高考生物一輪復(fù)習(xí) 第二部分學(xué)案49 DNA重組技術(shù)的基本工具和基因工程的基本操作程序 新人教版

1、第十單元 現(xiàn)代生物科技專題學(xué)案49 DNA重組技術(shù)的基本工具和基因工程的基本操作程序考綱要求1.基因工程的誕生2.基因工程的原理及技術(shù) 復(fù)習(xí)要求1理解基因工程的實(shí)質(zhì)2理解基因工程操作的四步曲及其操作實(shí)例基礎(chǔ)自查一基因工程的概念基因工程是指 ，通過 技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出 。基因工程是在 水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，又叫做 。二基因工程的基本工具1.限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）（1）來源： 。（2）功能： 。（3）結(jié)果：產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式： 。2. DNA連接酶(1)兩種DNA連接酶（EcoliDNA連接酶和T4-DNA連接酶）比較：相同點(diǎn)： 。區(qū)別：（2）與DNA聚合酶

2、作用的異同: 3.載體（1）載體具備的條件：（2）最常用的是 其它載體： 三基因工程的基本操作程序第一步： 原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有 。.PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因（1）原理： （2）過程： 。第二步： 1.目的： 。2.組成： （1）啟動子： 。（2）終止子： 。（3）標(biāo)記基因的作用： 。第三步： 2.常用的方法：a、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞方法： 。b、將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞：最常用的方法是 。此方法的受體細(xì)胞多是 。C、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞：最常用的原核細(xì)胞是 ，其轉(zhuǎn)化方法是： 。第四步： 1.首先要檢測 ，方法是采用 。2.其次還要檢測

3、，方法是采用 。3.最后檢測 ，方法是 ，用 。4.有時(shí)還需進(jìn)行 的鑒定。如 轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀。課堂深化探究一對基因工程概念的理解別名基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)操作環(huán)境 操作對象 操作水平 基本過程 結(jié)果 與雜交育種相比 與誘變育種相比 原理 二基因工程的基本操作工具1與DNA分子相關(guān)的酶(1)幾種酶的比較種類項(xiàng)目限制酶DNA連接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物 作用部位 作用特點(diǎn) 作用結(jié)果 (2)限制酶與DNA連接酶的關(guān)系 2載體(1)作用 (2)具備的條件(3)種類特別提醒一般來說，天然載體往往不能滿足人類的所有要求，因此人們根據(jù)不同的目的和需要，對某些天然的載體進(jìn)行人工改造。

4、限制酶切割位點(diǎn)所處的位置必須是在所需的標(biāo)記基因之外，這樣才能保證標(biāo)記基因的完整性，有利于對目的基因的檢測。三基因工程操作程序基因工程技術(shù)生產(chǎn)凝乳酶的過程1基因工程的操作程序分析(1)目的基因的獲取途徑 (2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建特別提醒插入的目的基因的表達(dá)需要調(diào)控序列，因而用作載體的質(zhì)粒的插入基因部位之前需有啟動子，之后需有終止子。兩次使用的限制酶為同一種酶，這樣形成的黏性末端堿基之間互補(bǔ)，便于連接。(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(轉(zhuǎn)化)生物種類植物細(xì)胞動物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法 受體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程 (4)目的基因的檢測與鑒定類型檢測內(nèi)容方法結(jié)果顯示分子檢測導(dǎo)入檢測 轉(zhuǎn)錄檢測 翻

5、譯檢測 個(gè)體水平檢測 特別提醒：1在整個(gè)工程中，只有第三步將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞過程中不發(fā)生堿基互補(bǔ)配對，其他步驟均發(fā)生配對。2切割質(zhì)粒和目的基因的限制酶必須是同一種酶，以獲得相同的黏性末端，利于基因表達(dá)載體的構(gòu)建。3插入的目的基因只是結(jié)構(gòu)基因部分，其表達(dá)需要調(diào)控序列，因而用作載體的質(zhì)粒的插入部位前須有啟動子，后須有終止子。4PCR技術(shù)與DNA復(fù)制的比較PCR技術(shù)DNA復(fù)制相同點(diǎn)原理DNA雙鏈復(fù)制(堿基互補(bǔ)配對)原料四種游離的脫氧核苷酸條件模板、ATP、酶等不同點(diǎn)解旋方式DNA在高溫下變性解旋解旋酶催化場所體外復(fù)制主要在細(xì)胞核內(nèi)酶熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(Taq酶)細(xì)胞內(nèi)含有的DNA聚合酶結(jié)果在短

