血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶IFCC推薦方法測定作業(yè)指導(dǎo)書

1、血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶IFCC推薦方法測定作 業(yè)指導(dǎo)1. 實驗原理：國際臨床化學(xué)學(xué)會(IFCC)推薦的紫外連續(xù)監(jiān)測法。L-天門冬氨酸+-酮戊二酸AST草酰乙酸+L-谷氨酸L-蘋果酸 +NAD+fO草酰乙酸+ NADH +H + MDH蘋果酸脫氫酶2. 標(biāo)本：2.1 病人準(zhǔn)備：12小時禁食。2.2 類型：血清，肝素或EDTA血漿。3. 標(biāo)本存放：3天內(nèi)的活性損失：28 C保存：8%;1525 C保存：10%;標(biāo)本穩(wěn)定性：-20 C保存至少可 穩(wěn)定3個月。4. 標(biāo)本運(yùn)輸：常溫條件下保存運(yùn)輸。5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染的標(biāo)本6. 實驗材料6.1試劑：奧林巴斯AST測定試劑盒 試劑1 :

2、;試劑2：6.1.1 試劑準(zhǔn)備： 試劑為即用式。6.1.2 試劑穩(wěn)定性與貯存試劑保存于28 C ,若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑不可冰凍。6.1.3 變質(zhì)指示： 當(dāng)試劑有看得見的微生物生長， 有 濁度，或者未開蓋的液體有沉淀時，表明試劑已變質(zhì)， 不能繼續(xù)使用。6.1.4 注意事項：試劑中含疊氮鈉（0.95g/L）為防腐劑。 不可入口！避免接觸皮膚及粘膜。 應(yīng)采取必要的 預(yù)防措施使用試劑。6.2 校準(zhǔn)品： 使用奧林巴斯公司提供的校準(zhǔn)品對自動 分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)， 具體參見生化檢驗校準(zhǔn)品和 質(zhì)控 品 .SOP 文 件 。6.3 質(zhì) 控 品 ： 具 體 參 見 生 化 檢 驗 校 準(zhǔn) 品 和 質(zhì) 控 品

3、 .SOP 文件。7. 儀 器 ： 奧 林 巴 斯 AU2700 生 化 分 析 儀8. 操 作 步 驟8.1 項目基本參 數(shù)： 參見生化檢驗奧林巴斯 AU2700 生 化 分 析 儀 項 目 測 定 參 數(shù) .SOP 文 件8.2 儀器操作步 驟： 參見生化檢驗奧林巴斯 AU2700 生 化 分 析 儀 操 作 規(guī) 程 .SOP 文 件9. 檢 驗 結(jié) 果 的 判 斷 與 分 析10. 質(zhì)量控制 ：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水 平I與II質(zhì)控做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2S為質(zhì)控 警 告 限 ， 3S 為 失 控 限 ， 繪 制 質(zhì) 控 圖 ， 判 斷 是 否 在 控 。 質(zhì)控規(guī)則參見生化室

4、室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11. 計算方法：以 TruCal U 復(fù)合校準(zhǔn)品 AST 校準(zhǔn)值 校準(zhǔn)儀器后， 在病人結(jié)果可報告范圍內(nèi)， 儀器直接報 告可靠的檢測結(jié)果。不使用校準(zhǔn)品進(jìn)行AST活力檢測， 可以直接使用 A/min均值乘以計算因子得到結(jié)果， 但是這樣所得結(jié)果的可靠性不如使用校準(zhǔn)品。 計算 ALT 活 力 的 計 算 因 子 見 下 表 ： A/min x 因子 =AST 活力U/L底物起始的反應(yīng)（37 C ） 樣品起始的反應(yīng)（ 37 C ）340 nm21431745334 nm21841780365 nm3971323512. 參考值范 圍 4不 含 磷 酸 吡 哆 醛 含 磷

5、酸 吡哆醛女性31U/L10 -35U/L男性37U/L10 -50U/L參 考 值 因 性 別 、 年 齡 、 飲 食 和 地 域 的 不 同 而 有 所 差別。根據(jù)好的 實驗室經(jīng)驗，每個實 驗室應(yīng) 建立自己 的 參 考 值 。13. 臨 床 意 義 1,2丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT ）舊稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）, 天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）舊稱谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT。它們是氨基轉(zhuǎn)移酶類的典型代表。氨基轉(zhuǎn)移酶催化氨 基從氨基酸轉(zhuǎn)移給-酮酸的反應(yīng)。ALT是肝臟的特異性酶，僅在肝膽疾病時顯著升 高。而AST水平的升高和心肌或骨骼肌損傷，以及肝 組織損害等都有關(guān)。因此同時進(jìn)行ALT和AST的檢測 用于

6、鑒別肝損傷和心肌或骨骼肌損傷。AST/ALT比率 可用于肝病的鑒別診斷。比率1預(yù)示中度的肝損傷； 比率1和嚴(yán)重肝病有關(guān)，常見慢性肝病。14.操作性能14.1 線性范圍 2-800U/L 。14.2精密度：精密度的評估是根據(jù)NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn) 方法，AU2700批內(nèi)精密度小于3%,總精密度小于3%。 用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的 規(guī)則。不含磷酸吡哆醛批內(nèi)精密xsCV天間精密xsCV度n=20(U/L)(U/L)(%)度n=20(U/L)(U/L)(%)樣品125.10.823.25樣品125.71.134.40樣品251.31.573.06樣品248.60.671.38樣品31160.900.77樣品31150.800.69含磷酸吡哆醛批內(nèi)精密 度n=20x(U/L)s(U/L)CV(%)天間精密度n=20X(U/L)s(U/L)CV(%)樣品143.61.102.51樣品144.01.593.61樣品274.51.792.41樣品277.03.053.97樣品31743.181.83樣品31873.371.8014.3 方法學(xué)