分解纖維素的微生物的分離 上課用

1、 教學(xué)目標(biāo)教學(xué)目標(biāo): 1、知道纖維素酶的種類及作用、知道纖維素酶的種類及作用 2、初步掌握從土壤中分離出分解纖維、初步掌握從土壤中分離出分解纖維 素的微生物的實(shí)驗(yàn)方法素的微生物的實(shí)驗(yàn)方法 纖維二糖纖維二糖 C C1 1酶、酶、CxCx酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶 葡萄糖葡萄糖纖維素纖維素 真菌、放線菌及細(xì)菌真菌、放線菌及細(xì)菌 纖維素酶纖維素酶 下列生物能分解纖維素的是（下列生物能分解纖維素的是（ ） 人人 兔兔 牛牛 蘑菇蘑菇 纖維桿菌纖維桿菌 A. B. C. D. C 兔、牛等草食性動物的腸胃中的共生微生物可兔、牛等草食性動物的腸胃中的共生微生物可 合成纖維素酶分解纖維素。合成纖維素酶分解纖維

2、素。 蘑菇、纖維桿菌能分泌纖維素酶分解纖維素；蘑菇、纖維桿菌能分泌纖維素酶分解纖維素； 人不能消化纖維素。人不能消化纖維素。 在一支試管中添加纖維素酶，在一支試管中添加纖維素酶， 另一支試管不添加纖維素酶；另一支試管不添加纖維素酶； 思考思考1P27的小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對照的？的小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對照的？ 濾濾 紙紙 崩崩 潰潰 法法 4 4、纖維素酶活性的測定實(shí)驗(yàn)：、纖維素酶活性的測定實(shí)驗(yàn)： 方法：濾紙崩潰法方法：濾紙崩潰法 （二）纖維素分解菌的篩選（二）纖維素分解菌的篩選 1、篩選纖維素分解菌的方法、篩選纖維素分解菌的方法_。 優(yōu)點(diǎn)：該方法可以通過優(yōu)點(diǎn)：該方法可以通過_反應(yīng)直接篩選。反應(yīng)直接篩

3、選。 剛果紅染色法剛果紅染色法 顏色顏色 2、其原理是：、其原理是：剛果紅剛果紅可以與可以與纖維素纖維素形成形成 _，當(dāng)纖維素被，當(dāng)纖維素被_分解后，分解后， 紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以_ 為中心的為中心的_，可以通過，可以通過_ 來篩選纖維素分解菌。來篩選纖維素分解菌。 紅色復(fù)合物紅色復(fù)合物纖維素酶纖維素酶 纖維素分解菌纖維素分解菌 透明圈透明圈是否產(chǎn)生透明圈是否產(chǎn)生透明圈 可根據(jù)是否可根據(jù)是否 產(chǎn)生產(chǎn)生透明圈透明圈 來篩選纖維來篩選纖維 素分解菌素分解菌 透明圈大的，透明圈大的， 分解纖維素的分解纖維素的 能力就強(qiáng)啦能力就強(qiáng)啦 練一練：練一練： 1、下列關(guān)于纖維素

4、酶的說法，錯誤的是、下列關(guān)于纖維素酶的說法，錯誤的是 A、纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種、纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種 B、纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖、纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖 C、纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁、纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁 D、葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖、葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖 2、利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解菌，、利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解菌， 下列說法錯誤的是下列說法錯誤的是 A、剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物、剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物 B、剛果紅能與纖維二糖形成紅色復(fù)合物、剛果紅能與纖維二糖形成紅色復(fù)合物 C、剛果

5、紅不能與葡萄糖形成紅色復(fù)合物、剛果紅不能與葡萄糖形成紅色復(fù)合物 D、若培養(yǎng)基上產(chǎn)生了透明圈，則說明已篩選出、若培養(yǎng)基上產(chǎn)生了透明圈，則說明已篩選出 了纖維素分解菌了纖維素分解菌 ( (三三) )、實(shí)驗(yàn)設(shè)計、實(shí)驗(yàn)設(shè)計 土壤土壤 取樣取樣 選擇選擇 培養(yǎng)培養(yǎng) 梯度梯度 稀釋稀釋 將樣品涂將樣品涂 布到鑒別布到鑒別 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 挑選挑選 菌落菌落 什么樣什么樣 的環(huán)境的環(huán)境 取樣取樣? 培養(yǎng)的目的培養(yǎng)的目的? ? 選擇培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基的 特點(diǎn)特點(diǎn)? ? 挑選什挑選什 么樣的么樣的 菌落菌落? ? 鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基 的特點(diǎn)的特點(diǎn)? ? 如何鑒別如何鑒別? ? 根據(jù)根據(jù)：微生物：微生物 對生存環(huán)

