實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求培訓(xùn)班.ppt

GB 19489 2004 實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求 培訓(xùn)班 中國(guó)CDC傳染病所聯(lián)系電話 010 61739439Email xiwenlong ICDC com 什么是生物危險(xiǎn) 生物危險(xiǎn)是指由生物因子形成潛在的危險(xiǎn) 當(dāng)在實(shí)驗(yàn)室中處理致病微生物時(shí) 或處理基因重組過(guò)程中產(chǎn)生的可能具有潛在生物危害的新未知基因時(shí) 或在處理致病因子的產(chǎn)物時(shí) 這些病原體有可能對(duì)實(shí)驗(yàn)室的工作人員造成危害 當(dāng)實(shí)驗(yàn)室硬件條件缺失 管理制度不完善以及不規(guī)范的操作程序 導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室致病因子泄漏和逃逸 則可能造成災(zāi)難性的后果 什么是生物安全 生物安全是指避免危險(xiǎn)生物因子造成實(shí)驗(yàn)室人員暴露 向?qū)嶒?yàn)室外擴(kuò)散并導(dǎo)致危害的綜合措施 什么是生物安全實(shí)驗(yàn)室 生物安全實(shí)驗(yàn)室是指在研究傳染性疾病或微生物時(shí)能夠避免病原體意外傷害的實(shí)驗(yàn)室 氣溶膠感染主要途徑 吸球 即吸管 操作 吸球是微生物學(xué)方面最基本的器具 用吸球操作時(shí) 能導(dǎo)致氣溶膠發(fā)生 例如由吸管中向外排液 用力過(guò)猛則會(huì)使液滴飛濺 彈離液體或固體培養(yǎng)基表面 釋放出大量微粒 或者 當(dāng)吸管末端含有物快排盡時(shí) 可能產(chǎn)生氣泡 尤其是富于蛋白性懸液更易形成氣泡 而氣泡破裂就成為氣溶膠 離心沉淀時(shí) 沉淀管裝量太滿(mǎn) 管蓋未蓋或不嚴(yán) 以及離心操作過(guò)操作過(guò)程中離心管破裂 都可導(dǎo)致氣溶膠散播 氣溶膠感染主要途徑 注射器操作時(shí) 當(dāng)抽吸后或者撥出時(shí) 注射器針頭由于顫動(dòng)而散發(fā)出液體微粒 用接種針去粘沾液體時(shí) 液柱斷裂 鏡檢涂片時(shí) 液絲斷裂 傳染性材料傾注出來(lái) 打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋時(shí) 蓋內(nèi)壁往往有傳染性的凝結(jié)水薄膜 因破裂而散播氣溶膠 氣溶膠感染主要途徑 開(kāi)安瓿時(shí) 如瓿內(nèi)為液體 則當(dāng)銼刀銼斷瓿頸后 即可能發(fā)生氣溶膠 如瓿內(nèi)為干燥的活菌或菌種 特別是用真空熔封的 更易產(chǎn)生溶膠 機(jī)械振蕩和超聲振蕩 或者研磨 浸解 撥出研磨柱時(shí) 都可形成氣溶膠 裝有液體容器的破損或液體益出 用超聲波清洗機(jī)清洗污染器具時(shí) 也可能發(fā)生大量氣溶膠 在粗糙的培養(yǎng)基表面涂布菌液時(shí) 高壓滅菌器在滅菌前的排氣 從玻璃或離心管上撥出棉塞時(shí) 處理關(guān)過(guò)受感染動(dòng)物的籠子 各種操作的氣溶膠飛散系數(shù) 各種操作的氣溶膠飛散系數(shù) 各種操作的氣溶膠飛散系數(shù) 各種操作的氣溶膠飛散系數(shù) 可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法 可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法 可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法 可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法 可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法 可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法 可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法 可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 實(shí)驗(yàn)室事故 傷害以及與工作有關(guān)的感染主要是由于人為失誤 不良實(shí)驗(yàn)技術(shù)以及儀器使用不當(dāng)造成的 實(shí)驗(yàn)室樣品的收集以及內(nèi)部傳遞和接收不當(dāng)時(shí) 都能夠帶來(lái)使相關(guān)人員感染的危險(xiǎn) 應(yīng)建立完善的管理制度與操作細(xì)則 避免或盡量減少這類(lèi)問(wèn)題的發(fā)生 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 樣品容器樣品容器可以是玻璃的 但最好使用塑料制品 樣品容器應(yīng)當(dāng)堅(jiān)固 正確地用蓋子或塞子蓋好后應(yīng)無(wú)泄漏 在容器外部不能有殘留物 容器上應(yīng)當(dāng)正確地張貼標(biāo)簽以便于識(shí)別 樣品的要求或說(shuō)明書(shū)不能夠卷在容器外面 而是要分開(kāi)放置 最好放置在防水的袋子里 樣品在設(shè)施內(nèi)的傳遞為了避免意外泄漏或溢出 應(yīng)當(dāng)使用盒子等二級(jí)容器 并將其固定在架子上使裝有樣品的容器保持直立 二級(jí)容器可以是金屬或塑料制品 應(yīng)該可以耐高壓滅菌或耐受化學(xué)消毒劑的作用 密封口最好有一個(gè)墊圈 要定期清除污染 樣品接收需要接收大量樣品的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)指定專(zhuān)門(mén)的房間或空間 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 