半導(dǎo)體激光血管內(nèi)照射對人體外周血T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用

1、第 6 卷 第 3 期 1997 年 9 月激光生物學(xué)報(bào)v o l.n o.63a c ta l a ser b io l o gy s in ica sep. 1997 半導(dǎo)體激光血管內(nèi)照射對人體外周血 t淋巴細(xì)胞亞群及 n k細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用徐清史桂英許松林(上海第二醫(yī)科大學(xué) 生物物理教研室, 200025)成柏華王如瑤(上海第二醫(yī)科大學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室, 200025)朱雅芬俞慶憲吳之畏(上海東南醫(yī)院, 200023)摘要本文報(bào)道了半導(dǎo)體激光血管內(nèi)照射對人體外周血 t 淋巴細(xì)胞亞群及 n k 細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示: 在 23 例經(jīng) 650nm. 5mw 的半導(dǎo)體激光血管內(nèi)照

2、射治療一次, 五次和十次的患者 中, cd + 3 細(xì) 胞 亞 群 的 百 分 比 與 照 射 前 ( 63166% ) 比 較, 分 別 提 高 到 65186% , 69194% ,75104% 。cd + 4 t 輔助細(xì)胞在第十次治療后也有所增加。除此之外, 半導(dǎo)體激光血管內(nèi)照射對n k細(xì)胞比例及 cd + 4cd + 8 比值具有雙向調(diào)控作用, 即偏離 (即高于或低于) 正常值的患者經(jīng)照射后 恢復(fù)到正常水平。 這種雙向調(diào)控作用將對臨床治療更有指導(dǎo)意義。關(guān)鍵詞半導(dǎo)體激光血管內(nèi)照射t 淋巴細(xì)胞亞群免疫調(diào)節(jié)作用the ef f ec ts of d iode l a ser il ib on

3、 per iphera lb lood t l ym phocy te s subpopula t ion s an d nk ce llsx u q in g s h i g u i- y in g c h en g b a i- h u a e t a l(sh an gh a i seco n d m ed ica l u n ive r sity,200025)a bstra c tt h e imm uno - regu la t io n effec t o f d io de la se r il ib o n t lym p ho cy te s subpop u la t i

4、o n s and n kce lls h a s been stud ied.t h e re su lt s show ed th a t th e re w e re an im p ro v ing effec t o n th e cd + 3, cd + 4, cd + 8, and n k ce lls af te r a p e r io d o f d io de la se r (650nm , 5mw , cw ) il ib in 23 p a t ien t s. t h e m ean va lue o f cd + 3% w a s incea sed o n t

5、h e lst , 5th and 10th t im e s il ib sep a ra te ly ( 65186% , 69194% , 75104% ) com p a red w ith th e da ta ( 63166% ) be2 fo re t rea tm en t. t h e m ean va lue o f cd + 4% o n ly inc rea sed o n th e 10th t rea tm en t.in sp ite o f th e cd + 8 w a s a inc rea sed tendency and th e m ean va lu

6、e o f n k % w a s inc rea sed o n th e lst t im e o f il ib (23166 to 26190% ) bu t a m o du la t ing effec t h ad been seen , w h ich m o du la ted th e abno rm a l leve ls o fn k ce ll and cd + 4cd + 8 to th e no rm a l leve ls, so it w o u ld be a m o re u sefu l effec t c lin ica lly.key word s

7、d io de la se ril ibt lym p ho cy te s subpop u la t io nimm uno - m o du la t io n低功率氦氖激光血管內(nèi)照射 ( il ib ) 在臨床上的應(yīng)用已有大量報(bào)道。 對機(jī)體免疫狀態(tài)的影國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目收稿日期: 1997- 04- 27響和促進(jìn)免疫功能的作用, 作者亦已作了臨床治療觀察報(bào)道。 但半導(dǎo)體激光對人體免疫功能是否也有同樣的影響? 是當(dāng)今人們關(guān)注的問題, 迄今尚未見報(bào)道。本文將繼續(xù)采用單克隆抗體 直 接免疫熒光染色方法, 應(yīng)用流式細(xì)胞儀 ( fcm ) 深入觀察分析半導(dǎo)體激光 ( 650nm , 5mw

8、 , cw ) 血管內(nèi)照射對人體外周血 t 淋巴細(xì)胞亞群 (cd + 3, cd + 4, cd + 8 及 n k 等) 的影響。 從而 為進(jìn)一步開發(fā)推廣半導(dǎo)體激光在臨床上的應(yīng)用, 提供科學(xué)實(shí)驗(yàn)的依據(jù)。1 材料與方法111 觀察對象選自上海東南醫(yī)院病房內(nèi)接受 il ib 療程治療的患者共 23 例。 正常人對照組: 為體檢合格的健康人員共 15 例。112 樣品采集il ib 治療者分別于照射前, 第一次照射后, 第五次照射后, 或第十次照射后立即由靜脈采 血抽取肝素抗凝血 1m l 進(jìn)行分析, 正常組只采血一次。113 半導(dǎo)體激光器及血管內(nèi)照射半導(dǎo)體激光器: 末端輸出功率為 5mw , c

