XX中醫(yī)院HIV初篩實驗SOP

1、一.實驗室管理制度（一）實驗室技術(shù)規(guī)程1、采樣前應(yīng)對被檢者進行登記編號，按臨床采血技術(shù)規(guī)范操作，用一次性真空采血管抽取35ml靜脈血，置室溫12h，待血凝固，血塊收縮后再用3000r/min，吸出血清備用；短期（1周）內(nèi)進行檢測的血清（漿）存放于280c（冰箱），長期保存的血清（漿）置200c以下冰柜中，采樣時應(yīng)戴雙層手套、注意安全、謹慎操作，防止刺傷和造成外界污染。2、樣品運送須將血清（漿）置于帶蓋的塑料試管內(nèi)并標明編號、姓名、種類和采集時間，然后置于外標有hiv檢測專用字樣內(nèi)墊有緩沖吸水材料的帶蓋容器，最外層包裝要帖標簽（數(shù)量、收、發(fā)件人），送檢單與樣品分開放置，用冷藏包加放冰箱后運送。3

2、、對院內(nèi)各科室送來的樣品應(yīng)與送檢單核對無誤，同時檢查樣品管有無破損和溢漏，若漏則將尚存樣品移出，對樣品管和盛器消毒滅菌，記錄有無嚴重溶血，微生物污染，血脂過多以及黃疸等情況，如污染過重或認為樣品不能被接受，應(yīng)安全廢棄并告知送樣人。4、應(yīng)戴手套、口罩、防護服鏡在hiv專用操作臺面上（或生物安全柜里）打開樣品和吸加樣品至反應(yīng)板（或試紙條），嚴格按廠家試劑盒說明加入血清、掌握顯色時間、及陽性對照反應(yīng)情況，按sop文件填寫原始記錄。5、應(yīng)嚴格按sop文件操作，加入樣品和試劑要準確，防止移液器吸頭間、吸頭與反應(yīng)板（或試紙條）的交叉污染，測定結(jié)果后應(yīng)及時將原始記錄填寫、存檔、并將血清編號登記后置于-20冷

3、凍保存，檢測陰性的血清至少應(yīng)保存一年以上，檢測陽性的標本應(yīng)送上級確證，本院不能保存。6、實驗結(jié)果后應(yīng)對臺面和室內(nèi)物品進行清理，用0.5%次氯酸鈉或75%酒精消毒處理操作臺面或地面，按相關(guān)制度做好技術(shù)處理。（二）hiv抗體檢測程序1.常規(guī)檢測：初篩試驗，用敏感性高的檢測試劑，結(jié)果為陰性，則報告陰性；結(jié)果為陽性反應(yīng)，則進入復(fù)檢試驗。2.復(fù)檢試驗，用原有試劑+另一不同原理（或廠家）試劑或另外兩家不同原理（或廠家）試劑，兩種試劑復(fù)檢結(jié)果均為陰性，則報告陰性。如一陰一陽或兩種均為陽性反應(yīng)，則按全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范要求送贛州市疾病預(yù)防控制中心艾滋病確證實驗室進行確證試驗。3.根據(jù)檢測結(jié)果進行咨詢，檢測結(jié)

4、果為陰性的按陰性咨詢，對兩種檢測結(jié)果均為陽性反應(yīng)或一陰一陽反應(yīng)的，按照疑似陽性咨詢（流程圖）。 hiv抗體檢測流程圖樣品初篩試驗篩查試劑陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)復(fù)檢試驗原有試劑+另一不同原理（或廠家）試劑或另外兩種不同原理（或廠家）試劑均陽性反應(yīng)一陰一陽均陰性反應(yīng)確證試驗報告陰性（三）安全操作制度1. 個人保健和防護(1) 檢測人員上崗前應(yīng)接受相關(guān)的生物安全與個人防護培訓(xùn)。(2) 為檢測人員提供一次性乳膠手套、口罩、帽子。(3) 檢測人員工作前應(yīng)修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套。(4)避免在檢測樣本時進食、飲水、吸煙和化妝。(5) 出現(xiàn)手部皮膚有開放性傷口及其他不適于檢測工作的情況，應(yīng)暫停工作。(6)

5、 操作過程中，如發(fā)現(xiàn)工作服被污染，應(yīng)立即更換；如手套破損，應(yīng)立即丟棄、洗手并換上新手套。(7)避免用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵、頭發(fā)和清潔工作區(qū)域。(8)禁止手套清洗或消毒后再次使用，因為使用表面活性劑清洗可使手套對水的通透性增加，消毒劑可以引起手套的破損。2.意外事故處理(1) 如發(fā)生皮膚針刺傷或切割傷，應(yīng)立即用肥皂和大量流水沖洗，用70%乙醇或碘伏等其它消毒劑消毒傷口。(2)皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適當?shù)南緞┙?，?0%乙醇或碘伏等其它皮膚消毒劑。(3)粘膜污染：用大量流水或生理鹽水沖洗污染部位。發(fā)生上述事件后，通常應(yīng)遵循三條原則：及時處理原則，報告原則，

