(涂紹勇3、4.5周)發(fā)酵工程與設(shè)備實驗講義

1、前 言 發(fā)酵工程是一門以生物代謝過程和對代謝過程控制，獲得生物產(chǎn)品共性原理為研究對象的學(xué)科。探討生物產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的共性為目的，從工藝角度闡明細(xì)胞的生長和代謝產(chǎn)物與細(xì)胞的培養(yǎng)條件之間的相互關(guān)系，為生產(chǎn)過程的優(yōu)化提供理論依據(jù)。本實驗課程的任務(wù)是使學(xué)生在已學(xué)過微生物、生物化學(xué)、化工原理等課程的基礎(chǔ)上，把發(fā)酵工程的理論和實踐結(jié)合起來，實現(xiàn)對生物反應(yīng)器和生物化學(xué)產(chǎn)品純化與分離的操作。深入理解生產(chǎn)過程的工藝原理，進(jìn)一步深化和提高所學(xué)的基本知識，從而使學(xué)生具有選育新菌種，探求新工藝、新設(shè)備、從事生物產(chǎn)品研發(fā)和對生物產(chǎn)品下游技術(shù)操作的基本的能力并能夠應(yīng)用基本理論去分析和解決生產(chǎn)過程中的具體問題，改造原有不合

2、理的生產(chǎn)過程，使之更符合客觀規(guī)律。本實驗以霉菌、細(xì)菌、酵母菌等常見工業(yè)微生物為對象，經(jīng)過發(fā)酵生產(chǎn)植酸酶、谷氨酸、紅曲等，并經(jīng)過進(jìn)一步的分離提取，得到商品。通過這一過程學(xué)習(xí)生物工程中的中游和下游技術(shù)。實驗課程作為發(fā)酵工程教學(xué)的重要部分，一直是課程建設(shè)的重點，特別是經(jīng)過最近幾年的改革與實踐，已經(jīng)形成了基礎(chǔ)、綜合、創(chuàng)新三個平臺的實驗教學(xué)模式，并以此建立了一整套的實驗管理體系，形成了我校發(fā)酵工程實驗教學(xué)的特色。 按照三個平臺進(jìn)行編制實驗內(nèi)容。 基礎(chǔ)型實驗平臺：基礎(chǔ)型實驗平臺旨在培養(yǎng)學(xué)生的基本實驗技能，掌握基本實驗方法，為進(jìn)一步的實驗打下基礎(chǔ)。本平臺將發(fā)酵過程按工藝流程整合成樣品采集、菌種誘變、培養(yǎng)基配

3、制、種子擴(kuò)培、發(fā)酵培養(yǎng)、產(chǎn)物分析等單元實驗?zāi)K，與理論課程同步開設(shè)，作為課程實驗的基本環(huán)節(jié)。 綜合型實驗平臺：綜合型實驗平臺指具有一定綜合度并帶有一定設(shè)計性的大實驗，是課程實驗的提高環(huán)節(jié)，旨在培養(yǎng)學(xué)生的綜合實驗技能，使學(xué)生的實驗技能得到系統(tǒng)的訓(xùn)練，掌握較高層次的實驗方法。本平臺實驗內(nèi)容涵蓋酶制劑生產(chǎn)、紅曲色素生產(chǎn)、液態(tài)發(fā)酵、固態(tài)發(fā)酵、酶反應(yīng)工程及過程控制檢測等諸多領(lǐng)域，學(xué)生可以結(jié)合自己的興趣選做其中部分內(nèi)容。創(chuàng)新型實驗平臺：創(chuàng)新型實驗平臺指反映學(xué)科發(fā)展方向或研究熱點的帶有探索性的實驗環(huán)節(jié)，鼓勵學(xué)生自由參加。旨在培養(yǎng)學(xué)生的實驗創(chuàng)新能力，掌握較好的實驗設(shè)計方法和數(shù)據(jù)分析的能力。本實驗平臺由學(xué)院各研