9、w 波長 650nm 。激光器系采用進(jìn)口半導(dǎo)體激光管 自行研制而成。 每次照射時間為 40 分鐘。 每日一次, 連續(xù)五次為一療程。 部分患者共連續(xù)進(jìn)行十次照射。 第一次照射前及每次照射 以后各抽血進(jìn)行檢測分析。cd + 3, cd + 4, cd + 8, n k 細(xì)胞的檢測采用微量外周血全血法和單克隆抗體直接免疫熒光法。具體步驟如下: 各取肝素抗凝血 100l, 分別加入 cd + 3 - f it c. cd + 4 - f it c. cd + 8 -p e. (由北京醫(yī)科大學(xué)免疫教研室提供) cd 16. cd 56- p e. (美國 bd 公司提供) 單克隆抗體各20l, 孵育 3

10、0 分鐘后, 加入 n h 4c 1 溶血劑溶解紅細(xì)胞, 離心棄上清液, 用 pb s 洗滌后用 300l( 015- 1% ) 甲醛溶液懸浮細(xì)胞, 上激光流式細(xì)胞儀 fa c scan (bd 公司) 檢測, 每個樣品收取10000 個細(xì)胞, 以 l ist 模式存儲, 用 b. d. 公司所提供的專用程序 l y sy s 軟件分析數(shù)據(jù)。2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果211健康人外周血中 cd + 3, cd + 4, cd + 8, n k t 細(xì)胞亞群的正常值正常 15 例健康人外周血中 cd + 3 亞群平均為 701404111% 。cd + 4 亞群平均為 441153148% 。cd + 8 亞

11、群平均為 331453109% , cd + 4cd + 8 比值平均為 11460118。n k 細(xì)胞平 均為 201576178% 。114il ib 照射前后 cd + 3, cd + 4, cd + 8 細(xì)胞亞群的測定212在 接 受il ib 治 療 的 23 例 患 者 中, cd + 3照 射 前 為 63166% , 經(jīng) 一 次 照 射 后 上 升 到65186% , 第五次照射后上升到 69174% 。十次照射后上升到 75104% 。提示 cd + 3 經(jīng) il ib 治療后有明顯上升的趨勢。cd + 4 照射前為 42179% , 一次照射后為 42166% , 無明顯變

12、化。 五次照射后略有下降, 為40161% , 而十次照射后提高到 49115% 。cd + 8 照射前為 28184% , 一次和五次照射后, 略有上升, 分別為 31116% 和 29188% 。十次 照射后恢復(fù)到照射前水平為 27192% 。第 3 期徐清等: 半導(dǎo)體血管內(nèi)照射對人體外周血 t 淋巴細(xì)胞亞群及 n k 細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用1107從 cd + 4cd + 8 的比值來看照射前為 1171, 經(jīng)一次照射后為 1152, 經(jīng)五次、十次照射后分別提高至 1196 及 1186。213il ib 治療前后 n k t 細(xì)胞亞群的變化表 1半導(dǎo)體激光 il ib 對人體外周血 t 淋巴細(xì)

13、胞亞群及 n k 細(xì)胞的影響(x sd )cd + 3%cd + 4%cd + 8%cd + 4cd + 8n k %6316610185(n = 23)6518611195 (n = 17)6919411105 (n = 16)751046127 ( n= 3)701404111421797196(n = 23)421669188 (n = 17)401616189 (n = 16)491156167 (n= 3)441153143281849119(n = 23)311167178 (n = 17)291887144 (n = 16)271927132 (n= 3)331453109117

14、10182( n= 23)11520170 ( n= 17)11960199 ( n= 16)11860163 (n = 3)114601182316612125(n= 23)2619017129 (n= 17)211237199 (n= 16)141802154 (n = 3)201576178照射前第 1 次照射后第 5 次照射后第 10 次照射后正常值 (n = 15) (n = 15) (n = 15) ( n = 15) (n = 15) 實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果 觀 察 到 在 23例治療患者中, 照射治療前 為 23166 12125, 經(jīng)一次照射 治 療 后 上 升 為 26190, 在

