實驗二 細菌涂(抹)片的制備和革蘭氏染色.ppt_第1頁
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文檔簡介

實驗二細菌涂 抹 片的制備和革蘭氏染色 目的要求 1 掌握細菌抹片的制備方法和常用染色方法 2 認識革蘭氏染色和抗酸性染色的反應特性 實驗內容 1 細菌抹片的制備 玻片準備 透明 潔凈 無油漬 抹片 液體材料 非液體材料 組織臟器材料的抹片方法講解 示范 干燥固定 火焰固定和化學固定的示范 講解其目的及注意事項 2 細菌涂片的制備 講解并示范涂片 干燥 固定的方法 3 細菌常用染色方法 革蘭氏染色法 細菌抹片的制備 革蘭氏染色法 1 制片 取待檢病料或細菌培養(yǎng)物常規(guī)抹 涂 片 干燥 固定 2 初染 滴加結晶紫 染色1 2分鐘 水洗 3 媒染 用碘液沖去殘水 并用碘液覆蓋約1分鐘 水洗 4 脫色 用濾紙吸取或甩去載玻片上的殘水 將載玻片傾斜 在白色背景下 用滴管流加95 乙醇脫色 直至流出的乙醇無紫色時 20 30秒 立即水洗 5 復染 用復紅液復染約2分鐘 水洗 6 鏡檢 用濾紙吸水 干燥后 顯微鏡油鏡觀察 革蘭氏染色法原理 革蘭氏染色法將細菌分為G 和G 這由兩類細菌細胞壁的結構和組成的不同而決定 用結晶紫初染后 所有的細菌都染上藍紫色 碘作為媒染劑能與結晶紫結合形成結晶紫 碘的復合物 增強了染料與菌體的結合力 用乙醇脫色處理時 兩類細菌的脫色效果是不同的 G 細菌的細胞壁主要由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結構組成 且壁厚 類脂含量低 用乙醇脫色時使細胞壁脫水 網(wǎng)狀結構孔徑縮小 通透性降低 使得結晶紫 碘的復合物不易被洗脫而保留在細胞內 雖經洗脫和復染仍然保持初染劑的藍紫色 G 細菌則不同 由于其細胞壁肽聚糖層較薄 類脂含量高 所以在脫色處理時 類脂被乙醇溶解 細胞壁的通透性增大 使結晶紫 碘的復合物比較容易被洗脫出來 用復染劑復染后 細胞被染上復染劑的顏色 G 菌與G 菌細胞壁的區(qū)別 細胞壁革蘭陽性菌革蘭陰性菌強度較堅韌較疏松厚度21 80nm10 15nm肽聚糖層可達50層1 2層肽聚糖量50 80 5 80 糖類量約45 15 20 脂類量1 4 11 22 磷壁酸 外膜 革蘭氏染色法過程示意圖 革蘭氏染色法動畫 革蘭陽性菌革蘭陰性菌 革蘭氏染色法 革蘭氏染色法動畫 實驗報告 1 細菌抹片或涂片革蘭氏染色的顯微鏡觀察結果 2 革蘭氏染色法的具體程序和注意事項 細菌的單染色 細菌抗酸染色 1 初染 用玻片夾夾持涂片標本 滴加石炭酸復紅2 3滴 在火焰高處徐徐加熱 切勿沸騰 出現(xiàn)蒸汽即暫時離開 若染液蒸發(fā)減少 應再加染液 以免干涸 加熱3 5分鐘 待標本冷卻后用水沖洗 2 脫色

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