6、保密原則。3.hiv實驗室清潔和消毒(1) 每次實驗后，用0.5的次氯酸鈉或75的酒精常規(guī)消毒工作臺。(2) 將用過的檢測試劑板（或條），置于廢棄缸（或桶）中用1的次氯酸鈉浸泡。（四）廢棄物消毒處理制度1.血液標本置于合適容器內(nèi)，加蓋蓋緊后運送，切勿污染盛器外部。如果盛器被污染，要用消毒液消毒。也可以將血樣置于有蓋的塑料管內(nèi)，外面套上塑料袋，封口，連同送檢單一并運送，有血液外溢時，當即用消毒液消毒。2.各種試劑和化學(xué)品應(yīng)帖有標簽，放置于合適的位置，實驗臺上不放置不必要的物品。任何測試用的樣品和試劑不宜置于桌面或架子的邊沿，以防滑落打破，污染環(huán)境。一旦污染，先在污染區(qū)外周圍倒入0.5%次氯酸鈉消

7、毒液，逐漸向中心消毒處理。3. 實驗室所有垃圾，包括用過的一次性手套和工作衣，置于專門污袋內(nèi)經(jīng)有效消毒處理后交有關(guān)部門處理，污染的非一次性工作衣應(yīng)先消毒后再洗滌。4. 所有用過的實驗室用品，尤其是裝過血樣的試管和血標本先在實驗內(nèi)經(jīng)高壓滅菌處理后，再移出室外，交醫(yī)院清潔工轉(zhuǎn)置本院醫(yī)療廢物回收點。5.所有尖銳物品應(yīng)置于不宜刺破的容器內(nèi)（如銳器盒），消毒后標識，再移出室外，交醫(yī)院清潔工轉(zhuǎn)置本院醫(yī)療廢物回收點。6.常用的消毒劑和消毒方法與病毒性肝炎消毒方法相同。7.所有用的需消毒處理的實驗用品，必須在實驗室內(nèi)包裝后統(tǒng)一消毒。8.統(tǒng)一消毒工作由實驗室檢測人員負責(zé)，并做好處理記錄。（五）反饋與報告保密制度

8、1.對本實驗室檢測結(jié)果陰性的標本，出具hiv抗體陰性報告，并將結(jié)果及時反饋給送檢醫(yī)生或被檢者。2.對本實驗室檢測結(jié)果陽性的標本應(yīng)進行核對、登記，及時用兩種不同廠家的試劑復(fù)檢。3.復(fù)檢結(jié)果陰性的，出具hiv抗體陰性報告，并將結(jié)果及時反饋給送檢醫(yī)生或被檢者，此樣品不再送贛州市疾病預(yù)防控制中心。4.復(fù)檢結(jié)果無法排除hiv抗體陽性及本實驗初篩中發(fā)現(xiàn)的可疑陽性標本，應(yīng)及時送贛州市疾病預(yù)防控制中心，同時填寫hiv抗體復(fù)檢送檢單和送樣單。5.將本實驗室hiv抗體檢測情況匯總，于每月5日前上報中國疾病預(yù)防控制中心。6.hiv初篩實驗室有專人負責(zé)妥善保存各種實驗記錄、感染者檔案，不得擅自修改和銷毀；嚴格遵守保密

9、制度，未經(jīng)衛(wèi)生行政部門許可，不得向無關(guān)人員或單位提供任何情況。7.本實驗室檢測的陽性結(jié)果應(yīng)及時送贛州市疾病預(yù)防控制中心作進一步確證，不能出具hiv抗體陽性的結(jié)果報告，按疑似陽性咨詢告知。8.收到hiv抗體確認中心實驗室確證的陽性結(jié)果，以機密形式及時反饋給送檢醫(yī)生或被檢者，同時報相關(guān)部門備案。二.hiv篩查實驗室操作規(guī)程（一）樣品的采集、接收、登記、處理和運輸目的規(guī)范本篩查實驗室艾滋病病毒（hiv）檢測的血清、血漿和全血樣品的采集、接收、登記和處理、運輸，有序進行，提高檢測工作質(zhì)量。1. 適用范圍適用于hiv抗體檢測、hiv抗原檢測、核酸檢測、cd4+/cd8+t淋巴細胞測定。2. 職責(zé)（1）檢