6、境的對生存環(huán)境的 要求，到相應(yīng)要求，到相應(yīng) 環(huán)境中去找；環(huán)境中去找； 目的：目的：增加纖維素增加纖維素 分解菌的濃度，分解菌的濃度，以以 確保能夠從樣品中確保能夠從樣品中 分離到所需要的微分離到所需要的微 生物；生物； 剛果紅染色法剛果紅染色法 ( (三三) )、實(shí)驗(yàn)設(shè)計、實(shí)驗(yàn)設(shè)計 土壤土壤 取樣取樣 選擇選擇 培養(yǎng)培養(yǎng) 梯度梯度 稀釋稀釋 將樣品涂將樣品涂 布到鑒別布到鑒別 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 挑選挑選 菌落菌落 旁欄思考旁欄思考1本實(shí)驗(yàn)流程與尿素分本實(shí)驗(yàn)流程與尿素分 解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？ 尿素分解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程是將土樣制成的尿素分解菌的分離實(shí)驗(yàn)流程是將土

7、樣制成的 菌懸液直接涂布在選擇培養(yǎng)基上；菌懸液直接涂布在選擇培養(yǎng)基上； 本課題通過選擇培養(yǎng)使細(xì)菌增殖后，再涂布本課題通過選擇培養(yǎng)使細(xì)菌增殖后，再涂布 在鑒別培養(yǎng)基上。其它操作基本基本相同。在鑒別培養(yǎng)基上。其它操作基本基本相同。 選擇纖維素豐富的環(huán)境選擇纖維素豐富的環(huán)境，如樹林中多年落，如樹林中多年落 葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等等。葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等等。 生物與環(huán)境的互相依存關(guān)系，在富含纖維生物與環(huán)境的互相依存關(guān)系，在富含纖維 素的環(huán)境中纖維素分解菌的含量相對提高，因素的環(huán)境中纖維素分解菌的含量相對提高，因 此從這種土壤中此從這種土壤中獲得目的微生物的幾率要高于獲得目

8、的微生物的幾率要高于 普通環(huán)境普通環(huán)境 旁欄思考旁欄思考2 取樣的環(huán)境是怎樣的，作出這取樣的環(huán)境是怎樣的，作出這 種選擇的理由是什么？種選擇的理由是什么？ 根據(jù)根據(jù)微生物對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)環(huán)境中去找；微生物對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)環(huán)境中去找； 【資料一資料一】土壤取樣土壤取樣 人工設(shè)置適宜環(huán)境，使纖維人工設(shè)置適宜環(huán)境，使纖維 素分解菌相對聚集。素分解菌相對聚集。 將紙埋于深約將紙埋于深約10cm的腐殖土的腐殖土 壤中。壤中。 旁欄思考旁欄思考3 將濾紙埋在土壤中有什么作用？將濾紙埋在土壤中有什么作用？ 你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？ 選擇培養(yǎng)的選擇培養(yǎng)的 【資料

9、二資料二】選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng) 培養(yǎng)基成分分析培養(yǎng)基成分分析 培養(yǎng)基組成培養(yǎng)基組成提供主要的營養(yǎng)物質(zhì)提供主要的營養(yǎng)物質(zhì) 纖維素粉纖維素粉 5g碳源（能源）碳源（能源） NaNO3 1g氮源、無機(jī)鹽氮源、無機(jī)鹽 KCl 0.5g Na2HPO47H2O 1.2g KH2PO4 0.9g MgSO4 7H2O 0.5g 無機(jī)鹽無機(jī)鹽 酵母膏酵母膏 0.5g生長因子、生長因子、碳源碳源、氮源、氮源 水解酵素水解酵素 0.5g氮素、生長因子氮素、生長因子 溶解后，蒸餾水定容至溶解后，蒸餾水定容至1000mL水水 有選擇作用，本配方中纖維素作為主要碳源，只有能有選擇作用，本配方中纖維素作為主要碳源，只有能

