1油鏡使用、細(xì)菌簡單染色

教學(xué)計(jì)劃 農(nóng)學(xué)院15學(xué)時(shí)5個(gè)實(shí)驗(yàn)生科院30學(xué)時(shí)9個(gè)實(shí)驗(yàn) 課堂紀(jì)律 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度嚴(yán)肅課堂紀(jì)律不允許無故曠課 早退 遲到 不準(zhǔn)大聲喧嘩實(shí)驗(yàn)服 實(shí)驗(yàn)室安全和衛(wèi)生 安全實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)禁吸煙 注意用水 防電和防火 正確使用化學(xué)試劑 菌種和儀器 衛(wèi)生每次實(shí)驗(yàn)需留下6位同學(xué)值日 保持實(shí)驗(yàn)室清潔 負(fù)責(zé)關(guān)門窗 水電 微生物的個(gè)體微小 必須借助顯微鏡才能觀察到 因此 顯微鏡就成為微生物學(xué)研究工作者不可缺少的基本工具 所以 了解顯微鏡的種類 結(jié)構(gòu) 功能和正確地掌握不同顯微鏡的使用方法是很有必要的 實(shí)驗(yàn)一油鏡的使用 細(xì)菌的簡單染色 顯微鏡的使用 1 普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造 1 機(jī)械裝置 2 光學(xué)系統(tǒng) 2 光學(xué)顯微鏡的工作原理最小分辨距離 D 2N A n 介質(zhì)折射率 光線入射角半數(shù) 2 1 光波長度 數(shù)值口徑 nsin 在物鏡上 有鏡口率 N A 的標(biāo)志 它反應(yīng)該鏡頭分辨力的大小 其數(shù)字越大 表示分辨率越高 各物鏡的鏡口率如下表 物鏡鏡口率 N A 工作距離 mm 10 0 257 040 0 650 65100 1 300 15 與其他物鏡不同 油鏡需在載玻片與鏡頭之間加滴鏡油 原因有二 1 增加照明亮度油鏡的放大倍數(shù)可達(dá)100 x 焦距很短 直徑很小 但所需要的光照強(qiáng)度卻最大 為了不使通過的光線有所損失 必須加入與玻璃的折射率 n 1 55 相仿的鏡油 通常用香柏油 n 1 52 2 增加顯微鏡的分辨率油鏡的分辨率可達(dá)到0 2 m左右 1 不準(zhǔn)擅自拆卸顯微鏡的任何部件 以免損壞 2 鏡面只能用擦鏡紙擦 不能用手指或粗布 以保證光潔度3 觀察標(biāo)本時(shí) 必須依次用低 中 高倍鏡 最后用油鏡 當(dāng)目視接目鏡時(shí) 特別在使用油鏡時(shí) 切不可使用粗調(diào)節(jié)器 以免壓碎玻片或損傷鏡面 4 拿顯微鏡時(shí) 一定要右手拿鏡臂 左手托鏡座 不可單手拿 更不可傾斜拿 5 顯微鏡用完后 將載物臺降至最低 并將最低倍數(shù)物鏡或物鏡的空位正對載物臺 顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項(xiàng) 單染色法是用一種染料使細(xì)菌著色以顯示其形態(tài) 不能辨別細(xì)菌細(xì)胞的構(gòu)造 通常采用堿性染料 如美藍(lán) 結(jié)晶紫 堿性復(fù)紅等 使其著色 當(dāng)在中性 弱堿性 弱酸性溶液中 細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷 而堿性染料在電離時(shí) 其分子的染色部分帶正電荷 因此堿性染料的染色部分很容易與細(xì)菌結(jié)合使細(xì)菌著色 染色前必須固定細(xì)菌 其目的是 一是殺死細(xì)菌并使菌體粘附于玻片上 二是增加其對染料的親和力 常用的有加熱和化學(xué)固定兩種方法 固定時(shí)盡量維持細(xì)胞原有的形態(tài) 細(xì)菌的單染色 實(shí)驗(yàn)材料 單目普通光學(xué)顯微鏡番紅 結(jié)晶紫牙簽 染色缸 載玻片 接種環(huán) 酒精燈 香柏油 乙醇 乙醚混合液 3 7 生理鹽水 擦鏡紙 吸水紙等 1 染色1 取一干凈載玻片 2 在載玻片中間滴一小滴生理鹽水 3 用牙簽取少量牙垢 涂在生理鹽水中 混勻并涂成薄膜 4 自然干燥 5 火焰固定 6 染色 用結(jié)晶紫或番紅染色一分鐘 7 水洗 8 自然干燥 實(shí)驗(yàn)步驟 染色中注意事項(xiàng) 1 涂片不可太厚2 固定時(shí)不能在火上烤的時(shí)間太長 否則菌體收縮變形3 染色后必須晾干后才能用油鏡鏡檢 2 鏡檢將制好的玻片在低倍鏡下確定其位置然后再在高倍鏡下觀察最后滴上一滴香柏油放在油鏡下觀察側(cè)視用粗調(diào)升載物臺至最高 然后緩慢下降至清晰 仔細(xì)觀察 并將其繪制下來 實(shí)驗(yàn)步驟 3 擦鏡先用擦鏡紙將油鏡由里圈向外圈擦一遍然后再取一張擦鏡紙 滴上乙醇 乙醚混液 將油鏡由里圈向外圈擦一遍最后再用干凈擦鏡紙擦兩遍即可4 整理實(shí)驗(yàn)器具 實(shí)驗(yàn)步驟 作業(yè) 1 繪制牙垢中的細(xì)菌形態(tài) 示例 16 1