15、 五次、第十次治療后分別為21123 及 14180, 其均值又有 所下降。(上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見 表 1 及圖 1)但若將上述患者從各人 免疫功能的原有實(shí)際水平進(jìn) 行分組分析, 則發(fā)現(xiàn)原有免疫功能 n k 表達(dá)低于正常水 平者, 則有上調(diào)的作用。而原n k 表 達(dá) 高 于 正 常 水 平 者,則 有 下 調(diào) 的 趨 向。 cd+4圖 1cd + 8 比值同樣亦有類同的調(diào)整作用 (參見表 2 及圖 2、圖 3)。討論本工作用半導(dǎo)體激光進(jìn)行血管內(nèi)照射治療過程中, 同時測定病員照射前后的 t 淋巴細(xì)胞 cd + 3, cd + 4, cd + 8 及 n k 細(xì)胞亞群的變化。結(jié)果提示: 外周血中 cd

16、 + 3 細(xì)胞隨著照射次數(shù)的 增加與照射前比較, 均有不同程度的提高。cd + 4 細(xì)胞同樣在第一次及第十次照射后有所提 高。而 cd + 8 細(xì)胞在第一次與第五次照射后稍有上升。在第十次恢復(fù)到照射前水平。這些變化3表 2半導(dǎo)體激光 il ib 對人體 n k 細(xì)胞及 cd 4cd 8 的調(diào)整作用(x sd )n k %cd + 4cd + 8低于正常值者高于正常值者低于正常值者高于正常值者131923199(n = 11)151445141 (n= 8)201018117 (n= 8)141802154 (n= 3)3215910119( n= 12)3511318106 ( n= 10)2

17、21058196 (n = 6)110901211(n = 6)112101190 (n = 3)110901232 (n = 6)11330100 (n = 1)2120601542(n = 10)118601836 (n = 7)116801489 (n = 10)211201622 (n = 2)照射前第 1 次照射后第 5 次照射后第 10 次照射后2015761678(n = 15)11460118(n = 15)正常值圖 2時相的不完全相同, 很可能與各人的個體差異及病情不同有關(guān)。但總的發(fā)現(xiàn)這些指標(biāo)的變化以及 cd + 4cd + 8 比值在進(jìn)行半導(dǎo)體激光內(nèi)照射后其總的趨勢有所提高

18、。 故本工作中半導(dǎo)體激 光血管內(nèi)照射的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與 h e- n e 激光血管內(nèi)照射對 t 淋巴細(xì)胞亞群的變化趨勢基本相 符1 。 外周血中 t 細(xì)胞亞群水平是反映人體免疫系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的一個重要指標(biāo), 測定 t 細(xì) 胞亞群數(shù)量和功能, 對判斷機(jī)體免疫功能有重要的意義。尤其是 cd + 4cd + 8 比值更能反映人 體免疫功能的正常與否。因此本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示我們, 半導(dǎo)體激光進(jìn)行 血管內(nèi)照射猶如 h e- n e 激光內(nèi)照射, 同樣可產(chǎn)生免疫促進(jìn)作用。在本實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)在 il ib 照射治療過程中, 外周血中 n k 表達(dá)以及 cd + 4cd + 8 比值變 化趨勢具有雙向調(diào)控的作用, 即高于

19、正常值的群組經(jīng)照射后能向正常水平下調(diào)。而低于正常者 的群組, 亦能向正常水平上調(diào) (參見表 2 及圖 2、圖 3)。其中第十次的結(jié)果由于例數(shù)太少故未列 入圖中。這種雙向的調(diào)節(jié)作用, 對機(jī)體維持其正常免疫功能的恒定具有重要意義。因?yàn)?n k 細(xì)第 3 期徐清等: 半導(dǎo)體血管內(nèi)照射對人體外周血 t 淋巴細(xì)胞亞群及 n k 細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用1109圖 3胞代表體內(nèi)自然殺傷亞群, n k 細(xì)胞對 b 細(xì)胞的分化和抗原誘導(dǎo)的分化都顯示其抑制作用。n k 細(xì)胞的活性升高勢必導(dǎo)致對 b 細(xì)胞的激活、增殖、分化和抗體產(chǎn)生等等的抑制能力增強(qiáng),使之產(chǎn)生各種淋巴因子, 如 il - 2、ifn 等, 再作用于 t 細(xì)胞, 使 t 細(xì)胞增殖、活化2 3 4從而提高免疫功能。相反, 如果 n k 細(xì)胞亞群水平過高于正常群組, 一方面反映了 t 淋巴細(xì)胞亞群中自然殺傷亞群過高, 另一方面反映了由于 n k 細(xì)胞過高而導(dǎo)致 t 細(xì)胞增殖過快, 這樣對于 維持機(jī)體免疫狀態(tài)的穩(wěn)定性是不利的。 因此, 本工作中觀