高等藥物分析復(fù)習(xí)資料

1、1、簡(jiǎn)述現(xiàn)代藥物分析較傳統(tǒng)藥物分析的新特點(diǎn)。靜態(tài)分析T動(dòng)態(tài)分析體外分析T體內(nèi)分析品質(zhì)分析T生物活性分析單一技術(shù)T聯(lián)用技術(shù)小樣本分析T高通量分析人工分析T計(jì)算機(jī)輔助分析特點(diǎn)：（1）新的藥物分析理論、方法、技術(shù)迅速發(fā)展，具有高通量、高靈敏、高選擇性 優(yōu)點(diǎn)；（2）分析儀器自動(dòng)化、數(shù)字化、仿生化和計(jì)算機(jī)化并向智能化、信息化方向發(fā)展；（3）藥物分析測(cè)定對(duì)象、內(nèi)容亦有很大的擴(kuò)展。如對(duì)藥物的晶型和構(gòu)型研究、藥物中存在的有關(guān) 物質(zhì)（含降解產(chǎn)物）結(jié)構(gòu)研究、手性藥物的分離、藥物代謝研究、基因工程藥物分析、復(fù)雜 物質(zhì)分離分析（含中藥成分分析）等。2、簡(jiǎn)述現(xiàn)代藥物分析的新進(jìn)展主要有哪些方面。 分析領(lǐng)域的發(fā)展：藥物質(zhì)量

2、控制、手性藥物分析、臨床藥學(xué)、中藥與天然藥物分析、 藥物代謝分析、法醫(yī)毒物分析、興奮劑檢測(cè)、藥物制劑分析、創(chuàng)新藥物研究、藥品上市后的 評(píng)價(jià)。 分析技術(shù)的發(fā)展：核磁共振波譜、熒光分析法、薄層色譜法、紫外-可見分光光度法、高效液相色譜法，毛細(xì)管電泳，多維色譜及聯(lián)用技術(shù)。色譜-光譜聯(lián)用技術(shù)使高分離性能的液相色譜技術(shù)與能夠獲得豐富化學(xué)結(jié)構(gòu)信息的光譜技術(shù)相結(jié)合，是現(xiàn)代藥學(xué)研究領(lǐng)域中最強(qiáng)有力的分析工具之一。3、常用的手性固定相有哪些？并簡(jiǎn)述其各自的原理。 環(huán)糊精衍生物手性固定相：拆分機(jī)制一般認(rèn)為是由于環(huán)糊精特殊的桶狀結(jié)構(gòu)，可與對(duì)映體形成非對(duì)映的包合物而達(dá)到拆分目的。 冠醚類手性固定相：用手性冠醚作固定相分

3、離手性化合物的主要依據(jù)是溶質(zhì)分子與手性冠醚環(huán)腔形成主客體絡(luò)合物的穩(wěn)定常數(shù)不同冠醚的手性“臂障越大，其手性識(shí)別能力越高. 多糖類手性固定相：它們本身表現(xiàn)出一定的手性識(shí)別能力，但其直接做固定相選擇性低， 然而其衍生物作為 CSP具有較高的手性識(shí)別能力，能拆分大量的對(duì)映體。 Pirkle型手性固定相（刷型固定相）：該類固定相通過含末端梭基或異氰酸酷基手性前體與氨基鍵合硅膠進(jìn)行縮合反應(yīng)，分別形成含酞胺或服型結(jié)構(gòu)CSP,廣泛用于氨基酸、乙內(nèi)酞脈、內(nèi)酞脈、胺類、醇類及硫醇類藥物對(duì)映體拆分。在汝類CSP上的對(duì)映體分離通常通過以下幾種惟用而發(fā)生：11）枕甘離常站 CSP芳?jí)牡?*# 和卜授體之間詢柞用；（2）