包裝開(kāi)啟接收和打開(kāi)樣品的人員應(yīng)當(dāng)了解樣品對(duì)身體健康的潛在危害 并接受過(guò)如何采用常規(guī)預(yù)防措施的培訓(xùn) 尤其是處理破碎或泄漏的容器時(shí)更應(yīng)如此 樣品要在生物安全柜內(nèi)打開(kāi) 并準(zhǔn)備好消毒劑 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 移液管和移液輔助器的使用1 應(yīng)使用移液輔助器 嚴(yán)禁用口吸取 2 所有移液管應(yīng)帶有棉塞以減少移液器具的污染 3 不能向含有感染性物質(zhì)的溶液中吹人氣體 4 感染性物質(zhì)不能夠用移液管反復(fù)吹吸混合 5 不能將液體從移液管內(nèi)用力吹出 6 刻度對(duì)應(yīng) Mark to mark 移液管不需要吹出最后一滴液體 因此最好使用這種移液管 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 移液管和移液輔助器的使用7 污染的移液管應(yīng)該完全浸泡在盛有適當(dāng)消毒液的防碎容器中 移液管應(yīng)當(dāng)在消毒劑中浸泡18 24小時(shí)后再進(jìn)行處理 8 盛放廢棄移液管的容器應(yīng)當(dāng)放在生物安全柜內(nèi) 而不能放在外面 9 固定有皮下注射針頭的注射器不能夠用于移液 應(yīng)當(dāng)用鈍頭導(dǎo)管替代針頭 可以用工具打開(kāi)瓶塞后再用移液管取樣 從而避免使用注射器和針頭 10 為了避免感染性物質(zhì)從移液管中意外滴出而擴(kuò)散 在工作臺(tái)面應(yīng)當(dāng)放置一塊浸有消毒液的布或吸有消毒液的紙 使用后將其高壓滅菌或按感染性廢物處理 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 避免感染性物質(zhì)的擴(kuò)散1 為了避免轉(zhuǎn)移物質(zhì)灑落 微生物接種環(huán)的直徑應(yīng)為2 3mm并完全封閉 手柄 shanks 的長(zhǎng)度應(yīng)小于6cm以減小振動(dòng) 或者采用一次性滅菌棉簽 2 使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)能夠避免在本生燈的明火上加熱所引起的感染性物質(zhì)爆濺 最好使用不需要再進(jìn)行消毒的一次性接種環(huán) 3 為了避免產(chǎn)生氣泡和氣溶膠的擴(kuò)散 不要在玻片上進(jìn)行觸酶試驗(yàn) 而應(yīng)當(dāng)采用試管 毛細(xì)管或蓋玻片法 4 準(zhǔn)備高壓滅菌和 或處理的廢棄樣品和培養(yǎng)物應(yīng)當(dāng)放置在防漏的容器內(nèi) 如實(shí)驗(yàn)室廢物袋 5 在每一階段工作結(jié)束后 必須采用適當(dāng)?shù)南緞┣宄ぷ鲄^(qū)的污染 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 生物安全柜的使用1 應(yīng)參考國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)文獻(xiàn) 介紹生物安全柜的使用方法和局限性 并發(fā)給工作人員書(shū)面的操作步驟 安全或操作手冊(cè) 應(yīng)明確注明當(dāng)出現(xiàn)溢出 破損或不良操作時(shí) 安全柜就不再能保護(hù)操作者 2 生物安全柜必須運(yùn)行正常時(shí)才能使用 3 生物安全柜在使用中不能打開(kāi)玻璃觀察擋板 4 安全柜內(nèi)應(yīng)盡量少放置器材或樣品 不能阻礙后部的氣流循環(huán) 樣品在放人安全柜內(nèi)的工作區(qū)前需要清除表面污染 5 安全柜內(nèi)不能使用酒精燈 否則燃燒產(chǎn)生的熱量會(huì)干擾氣流并可能損壞過(guò)濾器 允許使用微型電加熱器 但最好使用一次性無(wú)菌接種環(huán) 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 生物安全柜的使用6 所有工作必須在工作臺(tái)面的中后部進(jìn)行 并能夠通過(guò)觀察擋板看到 7 盡量減少操作者身后的人員流動(dòng) 8 操作者不應(yīng)反復(fù)移出和伸進(jìn)手臂以免干擾氣流 9 實(shí)驗(yàn)記錄 移液管以及其他物品不能夠阻礙前面的空氣格柵 因?yàn)檫@將干擾氣體流動(dòng) 引起物品的潛在污染和操作者的暴露 10 工作完成后以及每天下班前 應(yīng)使用適當(dāng)?shù)南緞?duì)生物安全柜的表面進(jìn)行擦拭 11 工作開(kāi)始前和結(jié)束后 安全柜的風(fēng)機(jī)應(yīng)至少運(yùn)行5分鐘 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 避免感染性物質(zhì)的注入1 通過(guò)認(rèn)真練習(xí)和仔細(xì)操作 可以避免破碎玻璃器皿的意外刺傷 盡可能用塑料制品代替玻璃制品 2 皮下注射針頭 玻璃吸管以及破碎的玻璃均可能將感染性物質(zhì)注入體內(nèi) 3 以下兩點(diǎn)可以減少針刺事故 a 注射時(shí)特別小心 b 減少使用注射器和針頭 許多操作可用帶有鈍頭導(dǎo)管的注射器替代 可用一些簡(jiǎn)單的裝置來(lái)打開(kāi)瓶塞 然后使用吸管取樣 4 不要重新給用過(guò)的針頭戴護(hù)套 一次性注射器用完后 不必將針頭從注射器上取下 應(yīng)丟棄在防穿透的帶蓋容器中 5 應(yīng)當(dāng)用塑料吸管代替玻璃吸管 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 血清的分離1 只有經(jīng)過(guò)嚴(yán)格培訓(xùn)的人員才能進(jìn)行這項(xiàng)工作 2 操作時(shí)應(yīng)戴手套以及眼睛和黏膜的保護(hù)裝置 3 規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)可以避免或盡量減少?lài)姙R和氣溶膠的產(chǎn)生 血液和血清應(yīng)當(dāng)小心吸取 而不能傾倒 嚴(yán)禁用口吸液 4 移液管使用后應(yīng)完全浸入次氯酸鹽或其他適當(dāng)?shù)南疽褐?