生化檢驗-第二章-蛋白質(zhì)精編版

1、 第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 一、血漿蛋白質(zhì)一、血漿蛋白質(zhì) 血漿蛋白質(zhì)功能血漿蛋白質(zhì)功能 1.1.直接在血液中發(fā)揮作用直接在血液中發(fā)揮作用 在血漿中運載弱水溶性物質(zhì)在血漿中運載弱水溶性物質(zhì) 維持血漿膠體滲透壓維持血漿膠體滲透壓 組成血液組成血液pHpH緩沖系統(tǒng)緩沖系統(tǒng) 參與凝血與纖維蛋白溶解參與凝血與纖維蛋白溶解 血漿固有酶在血漿發(fā)揮作用血漿固有酶在血漿發(fā)揮作用 2.需要時進入組織發(fā)揮作用需要時進入組織發(fā)揮作用 對組織蛋白起修補作用對組織蛋白起修補作用 組成體液免疫防御系統(tǒng)組成體液免疫防御系統(tǒng) 抑制組織蛋白酶抑制組織蛋白酶 參與代謝調(diào)控作用的激素參與代謝調(diào)控作用的激素 血漿蛋白質(zhì)的功能及分類血漿蛋

2、白質(zhì)的功能及分類 運輸載體運輸載體 血漿脂蛋白血漿脂蛋白(CM(CM、VLDLVLDL、LDLLDL、HDLHDL等等) ) 白蛋白白蛋白 轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白 結(jié)合珠蛋白結(jié)合珠蛋白 血色素結(jié)合蛋白血色素結(jié)合蛋白 銅藍蛋白銅藍蛋白 視黃醇結(jié)合蛋白視黃醇結(jié)合蛋白 甲狀腺素結(jié)合球蛋白甲狀腺素結(jié)合球蛋白 皮質(zhì)素結(jié)合球蛋白皮質(zhì)素結(jié)合球蛋白 類固醇激素結(jié)合球蛋白類固醇激素結(jié)合球蛋白 蛋白酶抑制物：蛋白酶抑制物： 1 1- -抗胰蛋白酶、抗胰蛋白酶、1 1- -抗糜蛋白酶抗糜蛋白酶 2 2- -巨球蛋白等巨球蛋白等6 6種以上種以上 血漿酶：血漿酶： 卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶、假性膽堿酯酶等卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移

3、酶、假性膽堿酯酶等 蛋白類激素：蛋白類激素： 胰島素、胰高血糖素、生長激素等胰島素、胰高血糖素、生長激素等 凝血與纖溶蛋白：凝血與纖溶蛋白： 纖維蛋白原，凝血酶原，凝血因子纖維蛋白原，凝血酶原，凝血因子、 、，前激肽釋放酶、，前激肽釋放酶、HMWHMW激肽原，激肽原， 抗凝血酶抗凝血酶,纖維蛋白溶酶原等纖維蛋白溶酶原等 免疫球蛋白和補體蛋白：免疫球蛋白和補體蛋白：IgGIgG、A A 、M M、D D、E E C1q C1q、C1rC1r、C1sC1s、C2C2、C3C3、C4C4、C5C5、C6C6、 C7 C7、C8C8、C9C9、B B因子、因子、D D因子、備解素等因子、備解素等 血漿

4、蛋白質(zhì)的功能及分類血漿蛋白質(zhì)的功能及分類 血漿蛋白質(zhì)的電泳分類血漿蛋白質(zhì)的電泳分類 醋纖膜電泳或瓊脂糖電泳：醋纖膜電泳或瓊脂糖電泳： 白蛋白白蛋白 1 1球蛋白球蛋白 2 2球蛋白球蛋白 球蛋白球蛋白 球蛋白球蛋白 分辨率高時：可有分辨率高時：可有1 1和和2 2 2 2中也可有兩條中也可有兩條 采用聚丙烯酰胺凝膠電泳，采用聚丙烯酰胺凝膠電泳， 在適當(dāng)條件下可以分出在適當(dāng)條件下可以分出3030多個區(qū)帶多個區(qū)帶 各電泳區(qū)帶的主要血漿蛋白質(zhì)各電泳區(qū)帶的主要血漿蛋白質(zhì) 前白蛋白前白蛋白 甲狀腺素轉(zhuǎn)運蛋白甲狀腺素轉(zhuǎn)運蛋白 0.20.4g/L 白蛋白白蛋白 白蛋白白蛋白 3555 1-球蛋白球蛋白1-抗

5、胰蛋白酶抗胰蛋白酶 0.92.0 1-酸性糖蛋白酸性糖蛋白 0.51.2 甲胎蛋白甲胎蛋白 310-5 高密度脂蛋白高密度脂蛋白 1.73.25 2-球蛋白球蛋白結(jié)合珠蛋白結(jié)合珠蛋白 0.32.0 2-巨球蛋白巨球蛋白 1.253.1 銅藍蛋白銅藍蛋白 0.20.6 -球蛋白球蛋白 轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白 2.03.6 低密度脂蛋白低密度脂蛋白 2.54.4 C4 0.10.4 2-微球蛋白微球蛋白 0.0010.002 纖維蛋白原纖維蛋白原 2.04.0 C3 0.71.5 -球蛋白球蛋白 IgA 0.74.0 IgG 7.016 IgM 0.42.3 C- C-反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白 0.008 （一

6、）前白蛋白（一）前白蛋白（prealbumin,PAprealbumin,PA） 即甲狀腺素轉(zhuǎn)運蛋白即甲狀腺素轉(zhuǎn)運蛋白(transthyretin(transthyretin，TTR)TTR) 電泳顯示在白蛋白前方故名電泳顯示在白蛋白前方故名PAPA， 肝臟合成，肝臟合成，55kD55kD，半壽期僅，半壽期僅2.52.5天。天。 50507070與視黃醇結(jié)合蛋白組成復(fù)合體。與視黃醇結(jié)合蛋白組成復(fù)合體。 能轉(zhuǎn)運甲狀腺素和三碘甲腺原氨酸，能轉(zhuǎn)運甲狀腺素和三碘甲腺原氨酸， 大約結(jié)合血漿中大約結(jié)合血漿中1010的甲狀腺激素。的甲狀腺激素。 必需氨基酸含量很高，是組織修補材料。必需氨基酸含量很高，是組織

7、修補材料。 （二）視黃醇結(jié)合蛋白（二）視黃醇結(jié)合蛋白 （retinol-binding proteinretinol-binding protein，RBPRBP ） 肝臟合成，僅肝臟合成，僅21kD21kD，半壽期，半壽期12h12h 攜帶視黃醇從肝臟轉(zhuǎn)運到各種靶組織。攜帶視黃醇從肝臟轉(zhuǎn)運到各種靶組織。 與與TTRTTR以以1:11:1比例結(jié)合，避免比例結(jié)合，避免RBPRBP從腎小球濾過，從腎小球濾過， 在靶細胞，在靶細胞，TTR-RBPTTR-RBP降解，視黃醇被攝入細胞，降解，視黃醇被攝入細胞， 無視黃醇的無視黃醇的RBPRBP載體蛋白與載體蛋白與TTRTTR無親和性，無親和性， 被腎小

8、球濾出，腎近端小管細胞吸收并降解。被腎小球濾出，腎近端小管細胞吸收并降解。 （三）白蛋白（三）白蛋白（albumin albumin ，ALBALB） 生化特性生化特性 占血漿總蛋白的占血漿總蛋白的57576868，不含糖，不含糖，66.3kD66.3kD 由肝臟合成，由肝臟合成，111114.7g/d14.7g/d，半壽期約，半壽期約18182020天天 合成儲備大，由血漿膠體滲透壓和蛋白質(zhì)攝入量調(diào)節(jié)合成儲備大，由血漿膠體滲透壓和蛋白質(zhì)攝入量調(diào)節(jié) 腎病綜合征時合成量可增高到正常的腎病綜合征時合成量可增高到正常的300300以上以上 遺傳性變異可發(fā)生電泳遷移率變化，出現(xiàn)雙白蛋白區(qū)帶遺傳性變異可