10、測人員須嚴格遵守本操作規(guī)程。（2）本科室負責(zé)人負責(zé)監(jiān)督檢測人員履行相關(guān)職責(zé)。4、程序1）樣品的采集和處理艾滋病檢測最常用的樣品是血液，包括血清、血漿和全血。唾液或尿液有時也可作為測試樣品。常用的血液樣品的采集和處理方法如下：（1） 編號及填寫登記表首先對被檢者編號及填寫信息(試管編號與登記表編號應(yīng)相一致,試管標簽應(yīng)填寫dzy/檢測編號/采血時間。（注解：“dyz” ：“d”大，“y”余，“z”中醫(yī)院）（2） 血清樣品采集和處理用一次性注射器（或真空采血管）抽取5ml靜脈血，室溫下自然放置12h，待血液凝固、血塊收縮后再用3000r/min離心15min,將血清置于貼好標簽的血清管(2ml規(guī)格螺

11、口管)中,在標簽上填寫dyz/檢測編號/收樣(采血)時間。（3） 抗凝血樣品采集和處理. 用加有抗凝劑的5ml真空采血管（或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管）采血5ml，立即把握住試管兩端,顛倒混勻數(shù)次，將血液與抗凝劑混勻,防止凝固,分離血漿和血細胞備用,填寫被檢者的個案調(diào)查表,個案表號應(yīng)與抗凝管編號一致,貼上標簽, 在標簽上填寫dzy/檢測編號/采血時間。. 應(yīng)根據(jù)實驗要求選用適當?shù)目鼓齽?，如cd4+/cd8+t淋巴細胞測定可選用k3edta或肝素或枸櫞酸鈉，hiv病毒分離、核酸定性/定量檢測可選用k3edta或枸櫞酸鈉。.用于核酸定性檢測時，采集的抗凝全血應(yīng)在48h內(nèi)分離pb

12、mc和血漿，否則應(yīng)在2448h內(nèi)分離血漿和血細胞。做病毒載量測定的樣品要求在6小時內(nèi)分離血漿,運輸前五天內(nèi)在-20下冷凍或-70凍存。 cd4+/cd8+t淋巴細胞測定樣品必須在常溫（18-23）下24小時內(nèi)送達檢測實驗室。（4）采集樣品注意事項. 采集樣品原則上應(yīng)按臨床采血技術(shù)規(guī)范操作（試劑盒說明書有特殊要求除外）。. 采集樣品時應(yīng)注意安全，建議采用真空采血管及蝶形針具，以避免直接接觸血液；直接接觸hiv感染者/艾滋?。╝ids）病人血液/體液的操作,應(yīng)戴雙層手套。2） 樣品的運送（1） 實驗室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿，除特殊情況外一般不運送全血。（2）應(yīng)采用who提出的三級包裝系統(tǒng). 第

13、一層容器：裝樣品，要求防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標記，標明樣品的編號或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。. 第二層容器：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護第一層容器，可以裝若干個第一層容器。將試管裝入專用帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理。. 第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內(nèi)，應(yīng)易于消毒。在第三層容器外面要貼標簽（數(shù)量，收、發(fā)件人）。（3） 血清和血漿樣品應(yīng)在28條件下由專人運送，隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣品分開放置。用于cd4+/cd8+t淋巴細胞測定的樣品應(yīng)在室溫下1823運送。每一包裝的體積以不超過50ml為宜。（4）

14、 運送感染性材料必須有記錄。3）樣品的接收、登記檢測人員在接收樣品時應(yīng)核對樣品與送檢單是否一致,是否清晰,粘貼牢固。如樣品出現(xiàn)以下情況之一者應(yīng)拒收，并要求送檢者（單位）完善相關(guān)信息內(nèi)容或重新采集標本：（1）樣品上無標識或標識不清。（2）嚴重溶血及污染等影響檢測結(jié)果的樣品。（3）樣品血清量不足，少于0.2ml。（4）樣品的登記把樣品信息及時填寫大余縣中醫(yī)院hiv抗體篩查實驗室樣品檢測登記表,應(yīng)有樣品編號、姓名、姓別、年齡、送檢人群、送檢科室、住院號（或門診號）、收樣時間、收樣人,必要時要記錄被檢者的戶口所在地詳細地址、聯(lián)系電話、身份證號碼。4.支持性文件全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）

15、5.相關(guān)記錄艾滋病抗體篩查實驗室樣品接收登記本（三）hiv抗體檢測方法和步驟1. 目 的根據(jù)全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版），對艾滋病病毒抗體檢測作必要的細化和補充，以規(guī)范本中心對艾滋病病毒抗體的檢測方法。2. 適用范圍適用于本hiv篩查實驗室于對人體血液中艾滋病病毒抗體檢測3. 職 責(zé)1) 檢測人員：負責(zé)按照本檢測細則對被檢樣品進行檢測；2) 復(fù)核人員：負責(zé)對檢測操作是否規(guī)范以及檢測結(jié)果是否準確進行復(fù)核；3)科室負責(zé)人：負責(zé)對科室綜合管理和檢測報告的簽發(fā)。4. 檢測依據(jù)全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）。5. 操作程序1)實驗前準備(1)檢測人員進入污染區(qū)前，必須穿好工作服

