相為甲醇一1 冰醋酸(30：70)。我們采用高效液相色譜法，對(duì)婦科調(diào)經(jīng)片及其中的藥材當(dāng)歸、川I芎中阿魏酸進(jìn)行含量測(cè)定。1 儀器與試藥11 儀器高效液相色譜儀(P200II，大連依利特科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn))，UV200 11紫外可見(jiàn)波長(zhǎng)檢測(cè)器，ODS C。 色譜柱，Echrom98色譜工作站。12 試藥阿魏酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：7739202)；婦科調(diào)經(jīng)片(河南仲景保健藥業(yè)有限公司)；甲醇為色譜純；水為重蒸水，其它試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果21 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) ODS C。 色1 河南省人口和計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究院鄭州市450002譜柱(46 mm 250 mm，5 m)；流動(dòng)相：甲醇一01磷酸溶液(30：70)；流速10 mlmin，柱溫40 ，檢測(cè)波長(zhǎng)313 nm；進(jìn)樣量10 l。理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。22 線性關(guān)系考察精密取阿魏酸對(duì)照品，分別制成濃度為388 gml、7761xgml、1552txgml、2328 gml、31041xgml的樣品，進(jìn)樣量101xl，測(cè)定阿魏酸峰面積積分值，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，阿魏酸的進(jìn)樣量(x)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，Y=003126255X一02889704：(r=09999，n =5)，表明阿魏酸在00388031041xg之問(wèn)呈良好的線性關(guān)系。23 精密度試驗(yàn)精密吸取同一對(duì)照品溶液10 ，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定其峰面積積分值，結(jié)果其色譜峰的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為072 ，表明其精密度良好。24 樣品含量測(cè)定241 對(duì)照品溶液制備取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每125oeml的溶液，即得。242 供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下本品同批次(040428)10片，除去包衣，研細(xì)，混勻，取約l g，精密稱定，分別置5O ml具塞錐形瓶中，精密加甲醇l5 ml，密塞，稱定重量，超聲處理60 rain，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液用微孔濾膜濾過(guò)，即得。243 陽(yáng)性對(duì)照品溶液的制備依據(jù)處方中的比例，按供試品溶液的制備方法制備缺當(dāng)歸和川芎的陽(yáng)性對(duì)照溶液。結(jié)果經(jīng)進(jìn)樣證明陰性無(wú)干擾。244 樣品含量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各l0 l，進(jìn)樣，由峰面積計(jì)算阿魏酸的含量，同法制備并測(cè)定l0批中試產(chǎn)品，計(jì)算阿魏酸的含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表l。表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果245 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液lO l，注入液相色譜儀，按0、2、4、6、8 h各測(cè)定1次阿魏酸峰面積，并計(jì)算阿魏酸含量，RSD=050 。246 重現(xiàn)性試驗(yàn)取批號(hào)為040428的樣品，按供試品溶液制備方法制備5份供試液，測(cè)定分別測(cè)定阿魏酸含量，其RSD=046 。247 回收率試驗(yàn) 取批號(hào)為040428的樣品(阿魏酸含量81841zg片)20片，精密稱定重量：醫(yī)藥論壇雜志2005年9月 第26卷 第18期70346g，平均片重03517g片，研細(xì)，取05g，精密稱定，共取5份，分別加入阿魏酸對(duì)照品適量，進(jìn)樣量l0 l，測(cè)定阿魏酸峰面積，計(jì)算阿魏酸含量，計(jì)算回收率，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。表2 回收率測(cè)定結(jié)果取樣量(g)樣品中含量加入量測(cè)得值回收率平均回收率RSD( )【 g ( g ( g) ( ) ( )0498l ll59 l200 23234 97 03050I