9、發(fā)生電泳遷移率變化，出現(xiàn)雙白蛋白區(qū)帶 （三）白蛋白（三）白蛋白生理作用生理作用 最重要血漿營養(yǎng)蛋白，胞飲進入細胞，氨基酸合成組織蛋白最重要血漿營養(yǎng)蛋白，胞飲進入細胞，氨基酸合成組織蛋白 最重要血漿載體蛋白最重要血漿載體蛋白 維持血漿膠體滲透壓的最重要成分維持血漿膠體滲透壓的最重要成分 緩沖酸堿物質(zhì)的主要血漿蛋白質(zhì)緩沖酸堿物質(zhì)的主要血漿蛋白質(zhì) 高度溶于水，能運載許多疏水分子高度溶于水，能運載許多疏水分子 生理生理pHpH中為負離子，每分子帶中為負離子，每分子帶200200個負電荷個負電荷 運輸膽紅素運輸膽紅素. .長鏈脂肪酸長鏈脂肪酸. .膽汁酸鹽膽汁酸鹽. .前列腺素前列腺素. .類固醇激素類

10、固醇激素 無機離子無機離子( (如如CaCa2+ 2+、 、CuCu2+ 2+、 、NiNi2+ 2+). ).藥物藥物( (如阿司匹林、青霉素如阿司匹林、青霉素) ) 結(jié)合型激素和藥物無活性，結(jié)合型激素和藥物無活性，ALBALB含量或含量或pHpH變化時其活性變化變化時其活性變化 （四（四) )1 1- -抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶( (1 1-antitrypsin-antitrypsin，1 1ATAT或或 AAT AAT ） 蛋白酶和抗蛋白酶蛋白酶和抗蛋白酶 蛋白酶：清除病原微生物、壞死組織和衰老紅細胞蛋白酶：清除病原微生物、壞死組織和衰老紅細胞 蛋白酶過多或活性過強可破壞正常組織和細胞蛋白

11、酶過多或活性過強可破壞正常組織和細胞 抗蛋白酶：機體為對抗蛋白酶的異常作用而產(chǎn)生抗蛋白酶：機體為對抗蛋白酶的異常作用而產(chǎn)生 抗蛋白酶減少可導(dǎo)致某些疾病發(fā)生抗蛋白酶減少可導(dǎo)致某些疾病發(fā)生 （四）（四）1 1- -抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶 生理功能生理功能 占血清中抑制蛋白酶活力的占血清中抑制蛋白酶活力的9090左右左右 能抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、膠原蛋白酶能抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、膠原蛋白酶 及白細胞釋放的溶酶體蛋白水解酶及白細胞釋放的溶酶體蛋白水解酶 形成不可逆的酶形成不可逆的酶- -抑制物復(fù)合體抑制物復(fù)合體 （四）（四）1 1- -抗胰蛋白酶抗胰蛋白酶 AATAAT的多種遺傳表型的多種遺傳表型

12、至少有至少有7575種，表達的蛋白質(zhì)有種，表達的蛋白質(zhì)有M M型和型和Z Z型、型、S S型型 PiMM PiMM型最多，占人群型最多，占人群95%95%以上以上 類型：類型：PiMM:PiMSPiMM:PiMS、PiMZPiMZ、PiSSPiSS、PiSZPiSZ、PiZZ PiZZ 活力：活力：100%:80100%:80、6060、6060、3535、1515 （五）（五）1 1- -酸性糖蛋白酸性糖蛋白 ( (1 1-acid glycoprotein-acid glycoprotein，1 1AGAG或或AAG)AAG) 主要的急性時相反應(yīng)蛋白主要的急性時相反應(yīng)蛋白 急性炎癥時增高，

13、與免疫防御功能有關(guān)急性炎癥時增高，與免疫防御功能有關(guān) AAGAAG可以結(jié)合利多卡因和心得安等可以結(jié)合利多卡因和心得安等 急性心肌梗死時升高，藥物結(jié)合狀態(tài)增加急性心肌梗死時升高，藥物結(jié)合狀態(tài)增加 游離狀態(tài)減少，需要增加藥物劑量。游離狀態(tài)減少，需要增加藥物劑量。 肝臟合成，肝臟合成，40kD40kD，又稱血清類黏蛋白，又稱血清類黏蛋白， 含糖約含糖約4545，包括，包括11112020唾液酸，唾液酸， 血清黏蛋白的主要成分，黏蛋白是能被血清黏蛋白的主要成分，黏蛋白是能被 高氯酸和其它強酸沉淀的一組蛋白質(zhì)。高氯酸和其它強酸沉淀的一組蛋白質(zhì)。 （六）結(jié)合珠蛋白（六）結(jié)合珠蛋白（haptoglobinh

14、aptoglobin，HpHp） 生化特性和表型生化特性和表型 由肝臟合成，由肝臟合成，85kD85kD400kD400kD，分子量變化很大，分子量變化很大 2 22 2四聚體，四聚體， 亞基不同而形成的四聚體表型不同亞基不同而形成的四聚體表型不同 亞基有三種遺傳表型亞基有三種遺傳表型1F 1F、 、1s 1s 、 、2 2，氨基酸數(shù)不同，氨基酸數(shù)不同 有些表型的四聚體又形成聚合體，在電泳中出現(xiàn)多條帶有些表型的四聚體又形成聚合體，在電泳中出現(xiàn)多條帶 結(jié)合珠蛋白的幾種遺傳表型結(jié)合珠蛋白的幾種遺傳表型 表表 型型 亞單位的結(jié)構(gòu)亞單位的結(jié)構(gòu) 組組 成成 Hp1-1 (Hp1-1 (1F 1F) )2

15、 2 2 2 80kD 80kD，鏈氨基酸鏈氨基酸8383個個 1F 1F 1S 1S 2 2 鏈氨基酸鏈氨基酸245245個個 ( (1S 1S) ) 2 2 2 2 Hp2-1 (Hp2-1 (1S 1S 2 2 2 2 )n 120kD-200kD )n 120kD-200kD的聚合體的聚合體 ( (1F 1F 2 2 2 2)n )n Hp2-2 (Hp2-2 (2 2)n 160kD-400kD)n 160kD-400kD n =3-8 n不同不同 在電泳中呈多條帶在電泳中呈多條帶 能與能與RBCRBC中釋放的游離中釋放的游離HbHb結(jié)合結(jié)合 每分子每分子HpHp結(jié)合兩分子結(jié)合兩分子

16、HbHb 防止防止HbHb從腎丟失而保留鐵，避免從腎丟失而保留鐵，避免HbHb對腎臟損傷。對腎臟損傷。 HpHp不能重新被利用，溶血后其含量急劇降低，不能重新被利用，溶血后其含量急劇降低， 血漿血漿HpHp濃度多在一周內(nèi)由再生而恢復(fù)。濃度多在一周內(nèi)由再生而恢復(fù)。 （六）結(jié)合珠蛋白（六）結(jié)合珠蛋白 生理功能生理功能 由肝實質(zhì)細胞合成，分子量約由肝實質(zhì)細胞合成，分子量約720kD720kD 血漿最大的蛋白質(zhì)，不能從血管擴散至細胞外液血漿最大的蛋白質(zhì)，不能從血管擴散至細胞外液 也是主要的蛋白酶抑制劑也是主要的蛋白酶抑制劑 能結(jié)合并抑制各種類型的蛋白酶，能結(jié)合并抑制各種類型的蛋白酶， 如纖維蛋白溶酶、