16、、隔離衣，戴上口罩、帽子及手套，不得將與實驗無關(guān)物品帶入實驗室。(2)調(diào)節(jié)室溫至18-25，濕度20-80%。(3)檢測試劑在室溫平衡半小時;并檢查試劑是否在有效期內(nèi)。(4)檢查儀器是否正常，做好檢測前準備工作。(5)開啟實驗室污染區(qū)生物安全柜2)實驗方法：根據(jù)檢測樣品的需要選定方法，本實驗室開展二種方法檢測酶聯(lián)免疫（elisa）、快速檢測(膠體硒法)。(1)方法一:人類免疫缺陷病毒hiv(1+2)型艾滋病病毒抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑(雙抗原夾心法),以萬泰試劑為例：.方法原理在微孔板上預(yù)包被高純度基因重組hiv(1+2)型抗原，可與樣品中抗hiv抗體反應(yīng)，同時加入hrp標記hiv(1+2)型抗原

17、，然后用tmb底物作用顯色，加入終止液終止反應(yīng)，有顏色變化的微孔板變?yōu)辄S色，顏色的深淺與血清中hiv抗體含量呈正比，通過酶標儀檢測吸光度(od值)從而判定樣品中hiv抗體的存在與否。. 檢測儀器設(shè)備名稱、型號和材料:a. st-360酶標儀。b.水浴箱(濕式)371。c. (新鮮的)蒸餾水或去離子水。d. 一次性型水槽，用完棄去。e.容量器(用于準備洗滌液)。f. 一次性手套。g. 計時器。h.含有效氯5000mg%l的次氯酸鈉溶液或健之素消毒液。i. 適用于盛裝有可能受污染的物品的容器。j. 吸水紙。k. 微板振蕩器（用于溶解及混勻結(jié)合物與樣品，速度約為900r/min）。l.sa6000(

18、洗板機)。m. 加樣器(20200l)，準確度2%及一次性加樣頭； .檢測步驟：a.將標本、試劑和需要數(shù)量的微孔放置室溫平衡(約15至30分鐘)。b. 配液：將50ml濃縮洗滌液(20) 用蒸餾水或去離子水稀釋至1000ml備用，或根據(jù)檢測樣品量來配液，每孔約4.5ml洗滌液。c.編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板設(shè)陰性對照3孔、陽性對照2孔、外部對照質(zhì)控1孔。d.加樣：分別在相應(yīng)孔中加入陰性對照、陽性對照、對照質(zhì)控和樣品各100l，空白不加。e. 溫育：用封板膜封板后置37溫育30分鐘。f.洗滌：小心將封板膜揭掉，甩干孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌5遍，每次靜置30-60秒，最后一次盡量扣干。g

19、.加酶：每孔加入酶標記物100l，輕輕振蕩混勻。h. 溫育：用封板膜封板后置37溫育30分鐘i. 洗滌：小心將封板膜揭掉，甩干孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌5遍，每次靜置30-60秒，最后一次盡量扣干。j. 顯色：每孔加入底物緩沖液、底物液各50l，輕輕振蕩混勻，用封板膜封板后置37避光顯色30分鐘。k.測定：每孔加終止液50l，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀波長于450nm/630nm處檢測，測定各孔od值。.檢測記錄和數(shù)據(jù)處理:a.使用st-360酶標儀酶標儀，可以直接進行od值讀數(shù)或進行自動計算分析實驗結(jié)果。b.計算： nc=陰性對照平均的od值，pc=陽性對照平均的od值。c.陰性對照的正常范圍

20、：正常情況下，nc必須0.12，去除nc0.12的值。d.陽性對照的正常范圍：正常情況下，pc必須0.80，去除pc0.80的值e.確定nc的均值。f.確定pc的均值。g.確定實驗的有效性。h. 臨界值(cutoff)計算：臨界值=nc的均值+0.12,如果陰性對照的平均od值小于0.08按0.08計算,大于0.08按實際計算。.結(jié)果判斷 樣品od值cutoff值者為陽性，樣品od“檢驗項目設(shè)置”。基本參數(shù)：a 陰陽性上下限b 項目代號c 項目類別d 公式。e 結(jié)果類型f 接口號/別名g 項目取值列表 h 計算公式醫(yī)學(xué)參數(shù)i 設(shè)定為質(zhì)控項目。j 設(shè)定上/下極限k 設(shè)參考值說明：1.測量項目名稱

