牛津杯和打孔法抑菌試驗(yàn)

1、牛津杯法和打孔法抑菌試驗(yàn) u擴(kuò)散法又包括紙片法、牛津杯法和打孔法。擴(kuò)散法又包括紙片法、牛津杯法和打孔法。 u由于擴(kuò)散法操作簡單，成本低，已經(jīng)被大多數(shù)由于擴(kuò)散法操作簡單，成本低，已經(jīng)被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室和基層單位所采用實(shí)驗(yàn)室和基層單位所采用稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法，通過測試細(xì)菌在含稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法，通過測試細(xì)菌在含不同濃度藥物培養(yǎng)基內(nèi)的生長情況，判斷其最低抑菌濃度不同濃度藥物培養(yǎng)基內(nèi)的生長情況，判斷其最低抑菌濃度（MIC）。）。擴(kuò)散法擴(kuò)散法 藥敏試驗(yàn)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)，簡稱藥敏試驗(yàn)，是指對敏感性不能預(yù)測的分離菌株進(jìn)行試驗(yàn)，測試抗菌藥在體外對病原微生物有無抑制作用，以指導(dǎo)選擇治療

2、藥物和了解區(qū)域內(nèi)常見病原菌耐藥性變遷，有助于經(jīng)驗(yàn)性治療選藥 藥敏試驗(yàn)方法主要有兩種，即擴(kuò)散法和稀釋法。藥敏試驗(yàn)方法主要有兩種，即擴(kuò)散法和稀釋法。其中擴(kuò)散法屬手工測試方法，通過測試藥物紙片其中擴(kuò)散法屬手工測試方法，通過測試藥物紙片或者牛津杯在固體培養(yǎng)基上的抑菌圈的大小，判或者牛津杯在固體培養(yǎng)基上的抑菌圈的大小，判斷細(xì)菌對該種藥物是否敏感。斷細(xì)菌對該種藥物是否敏感。稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法，通過測試稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法，通過測試細(xì)菌在含不同濃度藥物培養(yǎng)基內(nèi)的生長情況，判細(xì)菌在含不同濃度藥物培養(yǎng)基內(nèi)的生長情況，判斷其最低抑菌濃度（斷其最低抑菌濃度（MIC）。）。 由于擴(kuò)散法操作簡

3、單，成本低，已經(jīng)被大多數(shù)實(shí)由于擴(kuò)散法操作簡單，成本低，已經(jīng)被大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室和基層單位所采用。驗(yàn)室和基層單位所采用。擴(kuò)散法又包括紙片法、牛津杯法和打孔法。擴(kuò)散法又包括紙片法、牛津杯法和打孔法。 一、實(shí)驗(yàn)原理u將培養(yǎng)基平板置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，一方面試驗(yàn)菌（指將培養(yǎng)基平板置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，一方面試驗(yàn)菌（指示菌）開始生長繁殖；另一方面抗生素呈球面擴(kuò)散，示菌）開始生長繁殖；另一方面抗生素呈球面擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度，離杯越近，抗生素濃度越大，形成遞減的梯度濃度，離杯越近，抗生素濃度越大，離杯越遠(yuǎn)抗生素濃度越小。離杯越遠(yuǎn)抗生素濃度越小。u在牛津杯周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌的生長被抑制，在牛津杯周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的

4、細(xì)菌的生長被抑制，形成透明的抑菌圈。形成透明的抑菌圈。u抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度（藥敏實(shí)驗(yàn)）或藥物對指示細(xì)菌的抑菌程度（抑菌（藥敏實(shí)驗(yàn)）或藥物對指示細(xì)菌的抑菌程度（抑菌試驗(yàn)）。試驗(yàn)）。一、實(shí)驗(yàn)原理u抗生素濃度越高，抑菌圈越大。抗生素濃度越高，抑菌圈越大。u在抑菌圈的邊緣處，瓊脂培養(yǎng)基中所含抑菌物質(zhì)的濃度即為在抑菌圈的邊緣處，瓊脂培養(yǎng)基中所含抑菌物質(zhì)的濃度即為該菌懸液中對該種指示菌的最低抑菌濃度（該菌懸液中對該種指示菌的最低抑菌濃度（MIC） 。u抑菌圈直徑與藥物對測試菌的最低抑菌濃度抑菌圈直徑與藥物對測試菌的最低抑菌濃度 呈負(fù)相關(guān)，即

