頸眩寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

1、頸眩寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 報(bào)告人：馮正騰 專業(yè)：微生物與生化藥學(xué) 指導(dǎo)老師：張鶴鳴 田雪梅 主要內(nèi)容 1. 研究背景 2. 目的意義 3. 研究?jī)?nèi)容 4. 已完成內(nèi)容 5. 待解決問題 1. 研究背景 1.1 頸椎病（椎動(dòng)脈型 ） 工作壓力大，坐姿不良。 脾虛肝旺，肝陽上亢 。 1.1 頸椎病 耳鳴、耳聾、記憶力智力下降。 發(fā)病率逐年升高，發(fā)病年齡逐年下降。 1.2 頸眩寧膠囊 配伍平肝潛陽、祛痰逐淤、活血通絡(luò)。 能改善由頸椎病引起的眩暈和頭痛癥狀。 1.2.1 頸眩寧膠囊藥材組成 天麻6份、鉤藤12份、川芎10份、 延胡索10份、葛根12份、白芷6份 1.2.1.1 天麻天麻素（天麻苷） 天麻

2、能鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛，治療頭暈?zāi)垦?、肢體麻木。 天麻素屬酚類，有多個(gè)羥基，易溶于水及極性溶劑。 1.2.1.2 鉤藤鉤藤堿 鉤藤性涼味甘苦，具有清熱平肝息風(fēng)定驚的功能。 可用于治療頭痛、高血壓、眩暈癥等。 鉤藤堿屬于吲哚類生物堿 ，可用堿化乙醚提取。 1.2.1.3 川芎阿魏酸 川芎性溫味辛微苦，具活血行氣，祛風(fēng)止痛功效。 川芎能抗心絞痛，改善微循環(huán)淤血，提高免疫力。 阿魏酸屬酚類，可用有機(jī)溶劑回流提取。 1.2.1.4 延胡索延胡索乙素 延胡索具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和催眠作用。 延胡索對(duì)心肌缺血和損傷有保護(hù)作用； 還有抗腫瘤，增強(qiáng)免疫力等作用。 延胡索乙素屬季銨堿，可用酸性乙醇回流提取。 1.2.1.5 葛根

3、葛根素 葛根性甘辛平，升陽止瀉。 具有降低血壓，減緩心律的作用。 可用于治療心肌梗死、高血壓、突發(fā)性耳聾等。 葛根素屬異黃酮類化合物?？捎靡掖蓟亓魈崛?。 1.2.1.6 白芷歐前胡素 白芷性溫味辛，能散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿。 能解熱鎮(zhèn)痛、抗炎，治療頭痛，皮膚病。 歐前胡素屬香豆素類，可以用乙醇滲漉法提取。 1.2.2 制備方法 六味藥按比例稱量 加入10倍體積65%乙醇 浸泡3個(gè)小時(shí) 回流提取3次，每次2小時(shí) 濃縮藥液，制成粉末 加入輔料制粒，裝入膠囊 中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的目的 確保藥物質(zhì)量的穩(wěn)定、安全、有效、可控。 中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的意義 促進(jìn)生產(chǎn)發(fā)展 參與國(guó)際市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng) 進(jìn)行藥品評(píng)價(jià) 1.3 中

4、藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)概述 1.3.1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分類 1. 法定標(biāo)準(zhǔn) 中華人民共和國(guó)藥典（已發(fā)行2010版） 2. 企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 企業(yè)內(nèi)部指標(biāo) 保護(hù)產(chǎn)品，防偽 1.3.2 中成藥制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容 名稱 處方 制法 性狀 鑒別 檢查 浸出物 含量測(cè)定 功能主治 用法用量 注意事項(xiàng) 規(guī)格 貯藏 中藥質(zhì)量存在的問題 重金屬污染（汞、鎘、砷、銅、鉈） 毒性成分 農(nóng)藥殘留、微生物、霉菌霉素 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中所檢成分未必是主治功能成分 1.3.3 中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展 中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展趨勢(shì) 建立中藥指紋圖譜可全面反映中藥內(nèi)在質(zhì)量。 中藥指紋圖譜 生藥材dna指紋圖譜 中藥飲品成分指紋圖譜 中成藥成分指紋圖譜 中藥質(zhì)量管理方向

5、 gacp基地 檢測(cè)方法的多樣化 基本設(shè)備：高效液相色譜、氣相色譜、毛 細(xì)管電色譜 聯(lián)用技術(shù)：色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、色譜-核磁共 振聯(lián)用 應(yīng)用多種檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器、蒸發(fā)光散 射檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、二極管陣列檢測(cè) 器 2. 目的意義 建立藥物分離、鑒定和含量分析方法。 為新藥頸眩寧制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 3. 研究?jī)?nèi)容 薄層色譜鑒別（薄層色譜鑒別（tlctlc） 定性鑒別，將供試品與對(duì)照品和對(duì)照藥材比較。 陰性鑒別，制備各藥材陰性供試品進(jìn)行tlc鑒別。 含量測(cè)定含量測(cè)定 用高效液相法（hplc）測(cè)定含量。 陰性鑒定，將各藥材陰性供試品進(jìn)行hplc鑒別。 回收率、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、檢測(cè)下限 檢查檢查（參