6、時(shí)間內(nèi)形成大量的DNA片段形成整個(gè)DNA分子對應(yīng)訓(xùn)練1.下列關(guān)于基因工程的敘述，錯誤的是( )A目的基因和受體細(xì)胞均可來自動物、植物或微生物B限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶是兩類常用的工具酶C人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無生物活性D載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)2.下列有關(guān)基因工程中限制性核酸內(nèi)切酶的描述，錯誤的是()。A一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識別一種特定的脫氧核苷酸序列B限制性核酸內(nèi)切酶的活性受溫度影響C限制性核酸內(nèi)切酶能識別和切割RNAD限制性核酸內(nèi)切酶可從原核生物中提取3.如圖是利用基因工程技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因植物，生產(chǎn)可食用疫苗的部分過程示意圖

7、，其中Pst 、Sma 、EcoR、Apa為四種限制性核酸內(nèi)切酶。下列說法錯誤的是()。A圖示過程是基因工程的核心步驟B表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)需要用到限制酶 SmaC抗卡那霉素基因的存在有利于將含有抗原基因的細(xì)胞篩選出來D除圖示組成外，表達(dá)載體中還應(yīng)該含有啟動子和終止子等結(jié)構(gòu)4.下圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過程示意圖，有關(guān)敘述正確的是()A過程獲取的目的基因，可用于基因工程和比目魚基因組測序B將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達(dá)的新基因，不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白C過程構(gòu)成的重組質(zhì)粒缺乏標(biāo)記基因，需要轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌才能進(jìn)行篩選D應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達(dá)

8、限時(shí)訓(xùn)練題組一基因工程及基本操作1.科學(xué)家將動物體內(nèi)的能夠合成胰島素的基因與大腸桿菌的DNA分子重組，并且在大腸桿菌體內(nèi)表達(dá)成功。請根據(jù)圖回答問題:(1)此圖表示的是采取 合成基因的方法獲取 基因的過程。 (2)圖中DNA是以 為模板， 形成單鏈DNA，在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得了所需要的基因。 (3)圖中代表 DNA，含 基因。 (4)圖中表示 。2下圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是()A B C D3下列關(guān)于基因工程的敘述，不正確的是(多選)()A基因工程經(jīng)常以抗菌素抗性基因?yàn)槟康幕駼細(xì)菌質(zhì)粒是基

9、因工程常用的運(yùn)載體C通常用一種限制性核酸內(nèi)切酶處理含目的基因的DNA，用另一種處理運(yùn)載體DNA D為培育成抗除草劑的作物新品種，導(dǎo)入抗除草劑基因時(shí)只能以受精卵為受體題組二基因工程的操作程序4.下圖表示利用基因工程培育抗蟲棉的過程，請據(jù)圖回答下列有關(guān)問題。(1)若限制酶的識別序列和切點(diǎn)是GATC，限制酶識別序列和切點(diǎn)是GGATCC，那么在過程中，應(yīng)用限制酶_切割質(zhì)粒，用限制酶_切割抗蟲基因。(2)將通過過程得到的大腸桿菌涂布在含有_的培養(yǎng)基上，若能夠生長說明已導(dǎo)入了普通質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒，反之則說明沒有導(dǎo)入。(3)要確定抗蟲基因?qū)牒螅欠衲芊€(wěn)定遺傳并表達(dá)，需進(jìn)行檢測和鑒定工作，則在個(gè)體水平上的鑒定

10、過程可簡述為：_。經(jīng)篩選分析，該植株細(xì)胞中含有一個(gè)攜帶抗蟲基因的DNA片段，因此可以把它看作是雜合子。理論上，該轉(zhuǎn)基因植株自交產(chǎn)生的F1代中，仍具有抗蟲特性的植株占總數(shù)的_。(4)過程所用的現(xiàn)代生物技術(shù)稱為_，從遺傳學(xué)角度來看，據(jù)細(xì)胞通過過程，能形成棉植株的根本原因是細(xì)胞具有_。5干擾素是病毒侵入人體后由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的一種免疫活性物質(zhì)，它具有廣譜抗病毒的作用。利用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)干擾素的流程如下：(1)過程產(chǎn)生的物質(zhì)A是_，cDNA文庫_(大于/小于)人的基因組文庫。(2)過程用到的工具酶是_，過程需先用_處理受體細(xì)胞，過程通常采用_技術(shù)。(3)過程和的關(guān)鍵技術(shù)分別是_、_。(4)基因工程的核

11、心步驟是圖中的_(填標(biāo)號)。題組三綜合題6.(2011安徽理綜31)家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因的能力。將人干擾素基因?qū)爰倚Q細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可提取干擾素用于制藥。(1)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用_酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞。(2)為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的_和_之間。(3)采用PCR技術(shù)可驗(yàn)證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細(xì)胞。該P(yáng)CR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)包含：擴(kuò)增緩沖液(含Mg2)、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、_和_。(4)利用生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)，貼壁生長的細(xì)胞會產(chǎn)生接觸抑制。通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放