移液管應(yīng)在消毒液中浸泡至少18小時(shí) 然后再丟棄或滅菌清洗后重復(fù)使用 5 帶有血凝塊等的廢棄樣品管 在加蓋后應(yīng)當(dāng)放在適當(dāng)?shù)姆缆┤萜鲀?nèi)高壓滅菌和 或焚燒 6 為了清洗噴濺和溢出的血樣 應(yīng)當(dāng)備有每天新鮮配制的次氯酸鹽溶液 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 離心機(jī)的使用1 在使用實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)時(shí) 儀器良好的機(jī)械性能是保障微生物安全的前提條件 2 應(yīng)按照操作手冊(cè)來(lái)操作離心機(jī) 3 離心機(jī)放置的高度應(yīng)當(dāng)使低于平均身高的工作人員也能夠看到離心機(jī)腔體內(nèi)部 以正確放置十字軸和離心管套 4 離心管和盛放離心樣品的容器應(yīng)當(dāng)由厚壁玻璃制成 或最好為塑料制品 并且在使用前應(yīng)檢查是否破損 5 用于離心的試管和樣品容器應(yīng)當(dāng)始終牢固蓋緊 最好使用螺旋蓋 6 離心管套的裝載 平衡 密封和打開(kāi)必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 離心機(jī)的使用7 離心管套和十字軸應(yīng)按重量配對(duì) 并在裝載離心管后正確平衡 8 操作指南中應(yīng)給出液面距離心管邊緣需要留出的空間大小 9 空離心管套應(yīng)當(dāng)用蒸餾水或乙醇 異丙醇 70 平衡 鹽溶液或次氯酸鹽溶液對(duì)金屬具有腐蝕作用 因此不能使用 10 對(duì)于危險(xiǎn)度3級(jí)和4級(jí)的微生物 必須使用可封口的離心離心管套 安全杯 11 當(dāng)使用固定角離心轉(zhuǎn)子時(shí) 必須小心不能將離心管裝得過(guò)滿(mǎn) 否則會(huì)導(dǎo)致漏液 12 應(yīng)當(dāng)每天檢查離心機(jī)內(nèi)轉(zhuǎn)子部位的腔壁是否被沾染或弄臟 如污染明顯 應(yīng)重新評(píng)估離心操作規(guī)程 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 離心機(jī)的使用13 應(yīng)當(dāng)每天檢查離心轉(zhuǎn)子和離心管套是否有腐蝕或細(xì)微裂痕 14 每次使用后 要清除離心管套 轉(zhuǎn)子和離心機(jī)腔的污染 15 使用后離心管套應(yīng)當(dāng)?shù)怪么娣攀蛊胶庖毫鞲?16 當(dāng)使用離心機(jī)時(shí) 可能?chē)娚涑隹稍诳諝庵袀鞑サ母腥拘灶w粒 如果將離心機(jī)放置在傳統(tǒng)的前開(kāi)式的I級(jí)或 級(jí)生物安全柜內(nèi) 這些粒子由于運(yùn)動(dòng)過(guò)快而不能被安全柜內(nèi)的氣流截留 而在 級(jí)生物安全柜內(nèi)封閉離心時(shí) 可以防止生成的氣溶膠廣泛擴(kuò)散 但是 良好的離心操作技術(shù)和牢固加蓋的離心管可以提供足夠的保護(hù) 以防止感染性氣溶膠和可擴(kuò)散粒子的產(chǎn)生 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 勻漿器 搖床 攪拌器和超聲處理器的使用1 實(shí)驗(yàn)室不能使用家用 廚房 勻漿器 因?yàn)樗鼈兛赡苄孤┗蜥尫艢馊苣z 使用實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)用攪拌器和消化器 stomacher 更為安全 2 蓋子 杯子或瓶子應(yīng)當(dāng)保持正常狀態(tài) 沒(méi)有裂縫或變形 蓋子應(yīng)能封蓋嚴(yán)密 襯墊也應(yīng)處于正常狀態(tài) 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 3 在使用勻漿器 搖床和超聲處理器時(shí) 容器內(nèi)會(huì)產(chǎn)生壓力 含有感染性物質(zhì)的氣溶膠就可能從蓋子和容器間隙逸出 由于玻璃可能破碎而釋放感染性物質(zhì)并傷害操作者 建議使用塑料容器 尤其是聚四氟乙烯 po1ytetranuoroe thylene PTFE 容器 4 使用勻漿器 搖床和超聲處理器時(shí) 應(yīng)該用一個(gè)結(jié)實(shí)透明的塑料箱覆蓋設(shè)備 并在用完后消毒 可能的話 這些儀器可在生物安全柜內(nèi)覆蓋塑料罩進(jìn)行操作 5 操作結(jié)束后 應(yīng)在生物安全柜內(nèi)打開(kāi)容器 6 應(yīng)對(duì)使用超聲處理器的人員提供聽(tīng)力保護(hù) 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 組織研磨器的使用1 使用玻璃研磨器時(shí)應(yīng)戴手套 并用一塊具有吸收性的軟物包住研磨器 塑料 聚四氟乙烯 研磨器更加安全 2 操作和打開(kāi)組織研磨器時(shí)應(yīng)當(dāng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 冰箱與冷柜的維護(hù)和使用1 冰箱 低溫冷柜和干冰柜應(yīng)當(dāng)定期除霜和清潔 應(yīng)清理出所有在儲(chǔ)存過(guò)程中破碎的安瓿和試管等物品 清理時(shí)應(yīng)戴厚橡膠手套并進(jìn)行面部防護(hù) 清理后要對(duì)內(nèi)表面進(jìn)行消毒 2 儲(chǔ)存在冰箱內(nèi)的所有容器應(yīng)當(dāng)清楚地標(biāo)明內(nèi)裝物品的學(xué)名 