17、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶等如纖維蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶等 酶與酶與2 2MGMG處于復(fù)合物狀態(tài)時處于復(fù)合物狀態(tài)時 酶底物為大分子，蛋白水解酶活性被抑制酶底物為大分子，蛋白水解酶活性被抑制 酶底物為小分子，仍能被酶底物為小分子，仍能被2 2MG-MG-蛋白酶水解蛋白酶水解 （七）（七）2巨球蛋白巨球蛋白 (2-acroglobulin，2MG或或AMG) （八）銅藍蛋白（八）銅藍蛋白（ceruloplasmin,Cpceruloplasmin,Cp） 生化特性生化特性 肝實質(zhì)細胞合成，肝實質(zhì)細胞合成，132kD132kD，2 2區(qū)帶區(qū)帶 每分子含每分子含6 68 8個銅原子，

18、含銅而呈藍色個銅原子，含銅而呈藍色 95%95%的血清銅存在于的血清銅存在于CpCp中，另中，另5%5%呈可擴散狀態(tài)呈可擴散狀態(tài) 血循環(huán)中血循環(huán)中CpCp為銅沒有毒性的代謝庫。為銅沒有毒性的代謝庫。 與氧化還原反應(yīng)有關(guān)，與氧化還原反應(yīng)有關(guān)， 既能起氧化作用又能起抗氧化作用。既能起氧化作用又能起抗氧化作用。 具有鐵氧化酶作用，能將具有鐵氧化酶作用，能將FeFe2+ 2+氧化為 氧化為FeFe3+ 3+ Fe Fe3+ 3+再結(jié)合到轉(zhuǎn)鐵蛋白上，使鐵不具毒性 再結(jié)合到轉(zhuǎn)鐵蛋白上，使鐵不具毒性 還有抑制膜脂質(zhì)氧化的作用還有抑制膜脂質(zhì)氧化的作用 （八）銅藍蛋白（八）銅藍蛋白 生理功能生理功能 （九）轉(zhuǎn)鐵

19、蛋白（九）轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrintransferrin，TRFTRF） 生化特性生化特性 肝細胞合成，肝細胞合成，79.6kD79.6kD，區(qū)帶，半壽期區(qū)帶，半壽期10.5d10.5d 能可逆結(jié)合多價陽離子能可逆結(jié)合多價陽離子: :鐵、銅、鋅、鈷等，鐵、銅、鋅、鈷等， 其對鐵的結(jié)合具有臨床重要性其對鐵的結(jié)合具有臨床重要性 （九）轉(zhuǎn)鐵蛋白（九）轉(zhuǎn)鐵蛋白 生理功能生理功能 從小腸進入血液的從小腸進入血液的FeFe2+ 2+被 被CpCp氧化為氧化為FeFe3+ 3+， ， 再被再被TRFTRF的載體蛋白結(jié)合。的載體蛋白結(jié)合。 每種細胞表面都有每種細胞表面都有TRFTRF受體，對受體，對T

20、RF-FeTRF-Fe3+ 3+ 復(fù)合物比對復(fù)合物比對TRFTRF的載體蛋白親和力高得多的載體蛋白親和力高得多 TRF-FeTRF-Fe3+ 3+將大部分 將大部分FeFe3+ 3+運輸?shù)焦撬韬铣?運輸?shù)焦撬韬铣蒆bHb 小部分則運輸?shù)礁鹘M織細胞，形成鐵蛋白小部分則運輸?shù)礁鹘M織細胞，形成鐵蛋白 及合成肌紅蛋白、細胞色素等及合成肌紅蛋白、細胞色素等 （十）（十）2 2- -微球蛋白微球蛋白 （2 2-microglobulin-microglobulin，2 2M M，BMGBMG） 存在于各種有核細胞表面，僅存在于各種有核細胞表面，僅11.8kD11.8kD 是是HLAHLA的輕鏈或的輕鏈或鏈

21、，可從細胞表面尤其是淋巴鏈，可從細胞表面尤其是淋巴 細胞和腫瘤細胞表面脫落到血漿中細胞和腫瘤細胞表面脫落到血漿中 從腎小球濾過，再被腎近端小管重吸收和分解從腎小球濾過，再被腎近端小管重吸收和分解 （十一（十一)C-)C-反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白 （C-reactive protein,CRPC-reactive protein,CRP） 生化特性生化特性 因在急性炎癥病人血清中出現(xiàn)的可以結(jié)合因在急性炎癥病人血清中出現(xiàn)的可以結(jié)合 肺炎球菌細胞壁肺炎球菌細胞壁C-C-多糖的蛋白質(zhì)而命名多糖的蛋白質(zhì)而命名 由肝細胞所合成，由肝細胞所合成，115kD115kD 電泳分布在慢電泳分布在慢區(qū)帶，有時可延伸到區(qū)帶，

22、有時可延伸到區(qū)帶區(qū)帶 不僅結(jié)合多種細胞、真菌及原蟲等多糖物質(zhì)不僅結(jié)合多種細胞、真菌及原蟲等多糖物質(zhì) 在鈣離子存在下，還可以結(jié)合卵磷脂和核酸在鈣離子存在下，還可以結(jié)合卵磷脂和核酸 可引發(fā)對侵入細胞的免疫調(diào)理作用和吞噬作用可引發(fā)對侵入細胞的免疫調(diào)理作用和吞噬作用 結(jié)合后的復(fù)合體具有對補體系統(tǒng)的激活作用結(jié)合后的復(fù)合體具有對補體系統(tǒng)的激活作用 表現(xiàn)炎癥反應(yīng)表現(xiàn)炎癥反應(yīng) ( (十一十一)C-)C-反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白 生理功能生理功能 二、體液氨基酸二、體液氨基酸（amino acidamino acid，AAAA） 來源：消化道吸收、體內(nèi)合成、組織蛋白分解來源：消化道吸收、體內(nèi)合成、組織蛋白分解 作用：合

23、成蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌锘钚晕镔|(zhì)作用：合成蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌锘钚晕镔|(zhì) 分解途徑：分解途徑： 脫氨基成氨及脫氨基成氨及-酮酸酮酸( (轉(zhuǎn)變?yōu)樘?、脂肪或分解供能轉(zhuǎn)變?yōu)樘?、脂肪或分解供? ) 小部分脫羧基生成小部分脫羧基生成COCO2 2和胺類和胺類 體液氨基酸含量可反映體內(nèi)氨基酸代謝紊亂情況體液氨基酸含量可反映體內(nèi)氨基酸代謝紊亂情況 氨基酸代謝紊亂有遺傳性原發(fā)性和繼發(fā)性氨基酸代謝紊亂有遺傳性原發(fā)性和繼發(fā)性 （一）遺傳性原發(fā)性氨基酸代謝紊亂（一）遺傳性原發(fā)性氨基酸代謝紊亂 為遺傳性代謝酶缺陷引起，種類很多為遺傳性代謝酶缺陷引起，種類很多 是相關(guān)基因突變所致，至今已發(fā)現(xiàn)是相關(guān)基因突變所致

