大黃中蒽醌類(lèi)成分的提取大黃中蒽醌類(lèi)成分的提取分離和鑒別

1、大黃中蒽醌類(lèi)成分的提取、分離和鑒別 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?1. 掌握蒽醌苷元的提取方法酸水解法。 2. 掌握緩沖紙色譜的原理及基本操作技術(shù)。 3. 掌握pH梯度萃取法的原理及操作技術(shù)。 4. 通過(guò)大黃酚和大黃素甲醚的分離實(shí)驗(yàn)，熟悉柱色 譜的操作技術(shù)。 5. 熟悉蒽醌類(lèi)化合物的鑒定方法。 二、基本原理二、基本原理 大黃中羥基葸醌類(lèi)化合物多數(shù)以苷的形式存在，故先 用稀硫酸溶液把蒽醌苷水解成苷元，利用游離葸醌可溶于 熱氯仿的性質(zhì)，用氯仿將它們提取出來(lái)。由于各羥基葸醌 結(jié)構(gòu)上的不同所表現(xiàn)的酸性不同，用pH梯度萃取法分離它 們；大黃酚和大黃素甲醚酸性相近，利用其極性的差別， 用柱色譜分離之。 三、操

2、作要點(diǎn)三、操作要點(diǎn) 1.提取、分離流程（如圖一） 2.總蒽醌苷元的提取 大黃粗粉100 g，加20硫酸溶液300 ml潤(rùn)濕，再加氯 仿500 ml，回流提取2hr，稍冷后過(guò)濾，殘?jiān)鼦壢ィ确绿?取液于分液漏斗中，分出酸水層，得氯仿提取液。 圖1.大黃提取分離流程圖 3.蒽醌苷元的分離和精制 （1）蒽醌類(lèi)成分的緩沖紙色譜試驗(yàn) 為了驗(yàn)證分離所采用的萃取液是否合理，作如下緩沖紙色譜試驗(yàn)：取 層析濾紙3 cm12 cm，距下端2 cm處劃一起始線(xiàn)，向上每隔1.5 cm劃一平 行線(xiàn)，在各條帶上依pH由低至高順次涂布實(shí)際所用的各緩沖液及堿液，涂 布完后，將濕濾紙夾在兩片干濾紙中吸至半干。取樣品總蒽醌苷元氯

3、仿提 取液點(diǎn)在起始線(xiàn)上，用氯仿上行展開(kāi)，將結(jié)果繪制在下面圖中，并確定選 擇的萃取劑是否合理。 （2）分離與精制 a.大黃酸的分離和精制 將含有總蒽醌的氯仿液450 ml于1000 ml分液漏斗中，加pH 8緩沖液150 ml充分振搖，靜置至徹底分層，分出堿水層置250 ml燒杯中，在攪拌下滴 加20鹽酸至pH 3，待沉淀析出完全后，過(guò)濾，并用少量水洗沉淀物至洗 出液呈中性，沉淀干燥后，樣品加冰醋酸10 ml加熱溶解，趁熱過(guò)濾，濾液 放置析晶，過(guò)濾，用少量冰醋酸淋洗結(jié)晶，得黃色針晶為大黃酸。 b.大黃素的分離和精制 pH 8緩沖液萃取過(guò)的氯仿層，用pH 9.9緩沖液300 ml振搖萃取，靜置至

4、徹底分層后，分出堿水層，在攪拌下用20鹽酸酸化至pH 3，析出棕黃色 沉淀，抽濾，水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀經(jīng)干燥后，用15 ml丙酮熱 溶，趁熱過(guò)濾，濾液靜置，析出橙色針晶，過(guò)濾后，用少量丙酮淋洗結(jié)晶， 得大黃素。 c.蘆薈大黃素的分離與精制 pH 9.9萃取過(guò)的氯仿層再加5碳酸鈉-5氫氧化鈉（9:1）堿水液540 ml萃取，堿水層加鹽酸酸化，析出的沉淀水洗，干燥，用10 ml乙酸乙酯精 制，得黃色針晶的蘆薈大黃素。 d.大黃酚和大黃素甲醚的分離 萃取除去蘆薈大黃素后余下的氯仿層，再用3氫氧化鈉溶液500 m1分 二次萃取，至堿水層無(wú)色為止，合并堿水層，加鹽酸酸化至 pH 3，析出黃 色

5、沉淀，過(guò)濾，水洗至中性，干燥，為大黃酚和大黃素甲醚混合物，留作 柱色譜分離的樣品。余下氯仿液水洗至中性，蒸餾回收氯仿。 e.硅膠柱色譜法分離大黃酚、大黃素-6-甲醚 裝柱：用石油醚乙酸乙酯（9.8:0.2）浸泡200300目硅膠約20 g，攪 拌均勻，盡量趕出氣泡。一次性倒入1.8 cm X 28 cm 的層析柱中，輕輕敲 打使硅膠均勻下沉，至硅膠界面不再下降為止。 上樣：將離大黃酚和大黃素-6-甲醚的混合物用乙醇加熱溶解，伴入少 量硅膠，水浴60左右烘干，加到已裝好的硅膠柱頂端，最后在樣品帶上 蓋上一層硅膠或棉花，以保護(hù)樣品界面不受干擾。 洗脫：先用100 ml石油醚乙酸乙酯（9.8:0.2

6、）洗脫，至第一條黃色色 帶洗下來(lái)，再換用100 ml石油醚乙酸乙酯（9.5:0.5）洗脫下第二條色帶。 4.鑒定 (1)蒽醌類(lèi)成分化學(xué)鑒定 a.堿液試驗(yàn) 分別取各蒽醌結(jié)晶數(shù)毫克置于小試管中，加 2氫氧化鈉溶 液l ml，觀(guān)察顏色變化。凡有互成鄰位或?qū)ξ涣u基的蒽醌呈藍(lán)紫至藍(lán)色， 其它羥基蒽醌呈紅色。 b.醋酸鎂試驗(yàn) 分別取蒽醌結(jié)晶數(shù)毫克，置于小試管中，各加乙醇l ml使 溶解，滴加0.5醋酸鎂乙醇溶液，觀(guān)察顏色變化。 (2)色譜鑒識(shí) a.薄層板：硅膠G-CMC-Na板。 b.點(diǎn)樣：提取的大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的 氯仿溶液及各對(duì)照品氯仿溶液。 c.展開(kāi)劑：石油醚乙酸乙酯甲酸（15:5:1）上層溶液。 d.展開(kāi)方式：上行展開(kāi)。 e.顯色：在可見(jiàn)光下觀(guān)察，記錄黃色斑點(diǎn)出現(xiàn)的位置，然后用濃氨水熏 或噴5%醋酸鎂甲醇溶