生物藥劑學與藥物動力學實驗講義

1 生物藥劑學與藥物動力學 實驗講義 中藥藥劑學教研室編寫 2006 年 12 月 2 目目 錄錄 實驗一 片劑溶出度試驗 4 實驗二 尿藥法測定水楊酸鈉片劑的生物利用度 7 實驗三 撲熱息痛血管外給藥的藥物動力學研究 10 實驗四 大鼠在體小腸吸收實驗 13 實驗五 氨茶堿藥物動力學的研究 15 3 生物藥劑學與藥物動力學實驗須知 生物藥劑學與藥物動力學屬于藥物臨床應用學科的范疇 具有綜合性強 應用性強 創(chuàng)新性強 等特點 生物藥劑學與藥物動力學實驗是教學的重要組成部分 是理論與實踐結合的主要方式之一 通過實驗課不僅能印證 鞏固和擴展教學內容 還能訓練基本操作技能 培養(yǎng)良好的實驗作風 為保證實驗課順利進行 并達到預期的目的 實驗中必須做到以下六個方面 1 預習實驗內容 通過預習 明確實驗目的與要求 對實驗內容做到心中有數(shù) 并能合理安 排實驗順序與時間 要明確每個處方中藥物與輔料的用途 2 遵守實驗紀律 不遲到 不早退 不曠課 保持實驗肅靜 未經許可 不得將實驗室物品 帶離實驗室 3 重視藥劑衛(wèi)生 進入實驗室必須穿整潔的白工作服 先將工作臺面擦洗干凈再開始做實驗 實驗過程中應始終注意臺面 地面的整潔 各種廢棄物應投入指定位置 不能隨手亂丟 更不能棄 入水槽內 完成實驗后 應將容器 儀器清潔 擺放整齊 臺面擦凈 經教師同意后方能離開 值 日生負責整理公用器材 清掃實驗室 關好水 電 門 窗 4 細心操作 勤于思考 稱量藥品 試劑時 要在稱量前 拿取時 稱量時和稱量后 放回 時 進行三次核對 稱量完畢應立即蓋好瓶塞 放回原處 對劇毒藥品更要仔細核對名稱與劑量 并準確稱取 實驗中要嚴格控制好實驗條件 認真操作每一道工序 以保證成品質量 實驗成品應 標明名稱 規(guī)格 配制者 配制時間 并交教師驗收 實驗中遇到問題應先獨立思考 再請教他人 在實驗中逐步形成整潔 細致 嚴謹 冷靜 善于觀察 善于思考 勤于動手的實驗風格 5 正確使用儀器 注意安全 使用儀器時要按使用方法正確操作 不熟悉操作方法時 應在 教師指導下使用 各種儀器 容器使用時要注意輕拿 輕放 用畢要清潔后放回規(guī)定位置 6 寫好實驗報告 實驗報告是考察學生分析總結實驗資料能力和寫作能力的重要方面 亦是 評定實驗成績的重要依據 實驗報告的格式如下所示 實驗目的及原理 寫出實驗目的及原理 實驗操作 寫出具體實驗步驟和實驗條件 實驗結果 記錄各采樣時間點及采樣的狀態(tài) 按要求對數(shù)據進行處理 并將全班數(shù)據進行綜合 求其平均值和標準差 討論 闡述實驗原理 實驗收獲與教訓 建議等 思考題 回答實驗思考題 每一實驗內容逐一按以上順序書寫實驗報告 4 實驗一實驗一 片劑溶出度試驗片劑溶出度試驗 一 實驗目的 1 掌握片劑溶出度測定方法及數(shù)據處理方法 2 了解溶出度測定的重要意義及其應用 二 實驗提示 片劑溶出度是指片劑主藥在體外協(xié)助適當裝置于適宜介質中溶出的速度和程度 測定溶出度的依據是 Noyes Whitney 的擴散理論 近年生物藥劑學的研究表明 難溶性藥物的 片劑 崩解時限不能作為判斷難溶性藥物片劑吸收的指示 因為片劑崩解后的粉粒還不能直接被機 體所吸收 溶解是吸收的主要過程 溶解度小于 0 1 1mg mL 的藥物 其體內吸收常受其溶出速 度的影響 溶出速度除與藥物的晶型 粒經大小有關外 還與制劑的生產工藝 輔料 儲存條件等 有關 所以為了控制這些片劑的質量 需測定血藥濃度或尿藥濃度 對于一些體外溶出度與體內血 