儲(chǔ)存日期和儲(chǔ)存者的姓名 未標(biāo)明的或廢舊物品應(yīng)當(dāng)高壓滅菌并丟棄 3 應(yīng)當(dāng)保存一份凍存物品的清單 4 除非采用有效防爆措施 否則冰箱內(nèi)不能放置易燃溶液并冰箱門(mén)上應(yīng)明確標(biāo)示 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 裝有凍干感染性物質(zhì)安瓿的開(kāi)啟當(dāng)打開(kāi)裝有凍干物的安瓿時(shí)必須小心 因?yàn)槠鋬?nèi)部可能處于負(fù)壓 瞬間進(jìn)入的空氣可能使一些物質(zhì)擴(kuò)散進(jìn)入空氣 安瓿應(yīng)該在生物安全柜內(nèi)打開(kāi) 建議按下列步驟打開(kāi)安瓿 1 首先清除安瓿外表面的污染 2 如果管內(nèi)有棉花或纖維塞 可以在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡 3 用一團(tuán)酒精浸泡的棉花將安瓿包起來(lái)以保護(hù)雙手 然后手持安瓿從標(biāo)記的銼痕處打開(kāi) 4 將頂部小心移去并按污染物處理 5 如果塞子仍然在安瓿上 用消毒鑷子除去 6 緩慢向安瓿中加入液體來(lái)重懸凍干物 避免出現(xiàn)泡沫 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 裝有感染性物質(zhì)安瓿的儲(chǔ)存裝有感染性物質(zhì)的安瓿不能浸入液氮中 因?yàn)檫@樣會(huì)造成有裂痕或密封不嚴(yán)的安瓿在取出時(shí)破碎或爆炸 如果需要低溫保存 安瓿應(yīng)當(dāng)儲(chǔ)存在液氮上面的氣相中 此外 感染性物質(zhì)應(yīng)儲(chǔ)存在低溫冰柜或干冰中 當(dāng)從冷凍儲(chǔ)存器中取出安瓿時(shí) 實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)當(dāng)進(jìn)行眼睛和手的防護(hù) 以這種方式儲(chǔ)存的安瓿在取出時(shí)應(yīng)對(duì)外表面進(jìn)行消毒 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 樣品的收集 標(biāo)記和運(yùn)輸1 始終遵循常規(guī)預(yù)防措施 所有操作均要戴手套2 應(yīng)當(dāng)由受過(guò)培訓(xùn)的人員來(lái)采集病人或動(dòng)物的血樣 3 在靜脈抽血時(shí) 應(yīng)當(dāng)使用一次性的安全的抽真空設(shè)備取代傳統(tǒng)的針頭和注射器 因?yàn)檫@樣可以使血液直接采集到帶塞的運(yùn)輸管和 或培養(yǎng)管中 用完后自動(dòng)廢棄針頭 4 裝有樣品的試管應(yīng)置于適當(dāng)容器中運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室 在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部轉(zhuǎn)運(yùn)也應(yīng)這樣說(shuō)明書(shū)應(yīng)當(dāng)分開(kāi)放置在防水袋或信封內(nèi) 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 玻璃器皿和 銳器 1 盡可能用塑料制品代替玻璃制品 只能用實(shí)驗(yàn)室級(jí)別 硼硅酸鹽 的玻璃 任何破碎或有裂痕的玻璃制品均應(yīng)丟棄 2 不能將皮下注射針作為移液管使用 可以使用鈍頭導(dǎo)管 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 用于顯微觀察的薄膜和涂片用于顯微觀察的血液 唾液和糞便樣品在固定和染色時(shí) 并不必殺死涂片上的所有微生物和病毒 應(yīng)當(dāng)用鑷子拿取這些東西 恰當(dāng)儲(chǔ)存 并經(jīng)清除污染和 或高壓滅菌后再丟棄 自動(dòng)化儀器 超聲處理器 渦旋混合器 1 為了避免液滴和氣溶膠的擴(kuò)散 這些儀器應(yīng)采用封閉型的 2 排出物應(yīng)當(dāng)收集在封閉的容器內(nèi)進(jìn)一步高壓滅菌和 或廢棄 3 在每一步完成后應(yīng)根據(jù)操作指南對(duì)儀器進(jìn)行消毒 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 組織1 組織樣品應(yīng)當(dāng)采用福爾馬林固定 小塊樣品 如針頭活檢樣品 能夠在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)固定和消毒 但是較大樣品則可能需要幾天時(shí)間 2 應(yīng)當(dāng)避免冰凍切片 如果必須進(jìn)行冰凍切片 應(yīng)當(dāng)罩住冰凍機(jī) 操作者要戴安全防護(hù)罩 面具 清除污染時(shí) 儀器的溫度要升至20 C 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 生物安全實(shí)驗(yàn)室消毒與滅活消毒和滅菌的基本常識(shí)對(duì)于實(shí)驗(yàn)室生物安全是至關(guān)重要的 生物安全中關(guān)于清除污染的特殊要求要根據(jù)實(shí)驗(yàn)工作的類(lèi)型和所操作感染性物質(zhì)的特性來(lái)決定 因此 有必要利用已知的普通信息來(lái)確立更具體的和標(biāo)準(zhǔn)化的程序 以滿(mǎn)足某些特殊實(shí)驗(yàn)室中各種不同生物危害水平的需求 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 清除局部環(huán)境的污染需要聯(lián)合應(yīng)用液體和氣體消毒劑來(lái)清除實(shí)驗(yàn)室空間 用具和設(shè)備的污染 