4、究所、研究室提供實驗課題，每年動態(tài)調(diào)整，學(xué)生自由選擇，讓學(xué)生接觸并參與科研工作，培養(yǎng)科研興趣，鼓勵學(xué)生提出新想法、新見解，并付諸實驗?；A(chǔ)型、綜合型實驗環(huán)節(jié)隨發(fā)酵工程理論課程同學(xué)期開設(shè)，基礎(chǔ)實驗安排4周，綜合型實驗安排12周；創(chuàng)新實驗環(huán)節(jié)從四年級開始啟動，以保證實驗的連貫性和效果。參加創(chuàng)新實驗的項目可以作為畢業(yè)論文（設(shè)計）的選題。通過這樣一個連貫性的實驗教學(xué)規(guī)劃，使學(xué)生的實驗技能得到系統(tǒng)的訓(xùn)練。目前我們的實驗教學(xué)體系，顯示了較為顯著的特點。1）基礎(chǔ)型實驗掌握扎實：首先通過精心選擇安排基本技能訓(xùn)練的實驗內(nèi)容，做到少而精，便于學(xué)生掌握，而且在進(jìn)一步在綜合實驗環(huán)節(jié)中，這些基本技能訓(xùn)練重復(fù)出現(xiàn)，基本技

5、能得到了鞏固和加強(qiáng)。2）綜合型實驗的比重大；占整個實驗環(huán)節(jié)的70，綜合型實驗中學(xué)生更可部分或全部完成從實驗方案設(shè)計、實驗準(zhǔn)備直至實驗結(jié)果獲取的全過程。通過這種系統(tǒng)化的訓(xùn)練，學(xué)生的動手能力、綜合問題的分析能力得到極大的提高。3）時代感突出：實驗內(nèi)容涵蓋了發(fā)酵工程的諸多新領(lǐng)域，與學(xué)科的發(fā)展相適應(yīng)，激發(fā)了學(xué)生的實驗興趣。發(fā)酵工程實驗室規(guī)則一、實驗前，請自覺對實驗內(nèi)容進(jìn)行充分的預(yù)習(xí)，了解實驗?zāi)康?、原理和方法，不清楚或不懂之處，可以查閱有關(guān)資料，做到心中有數(shù)。二、進(jìn)入實驗室后，應(yīng)保持良好的秩序，不要隨便談笑、高聲說話和隨意走動，不做與實驗無關(guān)的事情。三、實驗時，應(yīng)嚴(yán)格遵守正確的操作方法和按規(guī)定的步驟進(jìn)行

6、，并根據(jù)自己觀察所得，認(rèn)真、實事求是地記錄實驗結(jié)果，課后要及時、認(rèn)真完成實驗報告，并按時匯交老師批閱。四、使用化學(xué)藥品、玻璃器皿和水電等要切實注意安全，以免發(fā)生危險和傷害事故。五、使用顯微鏡、離心機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、搖床、電熱蒸汽滅菌鍋、培養(yǎng)箱、干燥箱等儀器時，要細(xì)心操作和特別愛護(hù)。六、對消耗性材料和藥品的使用要力求節(jié)約，用后歸還原處。七、實驗室里的一切物品，未經(jīng)教師許可，不得擅自取用或攜出。八、無菌操作前后要用消毒水（3%左右來蘇爾液或新潔爾滅等溶液）洗手和擦洗臺面。九、損壞物品應(yīng)及時登記，并照價賠償。十、實驗完畢，必須把所用的儀器、設(shè)備等抹凈放妥，清理好自己的實驗臺，把實驗用具、器皿洗刷干凈，

7、安放妥當(dāng)，將實驗室收拾整潔、干凈，然后將手洗凈，關(guān)好水電門窗等，并向指導(dǎo)教師交待清楚后方可離開實驗室。15發(fā)酵工程與設(shè)備實驗 附 錄 基礎(chǔ)型實驗平臺 實驗1 實驗準(zhǔn)備知識和基本操作訓(xùn)練一、實驗?zāi)康?. 理解發(fā)酵工程實驗技術(shù)的基礎(chǔ)理論。2. 掌握發(fā)酵工程實驗技術(shù)的基本操作。二、實驗原理1. 玻璃器皿的洗滌（1）新購置玻璃器皿的處理新購置的玻璃器皿往往含有游離堿，一般應(yīng)先在2%鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時后再用清水洗凈。洗凈后的試管倒置在試管筐或架中，錐形瓶倒置于洗滌架上，培養(yǎng)皿的皿蓋和皿底分開，順序壓著皿邊倒扣在桌子上或其它地方，晾干或在干燥箱中烘干備用。（2）常用玻璃器皿的洗滌常用的錐形瓶、培養(yǎng)皿、試