12、入反應(yīng)器中，這樣可以_，增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換。7(2010天津理綜，7)下圖是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線。圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamH、Hind、Sma直線所示為三種限制酶的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖回答問題。(1)圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用_限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含_的培養(yǎng)基上進(jìn)行。(2)能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是_(填字母代號)。A啟動子 BtetR C復(fù)制原點(diǎn) DampR(3)過程可采用的操作方法是_(填字母代號)。A農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化 B大腸桿菌

13、轉(zhuǎn)化C顯微注射 D細(xì)胞融合(4)過程采用的生物技術(shù)是_。(5)對早期胚胎進(jìn)行切割，經(jīng)過程可獲得多個(gè)新個(gè)體。這利用了細(xì)胞的_性。(6)為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達(dá)，可采用_(填字母代號)技術(shù)。A核酸分子雜交 B基因序列分析C抗原抗體雜交 DPCR8(2009上海卷)人體細(xì)胞內(nèi)含有抑制癌癥發(fā)生的P53基因，生物技術(shù)可對此類基因的變化進(jìn)行檢測。(1)目的基因的獲取方法通常包括_和_。(2)上圖表示從正常人和患者體內(nèi)獲取的P53基因的部分區(qū)域。與正常人相比，患者在該區(qū)域的堿基會發(fā)生改變，在上圖中用方框圈出發(fā)生改變的堿基對，這種變異被稱為_。(3)已知限制酶E識別序列為CCGG，若用限制酶E分別完全切割

14、正常人和患者的P53基因部分區(qū)域(見上圖)，那么正常人的會被切成_個(gè)片段，而患者的則被切割成長度為_對堿基和_對堿基的兩種片段。(4)如果某人的P53基因部分區(qū)域經(jīng)限制酶E完全切割后，共出現(xiàn)170、220、290和460個(gè)堿基對的四種片段，那么該人的基因型是_(以P表示正?；颍琍表示異?；?。9(2009福建卷)轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程如圖所示。質(zhì)粒上有Pst、Sma、EcoR、Apa等四種限制酶切割位點(diǎn)。請回答下列問題。(1)構(gòu)建含抗病基因的表達(dá)載體A時(shí)，應(yīng)選用限制酶_，對_進(jìn)行切割。(2)培養(yǎng)板中的卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長，欲利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細(xì)胞，應(yīng)使基

15、因表達(dá)載體A中含有_，作為標(biāo)記基因。(3)香蕉組織細(xì)胞具有_，因此，可以利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入抗病基因的香蕉組織細(xì)胞培育成植株。圖中、依次表示組織培養(yǎng)過程中香蕉組織細(xì)胞的_。高考真題體驗(yàn)1(2012浙江高考)天然的玫瑰沒有藍(lán)色花，這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B，而開藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B。現(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰，下列操作正確的是（ ）A.提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNA，再擴(kuò)增基因BB.利用限制性核酸內(nèi)切酶從開藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫中獲取基因BC.利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞D.將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞2.

16、 (2012高考全國新課標(biāo)卷40)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識，回答下列問題：（1）限制性內(nèi)切酶切割分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有和。（2）質(zhì)粒運(yùn)載體用EcoR切割后產(chǎn)生的片段如下：為使運(yùn)載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoR切割外，還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點(diǎn)是。（3）按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即DNA連接酶和DNA連接酶。（4）反轉(zhuǎn)錄作用的模板是，產(chǎn)物是。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用技術(shù)。（5）基因工程中除質(zhì)粒外，和也可作為運(yùn)載體。（6）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是。3.

17、(2012福建高考)現(xiàn)代生物科技專題。肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)敕伟┘?xì)胞實(shí)驗(yàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖。請回答：（）進(jìn)行過程時(shí)，需用 酶切開載體以插入let-7基因。載體應(yīng)用RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動let-7基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱為 。（）進(jìn)行過程時(shí)，需用 酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于傳代培養(yǎng)。（）研究發(fā)現(xiàn)，let-7基因能影響RAS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖。據(jù)圖分析，可從細(xì)胞提取 進(jìn)行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于

18、細(xì)胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量減少引起的。. (2012天津高考7)生物分子間的特異性結(jié)合的性質(zhì)廣泛用于生命科學(xué)研究。以下實(shí)例為體外處理“蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合體”獲得DNA片段信息的過程圖。據(jù)圖回答：（1）過程酶作用的部位是 鍵，此過程只發(fā)生在非結(jié)合區(qū)DNA，過程酶作用的部位是 鍵。（2）、兩過程利用了酶的 特性。（3）若將得到的DNA片段用于構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要過程的測序結(jié)果與 酶的識別序列進(jìn)行對比，以確定選用何種酶。（4）如果復(fù)合體中的蛋白質(zhì)為RNA酶聚合，則其識別、結(jié)合DNA序列位基因的 。（5）以下研究利用了生物分子間的特異性結(jié)合的有 （多選）A.分離得到核糖體，用蛋白酶酶解后

