色譜指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用.doc

黃色網(wǎng)站 作者設(shè)想的雙重TaqMan-MGB探針技能沒(méi)有只可用來(lái)A( H3N2)亞型流感野病毒NA基因E119V耐藥位點(diǎn)的監(jiān)測(cè)，也可同聲作為該亞型的分型鑒定引物，存正在快捷、高遲鈍性和特同性的劣勢(shì)，尤其實(shí)用于臨床標(biāo)本的檢測(cè)。舊有NA耐藥檢測(cè)辦法分成表型檢測(cè)法和基因型檢測(cè)法。interim guidelines for use of antiviral agems-United States,200506 influenza season. MMWR Morb Mortal Wkly Rep, 2006, 55(2) : 44-466 Takayama l, Nakauchi M , Fujisaki S, et al. Rapid detection of theS247N neuraminidase mutation in influenza A ( HINl ) pdm09VLrus by one-step duplex RT-PCR assa). J Virol Mechods, 2012,188 5 Centers for Disease Control and Prevention ( CDC) . High levels ofadamantane resistance among influenza A ( H3N2 ) viruses and測(cè)辦法等，保守測(cè)序辦法物耗長(zhǎng)，利潤(rùn)較高，況且需數(shù)據(jù)要高貴的測(cè)序儀表；焦鹽酸測(cè)序辦法固然檢測(cè)通量大，然而也需求一定的檢測(cè)儀表；而基于MGB探針的PCR檢測(cè)辦法檢測(cè)通量大，檢測(cè)進(jìn)度快，存正在較高的遲鈍性和特同性，況且只要要一般的熒光容量PCR儀表。4檢測(cè)混合野病毒耐藥位點(diǎn)等位基因：A/Texas/12/2007( H3N2)和A/Washington/l/2007( H3N2)野病毒(HA=8)依照5%- 95%系列沒(méi)有同對(duì)比混合后，提取RNA并做10倍倍比濃縮，對(duì)于沒(méi)有同深淺和沒(méi)有同對(duì)比的2種混合野病毒，停止rRT-PCR檢測(cè)。表型檢測(cè)法是檢測(cè)NA抑止劑對(duì)于NA酶活性的反應(yīng)，只能檢測(cè)結(jié)合的野病毒，沒(méi)有能檢測(cè)臨床標(biāo)本。與其余罕見(jiàn)深呼吸道野病毒沒(méi)有具有穿插反響。眼前，應(yīng)用MGB探鐘技能曾經(jīng)順利構(gòu)建了對(duì)準(zhǔn)于甲型HINI流感野病毒H274Y和S247N耐藥漸變株的檢測(cè)技能6。4濃縮度按沒(méi)有同對(duì)比混合時(shí)ADV、RSV-A、RSV-B、hMPV、HboV的DNA和（或者）RNA作為沙盤(pán)，應(yīng)用上述引物探針停止rRT-PCR擴(kuò)中華防止醫(yī)術(shù)刊物2013年5月箜47卷第5Chin J Prev Med：May 2013，V01. 47，No5表1 混合野病毒耐藥位點(diǎn)等位基因的檢測(cè)后果注：Tex2為A/Texas/12/2007( H3 N2)；Wal為A/Washington/l/2007/( H3 N2)；N專(zhuān)人陽(yáng)性增，均未視察到陰性擴(kuò)增直線，標(biāo)明設(shè)想的引物探針存正在很高的特同性。l Cox NJ. Subbarao K. Global epidemiology of influenza: past andresenL. Annu Rev Med , 2000 ,51 : 407 421.2J Ferraris 0, Lina B. Mutations of neuraminidase implicated inneuraminidase inhibitors resistance. J Clin Virol ,2008 ,41 ( 1 ) :13-19.3 Wong S.Pabbaraju K, Wong A, et al. Development of a real-timeRT-PCR assay for detection of resistance to oseltamivir in influenzaA pandemic ( HINI ) 2009 virus using single nucleotidepoiymorphism probes. J Virol Methods ,2011 , 173 ( 2 ) : 259 -265.二峽社 , 1997 : 100-102.議論NA抑止劑是眼前專(zhuān)一牢靠的醫(yī)治流感野病毒沾染的抗野病毒藥品3。對(duì)于內(nèi)中20株野病毒的NA基因序列停止綜合，證明該署毒株的NAI 19位點(diǎn)均為谷氨酸(E)，標(biāo)明本鉆研設(shè)想的辦法與序列內(nèi)定后果分歧。后果標(biāo)明，以10_1濃縮度混合時(shí)H3 N2-119E和H3 N2-119V檢測(cè)的對(duì)比范疇均是5% - 1000-/o。而耐藥毒株的涌現(xiàn)會(huì)使臨床醫(yī)治，特別是對(duì)于險(xiǎn)癥病例的醫(yī)治更為辣手，因而，構(gòu)建快捷、煩瑣、奇異的耐藥株檢測(cè)辦法對(duì)于病人診斷下藥和監(jiān)測(cè)病況的停滯有著主要意思。辨別以RV、FluB、HINI、PIV1、PIV2、PIV3、5應(yīng)用臨床標(biāo)本結(jié)合株考證引物探針：選取經(jīng)國(guó)度流感核心鑒定陰性的111株A( H3N2)亞型流感毒株停止NA基因E119V實(shí)變檢測(cè)，應(yīng)用H3 N2-119V探針停止的rRT-PCR檢測(cè)后果顯現(xiàn)，111份均為陽(yáng)性，而H3 N2-119E探針的檢測(cè)后果均為陰性，即未檢測(cè)到E119V漸變毒株。A( H3N2)亞型流感野病毒的NA發(fā)作E119V變異后，能招致野病毒對(duì)于奧司他韋遲鈍性升高心1，本國(guó)流感野病毒耐酒性監(jiān)測(cè)尚在于起步階段，眼前尚無(wú)E119V漸變株的簡(jiǎn)報(bào)。而野病毒以較低的10。于是，正在檢測(cè)耐藥漸變與藥品遲鈍株的混合模本中存正在顯然劣勢(shì)，并且此辦法