藥濃度有相關性的藥物 則可測定其主藥成分的體外溶出度作為控制該片劑質量的一項指標 本實驗以對乙酰氨基酚片為樣品 測定對乙酰氨基酚的溶出度 原理 對乙酰氨基酚在溶出介質中 在 257nm 波長處有最大吸收 因此可用紫外分光光度法 進行測定 測定其在 257nm 的吸收度 A 用標準曲線方程計算其對應濃度 三 實驗內容 1 測出比較法的 A 值 用 A W表示 作對照品 取樣品 10 片 精密稱定 計算平均片重 W 將稱定的片子研細 再精密稱取相當于 W 的量 加約 600mL 溶出介質 稀鹽酸 24mL 加水至 1000mL 水浴 40 50 中攪伴溶解 冷至室 溫 移入 1000mL 容量瓶中 加入介質至足量 搖勻 過濾 精密吸取濾液 1mL 置 50mL 容量瓶中 加入 0 04 氫氧化鈉溶液稀釋至 50mL 搖勻 照分光光度法 中國藥典 2005 年版二部附錄 IVA 在 257nm 的波長處測定吸收度 A 值 用 A W 表示 2 對乙酰氨基酚片溶出度的測定 A 儀器準備 轉籃是用 40 目不銹鋼制成的圓筒 高 3 66cm 直徑 2 5cm 頂部通過金屬棒連 接于變速小馬達上 轉籃懸吊于盛有溶媒的容器中 距溶出杯底 2 5cm 使用前安裝就緒 開動電 機空轉 檢查電路是否暢通 有無異常噪音 轉籃的轉動是否平穩(wěn) 加熱恒溫裝置及變速裝置是否 正常 如一切符合要求 就可以開始測定樣品 B 測定方法 取溶出介質 稀鹽酸 24mL 加水至 1000mL 1000mL 加熱至 37 置溶出杯中 調節(jié)轉籃轉速為 100 轉 分 將精密稱定重量的藥片一片 W 放在轉籃內 以溶出介質接觸藥片 時為零時刻開始計時 然后按 2 5 10 15 20 30 分鐘定時取樣 取樣位置固定在轉籃上端液 面中間 距離杯壁 1cm 處 每次取樣 5mL 將樣品液過濾 吸取濾液 1mL 余按實驗內容 1 測 出比較法 A 值項下 自 置 50mL 容量瓶 始 依法測定規(guī)定時間藥片溶出的 A 值 以 As 表 示 注 1 對所用的溶出度測定儀 應預先檢查其是否運轉正常 并檢查溫度的控制 轉速等是否精確 升降轉籃是否靈活等 2 溶出方法分轉籃法 槳法和小杯法三種 本實驗選用轉籃法 轉籃的尺寸和結構應符合藥典 規(guī)定 3 每次取出樣品液后 應同時補充相同體積的空白溶液 4 根據藥典規(guī)定 應同時測定 6 片的溶出度 鑒于實驗時間限制 每實驗組僅要求完成 1 片的 測試 5 四 測定結果與數(shù)據處理 1 每片測定結果記錄 Aw 溶出度的計算 累計溶出 2 用普通坐標紙作圖求 t50 以累計溶出百分比對溶出時間逐一描點 用圖估法擬合 平滑曲線 過累計溶出百分比 50 處引一 與 t 軸平行的直線 與溶出曲線相交于 A 過 A 點向 t 軸引垂線交于 t1 此 t1即為 t50 此值供方差分 析用 3 用威布爾分布概率求 t50 td和 m 三個參數(shù) 從上面所作溶出曲線所見 累計溶出百分比對相應時間各數(shù)據在一般直角坐標紙上作圖 并不 成直線關系 但可將累計溶出百分比與時間的關系看作統(tǒng)計學上的概率分布函數(shù) 用威布爾概率紙 使之直線化 從圖上即可極為方便的找到 t50 溶解 50 所需時間 td 溶解 63 2 所需時間 及 m 斜率 三個參數(shù) 在威布爾概率紙作圖的基本步驟如下 A 以 F t 尺代替累計溶出百分比 t 尺為釋放時間 用原數(shù)據描點 若各點基本上呈直線分布 則可直 接擬合一條直線 尤其注意照顧 F t 在 30 