19、提取rRNA B.用無水乙醇處理菠菜葉片，提取葉綠體基粒膜上的光合色素C通過分子雜交手段，用熒光物質(zhì)標(biāo)記的目的基因進(jìn)行染色體定位D將抑制成熟基因?qū)敕?，其mRNA與催化成熟酶基因的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，終止后者翻譯，延遲果實(shí)成熟。. (2012江蘇高考32)圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?，F(xiàn)有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。請回答下列問題 （1）圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由 連接。（2

20、）若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是 末端，其產(chǎn)物長度為 。（3）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T-A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對應(yīng)的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，產(chǎn)物中共有 種不同長度的DNA片段。（4）若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是 。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加 的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是 。6(2011四川理綜，5)北極比目魚中有抗凍基因，其編碼的抗凍蛋白

21、具有11個(gè)氨基酸的重復(fù)序列，該序列重復(fù)次數(shù)越多，抗凍能力越強(qiáng)。下圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過程示意圖，有關(guān)敘述正確的是()。A過程獲取的目的基因，可用于基因工程和比目魚基因組測序B將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達(dá)的新基因，不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白C過程構(gòu)成的重組質(zhì)粒缺乏標(biāo)記基因，需要轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌才能進(jìn)行篩選D應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達(dá)7.（2011 浙江）將ada（腺苷酸脫氨酶基因）通過質(zhì)粒pET28b導(dǎo)人大腸桿菌并成功表達(dá)腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯誤的是（）A每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞至少含一個(gè)重組質(zhì)粒B每個(gè)重組質(zhì)粒至少含一個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識別位

22、點(diǎn)C每個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識別位點(diǎn)至少插入一個(gè)adaD每個(gè)插入的ada至少表達(dá)一個(gè)腺苷酸脫氨酶分子 8(2010全國，5)下列敘述符合基因工程概念的是()。AB淋巴細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合，雜交瘤細(xì)胞中含有B淋巴細(xì)胞中的抗體基因B將人的干擾素基因重組到質(zhì)粒后導(dǎo)入大腸桿菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株C用紫外線照射青霉菌，使其DNA發(fā)生改變，通過篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株D自然界中天然存在的噬菌體自行感染細(xì)菌后其DNA整合到細(xì)菌DNA上9(2010浙江理綜，2)在用基因工程技術(shù)構(gòu)建抗除草劑的轉(zhuǎn)基因煙草過程中，下列操作錯誤的是()。A用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草花葉病毒的核酸B用DNA連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因

23、和載體C將重組DNA分子導(dǎo)入煙草原生質(zhì)體D用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞10(2010江蘇卷)下列關(guān)于轉(zhuǎn)基因植物的敘述，正確的是()。A轉(zhuǎn)入到油菜的抗除草劑基因，可能通過花粉傳入環(huán)境中B轉(zhuǎn)抗蟲基因的植物，不會導(dǎo)致昆蟲群體抗性基因頻率增加C動物的生長激素基因轉(zhuǎn)入植物后不能表達(dá)D如轉(zhuǎn)基因植物的外源基因來源于自然界，則不存在安全性問題11(2009浙江卷)下列關(guān)于基因工程的敘述，錯誤的是()。A目的基因和受體細(xì)胞均可來自動、植物或微生物B限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶是兩類常用的工具酶C人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無生物活性D載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基

24、因的表達(dá)學(xué)案49 DNA重組技術(shù)的基本工具和基因工程的基本操作程序答案與解析基礎(chǔ)自查一基因工程的概念基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，又叫做DNA重組技術(shù)。二基因工程的基本工具1.限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，具有專一性。（3）結(jié)果：產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端

25、。2. DNA連接酶（1）兩種DNA連接酶（EcoliDNA連接酶和T4-DNA連接酶）比較：相同點(diǎn)：都縫合磷酸二酯鍵。區(qū)別：EcoliDNA連接酶來源于T4噬菌體，只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶能縫合兩種末端，但連接平末端的之間的效率較低。（2）與DNA聚合酶作用的異同:DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵。DNA連接酶是連接兩個(gè)DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵。3.載體（1）載體具備的條件：能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn)，供外源DNA片段插入。具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。（2