21、：可根據(jù)試劑盒的明稱來設(shè)定。2. 空白、陰性、陽性對照：根據(jù)試劑盒的要求設(shè)定，點擊控制位置空白、陰性、陽性，再在板子上點擊相應(yīng)的位置，不同的試劑盒要求不同，設(shè)定后每次實驗加樣位置必需一至，保證計算臨界值準確。3.外部對照：為質(zhì)控品，并固定位置，設(shè)定后每次實驗加樣位置必需一至。4. 計算公式設(shè)定：根據(jù)試劑盒的要求設(shè)定，例如萬泰試劑臨界值=nc的均值+0.12，如nc的均值小于0.08按0.08計算，既臨界值設(shè)定為maxnc1，0.08+0.15。nc1為陰性對照的od值平均值。5.實驗有效性：根據(jù)試劑盒的要求設(shè)定，例如麗珠試劑，有3個nc（nc陰性對照），每個nc的od值必須0.12，去除nc0

22、.12的值，最少符合數(shù)目1個。有2個pc（陽性對照），每個pc的od值必須0.80，去除pc0.80的值陽性，最少符合數(shù)目1個。6.定性分組：在定性分組1中輸入“”，（表示小于臨界值的樣品od值結(jié)果），在定性分組2中輸入“+”，（+表示大于臨界值的樣品od值結(jié)果）。7.具體的各種數(shù)據(jù)輸入可參照系統(tǒng)中xx試劑設(shè)定。(5)測量操作流程圖測量選擇單板單項測量或單板多項測量選擇測量項目設(shè)定本次樣本編號號選擇號碼自動前綴輸入起始號碼輸入樣本數(shù)目自動生成結(jié)果確定開始酶標儀測量中測量完成，測量數(shù)據(jù)已顯示在屏幕上保存測量數(shù)據(jù)輸入本次測量的板子編號選擇試劑名稱確認送檢樣本錄入對照電腦內(nèi)的樣本編號，將對應(yīng)的病人樣

23、本信息輸入到電腦中保存關(guān)閉.測量操作流程有關(guān)說明a. 一般選擇單板單項測量，選擇測量項目主要是已設(shè)定的檢測項目試劑。(6)查詢及打印操作流程圖查詢及打印化驗單打印選中要打印的樣本編號單擊化驗單打印按板查詢選中要打印的板子編號確認組合打印定性整板數(shù)據(jù)打印組合打印定量整板數(shù)據(jù)打印選擇輸出方式中的od陰陽性和s/co 選擇輸出方式中的od濃度和圖形打印5.支持性文件上海科華生物工程有限公司酶標儀控制及分析管理系統(tǒng)中文操作手冊6.相關(guān)記錄st-360酶標儀使用和維護記錄（4）2012a405型電熱立式蒸汽滅菌器操作維護規(guī)程1. 目 的規(guī)范2012a405型電熱立式蒸汽滅菌器操作程序，正確使用儀器，保證

24、檢測工作順利進行及設(shè)備安全。2. 適用范圍適用于2012a405型電熱立式蒸汽滅菌器的使用操作。3. 職 責(zé)1) 操作人員按照本規(guī)程操作儀器，對儀器進行日常維護和使用登記。2) 保管人員負責(zé)監(jiān)督儀器操作是否符合規(guī)程，對儀器進行定期維護和保養(yǎng)。3) 科室負責(zé)人負責(zé)儀器綜合管理。4. 操作程序1)準備(1)扛開滅菌器蓋,取出滅菌桶,向滅菌桶內(nèi)置放滅菌物，在滅菌桶內(nèi)下部和上部各放一片化學(xué)消毒指示卡。(2) 將滅菌桶置于消毒主體內(nèi)，將滅菌器蓋蓋好，按順時針方向旋緊，使蓋與口密合，不宜旋的太緊，以免損壞橡膠密封墊圈。(3)打開水源手動閥門。(4)將電源插頭插于電源座上，打開電源開關(guān)，準備指示燈處于亮狀態(tài)

25、。(5)設(shè)定滅菌工作參數(shù)需要設(shè)定的工作參數(shù)有：滅菌溫度、滅菌時間. a. 滅菌溫度：手動設(shè)定旋轉(zhuǎn)滅菌溫度開關(guān)至121.b. 滅菌時間設(shè)定: 手動設(shè)定旋轉(zhuǎn)滅菌溫度開關(guān)至所需的時間, 滅菌時間的設(shè)定要根據(jù)滅菌物的種類來確。（見表1）各種物品消毒滅菌工作參考數(shù)（表1）滅菌物品類滅菌保溫時間min蒸汽壓力mpa蒸汽相對溫度橡膠類150.1-0.11121敷料類30-450.1-0.14121-126器械類100.1-0.14121-126器皿類150.1-0.14121-126瓶裝液體類20-400.1-0.14121-1262)滅菌：當內(nèi)室溫度達到設(shè)定的滅菌溫度時，開始滅菌計時，計時以秒為單位遞減。

