他汀個體化檢測的臨床意義

1、他汀個體化基因SLC01B1和ApoE多態(tài)性診斷的介紹【項目背景】汀類藥物分為天然化合物(如洛伐他丁、辛伐他汀、普伐他汀、美伐他汀)和完全人工合成化合物(如氟伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀、羅伐他汀、效的降脂藥 pitavastatin)是最為經(jīng)典和有物，廣泛應(yīng)用于高脂血癥的治療。他汀類藥物(statins)是羥甲基戊二酰輔酶A ( HMG-CoA )還原酶抑制劑，此類藥物通過競爭性抑制內(nèi)源性膽固醇合成限速酶(HMGCoA)還原酶，阻斷細(xì)胞內(nèi)羥甲戊酸代謝途徑，使細(xì)胞內(nèi)膽固醇合成減少，從而反饋性刺激細(xì)胞膜表面(主要為肝細(xì)胞)低密度脂蛋白(lowden sity lipop rote in , L

2、DL)受體數(shù)量和活性增加、使血清膽固醇清除增加、水平降低。自1987年起，他汀開始應(yīng)用于臨床，旨在防范心腦血管事件，處方量很大。因而，臨床對于他汀的安全性和預(yù)后一直存在顧慮，特別是他汀與肌肉安全性的問題，嚴(yán)重時可致命，雖然發(fā)生率很低，但卻直接影響患者的生存質(zhì)量及預(yù)后，且可影響患者是否應(yīng)該長期服用他汀的選擇。研究表明，肌肉安全性與他汀代謝中的矢鍵酶SLCO1B1基因編碼的OAT P1B1密切相矢【1】，有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽(OAT P1B1 )參與多種藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)，在他汀藥物代謝中負(fù)責(zé)將血液中的藥物轉(zhuǎn)移至肝臟直接發(fā)揮藥效或代謝轉(zhuǎn)化成為有活性的物質(zhì)。SLCO1B1位于12號染色體，研究顯示SLCO1B

3、1基因具有遺傳多態(tài)性，其中388AG、521 TC兩種常見的單核昔酸多態(tài)性，可以形成4種單倍型SLCO1 B1*1a( 388A-521T)SLCO1B1*1b( 388G-521T 八 SLCO1B1*5( 388A-521C)和 SLCO1B1M5( 388G-521C)a突變型SLCO1B1基因會引起編碼的OATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活力減弱，表現(xiàn)為肝臟攝取藥物能力降低，引起他汀類藥物血藥濃度上升，增加橫紋肌溶解癥或肌病的發(fā)生風(fēng)險。研究表明，他汀的療效及預(yù)后與載脂蛋白ApoE密切相矢【2】，載脂蛋白E( ApoE)通過多種途徑參與機(jī)體的脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)，是影響機(jī)體血脂水平的重要內(nèi)在因素。ApoE多

4、肽被認(rèn)為是高脂蛋白血癥及動脈粥樣硬化性血管病的易感候選基因，與冠心病【3】、老年癡呆【4】等疾病風(fēng)險密切相尖，人類ApoE基因定位于19號染色體上，主要有兩種單核昔酸多態(tài)性526OT和388TC，可以形成3種單倍型分別是ApoE3( 388T-526C)、ApoE2(388T-526T)、ApoE4( 388C-526C)。文獻(xiàn)報道，ApoE4攜帶者患冠心病的風(fēng)險要高40%，并且他汀類藥物對ApoE4攜帶者療效往往不佳或無療效【2，而對ApoE2攜帶者的降脂作用最強(qiáng)?！痉椒ㄔ怼勘井a(chǎn)品使用的方法為多重?zé)晒舛縋CR技術(shù)，該技術(shù)基于熒光定量PCR平臺，首先針對SNP位點(diǎn)上下游設(shè)計特異性引物，分別

5、針對野生型及突變型位點(diǎn)設(shè)計不同熒光基團(tuán)標(biāo)記的特異性探針，然后對引物及探針進(jìn)行科學(xué)的配比組合，配置SNP位點(diǎn)檢測體系，通過熒光定量PCR儀對臨床樣本DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，同時收集擴(kuò)增信號，如果信號為野生型探針信號，那么樣本為純合野生型；如果信號為突變型探針信號，那么樣本為純合突變型；如果信號同時有野生型及突變型探針信號，那么樣本為雜合突變型。該方法及相矢產(chǎn)品具有以下明顯優(yōu)勢：1 操作簡便，檢測時間短、結(jié)果易判讀；2.特異性及靈敏度更高，確保結(jié)果客觀準(zhǔn)確；3可實現(xiàn)一管檢測一個SNP位點(diǎn)，通量大；4.具有UNG防污染體系，可有效預(yù)防臨床氣溶膠污染，避免假陽性；5.具有獨(dú)特的內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)，可監(jiān)控操作過程；

