微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)一輪

1、專題二 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用,課題一 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),1、形態(tài)：球形、桿形、螺旋形。,一、細(xì)菌,2、繁殖 二分裂,20分鐘30分鐘，分裂一次,無(wú)鞭毛的球菌：菌落較小較厚、邊緣整齊. 有鞭毛的細(xì)菌：菌落大而扁平、邊緣波狀或鋸齒狀.,問(wèn)：菌落在生態(tài)學(xué) 上屬于什么單位？,二、菌 落,菌落可以作為菌種 鑒定的重要依據(jù)。,單個(gè)或者少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體。,幾種菌落,一、微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),（一）培養(yǎng)基,人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì),一般的培養(yǎng)基均需要碳源、氮源、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽和水等。,1、培養(yǎng)基的基本成

2、分,不同培養(yǎng)基要滿足不同微生物對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及氧氣的需求。,2、培養(yǎng)基的種類,（1）按物理狀態(tài)來(lái)分： 分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基(還有半固體)。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等。 （2）按功能來(lái)分： 分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。 （3）按成分來(lái)分： 分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。,（二）無(wú)菌技術(shù),消毒,滅菌,使用較為溫和的方法來(lái)殺死部分對(duì)人體有害的微生物。,對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行 ； 將培養(yǎng)皿、接種用具進(jìn)行 ； 接種的過(guò)程要在 附近進(jìn)行。,使用較為強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。,清潔消毒,滅菌,酒精燈,1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min

3、 2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min 3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源 4、紫外線消毒 ,(1)消毒的方法：,1.灼燒滅菌：接種用具和接種過(guò)程中的試管口或瓶口放在酒精燈火焰的充分燃燒層中進(jìn)行灼燒滅菌。,（2）常用的滅菌方法,2.干熱滅菌：將玻璃器皿、金屬用具等能耐高溫并需要保持干燥的物品放到干熱滅菌箱內(nèi)，在160170OC中加熱12h即可。,3.高壓蒸汽滅菌：將需滅菌的物品放到盛有水的高壓滅菌鍋內(nèi)（見(jiàn)教材16頁(yè)圖2-4）煮沸，待冷空氣排盡后，密閉繼續(xù)加熱至鍋內(nèi)壓力到100kPa，溫度到121OC后，維持1530min即可。,

4、二、實(shí) 驗(yàn) 操 作,（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,1.計(jì)算,2.稱量,3.溶化,4.滅菌,5.倒平板：待培養(yǎng)基冷卻到50OC左右（P17）,平板冷凝后，為什么要將平板倒置？,平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。,（二）純化大腸桿菌,1.平板劃線法,在數(shù)次劃線后可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體稱菌落。,1、為什么在操作的第一步以及劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)？,殺滅殘留在接種環(huán)的微生物。,2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷

5、卻后再進(jìn)行劃線？ 3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？,以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。,劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。,2.稀釋涂布平板法,稀釋涂布平板法操作過(guò)程分兩個(gè)步驟，即系列稀釋操作和涂布平板操作。,系列稀釋操作,(1)將分別盛有9mL水的試管滅菌并編號(hào)。,(2)用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中，輕壓橡皮頭，吹吸三次使之充分混勻。,(3)從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入第三支試管中，重復(fù)步驟2，直至到第六

6、支試管。,涂布平板操作（P19）,(1)將涂布器浸在盛有70的酒精的燒杯中。,(2)取少量菌液（不超0.1mL），滴加到培養(yǎng)基表面。,(3)將沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷卻810s。,(4)用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。,涂布平板操作后，37度恒溫培養(yǎng)，如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請(qǐng)分析其可能的原因。,無(wú)菌操作未達(dá)到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底；可能是接種時(shí)發(fā)生了污染；也可能是在培養(yǎng)的過(guò)程中受到了污染。,兩種純化細(xì)菌的方法的比較,1、下面是對(duì)大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題。 實(shí)驗(yàn)步驟： (1)制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液

7、。 (2)為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，你選用_法接種樣品。 (3)適宜溫度下培養(yǎng)。 結(jié)果分析： (1)測(cè)定大腸桿菌數(shù)時(shí)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是_，其理由是_ 。 A一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230 B兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是220和260，取平均值240 C三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、50和520，取平均值260 D四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、300、240和250，取平均值250 (2)一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為105的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為234，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是_(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1 mL)。,稀釋涂布平板,D,在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少三個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性；在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否合理,2.34108,(3)用這種方法測(cè)定的大腸桿菌密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量_，因?yàn)開(kāi),多,當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落,2制備牛肉膏蛋白胨固體