動物細胞融合ppt.ppt

選修3現(xiàn)代生物科技專題2.2細胞工程,2.2.2動物細胞融合與單克隆抗體,“番茄馬鈴薯”（理想圖）,通過長期的實驗，科學家們采用植物體細胞雜交技術獲得了“番茄馬鈴薯”植株。,雜種植株,融合的原生質體AB,再生出細胞壁,脫分化,愈傷組織,再分化,過程,植物細胞A,原生質體B,原生質體A,雜種細胞AB,去壁,去壁,人工誘導,方法？,植物細胞B,植物體細胞雜交技術,纖維素酶、果膠酶等,物理法：離心、振動、電激等化學法：聚乙二醇等試劑,篩選,如果將奶牛的細胞與植物細胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽就可以擠出牛奶嗎？,動物細胞也能融合嗎？,異想天開,動物細胞的全能性會隨著動物細胞分化程度的提高而逐漸受到抑制，分化潛能逐漸變?nèi)?動物細胞培養(yǎng)技術,動物細胞融合技術,制備單克隆抗體技術,動物細胞核移植技術,動物細胞工程常用技術,思考題,1.植物體細胞雜交時首先應用什么方法去掉細胞壁？,酶解法，如纖維素酶或果膠酶,2.動物細胞融合時需要進行去壁處理嗎？為什么？,無需，因為動物細胞無細胞壁,3.植物體細胞雜交誘導原生質體融合常用的方法有哪些？,離心、振動、電激等物理方法；聚乙二醇等化學方法,4.動物細胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？,能還可以利用滅活的病毒進行誘導,5.植物體細胞雜交應先進行原生質體的融合再進行組織培養(yǎng)形成完整的雜種個體，動物細胞融合后能形成雜種動物個體嗎？,不能，只能形成雜種細胞,可用胰蛋白酶將細胞分散,一、動物細胞融合技術,1.概念：,動物細胞融合（cellfusion）也稱為細胞雜交，是指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程。,融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳物質的單核細胞，稱為雜交細胞。,結果：,“2個或多個動物細胞”“1個雜交單核細胞”,2、誘導方法,物理法：離心、振動、電激,化學法：聚乙二醇（PEG),生物法：滅活的病毒,病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。,舉例：仙臺病毒,喪失感染性,保留融合活性,（誘導細胞融合）,用滅活的病毒誘導動物細胞融合過程,滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面,細胞膜被病毒顆粒穿通,細胞膜連接,細胞融合，形成單核雜交細胞,原理：細胞膜具有一定的流動性,有絲分裂,4、過程：,注意：動物細胞的融合也需要把多個兩種細胞放在一起，讓它們隨機融合后，再從中篩選雜交細胞。,3、原理：,細胞膜的流動性,6、應用：,成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。,特別是利用雜交瘤技術制備單克隆抗體。,5、意義：,突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。,植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較,細胞膜的流動性、細胞的全能性,細胞膜的流動性,去除細胞壁后誘導原生質體融合,使細胞分散后誘導細胞融合,物理（離心、振動、電刺激）化學（PEG）,物理、化學方法滅活的病毒,培育新品種,制備單克隆抗體、病毒疫苗、干擾素等,形成雜種植株,形成雜種細胞，生產(chǎn)細胞產(chǎn)品,突破有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能,1、在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是A誘導融合的方法完全相同B所用的技術手段完全相同C所采用的原理完全相同D都能形成雜種細胞,D,2、下列關于動物細胞融合，敘述正確的是A動物細胞融合后形成的具有原來兩個或多個動物細胞遺傳信息的雙核或多核細胞稱為雜交細胞B原理是細胞的全能性C打破生殖障礙，使遠緣雜交成為現(xiàn)實D常用的誘導因素有聚乙二醇、滅活的病毒、離心等,3、動物細胞融合的目的中最重要的是A.克服遠緣雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新品種D.生產(chǎn)雜種細胞,D,B,1.什么是抗體？2.主要分布在哪里？3.由什么細胞產(chǎn)生,抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。,二、制備單克隆抗體技術,主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中。,每一個漿細胞只能分泌一種抗體,4.傳統(tǒng)抗體的生產(chǎn)方法及缺陷？