5、呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，抑菌圈愈大，MIC愈小。愈小。二、實(shí)驗(yàn)材料培養(yǎng)基：培養(yǎng)基： 牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基菌種：菌種： 大腸桿菌（大腸桿菌（E.coli) 金黃色葡萄球菌（金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus) 枯草芽孢桿菌（枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)藥品：阿莫西林、黃芪多糖、藥品：阿莫西林、黃芪多糖、 其他：牛津杯、培養(yǎng)皿、酒精棉、酒精燈、涂布器、移其他：牛津杯、培養(yǎng)皿、酒精棉、酒精燈、涂布器、移液槍、液槍、 1mL、200uL 槍頭、槍頭、 恒溫培養(yǎng)箱、恒溫培養(yǎng)箱、 超凈工作臺(tái)、超凈工作臺(tái)、接種環(huán)接種環(huán)“牛津杯”是放被測抗

6、生素的不銹鋼小管，小管內(nèi)徑為6mm，外徑為8mm，高10mm的圓筒形管子，管子的重量盡可能相等。 牛津杯牛津杯三、實(shí)驗(yàn)操作1. 倒平板倒平板：將已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基加熱到完全融化，倒在培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿約20ml，凝固。2. 標(biāo)記標(biāo)記：菌種、牛津杯擺放位置、藥物及其 濃度3. 制備菌懸液制備菌懸液：用生理鹽水洗下試管內(nèi)的菌苔并稀釋。4. 菌液涂布菌液涂布：吸取1mL 菌液入平板表面，用涂布器涂布將菌液涂布均勻5. 擺放牛津杯擺放牛津杯：在培養(yǎng)基表面垂直擺放牛津杯，輕輕加壓，使其與培養(yǎng)基接觸無空隙。6.加入待檢藥液加入待檢藥液：在杯中加入不同稀釋度的藥液或待檢樣品。7. 孵育孵育：加滿后在37 培養(yǎng)1

7、618 h。8. 結(jié)果報(bào)告：結(jié)果報(bào)告：用毫米尺量取抑菌圈直徑，參考表的標(biāo)準(zhǔn)判讀用毫米尺量取抑菌圈直徑，參考表的標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果，按敏感（結(jié)果，按敏感（S）、中介（）、中介（I）、耐藥（）、耐藥（R）報(bào)）報(bào) 以牛津杯周圍沒有肉眼可見生長物區(qū)域?yàn)橐志?，根以牛津杯周圍沒有肉眼可見生長物區(qū)域?yàn)橐志?，根?jù)抑菌圈直徑大小判斷細(xì)菌對抗菌藥的敏感性。據(jù)抑菌圈直徑大小判斷細(xì)菌對抗菌藥的敏感性。 藥敏試驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑（毫米）藥敏試驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑（毫米）20極敏感極敏感15-20高敏感高敏感 10-14中敏感中敏感 10低敏感低敏感 0不敏感不敏感 注意事項(xiàng)在超凈工作臺(tái)中或酒精燈旁操作平板倒好，一定要平 牛津杯立直，才能保證杯內(nèi)抑菌物質(zhì)均勻的向四周擴(kuò)散 牛津杯均勻擺放于培養(yǎng)基上，位置安排適中，防止出現(xiàn)抑制圈重疊，可在平皿中央擺一個(gè)，外周等距離擺56個(gè)。思考題青霉素