10、分解纖維素的微生物可以大量繁殖。分解纖維素的微生物可以大量繁殖。 （2）若設(shè)置一個對照實(shí)驗(yàn)說明選擇培養(yǎng)）若設(shè)置一個對照實(shí)驗(yàn)說明選擇培養(yǎng) 的作用，應(yīng)控制的變量是將的作用，應(yīng)控制的變量是將_ 改為改為_。 C、你能否設(shè)計一個對照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基、你能否設(shè)計一個對照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基 的作用？的作用？ 葡萄糖葡萄糖 纖維素粉纖維素粉 用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基與之對照用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基與之對照 答：（答：（1）自變量為培養(yǎng)基的種類，即普通）自變量為培養(yǎng)基的種類，即普通 培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基 在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng) 這種營養(yǎng)條件的

11、微生物得到迅速繁殖，而那這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那 些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑 制，因此可以起到制，因此可以起到“濃縮濃縮”的作用的作用 旁欄思考旁欄思考4 為什么選擇培養(yǎng)能夠?yàn)槭裁催x擇培養(yǎng)能夠“濃縮濃縮”所需的微生物？所需的微生物？ 【資料三資料三】剛果紅染色法剛果紅染色法 方法一：方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果先培養(yǎng)微生物，再加入剛果 紅進(jìn)行顏色反應(yīng)紅進(jìn)行顏色反應(yīng) 方法二：方法二：在倒平板時就加入剛果紅在倒平板時就加入剛果紅 漂洗作用漂洗作用,氯化鈉可以使結(jié)合不牢的剛果紅洗去氯化鈉可以使結(jié)合不牢的剛果紅洗去,這這 樣就留下大大

12、小小的透明圈樣就留下大大小小的透明圈,大的透明圈當(dāng)然分解大的透明圈當(dāng)然分解 纖維素的能就強(qiáng)。纖維素的能就強(qiáng)。 方法一中方法一中NaCl溶液的作用？溶液的作用？ 培養(yǎng)基組成培養(yǎng)基組成提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)提供的主要營養(yǎng)物質(zhì) CMC-Na 510g 碳源碳源 酵母膏酵母膏 1g碳源、氮源、生長因子碳源、氮源、生長因子 KH2PO4 0.25g無機(jī)鹽無機(jī)鹽 土豆汁土豆汁 100mL碳源、生長因子碳源、生長因子 瓊脂瓊脂 15g凝固劑凝固劑 上述物質(zhì)溶解后，加蒸上述物質(zhì)溶解后，加蒸 餾水定容至餾水定容至1000mL 氫元素、氧元素氫元素、氧元素 鑒別鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基纖維素分解菌的培養(yǎng)基 (水溶性羧

13、甲基纖維素鈉水溶性羧甲基纖維素鈉) 染色法染色法優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn) 顏色反應(yīng)基顏色反應(yīng)基 本上是纖維本上是纖維 素分解菌的素分解菌的 作用作用 操作繁瑣操作繁瑣 剛果紅會使菌落之間發(fā)剛果紅會使菌落之間發(fā) 生混雜生混雜 操作簡便操作簡便 不存在菌落不存在菌落 混雜問題混雜問題 產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生淀粉酶的微生物 也產(chǎn)生模糊透明圈，也產(chǎn)生模糊透明圈， 有些微生物能降解色素，有些微生物能降解色素， 形成明顯的透明圈。形成明顯的透明圈。 思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足 方法一：方法一：先先 培養(yǎng)微生物，培養(yǎng)微生物， 再加入剛果再加入剛果 紅進(jìn)行顏色紅進(jìn)行顏色 反應(yīng)

14、反應(yīng) 方法二：方法二：在在 倒平板時就倒平板時就 加入剛果紅加入剛果紅 挑選產(chǎn)生透明圈的菌落挑選產(chǎn)生透明圈的菌落 挑取產(chǎn)生挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，明顯的透明圈的菌落， 一般即為分解纖維素的菌落。一般即為分解纖維素的菌落。 接種到接種到纖維素分解菌的纖維素分解菌的選擇選擇培養(yǎng)培養(yǎng) 基上，在基上，在30300 0C C37370 0C C培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)，可獲得純 培養(yǎng)。培養(yǎng)。 練一練練一練 1、在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌，符合下列哪、在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌，符合下列哪 一生物學(xué)觀點(diǎn)？（一生物學(xué)觀點(diǎn)？（ ） A.生物結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的觀點(diǎn)生物結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)的觀點(diǎn) B