至 70 范圍內的點 使之優(yōu)先貼近該直線 B 若各點排布呈曲線狀 則沿曲線趨勢延伸 與 t 尺交點的數(shù)值作為 的初步估計值 以 F t 對 t 再作圖 若所得各點的排列接近直線 則擬合成直線 若 F t 對 t 作圖仍為一曲線 則可用 類似的方法反復修改 直至作得一直線為止 C 在 F t 對 t 或 F t 對 t 所作圖上擬合一直線 有 X 1 和 Y 軸的交點 稱 m 點 作該直線 的平行線 該平行線和 Y 軸交點在 Y 尺上投影點的讀數(shù)即為 m 值 取絕對值 D 所擬合的直線與 X 軸的交點在 t 尺上投影點的讀數(shù)即為 m 的估計數(shù) 本實驗中稱為 td 值 溶出 63 2 所需時間 與溶出 50 的交點在 t 尺上的投影點的讀數(shù)即為 t50 E 用威布爾概率紙求出 t50 td和 m 三個參數(shù)后 可利用方差分析 相關與回歸分析的數(shù)理統(tǒng)計法 來評定同類產品不同批號或不同廠家的片劑質量 另外 還可以評定同一產品體內 體外的相關程 度 4 用溶出參數(shù)作方差分析 將兩個批號共八片 按本實驗方法測得的累計溶出百分比共八組數(shù)據 經威布爾概率紙作圖得 八條直線 由圖中求出 t50 td和 m 值 將所得參數(shù)列表如下 供方差分析用 No 123456 取樣時間 min 2510152030 As Aw 累計溶出 5 6 思考題 檢查固體制劑的溶出度有何意義 哪些種類的制劑需檢查溶出度 參數(shù)方差來源自由度離差平方和方差F 值顯著性 t50 組間 組內 合計 td 組間 組內 合計 m 組間 組內 合計 7 實驗二實驗二 尿藥法測定水楊酸鈉片劑的生物利用度尿藥法測定水楊酸鈉片劑的生物利用度 一 實驗目的 1 通過實驗掌握用尿藥速率法求算體內藥動學參數(shù) 2 通過實驗掌握藥物的生物利用度的一般研究方法 3 通過測定求出水楊酸鈉的生物半衰期 二 實驗原理 藥物在體內的吸收 分布 代謝和排泄等過程既有區(qū)別 又有聯(lián)系 具有一定相關性 藥物在體 內的速度過程變化規(guī)律及生物利用度等相關參數(shù)的提取 要通過實驗采用血藥濃度法 尿藥濃度法 或唾液藥物濃度法等方法獲得 在多數(shù)情況下 尿藥濃度高于血藥濃度 定量分析精密度好 測定方法較易建立 且取樣方便 可免除受試者多次抽血的痛苦 因此 在體內藥物大部分以原型從尿中排出的條件下 通?？捎媚?藥法提取消除速度常數(shù) 生物半衰期等動力學參數(shù) 生物利用度反應藥物在體內被吸收的速度和程度 它可分為相對生物利用度與絕對生物利用度 當藥物的口服制劑與靜脈注射劑相比較 可求算絕對生物利用度 與其他制劑相比較 可求算相對 生物利用度 本實驗采用口服真溶液劑為參比 測定水楊酸鈉片劑的相對生物利用度 三 實驗方法 1 繪制水楊酸鈉標準曲線 精密稱取干燥恒重的水楊酸鈉 0 5g 置 100mL 容量瓶中 加蒸餾水溶解并稀釋至刻度 各精密 吸取此溶液 1 5 2 5 3 5 4 5 5 5mL 分別置 50mL 容量瓶中 加蒸餾水稀釋至刻度 搖勻 得濃 度分別為 0 15 0 25 0 35 0 45 0 55mg mL 的標準溶液 取干燥潔凈的帶塞玻璃試管 5 支 分別精密吸取以上各溶液的水楊酸鈉標準溶液 1mL 于試管 中 再分別加入 Fe NO3 3 試管 5mL 混合均勻 用 72 100 型分光光度計于 540nm 波長處測定吸 收度 將測得數(shù)據進行回歸分析 得吸收度對標準溶液濃度的回歸方程 