26、）最常用的是質(zhì)粒, 其它載體： 噬菌體的衍生物、動植物病毒 三基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的獲取. 反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法 .PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因（1）原理：DNA雙鏈復(fù)制（2）過程： DNA解鏈；引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建1.目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2.組成：目的基因啟動子終止子標(biāo)記基因（1）啟動子：是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質(zhì)。（2）終止子：也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段 ，位于基因的尾端。（3） 鑒

27、定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。常用的標(biāo)記基因是抗生素基因。第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 2.常用的方法：a、 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法和 花粉管通道法等。b、 顯微注射技術(shù) 受精卵。C、 大腸桿菌 先用 Ca2+ 處理細(xì)胞，使其成為感受態(tài)細(xì)胞 ，再將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化過程。第四步：目的基因的檢測和表達(dá)1.轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因 DNA分子雜交技術(shù)。2.目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA 用標(biāo)記的目的基因作探針與 mRNA雜交。3.目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 轉(zhuǎn)基

28、因生物中提取蛋白質(zhì) 抗體進(jìn)行抗原抗體雜交。4.個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。 課堂深化探究一對基因工程概念的理解別名基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)操作環(huán)境生物體外操作對象基因操作水平DNA分子水平基本過程剪切拼接導(dǎo)入表達(dá)結(jié)果人類需要的基因產(chǎn)物與雜交育種相比克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙與誘變育種相比定向改造生物性狀原理基因重組二基因工程的基本操作工具1與DNA分子相關(guān)的酶(1)幾種酶的比較種類項(xiàng)目限制酶DNA連接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物DNA分子DNA分子片段脫氧核苷酸DNA分子作用部位磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵堿基對間的氫鍵作用特點(diǎn)切割目的基因及載體，能專一性識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列

29、，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開將雙鏈DNA片段“縫合”起來，恢復(fù)被限制酶切開了的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵只能將單個(gè)脫氧核苷酸添加到脫氧核苷酸鏈上將DNA兩條鏈之間的氫鍵打開作用結(jié)果形成黏性末端或平末端形成重組DNA分子形成新的DNA分子形成單鏈DNA分子(2) 原核生物中不存在該酶的識別序列或識別序列已經(jīng)被修飾。DNA連接酶起作用時(shí)不需要模板。2載體(1)作為運(yùn)載工具，將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞內(nèi)。利用它在宿主細(xì)胞內(nèi)對目的基因進(jìn)行大量復(fù)制。(2) 能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復(fù)制。有多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，以便與外源基因連接。具有特殊的標(biāo)記基因，以便進(jìn)行篩選。(3)質(zhì)粒

30、：一種祼露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA之外，能夠自我復(fù)制的很小的雙鏈環(huán)狀DNA分子。噬菌體的衍生物。動植物病毒。三基因工程操作程序1(1)目的基因的獲取途徑從自然界中已有的物種中分離出來，如從基因組文庫或cDNA文庫中獲取。人工合成目的基因常用的方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因通過PCR技術(shù)可對已獲取的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，以獲取大量的目的基因。(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(轉(zhuǎn)化)生物種類植物細(xì)胞動物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)Ca2處理法受體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程將目的基因插入Ti質(zhì)粒的TDNA上農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞整

31、合到受體細(xì)胞的DNA上表達(dá)將含有目的基因的表達(dá)載體提純?nèi)÷?受精卵)顯微注射受精卵發(fā)育獲得具有新性狀的動物Ca2處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞重組表達(dá)載體DNA分子與感受態(tài)細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子(4)目的基因的檢測與鑒定類型檢測內(nèi)容方法結(jié)果顯示分子檢測導(dǎo)入檢測目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞DNA分子雜交(DNA和DNA之間)雜交帶轉(zhuǎn)錄檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA分子雜交(DNA和mRNA之間)雜交帶翻譯檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原抗體雜交雜交帶個(gè)體水平檢測包括做抗蟲、抗病的接種實(shí)驗(yàn)，以確定是否有抗性以及抗性的程度；對基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的功能進(jìn)行活性比較，以確定功能活性是否相同對應(yīng)訓(xùn)練1.【解

32、析】基因工程中有3種工具，但工具酶只有2種。工具酶本質(zhì)為蛋白質(zhì)，載體本質(zhì)為小型DNA分子，但不一定是環(huán)狀。標(biāo)記基因的作用篩選、檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，常見的有抗生素抗性基因、發(fā)光基因，表達(dá)產(chǎn)物為帶顏色物質(zhì)等。受體細(xì)胞中常用植物受精卵或體細(xì)胞（經(jīng)組織培養(yǎng)）、動物受精卵（一般不用體細(xì)胞）、微生物大腸桿菌、酵母菌等。一般不用支原體，原因是它營寄生生活；一定能用哺乳動物成熟紅細(xì)胞，原因是它無細(xì)胞核，不能合成蛋白質(zhì)。【答案】D2.解析考查基因工程中工具酶的有關(guān)知識。限制性核酸內(nèi)切酶的化學(xué)成分是蛋白質(zhì)，它的活性受到溫度和pH的影響；限制性核酸內(nèi)切酶的特點(diǎn)是能識別雙鏈DNA中特定的核苷酸序列，可在特定