15、.生物結(jié)構(gòu)與功能整體性觀點(diǎn)生物結(jié)構(gòu)與功能整體性觀點(diǎn) C.生物與環(huán)境相適應(yīng)的觀點(diǎn)生物與環(huán)境相適應(yīng)的觀點(diǎn) D.生物發(fā)展進(jìn)化的觀點(diǎn)生物發(fā)展進(jìn)化的觀點(diǎn) 2、從土壤中分離獲得某種微生物的步驟是（、從土壤中分離獲得某種微生物的步驟是（ ） 土壤取樣土壤取樣 梯度稀釋梯度稀釋 選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng) 菌懸液涂布平板菌懸液涂布平板 挑選出單個菌落挑選出單個菌落 A、 B、 C、 D、 3、有關(guān)選擇培養(yǎng)正確的敘述是（、有關(guān)選擇培養(yǎng)正確的敘述是（ ） A、可以增加纖維素分解菌的濃度、可以增加纖維素分解菌的濃度 B、可以減少纖維素分解菌的濃度、可以減少纖維素分解菌的濃度 C、所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基、所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基

16、 D、所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基、所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基 C B A 四、結(jié)果分析與評價四、結(jié)果分析與評價 1.1.培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選 出菌落出菌落 對照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長則說明對照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長則說明 培養(yǎng)基制作合格。培養(yǎng)基制作合格。 如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得 了分解纖維素的微生物。了分解纖維素的微生物。 2.2.分離的結(jié)果是否一致分離的結(jié)果是否一致 由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌 的數(shù)

17、量，因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取的數(shù)量，因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取 土樣的環(huán)境不同，不同同學(xué)也可能得到真菌和放線菌土樣的環(huán)境不同，不同同學(xué)也可能得到真菌和放線菌 等不同的分離結(jié)果。等不同的分離結(jié)果。 1.為了確定分離得到的是纖維素分解菌，為了確定分離得到的是纖維素分解菌， 還需要進(jìn)行還需要進(jìn)行_實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的 發(fā)酵方法有發(fā)酵方法有_ _ 發(fā)酵和發(fā)酵和_ _ 發(fā)酵。發(fā)酵。 2.2.纖維素酶測定方法是對纖維素酶分解濾紙等纖維素酶測定方法是對纖維素酶分解濾紙等 纖維素所產(chǎn)生的纖維素所產(chǎn)生的_ _ 含量進(jìn)行定量測定。含量進(jìn)行定量測定。 發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶發(fā)酵產(chǎn)纖維素

18、酶 液體液體 固體固體 五、課題延伸五、課題延伸 分解分解 纖維纖維 素的素的 微生微生 物的物的 分離分離 纖維素酶纖維素酶種類、作用、催化種類、作用、催化 剛果紅染色剛果紅染色篩選原理篩選原理 實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 設(shè)設(shè) 計計 土壤取樣土壤取樣 選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng) 涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng) 純化培養(yǎng)純化培養(yǎng) 前置染色法前置染色法 后置染色法后置染色法 富含纖維素土壤富含纖維素土壤 增大分解菌含量增大分解菌含量 染色鑒別染色鑒別 分離出分解菌分離出分解菌 課堂總結(jié)課堂總結(jié) 比較項目比較項目 分解尿素的細(xì)菌分解尿素的細(xì)菌纖維素分解菌纖維素分解菌 選選 擇擇 培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基 原理原理 培養(yǎng)基培養(yǎng)基 類型類型 目的

19、目的 鑒鑒 定定 培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基 原理原理 現(xiàn)象現(xiàn)象 方法方法 將細(xì)菌涂布在只有將細(xì)菌涂布在只有 尿素做氮源的選擇尿素做氮源的選擇 培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上 將細(xì)菌涂布在只有將細(xì)菌涂布在只有 纖維素粉做碳源的纖維素粉做碳源的 選擇培養(yǎng)基上選擇培養(yǎng)基上 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基 篩選菌株篩選菌株選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng),濃縮所需微生物濃縮所需微生物 比較比較 項目項目 分解尿素的細(xì)菌分解尿素的細(xì)菌纖維素分解菌纖維素分解菌 選選 擇擇 培培 養(yǎng)養(yǎng) 原理原理 培養(yǎng)基類培養(yǎng)基類 型型 目的目的 鑒鑒 定定 培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基 原原 理理 現(xiàn)現(xiàn) 象象 方方 法法 在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)在細(xì)菌分解尿素

