實驗四 氨基酸紙層析.ppt

1、實驗四氨基酸紙層析,一、實驗目的 本實驗采用紙色譜對幾種氨基酸進行分離和鑒定,以了解紙色譜的原理，練習其操作方法。,二、實驗原理,色譜分析法（簡稱色譜法或?qū)游龇ǎ?色譜分析法簡稱色譜法或?qū)游龇ā?906年，俄國植物學家Tsweet將CaCO3放在豎立的玻璃柱中，從頂端倒入植物色素的石油醚浸取液，并用石油醚沖洗。在柱的不同部位形成色帶，因而命名為色譜。管內(nèi)填充物稱為固定相，沖洗劑稱為流動相。 色譜法就是利用混合物中各組分在固定相和移動相中進行反復的吸附或分配作用，達到各組分分開的目的。,分類: (1)按照被分離物質(zhì)在固定相中的作用原理不同，色譜法可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜等。 (2)

2、按照操作方式不同，又可分為柱色譜、薄層色譜、紙色譜、氣相色譜、和高效液相色譜等。,紙色譜為分配色譜，色譜過程在固定相構成的平面狀層下進行。濾紙為載體，固定相為濾紙上的水，流動相（展開劑）為用水飽和過的有機溶劑。根據(jù)相似相溶的原則，在展開過程中，樣品在水和有機溶劑中不斷分配，從而達到分離的結(jié)果。 衡量物質(zhì)向上移動的物理量是比移值（Rf）,例:大黃中游離蒽醌的紙色譜圖,溶劑前沿 大黃素甲醚 蘆薈大黃素 大黃素 大黃酸 點樣點,三、實驗步驟 紙層析,1在濾紙條上端邊緣約1厘米的中央剪一小孔。 2將濾紙條平放于潔凈的紙上，在距離濾紙下端1cm處用鉛筆輕畫一橫線，并在橫線的中央畫一直徑為2mm的小圓圈。

3、 3用毛細管吸取氨基酸混合液，在濾紙條下端的小圓圈內(nèi)點樣。,4. 取干燥大試管，加入被水飽和的酚溶液10ml，注意勿使溶液沾到試管壁上，將試管垂直固定于鐵架臺上。 5. 在距濾紙條下端0.5cm處穿大頭針。從濾紙條上端小孔處穿棉線并左右分開，調(diào)節(jié)線的高度使濾紙垂直懸于試管內(nèi)且下湍浸入溶液0.5cm，注意勿使點樣點浸入溶液中，亦勿使濾紙條接觸試管壁。 6. 此時即可看到溶劑向上移動，溶劑升到一定高度時，小心將紙條取出，以鉛筆標出溶劑上升的前沿。,7. 將濾紙條兩端，用大頭針釘在小木框上，吹干后用噴霧器均勻地噴一層0.2%茚三酮乙醇溶液，然后再將濾紙條吹干，即可看到紙上顯出三色點，每個色點代表一種氨基酸。 8. 分別測量并計算三種氨基酸的Rf，再根據(jù)教師供給的值確定此三個色點各為何種氨基酸。 9. 留在試管內(nèi)的酚溶劑切勿棄去，塞緊塞子。,1 層析缸要預先飽和，展開劑勿附著于大試管內(nèi)壁。 2點樣量要適當，太少效果不明顯，太多分離不好。 要求點的樣直徑不超過.。 無論在準備工作中還是以后的實驗過程中，都不要用手觸摸紙條中部，