26、3)結(jié)束：當滅菌時間遞減為0時，內(nèi)室開始排汽。溫度下降，當內(nèi)室溫度下降至102，蜂鳴器鳴叫，滅菌結(jié)束。4)當確認內(nèi)室溫度與外面的室溫一致時，壓力表示數(shù)為零后，打開門，取出滅菌物品。5)關(guān)閉電源或進行下一次操作。5. 儀器的維護和保養(yǎng)1) 每次使用完畢后做好記錄。2) 保證良好的地線連結(jié)3)操作完成后，應(yīng)關(guān)閉主機電源，關(guān)閉電源插頭處的開關(guān)。4) 操作過程中出現(xiàn)異常顯示時，應(yīng)關(guān)閉主機電源開關(guān)，清除出現(xiàn)異常的原因，然后重新操作。5)操作過程中電源若意外切斷時，應(yīng)將鍋內(nèi)壓力降到大氣壓，然后重新操作。6) 不得在機體上澆水，以免導(dǎo)致電擊和故障。7) 滅菌過程中或鍋內(nèi)壓力高時嚴禁打開鍋門。8) 不得用本機

27、消毒含有強酸強堿的物品和腐蝕性化學(xué)試劑。9) 滅菌過程中或鍋內(nèi)壓力仍高時，盡量不要接觸鍋體（除重新設(shè)定滅菌溫度和滅菌時間），以免燙傷。10) 連續(xù)使用本機時，應(yīng)當在每次滅菌后冷卻五分鐘再進行操作。11) 滅菌過程中或鍋內(nèi)壓力仍高時，嚴禁打開排水閥。12)每日滅菌結(jié)束后，最好打開排水閥，將滅菌器內(nèi)水排除干凈，使期干燥并擦洗水垢，以利提高滅菌質(zhì)量及延長使用時間。13)安全閥必須每年檢查一次（由計量部門檢定），使用中安全閥失靈，壓力繼續(xù)上升，應(yīng)及時關(guān)閉電源，保證使用安全。6. 支持性文件2012a405型電熱立式蒸汽滅菌器使用說明書。7. 相關(guān)記錄2012a405型電熱立式蒸汽滅菌器使用記錄。（5）

28、600-b恒溫水浴箱1. 目 的規(guī)范恒溫培養(yǎng)箱的操作程序，正確使用儀器，保證檢驗工作順利進行，確保操作人員人身安全和設(shè)備安全。2. 適用范圍適用于本中心600-b恒溫水浴箱的使用操作3. 職 責(zé)1) 儀器使用人員職責(zé)：正確地操作儀器，保質(zhì)保量地完成檢測任務(wù)。2)儀器保管人員職責(zé)：妥善保管儀器，保證儀器正常運行。3) 實驗室主任職責(zé)：確保人員儀器到位，滿足實驗的物質(zhì)要求，對儀器使用維護進行監(jiān)督管理。4. 操作程序1) 安全操作注意事項特別提示:禁止水槽無水加熱，工作時應(yīng)保持一定的水位，不能低于1/2。2) 操作步驟(1)開儀器電源，溫度指示所顯溫度為箱內(nèi)溫。(2)設(shè)定所需溫度，按移位鍵“set”

29、至“out”亮?xí)r，再按“”或“”鍵改變溫度值到達所需溫度，再用“set” 鍵確認。(3)當溫度指示達到所需溫度時，表示溫度已到設(shè)定所需溫度。(4)溫度達到平衡后用溫度計測量是否達到實驗孵育溫度，以免數(shù)字顯示有誤，記錄實驗孵育溫度。(5)溫度達到實驗孵育要求，并平衡后，方可放入孵育樣品，同時記錄孵育時間。5 支持性文件600-b恒溫水浴箱操作使說明書6相關(guān)記錄600-b恒溫水浴箱使用記錄（6）sc-04低速離心機操作維護規(guī)程1. 目 的規(guī)范臺式低速離心機操作程序，正確使用儀器，保證檢測工作順利進行、操作人員人身安全和設(shè)備安全。2. 適用范圍適用于sc-04低速離心機的使用操作與維護。3. 職 責(zé)

30、1)操作人員按照本規(guī)則操作儀器，對儀器進行日常維護，作使用登記。2) 保管人員負責(zé)監(jiān)督儀器操作是否符合規(guī)程，對儀器進行定期維護、保養(yǎng)。3) 科室負責(zé)人負責(zé)儀器綜合管理。4. 操作程序1)插上電源插座,打開電源開關(guān)(在離心機后面),接通電源。2)按門開關(guān)鍵，打開門蓋3)把樣品離心管成偶數(shù)對稱放入離心管套中，并加液平衡。關(guān)上門蓋，并鎖緊。4)設(shè)置離心力、轉(zhuǎn)速、時間(1) 離心力設(shè)置：按離心力鍵及/鍵，轉(zhuǎn)速窗口顯示2433，cs-04低速離心機一般設(shè)置為2400. (2)轉(zhuǎn)速設(shè)置：按轉(zhuǎn)速鍵及/鍵，選擇轉(zhuǎn)速在4000r/min，(3)時間設(shè)置: 按時間鍵及/鍵，選擇離心機工作時間為15 min, 離心