24、，至今已發(fā)現(xiàn)7070余種余種 絕大多數(shù)疾患罕見，而病情卻嚴重絕大多數(shù)疾患罕見，而病情卻嚴重 如果診斷足夠早，某些疾患可以治療如果診斷足夠早，某些疾患可以治療 1.1.氨基酸血癥（氨基酸血癥（AminoacidemiaAminoacidemia） 酶缺陷酶缺陷 在氨基酸代謝起點，其催化的氨基酸在血中增加在氨基酸代謝起點，其催化的氨基酸在血中增加 在代謝途徑中間，酶催化前的中間代謝物堆積在代謝途徑中間，酶催化前的中間代謝物堆積 有時因正常途徑受阻，通過旁路代謝的產(chǎn)物可增多有時因正常途徑受阻，通過旁路代謝的產(chǎn)物可增多 氨基酸血癥（氨基酸血癥（aminoaciduria)aminoaciduria)：

25、 氨基酸、或其中間代謝物、或其旁路代謝物在血氨基酸、或其中間代謝物、或其旁路代謝物在血 液中增高。液中增高。 如酪氨酸血癥、組氨酸血癥、精氨酸血癥等如酪氨酸血癥、組氨酸血癥、精氨酸血癥等 2. 2. 氨基酸尿癥（氨基酸尿癥（AminoaciduriaAminoaciduria） 血漿增多的氨基酸及其代謝物均從腎小球濾過血漿增多的氨基酸及其代謝物均從腎小球濾過 超出腎小管重吸收能力從尿排出即為氨基酸尿癥超出腎小管重吸收能力從尿排出即為氨基酸尿癥 尿液中濃度經(jīng)常比血漿更高尿液中濃度經(jīng)常比血漿更高 血漿和尿液氨基酸增多可同時存在血漿和尿液氨基酸增多可同時存在 稱某種氨基酸血癥或氨基酸尿癥有時是傳統(tǒng)習(xí)

26、慣稱某種氨基酸血癥或氨基酸尿癥有時是傳統(tǒng)習(xí)慣 腎小管細胞膜存在氨基酸載體轉(zhuǎn)運蛋白腎小管細胞膜存在氨基酸載體轉(zhuǎn)運蛋白 當(dāng)某種載體缺乏時，相應(yīng)氨基酸從尿中排出增加當(dāng)某種載體缺乏時，相應(yīng)氨基酸從尿中排出增加 血漿中這些氨基酸濃度可在正常范圍或偏低血漿中這些氨基酸濃度可在正常范圍或偏低 遺傳性氨基酸代謝紊亂的缺陷酶遺傳性氨基酸代謝紊亂的缺陷酶 及其血和尿中增高的成分及其血和尿中增高的成分( (帶帶* *為尿中氨基酸為尿中氨基酸) ) 疾病名稱疾病名稱 缺乏的酶缺乏的酶 血漿（尿）中增高的成分血漿（尿）中增高的成分 苯丙酮酸尿癥苯丙酮酸尿癥 苯丙氨酸羥化酶苯丙氨酸羥化酶 苯丙氨酸、苯丙氨酸、 *苯丙酮酸

27、苯丙酮酸 I I型酪氨酸血癥型酪氨酸血癥 延胡索酸乙酰乙酸酶延胡索酸乙酰乙酸酶 酪氨酸、甲硫氨酸酪氨酸、甲硫氨酸 尿黑酸尿癥尿黑酸尿癥 尿黑酸氧化酶尿黑酸氧化酶 尿黑酸（輕度）尿黑酸（輕度） 同型胱氨酸尿癥同型胱氨酸尿癥 胱硫醚合成酶胱硫醚合成酶 甲硫氨酸、同型胱氨酸甲硫氨酸、同型胱氨酸 組氨酸血癥組氨酸血癥 組氨酸酶組氨酸酶 組氨酸、丙氨酸組氨酸、丙氨酸 甘氨酸血癥甘氨酸血癥 甘氨酸氧化酶甘氨酸氧化酶 甘氨酸甘氨酸 支鏈酮酸尿癥支鏈酮酸尿癥 支鏈酮酸氧化酶支鏈酮酸氧化酶 纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸等纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸等 胱硫醚尿癥胱硫醚尿癥 胱硫醚酶胱硫醚酶 胱硫醚胱硫醚 型高脯氨酸血癥

28、型高脯氨酸血癥 脯氨酸氧化酶脯氨酸氧化酶 脯氨酸、脯氨酸、 *羥脯氨酸羥脯氨酸 精氨酸琥珀酸尿癥精氨酸琥珀酸尿癥 精氨酸琥珀酸酶精氨酸琥珀酸酶 谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸等谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸等 精氨酸血癥精氨酸血癥 精氨酸酶精氨酸酶 精氨酸、精氨酸、 *胱氨酸胱氨酸 胱氨酸尿癥胱氨酸尿癥 腎小管堿性氨基酸載體腎小管堿性氨基酸載體 *胱氨酸胱氨酸.精氨酸精氨酸.賴氨酸賴氨酸.鳥氨酸鳥氨酸 色氨酸代謝綜合癥色氨酸代謝綜合癥 腎小管中性氨基酸載體腎小管中性氨基酸載體 *所有中性氨基酸所有中性氨基酸 二羧基氨基酸尿癥二羧基氨基酸尿癥 腎小管酸性氨基酸載體腎小管酸性氨基酸載體 *谷氨酸、天冬氨酸谷氨

29、酸、天冬氨酸 亞氨基甘氨酸尿癥亞氨基甘氨酸尿癥 腎小管亞氨基酸載體腎小管亞氨基酸載體 *脯氨酸、羥脯氨酸、甘氨酸脯氨酸、羥脯氨酸、甘氨酸 （二）繼發(fā)性氨基酸代謝紊亂（二）繼發(fā)性氨基酸代謝紊亂 與氨基酸代謝有關(guān)的器官出現(xiàn)嚴重病變與氨基酸代謝有關(guān)的器官出現(xiàn)嚴重病變 如肝臟和腎臟疾患、蛋白質(zhì)營養(yǎng)不良、燒傷等如肝臟和腎臟疾患、蛋白質(zhì)營養(yǎng)不良、燒傷等 肝功能衰竭：支鏈氨基酸肝功能衰竭：支鏈氨基酸/ /芳香族氨基酸比值芳香族氨基酸比值 （BCAA/AAABCAA/AAA比值）下降比值）下降 繼發(fā)性腎性氨基酸尿：由腎小管損害、腎近曲小繼發(fā)性腎性氨基酸尿：由腎小管損害、腎近曲小 管功能障礙，使氨基酸重吸收減少

30、而引起管功能障礙，使氨基酸重吸收減少而引起 三、嘌呤核苷酸三、嘌呤核苷酸 （一）嘌呤核苷酸代謝一）嘌呤核苷酸代謝 嘌呤核苷酸的合成：從頭合成途徑、補救途徑嘌呤核苷酸的合成：從頭合成途徑、補救途徑 嘌呤核苷酸的分解：終產(chǎn)物是尿酸，人類不能再分解嘌呤核苷酸的分解：終產(chǎn)物是尿酸，人類不能再分解 嘌呤核苷酸合成代謝嘌呤核苷酸合成代謝 主要原料：主要原料： 5-5-磷酸核糖磷酸核糖 氨基酸氨基酸 一碳單位一碳單位 二、高尿酸血癥（二、高尿酸血癥（hyperuricemiahyperuricemia） 分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩類，以前者為多分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩類，以前者為多 原發(fā)性高尿酸血癥：原發(fā)性高尿酸血癥