6、考中國(guó)藥典2010版） 水分檢查、裝量差異、崩解時(shí)限、微生物限度 3.1.1. 供試液制備 樣品制備方法：浸漬法、加熱回流提取、超聲提取、水蒸 汽蒸餾法提取、升華法、液液萃取法、固液萃取法（中性 氧化鋁柱、大孔吸附樹脂柱、離子交換樹脂柱和c18柱 等）。 3.1.2. 展開條件 展開劑選擇：良好分離度 考慮因素：溶劑的種類、極性、配比 展開環(huán)境：溫度、濕度 3.1.3. 顯色方法（參考藥典） 3.1 tlc實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 3.2 hplc實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 3.2.1. 供試品制備 3.2.2. 流動(dòng)相選擇 3.2.3. 方法學(xué)考察 3.2.3. 高效液相色譜法測(cè)定含量的方法學(xué)考察 a. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：線性關(guān)

7、系、線性范圍、相關(guān)系數(shù)。 b. 穩(wěn)定性試驗(yàn)：將供試品溶液多次進(jìn)樣，每次進(jìn)樣間隔 一段時(shí)間（比如12 h），考察供試品溶液中待測(cè)成分的 穩(wěn)定性，一般考察36小時(shí)。 c.精密度試驗(yàn)：取同一樣品，連續(xù)測(cè)定五次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn) 偏差不得大于3。 d. 重復(fù)性試驗(yàn)：同一批號(hào)樣品，按樣品測(cè)定方法操作， 測(cè)定五份，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得大于3。 e. 加樣回收試驗(yàn)：于已知被測(cè)成分含量的樣品中精密加 入一定量的被測(cè)成分純品，測(cè)定含量。用實(shí)測(cè)值與原樣品 中含測(cè)成分之差，除以加入純品量計(jì)算回收率。一般回收 率要求在95105。 f.含量限幅度的制定：根據(jù)原料來源不同的三批以上樣 品測(cè)定結(jié)果，確定含量范圍。 3.3. 檢查 水

8、分 裝量差異 崩解時(shí)限 微生物限度 4. 已完成內(nèi)容 樣品中天麻素的tlc定性測(cè)定及hplc定量測(cè) 定部分內(nèi)容。 4.1. 材料和設(shè)備 標(biāo)準(zhǔn)品：天麻素，中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批 號(hào)：116807-200205 頸眩寧膠囊：批號(hào)：20120716 硅膠板：gf merck生產(chǎn) 展開劑為分析純 電子天平：奧豪斯儀器（上海）公司，ar224cn 高效液相色譜：dionex ultimate 3000 烘箱：memmert 4.2. 方法 4.2.1. 天麻素薄層色譜鑒別 4.2.1.1. 供試品制備 d101大孔樹脂，10%乙醇50ml洗脫。 4.2.1.2. 標(biāo)準(zhǔn)品制備 取天麻素對(duì)照品，加甲醇制

9、成1mg/ml的對(duì)照品溶液。 4.2.1.3. 展開劑選擇 用氯仿:甲醇=3:1的比例展開。 4.2.1.4. 顯色方法 薄層板晾干后，噴以10%磷鉬酸乙醇，在110烘至顯出 斑點(diǎn)。 4.2.1.5. 天麻素薄層色譜鑒別實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1、8、9為天麻素對(duì)照品 6為上述方法制備得到的樣品 其余色譜條帶為其它方法制備得到的樣品 4.2.2 天麻素hplc含量檢測(cè) 4.2.2.1. 供試品制備 超聲處理1小時(shí) 4.2.2.2. 標(biāo)準(zhǔn)品制備 稱取天麻素標(biāo)準(zhǔn)品0.0059g，容于流動(dòng)相中。 4.2.2.3. 流動(dòng)相選擇 水:乙腈=3:97 4.2.2.4天麻素hplc含量

10、檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 0.01.32.53.85.06.37.58.810.011.312.513.815.016.317.518.820.021.322.523.825.0 -10.0 20.0 40.0 60.0 80.0 天麻素 天麻素標(biāo)準(zhǔn)品 標(biāo)準(zhǔn)曲線 （判定系數(shù) 99.9997） 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 0.0000.1000.2000.3000.4000.5000.6000.700 0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.013.014.015.0 -50 0 100 200 250 #14uv_vis_1 mau min 1

11、- 0.820 2 - 2.173 3 - 2.280 4 - 2.480 5 - 2.553 6 - 2.6937 - 2.913 8 - 3.153 9 - 3.493 10 - 3.627 11 - 3.733 12 - 3.993 13 - 4.113 14 - 4.333 15 - 4.747 16 - 4.973 17 - 5.333 18 - 5.553 19 - 5.873 20 - 6.080 21 - 6.34722 - 6.63323 - 7.553 24 - 7.987 25 - 9.260 26 - 10.040 27 - 10.393 天麻素 29 - 12.153

12、 30 - 13.620 樣品圖譜 天麻素含量為0.9605ug/ul 5. 待解決問題 其他5味藥的定性、定量測(cè)定。 hplc的方法學(xué)考察。 規(guī)定的檢查項(xiàng)目。 參考文獻(xiàn) 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部) s.北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2010. 楊翔宇. 椎動(dòng)脈型頸椎病中藥內(nèi)治進(jìn)展j. 貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005,27（2）：52-54. 宋成芝，徐燕. 天麻的化學(xué)成分和藥理作用j. 中國(guó)民族民間醫(yī)藥, 2010:13-14. 贠亞波, 徐劍, 張永萍. 影響天麻中天麻素提取的因素研究j. 中南藥學(xué), 2009, 7(5):327- 330. 黃青萍, 蔡樂. 鉤藤的藥理作用及臨床應(yīng)用j. 廣

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