即為標準直線 參比液以 蒸餾水 1mL 代替標準液 2 測定生物利用度 A 實驗方法 I 選擇受試者的條件 II 對受試者的要求 a 服藥前 48 小時開始 不吃任何含水楊酸鹽類食物 b 小便應按規(guī)定收集完全 不得損失 并保持尿樣不污染 在收集尿樣期間 內不作劇烈運動 c 早晨收集空白尿 空腹時口服水楊酸鈉片 0 6g 對照組口服相當于 0 6g 的 水楊酸鈉真溶液 d 按以下時間喝水和收集尿樣 并記錄排尿量 服藥當天 7 30 喝水 150mL 7 55 小便 收空白尿 8 00 用 250mL 溫開水吞服 0 3g 片的水楊酸鈉片兩片 8 30 收集尿樣 9 00 收集尿樣 10 00 收集尿樣 喝水 200mL 12 00 收集尿樣 喝水 150mL 8 14 00 收集尿樣 喝水 100mL 16 00 收集尿樣 喝水 100mL 18 00 收集尿樣 20 00 收集尿樣 喝水 100mL 22 00 收集尿樣 第二天 8 00 收集尿樣 22 00 收集尿樣 每次收集尿樣的時間必須小便一次 在上一次收集尿樣后所排出的小便 均要收集完全 作為 下一個時間尿樣 每次收尿容器必須洗凈 用蒸餾水清洗 瀝干備用 III 受試者服用樣品的安排 本實驗僅作兩種劑型 同一受試者二次服藥之間應間隔 4 天以上 IV 測定方法 每次尿樣測量體積后 精密吸取 1mL 于干燥潔凈的試管中 加 Fe NO3 3試管 5mL 按 繪制 標準曲線 項下進行測定 參比液用空白尿 1mL 替代含藥尿樣 如顯色時發(fā)現(xiàn)色澤太深 則根據 情況將尿樣稀釋后取樣測定 如果氣候炎熱 須將空白尿及尿樣置冰箱中保存 以防長霉發(fā)酵 影 響結果的準確性 B 數(shù)據處理 I 將所測各時間尿樣的吸收度代入標準直線 計算出該尿樣濃度 mg mL 再乘以尿量 如尿樣稀釋則需乘上稀釋倍數(shù) 計算出各時間的尿藥排泄量 II 以 lg x t 對相鄰兩時間的中點時間 t中 作尿藥排泄速度曲線 x 各時間的尿藥排泄量 t 相鄰兩次集尿時間的間隔時間 作圖 III 根據作出的尿藥排泄曲線求出水楊酸鈉片劑和真溶液的動力學參數(shù) 斜率 b Y2 Y1 X2 X1 或將曲線后部直線部分進行回歸分析 求出直線斜率 b 消除速度常數(shù) k 2 303 b 生物半衰期 t1 2 0 693 k IV 生物利用度 以真溶液為參比 求片劑的相對生物利用度 生物利用度 V 尿藥法數(shù)據記錄 姓名 性別 產品廠家及批號 藥量 服藥時間 劑型消除速度常數(shù) k半衰期 小時 總排泄量 mg 片劑 真溶液 9 思考題 血藥濃度法與尿藥法測定藥物動力學參數(shù)各有何特點 口服水楊酸鈉真溶液口服水楊酸鈉片 序 號 集尿 時間 小 時 尿量 mL 稀釋 倍數(shù) 吸收 度 平均濃度 mg mL 排泄量 mg 尿量 mL 稀釋 倍數(shù) 吸收 度 平均濃度 mg mL 排泄量 mg 10 20 5 31 42 54 66 78 810 912 1014 1124 1238 累計累計 真溶液片劑 序 號 集尿時 間 h 中點時 間 t 中 間隔時 間 t 排泄量 X 平均尿藥 速度 X t Lg X t 排泄量 X 平均尿藥 速度 X t Lg X t 0 10 50 250 5 210 750 5 321 51 4432 5652 6872 71092 812112 914132 10241910 11383114 10 實驗三實驗三 撲熱息痛血管外給藥的藥物動力學研究撲熱息痛血管外給藥的藥物動力學研究 