31、： 遺傳性嘌呤代謝紊亂和遺傳性嘌呤代謝紊亂和/ /或尿酸排泄障礙引起或尿酸排泄障礙引起, 多數(shù)由多基因遺傳缺陷所致。病因不明，與代多數(shù)由多基因遺傳缺陷所致。病因不明，與代 謝綜合征關(guān)系密切謝綜合征關(guān)系密切 繼發(fā)性高尿酸血癥：繼發(fā)性高尿酸血癥： 高嘌呤飲食、腎臟疾病、血液病、藥物等引起高嘌呤飲食、腎臟疾病、血液病、藥物等引起 嘌呤代謝紊亂嘌呤代謝紊亂 在原發(fā)性高尿酸血癥的病因中約占在原發(fā)性高尿酸血癥的病因中約占1010 主要原因：嘌呤代謝酶缺陷主要原因：嘌呤代謝酶缺陷 大多數(shù)屬多基因遺傳缺陷，機制不明大多數(shù)屬多基因遺傳缺陷，機制不明 由單酶缺陷引起者僅占由單酶缺陷引起者僅占1 12 2 單酶缺陷

32、原因：單酶缺陷原因： 次黃嘌呤次黃嘌呤- -鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)(HGPRT)缺乏缺乏 PRPPPRPP合成酶亢進合成酶亢進 G-6-PG-6-P酶缺乏，引起酶缺乏，引起G-6-G-6-磷酸增多磷酸增多 沿磷酸戊糖途徑生成較多沿磷酸戊糖途徑生成較多PRPPPRPP，嘌呤合成增多，嘌呤合成增多 腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(APRT)(APRT)缺乏缺乏 腺嘌呤不能經(jīng)補救途徑合成腺苷酸而出現(xiàn)堆積腺嘌呤不能經(jīng)補救途徑合成腺苷酸而出現(xiàn)堆積 腺嘌呤代謝產(chǎn)物腺嘌呤代謝產(chǎn)物2 2，8-8-二羥腺嘌呤由尿排出增加二羥腺嘌呤由尿排出增加 可產(chǎn)生腎結(jié)石，可產(chǎn)生腎結(jié)石

33、，不是高尿酸血癥不是高尿酸血癥 2.2.尿酸排泄障礙尿酸排泄障礙 原發(fā)性高尿酸血癥中原發(fā)性高尿酸血癥中80809090具有尿酸排泄障礙具有尿酸排泄障礙 腎臟功能大多正常，僅存在尿酸排泄障礙腎臟功能大多正常，僅存在尿酸排泄障礙 屬多基因遺傳性疾病，易感基因和發(fā)病機制不明確屬多基因遺傳性疾病，易感基因和發(fā)病機制不明確 2.2.尿酸排泄障礙尿酸排泄障礙 腎臟對尿酸鹽的排泄有四個階段：腎臟對尿酸鹽的排泄有四個階段： 腎小球腎小球 濾過血漿中的全部尿酸鹽濾過血漿中的全部尿酸鹽 減少減少 近曲小管近曲小管 重吸收濾液中大部分重吸收濾液中大部分 增多增多 近端小管近端小管 再分泌再分泌 減少減少 髓絆降支髓

34、絆降支 被動重吸收被動重吸收 增多增多 終尿排出尿酸鹽只占濾過量的終尿排出尿酸鹽只占濾過量的6 61010 總量約為總量約為2.4mmol2.4mmol3.0mmol/d3.0mmol/d 腎臟尿酸排泄障礙涉及以上各個過程腎臟尿酸排泄障礙涉及以上各個過程 3.3.代謝綜合征與高尿酸血癥代謝綜合征與高尿酸血癥 原發(fā)性高尿酸血癥與肥胖、原發(fā)性高血壓、原發(fā)性高尿酸血癥與肥胖、原發(fā)性高血壓、 血脂異常、糖尿病、胰島素抵抗關(guān)系密切。血脂異常、糖尿病、胰島素抵抗關(guān)系密切。 高尿酸血癥是代謝綜合征的一個組成部分高尿酸血癥是代謝綜合征的一個組成部分 肥胖和高甘油三酯血癥是高尿酸血癥的相關(guān)因素肥胖和高甘油三酯血

35、癥是高尿酸血癥的相關(guān)因素 但血液尿酸和但血液尿酸和TG等之間相互作用的機制仍不清楚等之間相互作用的機制仍不清楚 4.4.高嘌呤飲食高嘌呤飲食 短時間內(nèi)從飲食攝入大量含嘌呤食物會生成大量尿酸短時間內(nèi)從飲食攝入大量含嘌呤食物會生成大量尿酸 超過腎臟排泄能力導(dǎo)致血液尿酸升高超過腎臟排泄能力導(dǎo)致血液尿酸升高 各類葷菜都含嘌呤，尤其是各種動物內(nèi)臟和海鮮各類葷菜都含嘌呤，尤其是各種動物內(nèi)臟和海鮮 嘌呤極高：腦嘌呤極高：腦. .肝肝. .腎腎. .心心. .蛤蜊蛤蜊. .鳳尾魚鳳尾魚. .沙丁魚沙丁魚. .肉汁等肉汁等 嘌呤較高蔬菜：菠菜嘌呤較高蔬菜：菠菜. .韭菜韭菜. .扁豆扁豆. .豌豆豌豆. .大豆

36、大豆. .豆制品等豆制品等 飲料：咖啡、濃茶含一定量嘌呤飲料：咖啡、濃茶含一定量嘌呤 酒類：啤酒可能性最大，烈性酒次之，葡萄酒不存在酒類：啤酒可能性最大，烈性酒次之，葡萄酒不存在 雞蛋和牛奶含豐富蛋白質(zhì)而嘌呤較低，水果中嘌呤很少雞蛋和牛奶含豐富蛋白質(zhì)而嘌呤較低，水果中嘌呤很少 5.5.各種腎臟疾病各種腎臟疾病 各種腎小球疾病各種腎小球疾病 濾過功能等減退濾過功能等減退 慢性鉛中毒慢性鉛中毒 腎小管損害腎小管損害 藥物競爭性抑制腎小管排泌尿酸：藥物競爭性抑制腎小管排泌尿酸： 雙氫克尿塞雙氫克尿塞/ /利尿酸利尿酸/ /速尿速尿/ /吡嗪酰胺吡嗪酰胺/ /小劑量阿司匹林小劑量阿司匹林 血液乳酸或酮

37、酸等有機陰離子濃度增高：血液乳酸或酮酸等有機陰離子濃度增高： 腎小管對尿酸的分泌受到競爭性抑制而排出減少腎小管對尿酸的分泌受到競爭性抑制而排出減少 6.6.細胞破壞增多細胞破壞增多 使核酸分解及尿酸生成增多：使核酸分解及尿酸生成增多： 骨髓增生性疾病核酸合成增加和周轉(zhuǎn)加速骨髓增生性疾病核酸合成增加和周轉(zhuǎn)加速 白血病、淋巴瘤、紅細胞增多癥等白血病、淋巴瘤、紅細胞增多癥等 惡性腫瘤的化療和放療后細胞破壞過多惡性腫瘤的化療和放療后細胞破壞過多 溶貧、溶貧、SLESLE、牛皮癬、心梗、肺結(jié)核等、牛皮癬、心梗、肺結(jié)核等 組織細胞破壞增多組織細胞破壞增多 高尿酸血癥和痛風(fēng)的病因分類高尿酸血癥和痛風(fēng)的病因分