,反復注射抗原,不能無限增殖,產(chǎn)量低、純度低抗體特異性差,1、設計方案：一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細胞能無限增殖,米爾斯坦和科勒,雜交細胞,2、制備過程：,繼承了雙親細胞的遺傳物質：,（一）單克隆抗體的制備,既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體,經(jīng)過免疫的B淋巴細胞,雜交瘤細胞,單克隆抗體,抗原（羊的紅細胞）注射到小鼠體內(nèi),獲取經(jīng)過免疫的B淋巴細胞,小鼠骨髓瘤細胞,融合,滅活的病毒、PEG,多種雜交細胞,選擇性培養(yǎng)基,雜交瘤細胞,抗體陽性檢測,足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞群,培養(yǎng)液,小鼠腹水,單克隆抗體,篩選,克隆化培養(yǎng),（一）單克隆抗體的制備,篩選,(動物細胞培養(yǎng)技術),(動物細胞融合技術),制備單克隆抗體過程中兩次篩選第一次篩選是將未融合的B淋巴細胞、骨髓瘤細胞以及BB融合、瘤瘤融合的細胞通過選擇培養(yǎng)基淘汰，篩選出雜交瘤細胞。第二次篩選是將產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞通過細胞培養(yǎng)用相應抗原檢測的辦法篩選出來。因為從體內(nèi)取免疫過的B淋巴細胞時可以取出很多種，因此形成的雜交瘤細胞也有很多種，所以需篩選出產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞。,骨髓瘤細胞,免疫小鼠,（選擇培養(yǎng)基）,（抗體檢測）,優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，產(chǎn)量大,作為診斷試劑：準確識別各種抗原物質，并與特異性結合,用于,運載藥物：制成“生物導彈”,治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療,（二）單克隆抗體的應用,既不損傷細胞，又減少了用藥劑量，療效高、毒副作用小的新型藥物,優(yōu)點：準確、高效、簡易、快速,動物細胞融合技術,制備單克隆抗體技術,過程：不同的動物細胞,雜交細胞,原理：.,應用：主要用于制備。,制備：獲取細胞和骨髓瘤細胞融合、篩選細胞動物細胞培養(yǎng)提取單克隆抗體,應用：作為，用于治療疾病或運載藥物。,誘導劑,細胞膜的流動性,單克隆抗體,B淋巴,雜交瘤,生物導彈,課堂小結：,1、單克隆抗體是指（）A.單個骨髓瘤細胞增殖產(chǎn)生的抗體B.單個B淋巴細胞增殖產(chǎn)生的抗體C.單個雜交瘤細胞增殖產(chǎn)生的高度單一的抗體D.單個抗體通過克隆化，產(chǎn)生大量抗體,C,2、“生物導彈”是指（）A.單克隆抗體B.雜交瘤細胞C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物,D,練一練,3.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是（）淋巴細胞B淋巴細胞自身融合細胞小鼠骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞自身融合細胞雜交瘤細胞A.BC.D,C,4.生產(chǎn)單克隆抗體時，在培養(yǎng)基中加入某種試劑能篩選出雜交瘤細胞，該試劑的作用是A能選擇性抑制骨髓瘤細胞的DNA復制B能阻止淋巴細胞的原癌基因被激活C能抑制淋巴細胞的DNA復制D能阻止雜交瘤細胞核糖體上所有蛋白質的合成,A,5在現(xiàn)代生物科技的應用中，需要進行檢測與篩選的是（雙選）()A對植物的離體組織進行培養(yǎng)，大規(guī)模培育優(yōu)良品種B將鼠的骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合，制備單克隆抗體C利用人的皮膚細胞進行體外培養(yǎng)，解決自體移植皮膚不足的問題D將抗蟲基因導入植物細胞，培育具有抗蟲特性的新植株,植物組織培養(yǎng)技術,動物細胞融合技術,動物細胞培養(yǎng)技術,基因工程,BD,下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌抗體的實驗方案,制備單克隆抗體,B淋巴細胞,抗體,細胞融合,滅活病毒,雙親細胞,分泌抗體,無限增殖,原代,傳代,10,因為沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生此種抗體的效應B細胞,作業(yè)：,完成創(chuàng)新設計P3034,A、B細胞為動物細胞,請據(jù)圖回答問題:,A細胞,B細胞,C細胞,D細胞,(1)若A細胞為骨髓瘤細胞，B細胞為淋巴細胞,那么D細胞稱為細胞,由D細胞連續(xù)分裂產(chǎn)生大量細胞的過程，稱為。,雜交瘤,克隆,練一練,(2)D細胞中產(chǎn)生的抗體其化學本質是,合成該物質的場所是,它是由控制合成的,合成過程包括和兩個重要步驟.,球蛋白,核糖體,基因,轉錄,翻譯,(3)D細胞中產(chǎn)生的抗體具有作用,與血清抗體相比其優(yōu)越之處在于強高.,免疫,特異性,靈敏度,(4)若A為人細胞,B為鼠細胞,用同位素標記A細胞膜上的蛋白質,B不標記,在C細胞時,檢測結果發(fā)現(xiàn)整個細胞一半有放射性另一半沒有.在D細胞時,檢測結果發(fā)現(xiàn)整個細胞都有放射性,請解