8、管、燒杯、量筒、玻璃漏斗等器皿，洗滌時可用鬃刷沾上洗衣粉、肥皂粉或去污粉刷洗，然后用自來水沖洗干凈，倒放在洗滌架上自然晾干或放7080干燥箱中烘干備用。移液管和滴管可用自來水沖洗干凈后放7080干燥箱中烘干備用。若分析用移液管最好在2%鹽酸溶液（或洗液）中浸泡數(shù)十分鐘，取出后用自來水沖洗，再用蒸餾水沖洗23次，100 干燥箱中烘干備用。（3）帶菌玻璃器皿的處理移液管、滴管、玻片等帶菌后，使用完畢立即浸入5%石炭酸溶液（或2%來蘇爾或0.25%新潔爾滅溶液）中數(shù)小時或過夜，再洗滌。錐形瓶、培養(yǎng)皿、試管等應(yīng)經(jīng)120 滅菌后再洗滌。注意：瓊脂不能直接倒在洗滌池內(nèi)，必須倒在廢桶中，否則阻塞下水管道。2

9、. 發(fā)酵工程實驗室技術(shù)的有關(guān)內(nèi)容發(fā)酵工程的開發(fā)，首先要在實驗室中進(jìn)行。在實驗室里，與發(fā)酵工程有關(guān)的關(guān)鍵設(shè)備有：滅菌設(shè)備、超凈工作臺、搖瓶機(jī)、培養(yǎng)箱、小型發(fā)酵罐等。在發(fā)酵工程研究和生產(chǎn)中，純培養(yǎng)是最基本的操作。為了實現(xiàn)純培養(yǎng)的目的，要求從接種到培養(yǎng)結(jié)束的整個實驗過程不得有雜菌污染，也就是說，要嚴(yán)格滿足無菌操作的要求。因此，我們首先碰到的問題就是滅菌。所謂滅菌是指用熱或其它物理和化學(xué)方法將所有的微生物完全破壞或除去。在實驗室里常規(guī)的滅菌方式主要包括熱滅菌、化學(xué)滅菌、紫外線殺菌以及過濾除菌等。為了保證實驗過程完全按照無菌操作的要求進(jìn)行，不僅需要滅菌設(shè)備和無菌環(huán)境等客觀條件的保證，更需要實驗者主觀上將

10、無菌操作的意識貫穿于操作過程始終，并嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程。發(fā)酵工程實驗室技術(shù)操作很多，最基本也是最常見的操作有以下幾項：（1）平板操作（如劃線、涂布等）；（2）斜面操作（如劃線、接塊、穿刺等）；（3）搖瓶操作（如接塊、接菌苔、移液等）；（4）菌種保藏操作（斜面保藏、沙土管保藏、冷凍管保藏、固體曲保藏等）。三、實驗試劑與儀器1. 材料：棉花、紗布、棉繩、牛皮紙或報紙2. 儀器：試管、燒杯、錐形瓶、發(fā)酵瓶、移液管、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、涂棒等。四、實驗步驟 1. 實驗準(zhǔn)備操作（1）幾種棉塞的制作（試管、錐形瓶、發(fā)酵瓶棉塞）（2）幾種器皿和用具的包扎（移液管、培養(yǎng)皿、試管） 培養(yǎng)皿的包扎。培養(yǎng)皿常用舊報紙

11、緊緊包好，一般610套，包好后干熱或濕熱滅菌。如果將培養(yǎng)皿放入金屬筒內(nèi)進(jìn)行干熱滅菌，則不必用紙包，金屬筒有一圓筒形的帶蓋外筒，里面放一裝培養(yǎng)皿的帶底框架（圖4），此框架可自圓筒內(nèi)提出，以便裝取培養(yǎng)皿。 移液管的包扎。準(zhǔn)備好干燥的移液管，在距其粗頭頂端約0.5cm處，塞上1.5cm長的棉花，以免使用時將雜菌吹入其中，或不慎將微生物吸出管外。棉花要松緊適當(dāng)（過緊，吹吸液體太費(fèi)力；過松，吹氣時棉花會下滑），接著按圖5方法包扎，后將移液管集中在一起，用一張大報紙包好，進(jìn)行干熱或濕熱滅菌。 （3）幾種接種用具的制作（接種環(huán)、涂棒、接種鏟、接種針、酒精燈） 試管和三角瓶的包扎 試管管口和三角瓶瓶口塞上棉花