38、類 類類 型型 病因或遺傳特征病因或遺傳特征 原發(fā)性高尿酸血癥原發(fā)性高尿酸血癥 尿酸排泄減少，占尿酸排泄減少，占80-90 多基因性常染色體顯性遺傳多基因性常染色體顯性遺傳 尿酸產(chǎn)生過多尿酸產(chǎn)生過多 從頭合成嘌呤過多從頭合成嘌呤過多(占原發(fā)性占原發(fā)性10-20) 多基因性常染色體顯性遺傳多基因性常染色體顯性遺傳 特異性酶缺陷特異性酶缺陷(占原發(fā)性占原發(fā)性1) 青春性原發(fā)性痛風(fēng)青春性原發(fā)性痛風(fēng) HGPRT部分缺乏，部分缺乏，X-連鎖連鎖 青春期尿酸結(jié)石癥青春期尿酸結(jié)石癥 （突變型）（突變型）PRS活性增強活性增強 Lesch-Nyhan Lesch-Nyhan綜合征綜合征 HGPRT完全缺乏，完

39、全缺乏，X-連鎖連鎖 Con gierke Con gierke病病 葡萄糖葡萄糖-6-磷酸酶缺乏或不足磷酸酶缺乏或不足 繼發(fā)性高尿酸血癥繼發(fā)性高尿酸血癥 尿酸排泄減少尿酸排泄減少 腎功能減退腎功能減退 慢性腎疾患慢性腎疾患 腎小球濾過減少腎小球濾過減少 糖尿病腎病糖尿病腎病 腎小管排泌尿酸減少腎小管排泌尿酸減少 高血壓、內(nèi)分泌疾病、高血壓、內(nèi)分泌疾病、 有機酸增加有機酸增加 、鉛中毒腎病、鉛中毒腎病 尿酸產(chǎn)生過多尿酸產(chǎn)生過多 骨髓增殖性疾?。喊籽?、多發(fā)性骨髓瘤、紅細胞增多癥骨髓增殖性疾?。喊籽?、多發(fā)性骨髓瘤、紅細胞增多癥 慢性溶血性貧血慢性溶血性貧血 全身擴散的癌癥，惡性腫瘤化療或放療全

40、身擴散的癌癥，惡性腫瘤化療或放療 嚴重的剝脫性牛皮癬嚴重的剝脫性牛皮癬 一、體液總蛋白定量一、體液總蛋白定量 二、體液白蛋白定量二、體液白蛋白定量 三、血清蛋白質(zhì)電泳三、血清蛋白質(zhì)電泳 四、免疫固定電泳四、免疫固定電泳 五、體液個別蛋白質(zhì)五、體液個別蛋白質(zhì) 六、體液氨基酸六、體液氨基酸 七、體液尿酸七、體液尿酸 第二節(jié)第二節(jié) 常用體液蛋白質(zhì)與非蛋白含氮化合物檢測項目常用體液蛋白質(zhì)與非蛋白含氮化合物檢測項目 一、一、 體液總蛋白體液總蛋白 體液總蛋白體液總蛋白 數(shù)量種類眾多數(shù)量種類眾多 定量測定時作了如下假定：定量測定時作了如下假定： 1.1.所有血漿蛋白是單純的多肽鏈，糖脂類和金所有血漿蛋白是

41、單純的多肽鏈，糖脂類和金 屬有機物等均不計在內(nèi)，其含氮量平均為屬有機物等均不計在內(nèi)，其含氮量平均為1616 2.2.各種蛋白質(zhì)理化性質(zhì)雖不同，各種蛋白質(zhì)理化性質(zhì)雖不同，但與化學(xué)試劑的但與化學(xué)試劑的 反應(yīng)性（如呈色、沉淀）一致。反應(yīng)性（如呈色、沉淀）一致。 測定蛋白質(zhì)時利用蛋白質(zhì)特有的結(jié)構(gòu)或性質(zhì)：測定蛋白質(zhì)時利用蛋白質(zhì)特有的結(jié)構(gòu)或性質(zhì)： 重復(fù)的肽鏈結(jié)構(gòu)；重復(fù)的肽鏈結(jié)構(gòu)； 分子中均含有氮原子；分子中均含有氮原子； 與色素結(jié)合的能力；與色素結(jié)合的能力； 沉淀后借濁度或光折射測定；沉淀后借濁度或光折射測定； 酪氨酸和色氨酸殘基對酚試劑反應(yīng)或紫外光吸收酪氨酸和色氨酸殘基對酚試劑反應(yīng)或紫外光吸收 臨床實驗

42、室測定體液蛋白質(zhì)的方法有多種臨床實驗室測定體液蛋白質(zhì)的方法有多種 各種方法性能和應(yīng)用情況不同各種方法性能和應(yīng)用情況不同 最多用的是雙縮脲法最多用的是雙縮脲法 一、一、 體液總蛋白體液總蛋白 （一）雙縮脲法（一）雙縮脲法（biurea method） 【測定原理】【測定原理】 蛋白質(zhì)中兩個相鄰肽鍵蛋白質(zhì)中兩個相鄰肽鍵(-CO-NH-)(-CO-NH-)在堿性溶液中能在堿性溶液中能 與二價銅離子作用產(chǎn)生穩(wěn)定的紫紅色絡(luò)和物。與二價銅離子作用產(chǎn)生穩(wěn)定的紫紅色絡(luò)和物。 此反應(yīng)與雙縮脲此反應(yīng)與雙縮脲( (兩個尿素縮合物兩個尿素縮合物H H2 2N-OC-NH-CO-N-OC-NH-CO- NHNH2 2)

43、 )在堿性溶液與在堿性溶液與CuCu2+ 2+作用形成紫紅色反應(yīng)相似。 作用形成紫紅色反應(yīng)相似。 因此將蛋白質(zhì)與堿性銅反應(yīng)的方法稱為雙縮脲法因此將蛋白質(zhì)與堿性銅反應(yīng)的方法稱為雙縮脲法 （一）雙縮脲法（一）雙縮脲法 【參考區(qū)間】【參考區(qū)間】 隨年齡增大有所增高，隨年齡增大有所增高，6060歲后則稍有下降。歲后則稍有下降。 新生兒新生兒:46:4670 g/L70 g/L，數(shù)月到，數(shù)月到2 2歲歲:51:5175g/L75g/L， 3 3歲及以上歲及以上:60:6080 g/L80 g/L。 成人成人:64:6483g/L(83g/L(直立行走直立行走) )和和606078g/L(78g/L(臥床

44、臥床) ) 【臨床意義】【臨床意義】 濃度下降常由白蛋白濃度下降而引起濃度下降常由白蛋白濃度下降而引起 濃度增高見于慢性炎癥等多克隆免疫球蛋白增多，濃度增高見于慢性炎癥等多克隆免疫球蛋白增多， 以及漿細胞病的單克隆免疫球蛋白增多癥。以及漿細胞病的單克隆免疫球蛋白增多癥。 （一）雙縮脲法（一）雙縮脲法 【方法評價】【方法評價】 （1 1）特異性：）特異性：至少含兩個至少含兩個-CONH-CONH-才能與才能與CuCu2+ 2+絡(luò)合， 絡(luò)合， 氨基酸及二肽無反應(yīng)，三肽以上才能反應(yīng)。氨基酸及二肽無反應(yīng)，三肽以上才能反應(yīng)。 體液小分子肽含量極低，可忽略不計。體液小分子肽含量極低，可忽略不計。 （2 2

45、）呈色一致性：）呈色一致性：因呈色強度與肽鍵數(shù)量即蛋白質(zhì)因呈色強度與肽鍵數(shù)量即蛋白質(zhì) 含量成正比，故各種蛋白質(zhì)呈色強度基本相同，含量成正比，故各種蛋白質(zhì)呈色強度基本相同， 為目前所有總蛋白測定方法中最好。為目前所有總蛋白測定方法中最好。 （一）雙縮脲法（一）雙縮脲法 【方法評價】【方法評價】 （3 3）臨床應(yīng)用：）臨床應(yīng)用： 檢測范圍檢測范圍1010120g/L120g/L 靈敏度不高，但很適合血清總蛋白濃度靈敏度不高，但很適合血清總蛋白濃度 對胸腹水總蛋白的檢測低限為對胸腹水總蛋白的檢測低限為0.47g/L0.47g/L 生物檢測限為生物檢測限為1.33g/L1.33g/L 胸腹腔積液胸腹腔