33、的位點(diǎn)進(jìn)行切割，但不能識別和切割RNA；限制性核酸內(nèi)切酶主要是從原核生物體內(nèi)分離出來的。答案C解析圖示過程為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，是基因工程中的核心步驟。構(gòu)建過程中需要將目的基因完整切割下來，此時(shí)要用到限制酶Pst、EcoR。抗卡那霉素基因是標(biāo)記基因，目的是便于鑒定和篩選含有目的基因的細(xì)胞?；虮磉_(dá)載體包括啟動子、目的基因、終止子和標(biāo)記基因等。答案B4.【解析】過程中通過逆轉(zhuǎn)錄法獲得的目的基因，可用于基因工程，但該目的基因中不存在內(nèi)含子和非編碼序列，因此不能用于比目魚的基因組測序；將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)相連形成的能表達(dá)的新基因可能不再是抗凍基因；利用農(nóng)桿菌的目的是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，而不是

34、篩選重組質(zhì)粒；應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測受體細(xì)胞中是否成功導(dǎo)入了目的基因，但不能檢測目的基因是否完全表達(dá)。【答案】B限時(shí)訓(xùn)練題組一基因工程及基本操作1答案：(1)人工胰島素原目的 (2)胰島素原信使RNA 逆轉(zhuǎn)錄 (3)重組 胰島素原 (4)將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞解析:本題是對基因工程操作程序的考查。操作時(shí)，首先要獲取目的基因，然后讓目的基因與載體結(jié)合構(gòu)建成重組DNA分子，再通過一定方法把重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞使其擴(kuò)增和表達(dá)2C限制酶可在特定位點(diǎn)對DNA分子進(jìn)行切割；DNA聚合酶在DNA分子復(fù)制時(shí)將脫氧核苷酸連接成脫氧核苷酸鏈；DNA連接酶可將限制酶切開的磷酸二酯鍵連接在一起；解旋

35、酶的作用是將DNA雙鏈解開螺旋，為復(fù)制或轉(zhuǎn)錄提供模板。3ACD基因工程經(jīng)常以抗菌素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因；質(zhì)粒是基因工程常用的運(yùn)載體；通常用同一種限制酶切割目的基因和運(yùn)載體，以獲得相同的黏性末端；受體細(xì)胞可以是受精卵，也可以是體細(xì)胞。D為培育成抗除草劑的作物新品種，導(dǎo)入抗除草劑基因時(shí)只能以受精卵為受體題組二基因工程的操作程序4.解析本題極易出錯的部分有：在第(1)小題中沒有看清目的基因插入的位置，從而不能確定用限制酶還是來切割質(zhì)粒還是切割抗蟲基因。第(3)小題檢測抗蟲性狀在個(gè)體水平上是否表達(dá)，應(yīng)該讓害蟲吞食轉(zhuǎn)基因棉花的葉片，觀察害蟲的存活情況，這個(gè)地方也有出錯的，主要沒有看清是在哪個(gè)水平上進(jìn)行檢測

36、的。在切割質(zhì)粒時(shí)應(yīng)遵循一個(gè)原則：不能同時(shí)將兩個(gè)標(biāo)記基因切開，至少保留一個(gè)，所以只能用酶切割，而從目的基因兩側(cè)堿基序列可知，只能用酶才得到含目的基因的DNA片段。如果導(dǎo)入了重組質(zhì)粒，此時(shí)重組質(zhì)粒中四環(huán)素抗性基因能正常表達(dá)，而氨芐青霉素抗性基因已被破壞，所以涂布在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，能夠生長的話，說明導(dǎo)入了重組質(zhì)粒(普通質(zhì)粒)。如果把攜帶一個(gè)抗蟲基因的DNA片段看作雜合子，可以認(rèn)為是Aa，自交產(chǎn)生的F1中仍具有抗蟲特性的植株占總數(shù)的比例為。把一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)成一個(gè)植株的技術(shù)稱為植物組織培養(yǎng)。答案(1)(2)四環(huán)素(3)讓害蟲吞食轉(zhuǎn)基因棉花的葉片，觀察害蟲的存活情況，以確定其是否具有抗蟲性狀(4)植物

