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文檔簡介

1、e7-2 人工合成核酸的基本步驟(一) 起始原料的制備，也可以通過化學合1. 核苷酸的來源 合成所需要的核苷酸單體可以從某些生物中制備(如鮭魚的精子) 成得到。2. 核苷的保護一般使用二甲氧基三苯基( dimethoxytrityl group， DMT)對核糖或脫氧核糖的 5 -羥基進行保護，用脂?；? acyl )對堿基上的氨基進行保護。如苯甲酰基( benzoyl ， Bz) 對 A 或 C 上的氨基進行保護，異丁?；? isobutyryl )對 G 上氨基的保護 圖 e7-1(1) 和圖 e7-1(2) 。如果要合成 RNA，還需要使用氰乙基( cyanoethyl )對 2- 羥基

2、進行保護。圖 e7-1(1) 核苷酸的制備、保護和 3 - 羥基的活化 保護基團所起的作用是， 既能防止反應發(fā)生在不該發(fā)生的位置， 還能增加核苷酸在有機 溶劑中的溶解性。圖 e7-1（2） 堿基的保護DMT對 5- 羥基的保護是暫時的， 在合成中需要使用酸處理的方法將其除去， 以便讓后 面的偶聯(lián)反應得以進行。 由于為堿基上的氨基提供保護的脂酰基對酸很穩(wěn)定， 因此， 在合成 中可以保留不變，只需在最后一步去保護反應中使用氨水處理即可。3. 磷酸化或亞磷酸化這一步的目的是在 3- 羥基加上反應性磷基團。磷可以是五價的（磷酸） ，也可以是三 價的（亞磷酸） ，但三價磷的反應性更強。（二）偶聯(lián)反應這一步反應的目的是讓核苷酸之間只能通過3, 5- 磷酸二酯鍵連接起來。保護基團的存在致使反應只能發(fā)生在 3 -磷酸和 5-自由的羥基之間，而不會產(chǎn)生 5, 5 -連接 或 3, 3-連接或分子內的連接 圖 e7-1（3） 。這樣的偶聯(lián)反應可按 35方向循環(huán)多 次，一直合成到所需要的長度為止。（三）去保護這一步反應是為了去除留在堿基上和3, 5 -連接上的（如果是 RNA還包括 2- 羥基）保護性基團，從而產(chǎn)生真正的單鏈 DNA或 RNA。核酸的化學合成一般都使用固相合成法， 并已實現(xiàn)了自動化 （參看第四

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