46、積液TPTP在在4.54.550 g/L50 g/L，可采用該法，可采用該法 蛋白質(zhì)濃度很低的腦脊液和尿液無法定量蛋白質(zhì)濃度很低的腦脊液和尿液無法定量 （二）測定體液總蛋白的其他方法（二）測定體液總蛋白的其他方法 1.1.染料結(jié)合法染料結(jié)合法 酸性環(huán)境蛋白質(zhì)帶正電荷，可與染料陰離子反應(yīng)酸性環(huán)境蛋白質(zhì)帶正電荷，可與染料陰離子反應(yīng) 而產(chǎn)生顏色改變。而產(chǎn)生顏色改變。 染料有氨基黑、麗春紅、考馬斯亮藍、鄰苯三酚紅染料有氨基黑、麗春紅、考馬斯亮藍、鄰苯三酚紅 鉬等，前兩種常作血清蛋白電泳的染料。鉬等，前兩種常作血清蛋白電泳的染料。 考馬斯亮藍可用于尿液、腦脊液等定量測定，雖簡考馬斯亮藍可用于尿液、腦脊液

47、等定量測定，雖簡 便和靈敏，但比色杯對染料有吸附作用。便和靈敏，但比色杯對染料有吸附作用。 鄰苯三酚紅鉬法沒有考馬斯亮藍法的缺點。鄰苯三酚紅鉬法沒有考馬斯亮藍法的缺點。 各法均存在與不同蛋白質(zhì)結(jié)合力不一致的問題各法均存在與不同蛋白質(zhì)結(jié)合力不一致的問題 （二）測定體液總蛋白的其他方法（二）測定體液總蛋白的其他方法 1.1.染料結(jié)合法染料結(jié)合法 鄰苯三酚紅鉬法鄰苯三酚紅鉬法（pyrogallol red molybdate，PRM） 原理：原理：在酸性介質(zhì)中，鄰苯三酚紅在酸性介質(zhì)中，鄰苯三酚紅- -鉬酸鹽與蛋白鉬酸鹽與蛋白 質(zhì)形成復(fù)合物，最大吸收峰從質(zhì)形成復(fù)合物，最大吸收峰從467nm467nm轉(zhuǎn)

48、移至轉(zhuǎn)移至594nm594nm。 靈敏度高，檢測下限約靈敏度高，檢測下限約101020mg/L20mg/L，上限約，上限約2g/L2g/L 試劑不吸附比色杯，可用于自動生化分析儀中試劑不吸附比色杯，可用于自動生化分析儀中 各種蛋白質(zhì)呈色程度不同，球蛋白約為白蛋白各種蛋白質(zhì)呈色程度不同，球蛋白約為白蛋白7070 加入適量十二烷基磺酸鈉，球蛋白反應(yīng)性有所升高加入適量十二烷基磺酸鈉，球蛋白反應(yīng)性有所升高 該法適用于蛋白質(zhì)濃度低的尿液、腦脊液等該法適用于蛋白質(zhì)濃度低的尿液、腦脊液等 （二）測定體液總蛋白的其他方法（二）測定體液總蛋白的其他方法 2. 2.凱氏定氮法（凱氏定氮法（Kjeldahl met

49、hodKjeldahl method） 1883 1883年建立，是經(jīng)典的蛋白質(zhì)測定方法。年建立，是經(jīng)典的蛋白質(zhì)測定方法。 原理：測定樣品中的含氮量，推算出蛋白質(zhì)含量。蛋原理：測定樣品中的含氮量，推算出蛋白質(zhì)含量。蛋 白質(zhì)中含氮量較為恒定，平均白質(zhì)中含氮量較為恒定，平均1616, ,即即1 1克氮相當(dāng)于克氮相當(dāng)于 6.256.25克蛋白質(zhì)?？说鞍踪|(zhì)。 準確性好，精密度高，靈敏度高，適用于任何形態(tài)的準確性好，精密度高，靈敏度高，適用于任何形態(tài)的 樣品測定，至今仍被認為是測定許多生物樣品中蛋白樣品測定，至今仍被認為是測定許多生物樣品中蛋白 質(zhì)含量的參考方法。質(zhì)含量的參考方法。 但操作復(fù)雜、費時，不

50、適合臨床常規(guī)測定。但操作復(fù)雜、費時，不適合臨床常規(guī)測定。 （二）測定體液總蛋白的其他方法（二）測定體液總蛋白的其他方法 3 3比濁法（比濁法（turbidimetry） 某些酸如三氯乙酸、磺基水楊酸等能與蛋白某些酸如三氯乙酸、磺基水楊酸等能與蛋白 質(zhì)結(jié)合而產(chǎn)生微細沉淀，由此產(chǎn)生的懸浮液質(zhì)結(jié)合而產(chǎn)生微細沉淀，由此產(chǎn)生的懸浮液 濁度大小與蛋白質(zhì)的濃度成正比。濁度大小與蛋白質(zhì)的濃度成正比。 優(yōu)點是操作簡便、靈敏度高，優(yōu)點是操作簡便、靈敏度高， 可測定尿液、腦脊液等蛋白質(zhì)較低的樣品?？蓽y定尿液、腦脊液等蛋白質(zhì)較低的樣品。 缺點是影響濁度大小的因素較多，包括加入缺點是影響濁度大小的因素較多，包括加入 試

51、劑的手法、混勻技術(shù)、反應(yīng)溫度等，且各試劑的手法、混勻技術(shù)、反應(yīng)溫度等，且各 種蛋白質(zhì)形成的濁度亦有較大的差別。種蛋白質(zhì)形成的濁度亦有較大的差別。 （二）測定體液總蛋白的其他方法（二）測定體液總蛋白的其他方法 3 3比濁法比濁法 芐乙氯銨法芐乙氯銨法 是目前臨床上較多應(yīng)用的比濁法是目前臨床上較多應(yīng)用的比濁法 原理：原理：芐乙氯銨在堿性條件下與蛋白質(zhì)形成沉芐乙氯銨在堿性條件下與蛋白質(zhì)形成沉 淀，其懸浮液穩(wěn)定，淀，其懸浮液穩(wěn)定，660nm 660nm 處進行濁度測定。處進行濁度測定。 靈敏度、準確度、對白蛋白和球蛋白的反應(yīng)一靈敏度、準確度、對白蛋白和球蛋白的反應(yīng)一 致性都優(yōu)于其他比濁法，檢測范圍較廣

52、。致性都優(yōu)于其他比濁法，檢測范圍較廣。 精密度仍不夠理想。精密度仍不夠理想。 （二）測定體液總蛋白的其他方法（二）測定體液總蛋白的其他方法 4 4. 酚試劑法酚試劑法（phenol reagent method） FolinFolin在在19211921年首創(chuàng)，用于酪氨酸和色氨酸測定年首創(chuàng)，用于酪氨酸和色氨酸測定 后由吳憲用于蛋白質(zhì)定量后由吳憲用于蛋白質(zhì)定量 原理：原理：蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸使磷鎢酸和磷鉬蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸使磷鎢酸和磷鉬 酸還原為鎢藍和鉬藍。酸還原為鎢藍和鉬藍。 靈敏度較高靈敏度較高 各種蛋白質(zhì)酪氨酸和色氨酸含量不同，各種蛋白質(zhì)酪氨酸和色氨酸含量不同， 如如ALBALB含