清除表面污染時(shí)可以使用次氯酸鈉 Na0C1 溶液 含有1 有效氯的溶液適于普通的環(huán)境衛(wèi)生設(shè)備 但是當(dāng)處理高危環(huán)境時(shí) 建議使用高濃度 5g L 溶液 用于清除環(huán)境污染時(shí) 含有3 過(guò)氧化氫的溶液也可以作為漂白劑的代用品 可以通過(guò)加熱多聚甲醛或煮沸福爾馬林所產(chǎn)生的甲醛蒸氣熏蒸來(lái)清除房間和儀器的污染 產(chǎn)生甲醛蒸氣 前 房間的所有開(kāi)口 如門(mén)窗等 都應(yīng)用密封帶或類(lèi)似物加以密封 熏蒸應(yīng)當(dāng)在室溫不低于21 且相對(duì)濕度70 的條件下進(jìn)行清除污染時(shí)氣體需要與物體表面至少接觸8小時(shí) 熏蒸后 該區(qū)域必須徹底通風(fēng)后才能允許人員進(jìn)入 在通風(fēng)之前需要進(jìn)入房間時(shí) 必須戴適當(dāng)?shù)姆蓝久婢?可以采用氣態(tài)的碳酸氫銨來(lái)中和甲醛 已有報(bào)道 可采用過(guò)氧化氫溶液的氣霧熏蒸污染的空間 但對(duì)此還需要進(jìn)一步的研究 注 甲醛是一種危險(xiǎn)和有刺激性的氣體 并懷疑有致癌性 應(yīng)使用具有供氣系統(tǒng)的全面罩式防毒面具 操作時(shí)應(yīng)當(dāng)采用 雙人 制 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 生物安全柜污染的清除清除I級(jí)和 級(jí)生物安全柜的污染時(shí) 應(yīng)當(dāng)將適量的多聚甲醛 空氣中的終濃度達(dá)到0 8 放在電熱板或電熱盤(pán)上 在生物安全柜外進(jìn)行控制 然后在生物安全柜內(nèi)放置第二個(gè)放有比多聚甲醛多10 的碳酸氫銨的加熱板或盤(pán) 第二個(gè)盤(pán)上覆蓋一個(gè)能夠從遠(yuǎn)處將其移走的蓋子 如連接一個(gè)能夠從生物安全柜外拉動(dòng)的繩子 從而盡量減少對(duì)甲醛氣體的提前中和 如果相對(duì)濕度低于70 在使用強(qiáng)力膠帶 如 管道密封膠帶 ducttape 密封前部封閉板前 還要在安全柜內(nèi)部放置一個(gè)開(kāi)口的盛有熱水的容器 如果前部沒(méi)有封閉板 則可以用重型塑料布 heavygaugeplastic heeting 粘貼覆蓋在前部以保證氣體不會(huì)泄漏進(jìn)入房間 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 打開(kāi)多聚甲醛盤(pán)的加熱開(kāi)關(guān) 1小時(shí)后或多聚甲醛完全蒸發(fā)后關(guān)閉 讓生物安全柜靜置過(guò)夜 移去第二個(gè)盤(pán)子的蓋后打開(kāi)加熱開(kāi)關(guān) 讓碳酸氫銨揮發(fā) 然后 關(guān)閉開(kāi)關(guān)并啟動(dòng)安全柜讓碳酸氫銨氣體循環(huán)1小時(shí) 移去前封閉板 或塑料布 后就可以使用生物安全柜了 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 洗手 清除手部污染接觸生物危害性材料時(shí) 必須戴合適的手套 但是這并不能代替實(shí)驗(yàn)室人員需要經(jīng)常地 徹底地洗手 接觸過(guò)生物危害性材料和動(dòng)物后 使用過(guò)衛(wèi)生間后 離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前以及吃東西前都必須洗手 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 大多數(shù)情況下 用普通的肥皂和水徹底沖洗對(duì)于清除手部污染就足夠了 但在高度危險(xiǎn)的情況下 建議使用殺菌肥皂 手要完全抹上肥皂 搓洗至少10秒鐘 用干凈水沖洗后再用干凈的紙巾或毛巾擦干 如果有條件 也推薦使用暖風(fēng)干手器 推薦使用腳控或肘控的水龍頭 如果沒(méi)有安裝 應(yīng)使用紙巾或毛巾關(guān)上水龍頭以防止再度污染洗凈的手 如上所述 如果沒(méi)有條件徹底洗手或洗手不方便 應(yīng)該用酒精擦手來(lái)清除雙手的輕度污染 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 加熱滅菌和消毒加熱是最常用的清除病原體污染的物理手段 干 熱沒(méi)有腐蝕性 可用來(lái)處理實(shí)驗(yàn)器材中許多可耐受160 C或更高溫度2 4小時(shí)的物品 燃燒或焚化也是一種干熱方式 高壓滅菌的濕熱法則最為有效 煮沸并不一定能殺死所有的微生物或病原體 但如果其他方法 化學(xué)殺菌 清除污染 高壓滅菌 不可行或沒(méi)有條件時(shí) 也可以作為一種最起碼的消毒措施 滅菌后的物品必須小心操作并保存 以保證在使用之前不再被污染 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 高壓滅菌壓力飽和蒸汽滅菌 高壓滅菌 是對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行滅菌時(shí)最有效和最可靠的方法 對(duì)于大多數(shù)目的 下列組合可以確保正確裝載的高壓滅菌器的滅菌效果 134 2 3分鐘 126 10分鐘 121 15分鐘 115 25分鐘 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 高壓滅菌器的裝載為了利于蒸汽的滲透和空氣排出 高壓滅菌物品應(yīng)松散包裝放置在滅菌器內(nèi) 要使蒸汽能夠作用到其內(nèi)容物 通過(guò)高壓滅菌器內(nèi)的蒸汽 由下而上置換空氣并經(jīng)排氣孔排出 當(dāng)所有的空氣排出后 關(guān)閉排氣孔的閥門(mén) 緩慢加熱使壓力和溫度上升到安全閥預(yù)置的水平 此時(shí)記為滅菌開(kāi)始時(shí)間 滅菌結(jié)束后停止加熱 讓溫度下降到80 以下再打開(kāi)蓋子 