37、組織培養(yǎng)發(fā)育成完整個(gè)體的全部遺傳物質(zhì)解析(1)cDNA來自mRNA的逆轉(zhuǎn)錄或根據(jù)mRNA的堿基序列人工合成，cDNA文庫小于基因組文庫。(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體用到限制酶和DNA連接酶。將目的基因?qū)氪竽c桿菌須用Ca2處理受體細(xì)胞；導(dǎo)入動物細(xì)胞用顯微注射法。(3)過程的關(guān)鍵技術(shù)是胚胎移植，過程的關(guān)鍵技術(shù)是細(xì)胞核移植。(4)基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，即。題組三綜合題6.解析本題綜合考查基因工程、細(xì)胞工程和PCR技術(shù)，意在考查考生對基礎(chǔ)知識的理解。胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理可以將動物組織分解成單個(gè)細(xì)胞；基因表達(dá)載體包括啟動子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因等，其中啟動子和終止子有利于目的基因

38、的表達(dá)，標(biāo)記基因有利于目的基因的檢測；PCR技術(shù)中需要原料(4種脫氧核苷酸)、緩沖液、模板DNA、引物和耐熱DNA聚合酶等；在生物反應(yīng)器中放入多孔的中空薄壁小玻璃珠的目的：一方面有利于細(xì)胞的貼壁生長，避免接觸抑制；另一方面有利于氣體交換。答案(1)胰蛋白(或膠原蛋白)(2)啟動子終止子(3)對干擾素基因特異的DNA引物對TaqDNA聚合酶(4)擴(kuò)大細(xì)胞貼壁生長的附著面積7.解析(1)由圖示可知：需用Hind和BamH限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因，因酶切后tetR四環(huán)素抗性基因結(jié)構(gòu)被破壞而ampR氨芐青霉素抗性基因結(jié)構(gòu)完好，故用含氨芐青霉素的選擇培養(yǎng)基可篩選含有重組載體的大腸桿菌。(2)啟

39、動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點(diǎn)，可調(diào)控基因的特異性表達(dá)。(3)過程表示把重組載體導(dǎo)入受體細(xì)胞的過程，當(dāng)受體細(xì)胞為動物細(xì)胞時(shí)，常采用顯微注射法。(4)過程表示把早期胚胎移植到代孕母牛子宮的過程，屬于胚胎移植技術(shù)。(5)經(jīng)過程得到新個(gè)體是細(xì)胞全能性的體現(xiàn)。(6)人乳鐵蛋白基因是否成功表達(dá)，關(guān)鍵看是否有其表達(dá)產(chǎn)物即人乳鐵蛋白，可用抗原抗體雜交法檢測該蛋白是否存在。答案(1)Hind和BamH氨芐青霉素(2)A(3)C(4)胚胎移植技術(shù)(5)全能(6)C8.解析本題主要考查基因工程相關(guān)知識。(1)目的基因的獲取方法有直接分離和化學(xué)方法人工合成兩種；(2)仔細(xì)對比正常人與患者

40、的基因序列可知是CG堿基對變?yōu)榱薚A堿基對，這種變化屬于基因突變；(3)正常人P53基因有兩個(gè)限制酶E的識別序列，完全切割后可產(chǎn)生三個(gè)片段，患者P53基因中有一個(gè)限制酶E的識別序列發(fā)生突變，且突變點(diǎn)位于識別位點(diǎn)內(nèi)，這樣患者就只有一個(gè)限制酶E的識別序列，切割后產(chǎn)生兩個(gè)片段，分別為290170460對堿基，220對堿基；(4)正常人的P53基因經(jīng)限制酶E完全切割后產(chǎn)生三個(gè)片段，290對堿基、170對堿基和220對堿基，患者產(chǎn)生兩個(gè)片段460對堿基和220對堿基，則該人的基因型應(yīng)為PP。答案(1)從細(xì)胞中分離通過化學(xué)方法人工合成(2)見下圖基因堿基對的替換(基因突變)(3)3460220(4)PP解

41、析本題考查基因工程的有關(guān)知識。(1)從圖可看出，只有Pst、EcoR兩種酶能保持抗病基因結(jié)構(gòu)的完整性，所以構(gòu)建含抗病基因的表達(dá)載體A時(shí)，應(yīng)選用限制酶Pst、EcoR兩種酶，對抗病基因的DNA和質(zhì)粒進(jìn)行切割。(2)卡那霉素能抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長，欲利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體A中含有抗卡那霉素基因，以此作為標(biāo)記基因。(3)香蕉組織細(xì)胞具有全能性，因此，可以利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入抗病基因的香蕉組織細(xì)胞培育成植株。圖中、依次表示組織培養(yǎng)過程中香蕉組織細(xì)胞的脫分化和再分化。答案(1)Pst、EcoR含抗病基因的DNA、質(zhì)粒(2)抗卡那霉素基因(3)全能性脫分化、再分