12、或硅膠塞后，在棉花塞與管口和瓶口的外面用二層報紙包扎好（如有牛皮紙只用單層，效果更好），進(jìn)行干熱或濕熱滅菌。試管較多時，一般7支一組，再用雙層報紙包扎。2. 培養(yǎng)基的制備與滅菌方法（1）配制培養(yǎng)基的基本過程：藥品稱量溶解調(diào)節(jié)pH過濾分裝塞棉塞和包扎滅菌 先估算實際需要培養(yǎng)基的用量，然后按比例計算各種組份的用量； 稱量藥品、溶解。量微不宜直接稱量的藥品可以先配制母液，然后取適當(dāng)體積達(dá)到規(guī)定比例。 調(diào)節(jié)pH。一般用精密pH試紙測定培養(yǎng)基的pH。 過濾。趁熱（60以上）用濾紙或多層紗布在玻璃漏斗中過濾，使培養(yǎng)基清澈透明，以利某些實驗結(jié)果的觀察。一般無特殊要求，此步驟可省略。 分裝。試管分裝視管大小及

13、需要而定，若所用試管大小為15mm150mm時，液體培養(yǎng)基可分裝至試管高度1/4左右為宜；如分裝固體或半固體培養(yǎng)基時，在瓊脂完全熔化后，應(yīng)趁熱分裝于試管中，用于制作斜面的固體培養(yǎng)基的分裝量為管高的1/5，半固體培養(yǎng)基分裝量為管高的1/3為宜，見圖7。三角瓶的分裝若用于振蕩培養(yǎng)微生物時，一般裝液量為1020，若用于制作平板培養(yǎng)基時，一般以三角瓶容積的1/22/3為宜。 塞棉塞。在試管口或三角瓶口塞上棉塞或耐高溫硅膠塞。 包扎。管裝培養(yǎng)基可每7支扎成一捆，或排放在鐵絲框內(nèi)。三角瓶加塞后，每只單獨用牛皮紙包好，用線繩以活結(jié)形式扎緊，使用時容易解開，并用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期等。（2）培

14、養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的滅菌時間和溫度，應(yīng)按照各種培養(yǎng)基的規(guī)定要求進(jìn)行，以保證滅菌效果和不破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分。通常對普通營養(yǎng)培養(yǎng)基用0.10MPa（121）高壓蒸汽滅菌2030min。牛乳培養(yǎng)基用0.07 MPa（115）菌20min。注意培養(yǎng)基中含有糖類、尿素、氨基酸、酶、維生素、抗生素、血清等成分時，因之在高溫下易分解、變性，故應(yīng)單獨使用濾菌器過濾除菌，再按規(guī)定的溫度和用量加入已滅菌的培養(yǎng)基中。3. 平板操作（1）倒平板倒平板分為持皿法和疊皿法。持皿法是先左手持三角瓶，右手反轉(zhuǎn)手掌用中指和無名指拔出棉塞（或不翻轉(zhuǎn)手掌用小指和手掌拔出棉塞），同時將三角瓶轉(zhuǎn)換至右手，而后左手拿平皿，以大拇指和中指

15、將皿蓋打開一縫，至瓶口剛好伸入。三角瓶口經(jīng)火焰灼燒后，傾入滅菌或熔化、冷卻至5560的培養(yǎng)基約15mL（勿使瓶口靠在平皿壁上，以免沾染皿壁），迅速蓋好皿蓋，置于桌上輕輕旋轉(zhuǎn)平皿，使培養(yǎng)基均勻分布于整個平皿底部，冷凝后即為平板培養(yǎng)基。有時冷凝后的培養(yǎng)基表面有冷凝水，為防止冷凝水過多，亦可將培養(yǎng)基冷卻至4550再倒平板。（2）平板劃線（3）平板涂布4. 斜面操作（1）擺斜面斜面長度一般以不超過試管長度的1/2為宜，如制作半固體或固體高層培養(yǎng)基時，滅菌后則應(yīng)垂直放置至冷凝，見圖11。（2）斜面接種 斜面活化。從生長良好的微生物斜面試管中挑取少量菌苔接種至空白斜面培養(yǎng)基上。操作過程演示見圖12-1，1