一 實驗目的 1 通過本實驗 掌握生物樣品分析方法的基本要求 2 掌握撲熱息痛的血藥濃度測定方法及有關參數(shù)的計算 二 實驗原理 撲熱息痛與亞硝酸發(fā)生親電取代反應 生成 2 亞硝基 4 乙酰氨基苯酚 用氨基磺酸銨除去過 量的亞硝酸 在堿性條件下 2 亞硝基 4 乙酰氨基苯酚于 430nm 波長處有最大吸收 三 實驗內容 1 標準曲線 精密稱取撲熱息痛 100mg 以 95 乙醇 3mL 溶解加適量水 轉移于 100mL 容量瓶中 加水至 刻度 充分搖勻 得撲熱息痛儲備液 1mg mL 精密吸取儲備液 2 5mL 準確稀釋至 10mL 得 250 g mL 的標準液 分別精密吸取 250 g mL 的標準液 0 3 0 6 0 9 1 2 1 5 1 8mL 于離心管中 分別加水使 成 2mL 各加家兔血漿 1 5mL 搖勻 再加入 2mL10 三氯醋酸 充分混合再離心 20 分鐘 3000rpm 吸取上清液 4mL 于 25mL 帶塞刻度試管中 加入 1mL6N 鹽酸 1mL20 NaNO2溶 液 搖勻 放置 5 分鐘 使反應完全 慢慢加入 2mL15 氨基磺酸 振搖至無氣泡產生 流水冷卻 加入 2 5mL20 NaOH 搖勻 用 2cm 比色杯于 430nm 波長處測定吸收度 用蒸餾水 2mL 代替標準 液同法處理 作空白對照 求出回歸方程 標準曲線 回歸方程 2 回收率試驗 分別精密吸取 250 g mL 的標準液 0 3 0 9 1 8mL 于離心管中各三份 分別加水使成 2mL 各加家兔血漿 1 5mL 搖勻 以下操作同標準曲線項下 加入 2mL10 三氯醋酸 充分混合 起 依法操作 測定吸光度 代入回歸方程求其濃度 并與加入時濃度相比求出回收率 標準液 mL 0 30 60 91 21 51 8 濃度 g mL 50100150200250300 A 3 次 A 初始濃度 g mL 吸光度 測得濃度 g mL 回收率 回收率 均值 RSD 21 43 64 29 128 58 11 3 精密度試驗 精密吸取 250 g mL 的標準液 0 3 0 9 1 8mL 于離心管中各 6 份 分別加水使成 2mL 各加 家兔血漿 1 5mL 搖勻 以下操作同標準曲線項下 加入 2mL10 三氯醋酸 充分混合 起 依法 操作 測定吸光度 求其日內精密度 4 樣品穩(wěn)定性考察 將上述標準曲線項下的 0 9mL 樣品處理好后于 0 5h 1h 2h 3h 4h 測定吸收度 考察處 理后樣品室溫放置時的穩(wěn)定性 5 樣品測定 取家兔 5 只 雌兔不得懷孕 每只體重 2 5 kg 3 kg 給藥前先從耳靜脈取血 3mL 留作對照 然后按 200mg kg 的劑量 肌注給藥 給藥前禁食 12 小時 給藥后按第 3 5 10 15 25 30 40 60 100 140 180 分鐘 定時從兔耳靜脈取血 3 mL 用干燥并帶有 適量肝素鈉的離心管集血 輕輕搖勻 離心 10 分鐘 3000rpm 吸取血漿于干燥試管中 置冰箱 中保存?zhèn)溆?