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 高壓滅菌器使用注意事項(xiàng)下列規(guī)定能夠減小操作壓力容器時(shí)會(huì)發(fā)生的危害 1 高壓滅菌器的操作和日常維護(hù)應(yīng)由受過(guò)良好培訓(xùn)的人員負(fù)責(zé) 預(yù)防性的維護(hù)程序應(yīng)包括 由有資質(zhì)人員定期檢查滅菌器內(nèi)部 門(mén)的密封性以及所有的儀表和控制器 2 應(yīng)使用飽和蒸汽 并且其中不含腐蝕性抑制劑或其他化學(xué)試劑 這些物質(zhì)可能污染正在滅菌的物品 3 所有要高壓的物品都應(yīng)放在空氣能夠排出并具有良好熱滲透性的容器中 滅菌器內(nèi)不能塞得過(guò)緊 否則蒸汽不能均勻作用于裝載物 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 4 當(dāng)滅菌器內(nèi)部加壓時(shí) 互鎖安全裝置可以防止門(mén)被打開(kāi) 而沒(méi)有互鎖裝置的高壓滅菌器 應(yīng)當(dāng)關(guān)閉主蒸汽閥并待溫度下降到80 以下時(shí)再打開(kāi)門(mén) 5 即使溫度下降到80 以下 操作者打開(kāi)門(mén)時(shí)也應(yīng)當(dāng)戴適當(dāng)?shù)氖痔缀兔嬲謥?lái)進(jìn)行防護(hù) 6 在進(jìn)行高壓滅菌效果的常規(guī)監(jiān)測(cè)中 生物指示劑或熱電偶計(jì)應(yīng)置于每件高壓滅菌物品的中心 最好在 最大 裝載時(shí)用熱偶計(jì)和記錄儀進(jìn)行定時(shí)監(jiān)測(cè) 以確定滅菌程序是否恰當(dāng) 7 滅菌器的過(guò)濾器 如果有 應(yīng)當(dāng)每天拆下清洗 8 應(yīng)當(dāng)注意保證高壓滅菌器的安全閥沒(méi)有被高壓滅菌物品中的紙等堵塞 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 焚燒在處理那些經(jīng)過(guò)或事先未經(jīng)清除污染的動(dòng)物尸體以及解剖組織或其他實(shí)驗(yàn)室廢物時(shí) 焚燒是一種有效的方法 只有在實(shí)驗(yàn)室可以控制焚燒爐 并且能夠有效地控制溫度和配備了二級(jí)焚燒室時(shí) 才能用焚燒代替高壓滅菌來(lái)處理感染性物質(zhì) 焚燒也是一種處理被朊蛋白污染物品的有效方法 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 需要焚燒的材料 即使事先已清除污染 應(yīng)當(dāng)用袋子運(yùn)送到焚燒室 最好使用塑料袋 負(fù)責(zé)焚燒的工作人員應(yīng)當(dāng)接受關(guān)于如何裝載和控制溫度等的正確指導(dǎo) 還需要注明的是 焚燒爐的操作是否有效主要取決于對(duì)需要處理的廢物中物品的正確混合 危險(xiǎn)度評(píng)估 危險(xiǎn)評(píng)價(jià)首先集中在實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染的防御上 當(dāng)實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)涉及傳染或潛在傳染因子時(shí) 對(duì)某一個(gè)特定的操作程序或?qū)嶒?yàn)進(jìn)行危險(xiǎn)度評(píng)估 危險(xiǎn)評(píng)價(jià)幫助正確選擇生物安全水平 設(shè)施 設(shè)備和操作 評(píng)估職業(yè)性疾病風(fēng)險(xiǎn) 采取相應(yīng)安全防護(hù)措施 減少危險(xiǎn)性事件發(fā)生 危險(xiǎn)度評(píng)估 在進(jìn)行危險(xiǎn)性的評(píng)估和選擇安全防護(hù)措施時(shí) 應(yīng)充分考慮有關(guān)實(shí)驗(yàn)以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的特點(diǎn) 可能直接或間接參與風(fēng)險(xiǎn)的傳染性病原 工作人員的專(zhuān)業(yè)素養(yǎng)及經(jīng)驗(yàn) 實(shí)施項(xiàng)目的具體活動(dòng)和程序等因素 做出決策 根據(jù)傳染過(guò)程的基本因素 減少工作人員暴露的危險(xiǎn)和使環(huán)境污染降到最低限度 危險(xiǎn)度評(píng)估 危險(xiǎn)度評(píng)估應(yīng)當(dāng)由那些對(duì)微生物特性 設(shè)備和操作程序 動(dòng)物模型 屏障設(shè)備和設(shè)施最為熟悉的人員來(lái)進(jìn)行 授權(quán)的專(zhuān)業(yè)人員進(jìn)行 危險(xiǎn)度評(píng)估一旦進(jìn)行 在必要時(shí)就應(yīng)當(dāng)對(duì)它進(jìn)行常規(guī)性的評(píng)估和修訂 同時(shí)要考慮收集與危險(xiǎn)程度相關(guān)的新資料以及來(lái)自科學(xué)文獻(xiàn)的其他相關(guān)的新信息 微生物的危險(xiǎn)評(píng)價(jià)涉及范疇 1 已知的傳染微生物經(jīng)過(guò)鑒定的病原體 有實(shí)驗(yàn)室研究 疾病監(jiān)測(cè)和流行病學(xué)研究危險(xiǎn)評(píng)價(jià)資料 2 未知傳染微生物對(duì)未知傳染微生物危險(xiǎn)評(píng)價(jià)的需要考慮以下方面 傳染性 傳播途經(jīng) 發(fā)病率和死亡率等流行病學(xué)和病原血清型等生物學(xué)特性資料 微生物的危險(xiǎn)評(píng)價(jià)涉及范疇 3 基因修飾微生物通過(guò)基因修飾技術(shù)獲得的具有新特性的微生物 通常通過(guò)受體和供體的生物特性和用量 進(jìn)行危險(xiǎn)性評(píng)價(jià) 修飾后是否改變其毒性 繁殖能力 