16、2-2。 斜面接種至搖瓶。將10mL左右的無菌水洗斜面，制作菌懸液，從斜面菌液吸取一定量的菌液接種到搖瓶（液體）培養(yǎng)基中。操作過程演示見圖14。 穿刺接種。用來接種厭氧菌，檢查細(xì)菌的運(yùn)動能力或用于保藏菌種。五、思考題1. 請將每項操作中應(yīng)注意的細(xì)節(jié)列出。2. 談?wù)劚敬螌嶒灥捏w會。 專題實驗2 產(chǎn)植酸酶黑曲霉發(fā)酵植酸（phytic acid）又名肌醇六磷酸（myo-inostol hexakisphosphate），廣泛存在于植物組織和相應(yīng)的糧食產(chǎn)品中，占其總量的1%3%，其中的磷含量占植物總磷的50%90%。磷是動物生長繁殖、骨骼礦化及代謝所必需的礦物元素之一，而動物攝入的無機(jī)磷，大部分以植酸

17、鹽形式存在，不易被人和單胃動物所消化利用而隨糞便排出體外，致使全球磷的污染越來越嚴(yán)重。一些國家從環(huán)保的角度對集約化畜牧場已提出了限制排磷的要求。荷蘭于1998年通過了MINAS（一種新的礦物元素結(jié)帳系統(tǒng)）的立法，其中嚴(yán)格限制了動物糞便中磷酸鹽的排放量。另外，動物體內(nèi)磷的低利用率，導(dǎo)致了飼料中無機(jī)磷添加量的增加，從而使得磷的浪費(fèi)，增加飼料成本。因為植酸是一種抗?fàn)I養(yǎng)因子，具有極強(qiáng)的螯合能力，可以與鈣、鎂、鉀、鈉、鋅、鐵、銅、錳等礦物質(zhì)形成不溶性的鹽類，是影響多種礦物質(zhì)吸收的最重要的因素。植酸在低pH時可與蛋白質(zhì)分子的堿性基團(tuán)結(jié)合，絡(luò)合蛋白質(zhì)，抑制消化酶如胃蛋白酶、淀粉酶和胰蛋白酶的活性。所以植酸的

18、存在使多種常量和微量元素的利用率下降，降低了蛋白質(zhì)、淀粉、脂類物質(zhì)等營養(yǎng)因子的消化吸收利用。植酸酶（phytases，myo-inositol hexakisphosphate phosphohydrolases），是催化植酸和植酸鹽水解成肌醇和磷酸（或鹽）的一類酶的總稱，系統(tǒng)名稱為肌醇六磷酸酶，屬于磷酸單脂水解酶，是一類特殊的酸性磷酸酶。飼料中添加植酸酶可以改良磷酸鹽的生物利用率，減少無機(jī)磷的添加，緩解了我國磷資源缺乏，磷供應(yīng)不足的局面；消除植酸的抗?fàn)I養(yǎng)作用，增加了鈣、鎂、鋅、錳、銅和鐵的生物利用率，促進(jìn)了動物對蛋白質(zhì)、氨基酸及碳水化合物的消化吸收；減少磷在環(huán)境中的排泄，由此降低農(nóng)業(yè)生態(tài)的負(fù)

19、擔(dān)，減緩水生環(huán)境的富營養(yǎng)化。目前全世界己公認(rèn)，要提高飼料中植酸磷的利用率，減少豬、禽糞便中植酸磷對環(huán)境的污染，降低植酸磷對其它微量元素及蛋白質(zhì)利用率的影響，應(yīng)用植酸酶是一種有效的方法。目前，已經(jīng)分離出的產(chǎn)植酸酶細(xì)菌相對較少，主要有：枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis），大腸桿菌（Escherichia coli），假單胞菌（Pseudom onas），克雷伯氏菌（Klebsiella）等。而其中較多研究的則是枯草芽孢桿菌和大腸桿菌。自然界中產(chǎn)植酸酶的真菌種類很多，目前已有超過200株產(chǎn)植酸酶的絲狀真菌被分離到，多數(shù)屬于曲霉（Aspergillus），毛霉（Mucor），青霉（Pe

20、nicillum）和根霉（Rhizopus），大多分離的菌株均有較高的酶活，其中最活躍的產(chǎn)酶菌株是黑曲霉（A.niger），而無花果曲霉（A.ficcum）的產(chǎn)酶效率最高。其它曲霉如A.amstelodami，白曲霉（A.candidus），黃曲霉（A.flavus），和A.repens所產(chǎn)胞外酶活性也相當(dāng)高。一般而言，絲狀真菌植酸酶是胞外酶，容易分離提純，而細(xì)菌植酸酶往往是胞內(nèi)酶（除B.Subtilis和腸桿菌屬Enterobacter外）。相對于細(xì)菌和絲狀真菌，酵母菌植酸酶的報道很少，主要是啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和Schwanniomyces cast