31、機運行過程中時間倒計時。5)當上述三個步驟完成后，按啟動鍵啟動。6) 當離心機運行，倒計時到0時，離心機停止運轉(zhuǎn)，手動按門蓋開關(guān)，打開門蓋。7)打開門蓋，取出樣品離心管。8)工作完畢，切斷電源。5. 儀器的維護1)不可用尖硬的物體碰撞轉(zhuǎn)子，在搬運和拆裝中要防止磕碰，要防止因劃痕或外傷而導(dǎo)致轉(zhuǎn)子在使用中產(chǎn)生裂紋。2)通常情況下，轉(zhuǎn)子和離心杯每周應(yīng)清洗一次，如發(fā)現(xiàn)在使用中離心樣品濺出，浸、滴在轉(zhuǎn)子上，應(yīng)立即吸干并局部清洗。3)清洗轉(zhuǎn)子時為防止表面氧化層破壞，請用清潔劑沾濕海綿棉布清洗，然后用蒸餾水洗掉清潔劑或用70酒精擦洗，清洗后允許將其倒置晾干。4)離心機在運轉(zhuǎn)時不得移動離心機，不能打開門蓋。5

32、)放置離心機的臺面要堅實平整。6)離心管加液應(yīng)稱量平衡，若加液量差異過大運轉(zhuǎn)時會產(chǎn)生大的振動。7)如在動行時有異常響聲或有離心管破裂,會引起較大的振動應(yīng)立即停機.8)離心機的電源必須有接地線。6. 支持性文件sc-04低速離心機使用說明。7. 相關(guān)記錄 sc-04低速離心機使用維護記錄。（7）11231-bbc86型生物安全柜1. 目 的規(guī)范11231-bbc86型生物安全柜操作和維護程序，正確使用儀器，保證檢測工作順利進行、操作人員人身安全和設(shè)備安全。2. 適用范圍適用于11231-bbc86型生物安全柜的使用操作和維護。3. 職 責(zé)1) 檢測人員：負責(zé)按操作規(guī)程進行儀器操作，樣品測定。2)

33、 保管人員：負責(zé)儀器的日常維護和保養(yǎng)。3) 科室負責(zé)人：負責(zé)對儀器使用維護進行監(jiān)督檢查。4. 操作程序1)將安全柜的電源線插頭端插到實驗室內(nèi)固定電源插座上，開鎖后即已接通電源,。2) 按安全柜上的電源開關(guān)“power”，此時系統(tǒng)開始通電。3)將設(shè)備置于 “ 玻璃門：安全”、“風(fēng)機：開”、 “日光燈：開”、“uv燈：關(guān)”狀態(tài)，使機器正常運轉(zhuǎn)。4)在工作前，把工作過程中所需的每一件物品放置在安全柜中。5)當工作完成任后，將實驗使用過的所在材料和相關(guān)物品進行消毒處理后取出，并用75%的灑精擦棉球拭安全柜內(nèi)四面和移液器頭部，干燥后關(guān)閉風(fēng)機和日光燈，再關(guān)閉前窗玻璃門。6)開啟uv燈殺菌20-30分鐘。7

34、)按“power”鍵關(guān)機并關(guān)鎖切斷電源。8)如實填寫使用記錄。5 注意事項1)只有顯示屏上顯示了system safe/系統(tǒng)安全后方可正式使用2)在操作前必須把所有的危險物品放入生物安柜內(nèi)，并在無孔區(qū)域內(nèi)操作和放置物品，同時盡量不要在室內(nèi)活動。3)操作人員必須穿長袖白大褂，戴橡膠手套，使用正確的無菌操作技術(shù)操作，操作時間不宜過長。4)不能使用任何易燃物品。6. 日常維護和保養(yǎng)1)每次實驗結(jié)束后，對臺面進行消毒和清洗。2)每兩年更換日光燈。3)長時間不用時，應(yīng)每月通電一次，檢查系統(tǒng)是否正常運轉(zhuǎn)。4)根據(jù)uv燈的的使用時間進行更換。7. 支持性文件11231-bbc86型生物安全柜使用說明書。8

35、相關(guān)記錄11231-bbc86型生物安全柜使用記錄。（四）實驗中的質(zhì)量控制1. 目的根據(jù)全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年版），對艾滋病病毒抗體檢測作好質(zhì)量管理和質(zhì)量控制,提高檢測質(zhì)量。2. 適用范圍本細則適用于對人體血液中艾滋病病毒抗體檢測。3. 職責(zé)1） 檢測人員：負責(zé)按照本細則對被檢樣品進行檢測和質(zhì)量控制；2） 復(fù)核人員：負責(zé)對檢測操作是否規(guī)范以及檢測結(jié)果質(zhì)量控制是否符合要求；3 ）科室負責(zé)人：負責(zé)對科室綜合管理。4. 檢測依據(jù)全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）。5. 方法原理質(zhì)量控制是指在每一次實驗過程中為確保實驗工作正常進行而必須采取的各種措施,設(shè)置一個弱陽性質(zhì)控血清, 繪制