6、6.具有弱陽性對照及空白對照，可監(jiān)控試劑及環(huán)境質(zhì)量。1 多重黃光定PCR體系O AX特異性探針識別特異性模板C TQnlRfftrnv frtntr、 t / x)pUIIMIIIIIIIIII 川IIHIIIIIIIIIlLLilllllg3-S應(yīng)正常進(jìn)行，釋放熒光信號Tarrnnl Pruu 啊曠Friiur【適應(yīng)癥】心內(nèi)科（服用他汀患者的個體化基因診斷，用于風(fēng)險預(yù)測、療效及預(yù)后）體檢科、老年科（用于冠心病、老年癡呆等發(fā)病風(fēng)險預(yù) 測，提供健康管理方案）【臨床意義】SLCO1B1基因檢測的位點(diǎn)為388AC、521TC，其可形成4種單倍型*1a *1b5、*15，SLCO1B1基因編碼的蛋白主

7、要參與藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)，負(fù)責(zé)將血液中的藥物轉(zhuǎn)移至肝臟中直接發(fā)揮藥效或代謝轉(zhuǎn)化為有活性的物質(zhì)。突變型SLCO1B1基因引起自身轉(zhuǎn)運(yùn)活力減弱，表攜帶者服用他汀療效往往不佳或無效, 臨床指導(dǎo)ApOE2攜帶者服用他汀效果最佳。臨床指導(dǎo)基因基因型臨床意義SLCO1B1*1a/*1a,*1a/*1b, *1b/*1b正常肌病風(fēng)險，他汀耐受劑量較高*1a/*5, *1a/*15, *1b/*15中度肌病風(fēng)險，他汀耐受劑量中等*5/*5, *5/* 15, *15/* 15高度肌病風(fēng)險，他汀耐受劑量較低ApoE基因檢測的位點(diǎn)為526OT、388TC、其可形成3種單倍型ApoE2ApoE3ApoE4 的ApoE4 ,

8、 ApoE基因編碼的蛋白是影響機(jī)體血脂水平的重要內(nèi)在因素，文獻(xiàn)報道,基因型建議飲食預(yù)防疾病提示用藥提示E2/E2魚油降脂效果最好注意黃斑變性、m類高脂血癥；老年癡呆、他汀療效較好E2/E3適量飲酒風(fēng)險明顯降低腦梗塞有保護(hù)因子5冠心病風(fēng)險低E2/E4魚油降脂效果最好正?；蛐?，老年癡呆、腦梗塞、冠心病他汀治療療效正常E3/E3適量飲酒風(fēng)險明顯降低正常E3/E4魚油降脂風(fēng)險加大適量飲酒風(fēng)險明顯大增增加冠心病、心梗、腦梗、老年癡呆風(fēng)險，宜低脂低鹽彳田糖，忌煙酒角肉他汀療效較差【參考文獻(xiàn)】1Mikko Niemi, Marja K P asanen, and P ertti J. Neuvonen O

9、rganic Anion Trans porting Polypep tide 1B1 :aGenetically Polymorp hie Trans porter of Majorlm portance for Hep atic Drug Up take. P harmacol Rev 63:157 -81,2011 2. John F. Thom pson, PhD; Craig L. Hyde, PhD; Linda S. Wood, MS;Sara A. P aciga, MA; David A. Hinds, PhD;David R. Cox, MD, PhD;G. Kees Ho

10、vingh, MD, PhD; John J.P. Kastelein, MD, PhD. Comp rehensive Whole-Genome and Can didate GeneAn alysis for Respo nse to Stati n Thera py in the Treati ng toNew Targets (TNT) Cohort Circ Cardiovasc Genet. 2009;2:173-181.3 Ra pha?l Chouinard-Watkins and Melanie P lourde Fatty Acid Metabolism in Carriers of Ap oli pop rotein EEp silon 4 Allele: Is It Contributing to Higher Risk of Cognitive Decline and Coronary Heart Disease? Nutrients 2014, 6, 4452-4471; doi:10.3390/nu6104452 4 Ping Wu1,2Hong-Lei Li1Zhi-Jun Liu1Qing-Qing TaolMiao Xu1 Qi-Hao GuolZhen Hongl Yi-MinSun1