21、ellii，其中S.castellii的產(chǎn)酶活性在酵母菌中較高。國外對植酸酶的研究較早，已經(jīng)推出了一些商品化的植酸酶制劑。據(jù)報道，最近歐共體推出了當(dāng)前啟用的3種植酸酶制劑：荷蘭Gise-Brocades公司推出的“自然磷”（Nahinhas），其特點是對熱穩(wěn)定，且在堿性和酸性條件下均具活性；美國Allzeech公司推出的“澳吉美”植酸酶（Allxyme phytase），是一種黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)物，其對熱和pH穩(wěn)定性較好；芬蘭 Aldo Biotechnolog公司推出的諸多酶系列，如多酶SP、TP、SF等，除節(jié)省磷外，還可提高纖維素和植物蛋白的利用率。我國目前對植酸酶的研究正進(jìn)入高潮，先后有山東大

22、學(xué)、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)、無錫輕工業(yè)大學(xué)、中國農(nóng)科院飼料研究所、四川省食品發(fā)酵設(shè)計院、河南大學(xué)、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)等眾多單位進(jìn)行了這方面的研究，并取得了階段性的成果。雖然目前我國對植酸應(yīng)用的研究正進(jìn)入高潮，并已取得了階段性的成果。然而，目前對于植酸酶的應(yīng)用還存在很多問題。首先，植酸酶在天然材料中表達(dá)水平太低，難以大量生產(chǎn)及生產(chǎn)成本過高；其次，天然植酸酶的一些性質(zhì)不能完全適合飼料加工和養(yǎng)殖業(yè)的要求，如：抗逆性、在動物體內(nèi)的有效性等，尤其是熱穩(wěn)定性。雖然現(xiàn)在有大量產(chǎn)植酸酶的微生物被報道，但是嗜熱、耐酸、高活性并能夠催化多種底物反應(yīng)的植酸酶仍然沒有出現(xiàn)。由于目前植酸酶的產(chǎn)量低、成本高，還無法廣泛應(yīng)用于市場。但是，

23、隨著不同微生物表達(dá)系統(tǒng)的完善，植酸酶的成本會越來越低。產(chǎn)酶條件和酶學(xué)性質(zhì)是植酸酶應(yīng)用的基礎(chǔ)，本實驗專題在對菌株進(jìn)行鑒定的基礎(chǔ)上，針對培養(yǎng)基碳源、氮源、無機(jī)鹽、接種量、裝液量、pH值、培養(yǎng)溫度等產(chǎn)酶條件進(jìn)行了優(yōu)化，為今后進(jìn)一步研究和應(yīng)用打下了良好的基礎(chǔ)。實驗2-1 產(chǎn)植酸酶黑曲霉的分離一、實驗?zāi)康?. 掌握從自然界分離目的菌種的基本方法。2. 從土壤中取樣分離產(chǎn)植酸酶黑曲霉菌株。二、實驗原理植酸即肌醇六磷酸酯。植酸及其鹽類是植物中磷的主要貯存形式，其貯存著植物總磷的60%90%。在營養(yǎng)研究中，發(fā)現(xiàn)植酸具有比較明顯的抗?fàn)I養(yǎng)作用，且不被人和單胃動物所利用，最終絕大部分從糞尿中排出體外，造成環(huán)境的磷污

24、染。植酸酶是催化植酸及其鹽類水解成肌醇與磷酸的一類水解酶的總稱。植酸酶可將飼料或食品中的植酸及其鹽分解成肌醇和磷酸，增加可利用磷的含量，抑制植酸對礦物質(zhì)和蛋白質(zhì)的親和力，解除植酸的抗?fàn)I養(yǎng)作用。植酸酶廣泛存在于小麥、大麥、玉米等植物的種子中，但含量較低。細(xì)菌、酵母和絲狀真菌等也是植酸酶的重要來源。本實驗利用選擇培養(yǎng)基（透明圈法），從土樣中篩選分離植酸酶的黑曲霉菌種。三、實驗試劑與儀器1. 土壤樣品 采集自稻米加工廠堆積米糠或谷殼處的土壤，或?qū)⑸倭抗葰ず望熎ぢ袢胪寥乐?個月后取土樣。2. 培養(yǎng)基 （1）1%脫氧膽酸鈉溶液。（2）氯霉素注射液或氯霉素眼藥水。（3）篩選培養(yǎng)基 0.2%植酸鈣（沒有植酸鈣，可用0.14%植酸代替