36、質(zhì)控圖: 以質(zhì)控血清樣本反應(yīng)的s/co比值繪制的即刻法和levey-jennings質(zhì)控圖。1）實驗前質(zhì)量控制：（1） 樣品要求樣品不能溶血、高膽紅素血、高溶血、乳糜血或高蛋白血標本，應(yīng)無微生物，在28溫度下，可保存一周，新鮮血液標本可長期保存在-20，標本要避免反復(fù)凍融，并有明顯標記(如hiv檢測、姓名、編號或時間、送檢科室（或單位）)，樣品量不能少于0.5ml;檢查送檢測樣品是否有送檢單,各項是否按要求填寫詳細；樣品存放于末檢測區(qū)；（2）檢查環(huán)境條件在20-30,儀器設(shè)備能正常運轉(zhuǎn);（3）檢測試劑在室溫平衡半小時;并檢查試劑是否在有效期內(nèi)2）實驗中質(zhì)量控制：（1）質(zhì)控血清：來源于省疾病預(yù)防

37、控制中心或其它上級部門，同一批質(zhì)控品根據(jù)實際檢測情況進行分裝到冷凍管中,一瓶70ul,并存放在-20冰箱中, 避免反復(fù)凍融,每次使用時從冰箱中取出, 質(zhì)控品使用從制作日期起使用期一年。（2）填寫原始記錄,并標明空白、陰性、陽性、質(zhì)控血清、樣品的確切位置，按照試劑盒要求進行操作，不同批號試劑不能混用；3）實驗后質(zhì)量控制：（1）正確解釋結(jié)果：檢查試劑內(nèi)陰陽性是否成立,如果成立,大于或等cutoff值為陽性,小于cutoff值為陰性; 如果不成立,須重做實驗室。（2）每次實驗后須有檢測人、復(fù)核人簽名（3）繪制和分析質(zhì)控圖：常規(guī)條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)，用s/co比值繪制質(zhì)控圖。對同一批質(zhì)控物連續(xù)測定得到

38、20個數(shù)據(jù)，求均值()和標準差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除,本實驗室先用“即刻法”質(zhì)控,同一批號試劑盒和外部對照有20個數(shù)據(jù)后,再繪制質(zhì)levey-jennings質(zhì)控圖。“即刻法”質(zhì)控“即刻法”質(zhì)控方法是在對同一批外部質(zhì)控血清連續(xù)測定3次后，即可對第3次檢驗結(jié)果進行質(zhì)控。具體計算方法如下：1-1 將質(zhì)控血清的測定值從小到大排列：x1，x2，x3xn(x1為最小值，xn為最大值)。1-2 計算 和s。1-3 計算si上限值 和si下限值。 si上限=x最大值-s si下限=-x最小值s1-4 將si上限、si下限與si值表（表1）中的數(shù)字比較。表1 si值表nn3sn2snn3sn2

39、s31.161.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56a.當si上限和si下限 n3s值時說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。數(shù)值 “失控”狀態(tài)應(yīng)舍去，需重新測定該質(zhì)控血清和病人樣品。舍去的只是失控的這次數(shù)值，其它測定值仍可繼續(xù)使用。5.3.3.2繪制質(zhì)levey-jennings質(zhì)控圖:在常規(guī)條件下，

40、對同一批血清連續(xù)測定20次（天）或以上，獲得一組s/co值，求均數(shù)()和標準差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除,本實驗室以即刻法質(zhì)控的20次數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)來繪制質(zhì)levey-jennings質(zhì)控圖。 將均值()和標準差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標示出來。以s/co值作縱座標(y軸)，每一次(天)試驗作橫座標(x軸)，繪制質(zhì)控圖。2-1 從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測結(jié)果依次點入該質(zhì)控框架圖中，檢驗進入質(zhì)控狀態(tài)。2-2 質(zhì)控規(guī)則及使用:實驗室在報告實驗結(jié)果之前必須評價質(zhì)控數(shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計算機審核結(jié)果來決定。目前許多質(zhì)控規(guī)則已被采用，常用的是12s和13s規(guī)則。a. 告警（12

41、s）：當外部對照的s/co值超出+2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。若將12s做失控標準，有較高的假失控概率，所以一般不采用。b. 失控（13s）：當外部對照的s/co值超出+3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部對照滴度下降造成。c. 趨勢：連續(xù)幾次（57次）外部對照s/co值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。d. 出現(xiàn)一次2s范圍的變化時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。f. 出現(xiàn)下列情況時，應(yīng)暫停檢測查找原因：出現(xiàn)一次3s范圍的變化、連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2s范圍的變化、連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1s范圍的變化、連續(xù)10