宿主范圍 與宿主染色體整合性和對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)周期的影響等 4 未知傳染性的生物材料在缺少資料證明有或沒(méi)有未知傳染性微生物材料時(shí)應(yīng)該擴(kuò)展防護(hù)范圍和提高防護(hù)級(jí)別 危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容 進(jìn)行微生物危險(xiǎn)度評(píng)估最有用的工具之一就是列出微生物的危險(xiǎn)度等級(jí) 然而對(duì)于一個(gè)特定的微生物來(lái)講 在進(jìn)行危險(xiǎn)度評(píng)估時(shí)僅僅參考危險(xiǎn)度等級(jí)的分類(lèi)是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的 適當(dāng)時(shí)還應(yīng)考慮其他一些因素 包括 1 微生物的致病性和感染劑量越是發(fā)病率高 后果嚴(yán)重的病原越是危險(xiǎn) 病原體的來(lái)源在危險(xiǎn)評(píng)價(jià)時(shí)必須考慮在內(nèi) 來(lái)源 涉及到微生物來(lái)源的地域 宿主和特點(diǎn) 危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容 2 暴露的后果發(fā)生暴露后對(duì)人員或環(huán)境可能的危害后果3 自然感染途徑傳染性病原能通過(guò)四種主要的感染途徑而致病 即攝人 吸人 黏膜接觸以及腸道外直接接種 感染途徑 可能與自然患病的感染途徑相類(lèi)似 也可能截然不同 危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容 4 實(shí)驗(yàn)室操作所造成的其他感染途徑 非消化道途徑 空氣傳播 食入 傳染性病原可通過(guò)天然的或人為的方式從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)逸散 經(jīng)尿液 唾液和糞便排出或從皮膚損害部位釋出是天然逸散方式的例子 促使傳染性病原從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)逸散的人為方式有很多 用針頭和注射器從病毒血癥動(dòng)物身上抽取血樣 活組織檢查或尸體剖檢操作者時(shí)被帶有污染物的針頭 刀刃刺傷 割破或擦傷 以及被動(dòng)物咬傷而直接接種 照料動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)吸人帶污染物的氣溶膠被濺出的污染物 污染的手和污染的表面接觸操作人員的眼睛 鼻腔或口腔黏膜 氣溶膠傳播的可能性越大 危險(xiǎn)性越高 通過(guò)氣溶膠傳播的疾病最容易發(fā)生實(shí)驗(yàn)室感染 危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容 進(jìn)行微生物危險(xiǎn)度評(píng)估最有用的工具之一就是列出微生物的危險(xiǎn)度等級(jí) 然而對(duì)于一個(gè)特定的微生物來(lái)講 在進(jìn)行危險(xiǎn)度評(píng)估時(shí)僅僅參考危險(xiǎn)度等級(jí)的分類(lèi)是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的 適當(dāng)時(shí)還應(yīng)考慮其他一些因素 包括 1 微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性不僅考慮微生物的傳染性 細(xì)菌芽胞 而且要考慮其在環(huán)境中的存活力 抗性越強(qiáng)越危險(xiǎn) 危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容 2 所操作微生物的濃度和濃縮樣品的體積根據(jù)研究?jī)?nèi)容 病原體濃度決定危險(xiǎn)的程度 濃度越高越危險(xiǎn) 3 適宜宿主 人或動(dòng)物 的存在常見(jiàn)的人畜共患疾病文獻(xiàn)記載的職業(yè)性疾病來(lái)源人體患病的嚴(yán)重程度 對(duì)疾病的抵抗力 危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容 4 從動(dòng)物研究和實(shí)驗(yàn)室感染報(bào)告或臨床報(bào)告中得到的信息在人體數(shù)據(jù)缺乏時(shí) 動(dòng)物研究數(shù)據(jù)可對(duì)危險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供有用的資料 動(dòng)物體致病性 傳染性和傳播途徑的信息可提供有價(jià)值的提示 但推論從一種動(dòng)物到另一種動(dòng)物傳染性時(shí) 必須小心驗(yàn)證 危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容 5 計(jì)劃進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)室操作 如濃縮 超聲處理 氣溶膠化 離心等 實(shí)驗(yàn)室操作內(nèi)容與其設(shè)備相關(guān)操作細(xì)則是否可保證其不泄露 實(shí)驗(yàn)程序和操作方法 操作的性質(zhì)和作用避免操作者攝人吸人 直接接種 割破或擦傷 針刺 咬傷直接接觸可能性 危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容 6 可能會(huì)擴(kuò)大微生物的宿主范圍或改變微生物對(duì)于已知有效治療方案敏感性的所有基因技術(shù)對(duì)開(kāi)展遺傳修飾微生物方面的工作進(jìn)行危險(xiǎn)度評(píng)估時(shí) 必須要包括對(duì)其潛在的危害程度 后果的嚴(yán)重性以及發(fā)生這種危害的可能性或頻率大小 