53、色氨酸含色氨酸0.20.2，球蛋白色氨酸，球蛋白色氨酸2 23 3 因此只適合測定單一蛋白質(zhì)。因此只適合測定單一蛋白質(zhì)。 受還原性物質(zhì)干擾受還原性物質(zhì)干擾( (帶帶-SH-SH化合物、糖類、酚類等化合物、糖類、酚類等) ) （二）測定體液總蛋白的其他方法（二）測定體液總蛋白的其他方法 5直接紫外吸收法直接紫外吸收法 根據(jù)蛋白質(zhì)在根據(jù)蛋白質(zhì)在280nm280nm或或215/225nm215/225nm紫外吸收值，紫外吸收值， 計算蛋白質(zhì)含量。計算蛋白質(zhì)含量。 蛋白質(zhì)濃度（蛋白質(zhì)濃度（g/L）1.45A280nm-0.74A260nm 準確性受蛋白中芳香族氨基酸含量影響甚大準確性受蛋白中芳香族氨基

54、酸含量影響甚大 而且尿酸和膽紅素在而且尿酸和膽紅素在280nm280nm附近有干擾。附近有干擾。 不適合血清、尿液等組成復(fù)雜的體液蛋白質(zhì)，不適合血清、尿液等組成復(fù)雜的體液蛋白質(zhì)， 常用于較純的酶、免疫球蛋白等測定。常用于較純的酶、免疫球蛋白等測定。 二、體液白蛋白二、體液白蛋白 【檢測方法】【檢測方法】 包括電泳法、免疫化學(xué)法和染料結(jié)合法。包括電泳法、免疫化學(xué)法和染料結(jié)合法。 電泳法只能測其百分含量，乘電泳法只能測其百分含量，乘TPTP濃度得其濃度濃度得其濃度 用于用于ALBALB定量不方便且精密度不如直接定量定量不方便且精密度不如直接定量 免疫化學(xué)法包括免疫比濁法和放射免疫法等免疫化學(xué)法包括

55、免疫比濁法和放射免疫法等 特異性好、靈敏度高，特異性好、靈敏度高，ALBALB易純化、抗血清易制備，易純化、抗血清易制備， 適合尿液和腦脊液等低濃度適合尿液和腦脊液等低濃度ALBALB的測定的測定 血清血清ALBALB測定可采用染料結(jié)合法測定可采用染料結(jié)合法 二、體液白蛋白二、體液白蛋白 【檢測方法】【檢測方法】 染料結(jié)合法染料結(jié)合法 原理：原理：陰離子染料溴甲酚綠陰離子染料溴甲酚綠(bromcresol green (bromcresol green ，BCG)BCG) 溴甲酚紫溴甲酚紫(bromcresol purple (bromcresol purple ，BCP)BCP)能與能與AL

56、BALB結(jié)合，結(jié)合， 其最大吸收峰發(fā)生轉(zhuǎn)移。其最大吸收峰發(fā)生轉(zhuǎn)移。 BCG BCG與與ALBALB形成的藍綠色復(fù)合物在形成的藍綠色復(fù)合物在630nm630nm處有吸收峰，處有吸收峰， BCP BCP與與ALBALB形成的綠色復(fù)合物在形成的綠色復(fù)合物在603nm603nm處有吸收峰。處有吸收峰。 而球蛋白基本不結(jié)合這些染料。而球蛋白基本不結(jié)合這些染料。 二、體液白蛋白二、體液白蛋白 【參考區(qū)間】【參考區(qū)間】 隨年齡有所變化，隨年齡有所變化，0 04 4天：天：282844 g/L44 g/L 4 4天天1414歲：歲：383854 g/L54 g/L，此后下降，此后下降 成人：成人：353552

57、 g/L52 g/L，6060歲為歲為323246 g/L46 g/L 走動者比臥床者平均高走動者比臥床者平均高3 g/L3 g/L 【醫(yī)學(xué)決定水平】：【醫(yī)學(xué)決定水平】：35g35gL L時正常時正常 28 2834g34gL L為輕度缺乏為輕度缺乏 21 2127g27gL L為中度缺乏為中度缺乏 21g21gL L則嚴重缺乏則嚴重缺乏 低于低于28g28gL L時，會出現(xiàn)組織水腫時，會出現(xiàn)組織水腫 【臨床意義】【臨床意義】 ALBALB增高僅見于嚴重失水時，無重要臨床意義增高僅見于嚴重失水時，無重要臨床意義 低低ALBALB血癥見于下述許多疾病情況：血癥見于下述許多疾病情況： （1 1）白

58、蛋白合成不足）白蛋白合成不足： 嚴重肝臟合成功能下降如肝硬化、重癥肝炎嚴重肝臟合成功能下降如肝硬化、重癥肝炎 蛋白質(zhì)營養(yǎng)不良或吸收不良蛋白質(zhì)營養(yǎng)不良或吸收不良 ALBALB受飲食蛋白質(zhì)攝入量影響，可作為營養(yǎng)狀態(tài)受飲食蛋白質(zhì)攝入量影響，可作為營養(yǎng)狀態(tài) 的評價指標，早期缺乏時不易檢出。的評價指標，早期缺乏時不易檢出。 二、體液白蛋白二、體液白蛋白 【臨床意義】【臨床意義】 （2 2）白蛋白丟失：）白蛋白丟失： 尿中丟失如腎病綜合征、慢性腎小球腎炎、尿中丟失如腎病綜合征、慢性腎小球腎炎、 糖尿病腎病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎病等糖尿病腎病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎病等 胃腸道蛋白質(zhì)丟失，因黏膜炎癥壞死胃腸道蛋白

59、質(zhì)丟失，因黏膜炎癥壞死 皮膚丟失如燒傷及滲出性皮炎等皮膚丟失如燒傷及滲出性皮炎等 （3 3）白蛋白分解代謝增加：）白蛋白分解代謝增加： 組織損傷如外科手術(shù)和創(chuàng)傷組織損傷如外科手術(shù)和創(chuàng)傷 組織分解增加如感染性炎癥疾病等組織分解增加如感染性炎癥疾病等 二、體液白蛋白二、體液白蛋白 【臨床意義】【臨床意義】 （4 4）白蛋白的分布異常：）白蛋白的分布異常： 門靜脈高壓時大量門靜脈高壓時大量ALBALB從血管內(nèi)漏入腹腔從血管內(nèi)漏入腹腔 （5 5）無白蛋白血癥）無白蛋白血癥： 極少見的遺傳性缺陷，血漿極少見的遺傳性缺陷，血漿ALBALB含量常低于含量常低于1g/L1g/L 二、體液白蛋白二、體液白蛋白

60、【方法評價】【方法評價】 （1 1）兩種染料結(jié)合法均操作簡便、重復(fù)性好）兩種染料結(jié)合法均操作簡便、重復(fù)性好 （2 2）特異性）特異性 BCGBCG與與ALBALB為快反應(yīng)，為快反應(yīng)，3030秒基本完全秒基本完全 血清血清和和球蛋白能起慢反應(yīng)，程度較球蛋白能起慢反應(yīng)，程度較ALBALB低低 縮短反應(yīng)時間能避免非特異性反應(yīng)縮短反應(yīng)時間能避免非特異性反應(yīng) BCPBCP與與ALBALB即時完全反應(yīng)即時完全反應(yīng) 無球蛋白非特異性干擾無球蛋白非特異性干擾 但但BCPBCP與牛、豬等與牛、豬等ALBALB的反應(yīng)性比人的反應(yīng)性比人ALBALB程度低程度低 二、體液白蛋白二、體液白蛋白 【方法評價】【方法評價】