42、化高考真題體驗(yàn)1【答案】A【解析】提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，逆轉(zhuǎn)錄得到DNA，然后擴(kuò)增，可獲得大量的基因B，A正確；從基因文庫中獲取目的基因，只要根據(jù)目的基因的相關(guān)信息和基因文庫中的信息進(jìn)行篩選對比即可，不需要用限制酶進(jìn)行切割，B錯誤；目的基因與質(zhì)粒的連接需要用DNA連接酶，而不是DNA聚合酶，C錯誤；目的基因需要和運(yùn)載體連接后形成重組質(zhì)粒再導(dǎo)入，而且應(yīng)該用農(nóng)桿菌進(jìn)行感染，而不是大腸桿菌，D錯誤。2.【答案】（1）黏性末端 平末端（2）切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoR切割產(chǎn)生的相同（3）Ecoli T4（4）mRNA（RNA） cDNA （DNA） PCR（5）噬菌體 動植物病毒等（6）未

43、處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱【解析】（1）當(dāng)限制酶在它識別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA的兩條鏈分別切開時(shí)，產(chǎn)生的是黏性末端，而當(dāng)限制酶在它識別序列的中心軸線處切開時(shí)，產(chǎn)生的則是平末端。（2）為使運(yùn)載體與目的基因相連，不同的限制酶應(yīng)切割出相同的黏性末端，它們必須要能識別相同的核苷酸序列，并且使每條鏈中相同的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。（3）DNA連接酶，根據(jù)酶的來源不同，可以將這些酶分為兩類：一類是從大腸桿菌中分離得到的，稱為Ecoli DNA連接酶；另一類是從T4噬菌體中分離出來的，稱為T4DNA連接酶。（4）反轉(zhuǎn)錄是以RNA為模版來合成DNA的過程。可以在體外短時(shí)間內(nèi)大量

44、擴(kuò)增DNA的技術(shù)叫PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）（5）基因工程中除質(zhì)粒外，還有噬菌體的衍生物、動植物病毒等。（6）大腸桿菌細(xì)胞外有細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，能阻止其他物質(zhì)的進(jìn)入，只能通過Ca2+處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞。3.【答案】（10分）（1）限制性核酸內(nèi)切酶（或限制） 啟動子（2）胰蛋白（3）RNA RAS蛋白【解析】（1）過程表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，在該過程中需要用限制酶對載體進(jìn)行切割以便于目的基因的插入（限制性核酸內(nèi)切酶，簡稱限制酶，寫其他的不得分）；啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶結(jié)合和識別的位點(diǎn)，RNA聚合酶結(jié)合到該位點(diǎn)，可驅(qū)動

45、轉(zhuǎn)錄過程。（2）過程表示動物細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個(gè)的細(xì)胞，之后分裝到其他培養(yǎng)瓶里面進(jìn)行傳代培養(yǎng)。（3）判斷目的基因是否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，可用分子雜交技術(shù)來進(jìn)行，從細(xì)胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標(biāo)記的目的基因單鏈DNA片段進(jìn)行雜交。根據(jù)題中信息“肺組織細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)就增強(qiáng)，引發(fā)肺癌”導(dǎo)入let7基因后，肺癌細(xì)胞受到抑制，說明RAS基因表達(dá)減弱，導(dǎo)致細(xì)胞中的RAS蛋白質(zhì)含量減少進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞受抑制。4【答案】（1）磷酸二酯鍵，肽鍵（2）專一（3）限制性核酸內(nèi)切酶 （4）啟動子（5）ACD【解析】（1）DNA

46、酶作用的部位是DNA的磷酸二酯鍵，蛋白酶作用的部位是肽鍵。（2）過程利用了各種酶催化一種或一類化學(xué)反應(yīng)的特性，即專一性。（3）DNA要構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要用限制性核酸內(nèi)切酶切割，再與質(zhì)粒重組。（4）RNA聚合酶識別和結(jié)合在基因的啟動子上，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄。（5）蛋白酶能特異性的酶解蛋白質(zhì)，分子雜交手段也是利用各物質(zhì)分子結(jié)合的特異性，抑制成熟基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA與催化成熟酶基因的mRNA堿基互補(bǔ)結(jié)合，也具有特異性，光和色素易溶于有機(jī)溶劑，與酒精并不是特異性的溶解，所以選ACD。5.【答案】（1）脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖（2）平 537bp、790bp、661bp （3）4（4）BamH I 抗生素B 同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向鏈接【解析】（1）DNA單鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間通過“脫氧核糖磷酸脫氧核糖”連接。（2）Sma I識別的序列為G