20、的化學(xué)反應(yīng) 中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素 分解成了氨，氨會使培養(yǎng)基分解成了氨，氨會使培養(yǎng)基 的堿性增強(qiáng)，的堿性增強(qiáng)，pHpH升高。在培升高。在培 養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，如養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，如 果果pHpH升高指示劑會變紅升高指示劑會變紅 剛果紅可以與纖維素形成剛果紅可以與纖維素形成 紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被 纖維素酶催化分解后紅色纖維素酶催化分解后紅色 復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基 上就會出現(xiàn)以纖維素分解上就會出現(xiàn)以纖維素分解 菌為中心的透明圈菌為中心的透明圈 觀察菌落周圍是否有著色的觀察菌落周圍是否有著色的 環(huán)帶出現(xiàn)來鑒定尿素分解菌

21、環(huán)帶出現(xiàn)來鑒定尿素分解菌 觀察菌落周圍是否出現(xiàn)觀察菌落周圍是否出現(xiàn) 透明圈來篩選纖維素分解菌透明圈來篩選纖維素分解菌 脲酶檢測法脲酶檢測法剛果紅染色法剛果紅染色法 【練一練練一練】 有些微生物能合成纖維素酶，通過對這些有些微生物能合成纖維素酶，通過對這些 微生物的研究和作用，使人們能夠利用秸稈等微生物的研究和作用，使人們能夠利用秸稈等 廢棄物生產(chǎn)酒精，用纖維素酶處理服裝面料等。廢棄物生產(chǎn)酒精，用纖維素酶處理服裝面料等。 研究人員用化合物研究人員用化合物A、硝酸鹽、磷酸鹽以及微、硝酸鹽、磷酸鹽以及微 量元素配制的培養(yǎng)基，成功的篩選到能產(chǎn)生纖量元素配制的培養(yǎng)基，成功的篩選到能產(chǎn)生纖 維素酶的微生物

22、。分析回答問題。維素酶的微生物。分析回答問題。 (1)培養(yǎng)基中加入的化合物培養(yǎng)基中加入的化合物A是是_，為微，為微 生物的生長提供生物的生長提供_，這種培養(yǎng)基屬于，這種培養(yǎng)基屬于 _培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。 (2)為了篩選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物，向培為了篩選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物，向培 養(yǎng)基中加入養(yǎng)基中加入_。 纖維素纖維素 碳源碳源 選擇選擇 剛果紅剛果紅 (3)在篩選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物之前，可在篩選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物之前，可 用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，增加微生物的濃度。為獲得用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，增加微生物的濃度。為獲得 純凈的菌株，常采用平板劃線的方法進(jìn)行接種，純凈的菌株，常采用平板劃線的方

23、法進(jìn)行接種， 此過程所用的接種工具是此過程所用的接種工具是_，操作時采，操作時采 用用_滅菌的方法；還可用滅菌的方法；還可用_ 的的 方法接種。方法接種。 (4)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌 處理后才能倒掉，這樣做的目的是處理后才能倒掉，這樣做的目的是 _。 接種環(huán)接種環(huán) 灼燒灼燒稀釋涂布平板稀釋涂布平板 防止造成環(huán)境污染防止造成環(huán)境污染 20092009年年40.40.【生物生物選修選修1 1生物技術(shù)實(shí)踐生物技術(shù)實(shí)踐】（1515分）分） （1 1）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外， 還要考慮還要考

24、慮_、_和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌 具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、_、 _等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。 （2 2）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染， 需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行_（消毒、滅菌）；操（消毒、滅菌）；操 作者的雙手需要進(jìn)行清洗和作者的雙手需要進(jìn)行清洗和_；靜止空氣中的細(xì)菌；靜止空氣中的細(xì)菌 可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還 能能

25、_。 溫度溫度酸堿度酸堿度 易培養(yǎng)易培養(yǎng) 生活周期短生活周期短 滅菌滅菌 消毒消毒 損傷損傷DNADNA的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu) 鏈接高考鏈接高考 （3 3）若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，）若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)， 要想使所得估計值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多要想使所得估計值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多 次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測樣品稀釋的次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測樣品稀釋的_。（。（4 4） 通常，對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小通常，對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小 等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的_。（。（5 5）培）培 養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。 對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是對于固體培養(yǎng)基