取出無藥血漿與各時刻的含藥血漿 室溫解凍后進行測定 吸取 1 5mL 血漿 置刻度離心管中 加水 2mL 混勻 以下操作同標準曲線項下 加入 2mL10 三氯醋酸 充分混合 起 依法測定吸收度 代入標準曲線 計算出該時刻的血藥濃度 以無藥血漿按同法處理作對照 初始濃度 g mL 吸光度吸光度均值RSD 21 43 64 29 128 58 時間 h 00 51234 吸光度 均值 RSD 12 6 結果記錄 兔子體重 給藥劑量 測定記錄 尾段直線相斜率 K 殘數(shù)斜率 ka 四 數(shù)據處理 1 以血藥濃度 g mL 為縱坐標 時間為橫坐標 作吸收曲線圖 血藥濃度 時間曲線 2 以血藥濃度 g mL 的對數(shù)對時間作血藥濃度 時間的半對數(shù)圖 從圖中求出消除速度常數(shù) K 再用殘數(shù)法求出吸收速度常數(shù) ka 3 提取參數(shù) t1 2 吸收 t1 2 消除 tp Cp A 吸收半衰期 t1 2 吸收 0 693 ka B 消除半衰期 t1 2 消除 0 693 K C 血藥濃度 時間曲線下的總面積 AUC0 D 達峰時間 tp 根據 ka 及 K 求出達峰時間 tp tp lnka lnK ka K 2 303 lgka lgK ka K 拋物線擬合法 用拋物線 C p Qt Rt2的峰段代替藥時曲線的峰段 選取實驗數(shù)據中最大濃度 C I 左右三點 ti 1 C I 1 ti Ci ti 1 C I 1 代入 則有 C I 1 P Q ti 1 R t2i 1 Ci P Q ti R t2i C I 1 P Q ti 1 R t2i 1 解上述方程組 求得 P Q R 的值 拋物線的峰丟按橫坐標 峰時 為 tp Q 2R E 峰濃度 Cp Cp A e Ktp e Katp 編號1234567891011 T min 35101525304060100140180 A A C g mL lgC T min C g mL 尾段直線相外推線濃度 的對數(shù) lgC外推 外推線濃度 C外推 殘數(shù)濃度 g mL C殘 C外推 C 殘數(shù)濃度的對數(shù) lgC殘 13 A 截距 可以從 lgC t 圖中求得 實驗結果 思考題 血藥濃度法求算藥物動力學參數(shù)的原理 血藥濃度法測定藥物動力學參數(shù)的要求 14 實驗四實驗四 大鼠在體小腸吸收實驗大鼠在體小腸吸收實驗 一 實驗目的 1 掌握大鼠在體小腸吸收的實驗方法 2 掌握計算藥物的吸收速度常數(shù) Ka 以及每小時吸收率的計算方法 二 實驗原理 大多數(shù)藥物以被動擴散方式從生物膜的高濃度側通過膜向低濃度側轉運 被動擴散可用 Fick 第一定律來描述 該定律指出 擴散速度 dC dt 正比于膜兩側的濃度差 C 因此有 1 b dc Ka CKa CC dt 式中 C 是消化道中的藥物濃度 Cb是血液中藥物濃度 Ka 是吸收速度常數(shù) 其值大小取決于 藥物的擴散常數(shù) 吸收膜的厚度與面積以及藥物對膜的穿透性 胃腸道吸收的生物學過程包括這樣 一個系統(tǒng) 即藥物從胃腸道屏障的一側向另一側擴散 因為進入血液的藥物很快分布到全身 故與 吸收部位比較 血中藥物濃度維持在很低的水平 幾乎在所有口服給藥的情況下 對于胃腸道來說 血液的作用猶如 水槽 并且在整個吸收相保持很大的濃度梯度 C Cb 則 C C 于是 1 式可以簡化為 2 dc KaC dt 此為一級速度方程式的標準形式 胃腸道按一級動力學從消化液中吸收大多數(shù)藥物 用消化液 中藥物量的變化 dXa dt 表示吸收速度 則 3 Xa KaX dt 將 3 式積分 并在方程兩側同取對數(shù) 4 lnln 0 XaXaKat 式中 Xa 為消化液中藥物量 Xa 0 為零時刻消化液中藥物量 Ka 為藥物吸收速度常數(shù) 以 lnXa 對 t 作圖得一條直線 其斜率為藥物在小腸中的吸收速度常數(shù) Ka 三 實驗內容 1 實驗操作 1 取 85ml 