宿主的易感性 宿主菌的致病性 包括毒力 傳染性 毒素生成 宿主范圍的變化 受體的免疫程度以及免疫系統(tǒng)的狀態(tài) 暴露后果的嚴(yán)重性 直接由插入的外源性基因片段所產(chǎn)生的危害當(dāng)插人外源性基因后的產(chǎn)物具有有害生物學(xué)活性危害性等方面的評(píng)估 危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容 當(dāng)?shù)厥欠窨梢赃M(jìn)行有效的預(yù)防或治療干預(yù)預(yù)防和治療的有效性是應(yīng)該考慮的重要因素 有效性越低 危險(xiǎn)性越大 反之亦然 試驗(yàn)室工作人員 有無(wú)免疫預(yù)防措施 文獻(xiàn)記載的職業(yè)性疾病 工作人員的素養(yǎng)及經(jīng)驗(yàn) 危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容 危險(xiǎn)度評(píng)估時(shí) 只有在明確了上述信息的基礎(chǔ)上 才能明確所計(jì)劃開(kāi)展的研究工作的生物安全水平級(jí)別 并選擇合適的個(gè)體防護(hù)裝備 對(duì)于那些所知甚少的樣品當(dāng)了解了足夠的信息時(shí) 才能很好地進(jìn)行上述危險(xiǎn)度評(píng)估 菌 毒 種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定 為保證菌 毒 種管理體系能規(guī)范化制度化正常運(yùn)作 制定符合本單位實(shí)際情況的菌 毒 種管理及監(jiān)督標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則 SOP 是非常必要的 該 SOP 主要內(nèi)容包括 菌 毒 種管理與監(jiān)督標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)總則 其內(nèi)容包括菌 毒 種接收 分離 標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則 SOP 種子批制備與質(zhì)控準(zhǔn)操作細(xì)則 SOP 菌 毒 種使用 保藏 分發(fā)標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則 SOP 菌 毒 種銷(xiāo)毀標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則 SOP 菌 毒 種事故應(yīng)急處理標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則 SOP 菌 毒 種管理監(jiān)督標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則 SOP 在各細(xì)則中根據(jù)其實(shí)際內(nèi)容或?qū)嶒?yàn) 制定更詳細(xì)的各實(shí)驗(yàn)獨(dú)立的操作細(xì)則 并制作對(duì)應(yīng)的規(guī)范化表格化的原始記錄 菌 毒 種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定 1 菌 毒 種管理與監(jiān)督標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)總則總則的內(nèi)容主要為菌 毒 種管理與監(jiān)督的制定SOP指導(dǎo)思想 各SOP形成與批準(zhǔn)程序 主要內(nèi)容提要 以及各SOP目錄 實(shí)施與監(jiān)督部門(mén) 2 菌 毒 種接收 分離 標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則 SOP 菌 毒 種接收標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則 SOP 要求內(nèi)容 接收 外購(gòu) 贈(zèng)送 審批與接收程序 對(duì)菌種來(lái)源 背景資料的要求 接收樣品的檢驗(yàn) 菌 毒 種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定 要求配套原始記錄 1 菌 毒 種外購(gòu) 接受贈(zèng)送 申請(qǐng)表 2 菌種來(lái)源 背景資料登記記錄 3 菌 毒 種入庫(kù)登記表 4 外來(lái)菌種傳代與檢驗(yàn)記錄 菌 毒 種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定 菌 毒 種分離標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則 SOP 取樣程序 對(duì)菌種來(lái)源 背景資料的要求 樣品的分離操作 如分離過(guò)程較復(fù)雜可分寫(xiě)各自獨(dú)立SOP 1 樣品來(lái)源 背景資料登記記錄 2 菌 毒 種分離記錄 3 外來(lái)菌種傳代與檢驗(yàn)記錄 4 菌 毒 種入庫(kù)或處理登記表 菌 毒 種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定 3 菌 毒 種種子批制備與質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則 SOP 菌 毒 種種子批制備標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則 SOP 內(nèi)容包括原代主代及工作種子批制品過(guò)程各工藝要求細(xì)則 批準(zhǔn)種子批發(fā)行使用程序 各過(guò)程應(yīng)制定相對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)原始記錄 菌 毒 種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定 菌 毒