供試液 100ml Krobs Ringer 試液含 SD2mg 酚紅 2mg 加入循環(huán)裝置中 2 將實驗前禁食一夜 體重 200g 左右的雄性大鼠 稱重 腹腔注射戊巴比妥鈉 劑量為 100g 體重注射 0 4ml 麻醉后并加以固定 3 沿腹中線打開腹腔 自十二指腸上部及回腸下部各剪開一個小口 各插入直徑為 0 5cm 的 玻璃管 用線扎緊 并用 37 的生理鹽水將小腸內容物沖洗干凈 然后將大鼠串聯(lián)到循環(huán) 裝置中 4 開動蠕動泵 以 5ml 分的流速循環(huán) 10 分鐘后流速調至 2 5ml 分 5 自燒瓶中取樣 1 5ml 1ml 0 5ml 各一份 為 和酚紅零時間樣品 并補加 2ml 酚紅溶液 每毫升 Krobs Ringer 試液含酚紅 20 g 其后每 15 分鐘取樣 1ml 0 5ml 各一份 同 時補加酚紅溶液 2ml 由于酚紅不被小腸吸收 用以測定水被小腸吸收的量 2 定量方法 1 磺胺嘧啶的定量 取樣品 1ml 加入 1mol L 5ml 加入 0 1 NaNO2 1ml 搖勻 放置 3 分鐘 加入 0 5 氨基磺 酸氨 1ml 搖勻 放置 3 分鐘 加入 0 1 萘乙二胺 2ml 搖勻 放置 20 分鐘 在波長 555nm 處測 定吸收度 15 參比溶液的配制 取 1ml 供試液按磺胺嘧啶的定量方法不加萘乙二胺顯色劑 2 酚紅定量 取酚紅溶液 0 5ml 加入 0 2mol L NaOH 5ml 搖勻 在波長 555nm 處測定吸收度 參比溶液 0 2mol L NaOH 溶液 3 標準曲線的制備 1 酚紅的標準曲線 精密稱取酚紅 100mg 置 1000ml 容量瓶內 加 1 Na2CO3溶液溶解并稀釋至刻度 制成 100 g ml 的儲備液 取 1 2 3 4 5 6ml 的儲備液于 10ml 容量瓶中 加蒸餾水至刻度 自上 述各溶液中吸取 0 5ml 按酚紅的定量方法測定吸收度 并繪制標準曲線 2 磺胺嘧啶標準曲線 精密稱取磺胺嘧啶標準品 10mg 置 100ml 容量瓶中 以蒸餾水溶解并稀釋至刻度 使成 100 g ml 的儲備液 取儲備液適量 稀釋成 20100 g ml 的溶液 分別吸取 2 4 6 8 10ml 于 10ml 容量瓶中 加蒸餾水至刻度 從上述溶液中吸取 1ml 按磺胺嘧啶定量方法測定吸收度 并 繪制標準曲線 四 數(shù)據處理 1 將實驗數(shù)據按表 1 中公式進行計算 表表 1 大鼠在體小腸吸收量的計算式大鼠在體小腸吸收量的計算式 取樣時 間 h SD 吸收度 SD 濃度 酚紅 吸收度 酚紅 濃度 供試液體積剩余藥量 循環(huán)前A0C0A 0C 0V0 85mlP0 85C0 0A1C1A 1C 1 00 1 1 C V V C 11 1 PCV 0 25A2C2A 2C 2 11 2 2 1 5 40VC V C 1 1 1 5 n nnni i PC VC 0 5A3C3A 3C 3 22 3 3 1 5 40VC V C 33312 1 5 PC VCC tnAnCnA nC n 11 1 5 40 nn n n VC V C 1 1 1 5 n nnni i PC VC 2 以剩余藥量的對數(shù)對時間作圖 求出吸收速度常數(shù) Ka 和每小時吸收率 每小時吸收率 零時間剩余藥量 60 分鐘剩余藥量 零時間剩余藥量100 思考題 用小腸剩余藥量測定吸收速率常數(shù)的原理 16 17 實驗五實驗五 氨茶堿藥物動力學的研究氨茶堿藥物動力學的研究 一 實驗目的 1