4、 CSP上的仲胺離基基團(tuán)口潅噴的酸性質(zhì)于據(jù)基、氨基之間的氫鍵作 用；（3）偶極偶股竹, 1.4大代機(jī)菲極性基拭離近匚卩手性屮心而產(chǎn)生的空間丄體效應(yīng). 配體交換型（L EC）手性固定相：是利用配體交換的分離機(jī)制而制成的固定相，即一個(gè)金屬離子可結(jié)合一個(gè)配體分子和一個(gè)對(duì)映體溶質(zhì)分子，形成可逆的非對(duì)映體復(fù)合物， 以達(dá)到分離對(duì)映體的目的，這類手性固定相的液相色譜多用于氨基酸或者肽類的拆分，這類色譜多用含水流動(dòng)相，其中加入適量螯合的金屬離子 大環(huán)抗生素類手性固定相：是將包含多個(gè)手性中心的大環(huán)抗生素固定到硅膠上形成的一類用于對(duì)映體拆分的新型手性固定相。 分子印跡手性固定相：它是將功能單體，在模板分子（目標(biāo)分

5、子，又稱印跡分子）的存在下，交聯(lián)聚合，然后洗脫除去模板分子，這樣制得的聚合物，在空間結(jié)構(gòu)和功能基排布上與目標(biāo)分子具有互補(bǔ)結(jié)構(gòu)的空穴，因此在分子識(shí)別中有著特殊的選擇性和良好的應(yīng)用前景 蛋白質(zhì)類手性固定相： 其具有大量不同的可與樣品分子結(jié)合的部位，此外樣品組分的保留和選擇性易受流動(dòng)相的 pH、離子強(qiáng)度、有機(jī)溶劑等影響，因此蛋白質(zhì)CSP的手性選擇性 較其他CSP要高，是高效液相色譜分離中最具吸引力的手性固定相之一 手性聚合物固定相：該類固定相使用最多的有兩種：一種是通過在手性條件下不對(duì)稱聚合制備的，如用手性催化劑；另一種是用手性單體的方法制備的。用這兩種技術(shù)可制備有手性 識(shí)別功能的聚合物，如聚甲基丙

6、烯的三苯甲酷，聚酞胺等，這類手性聚合物可涂漬或鍵合到硅膠上制成CSP。4、手性高效液相色譜法的分類有哪些？并簡(jiǎn)述其各自的原理。(1) 間接法：對(duì)映體的混合物與手性試劑結(jié)合，形成一對(duì)非對(duì)映異構(gòu)體，然后以常規(guī)固定相或手性方法分離，這種方法也稱為柱前衍生化法或手性衍生化試劑法(CDR)。此法主要適用于不宜直接拆分的樣品，無(wú)須使用價(jià)格昂貴的手性柱。但此法對(duì)衍生化試劑純度要求較高， 所使用的衍生化試劑必須具有足夠的光學(xué)純度和穩(wěn)定性，在衍生化反應(yīng)和色譜條件下穩(wěn)定；且衍生化條件復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，所得單一對(duì)映體有時(shí)不易與衍生化試劑分離。但該法仍不失為一種普遍、高效的對(duì)映體拆分方法。(2) 直接法：不做柱前衍生化

7、處理，直接以手性固定相或手性流動(dòng)相拆分的方法，稱為直接法。又分為手性固定相法 (CSP)和手性流動(dòng)相添加劑法(CMPA)。手性固定相(CSP)法是以手 性固定相直接與對(duì)映體外消旋物相作用，因生成的短暫的復(fù)合物穩(wěn)定性不同，從而引起二者柱內(nèi)保留時(shí)間不同而進(jìn)行分離的方法。目前，以商品出售的手性固定相有上百種之多，具有簡(jiǎn)便、快速、立體選擇性強(qiáng)、適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。手性流動(dòng)相添加劑法(CMPA)又稱手性添加劑法，這種拆分法是在流動(dòng)相中加入手性試劑，利用手性試劑與各對(duì)映體結(jié)合的穩(wěn)定常數(shù)不同，以及藥物與結(jié)合物在固定相上分配系數(shù)的不同來進(jìn)行分離。此法不需昂貴的手性柱， 亦無(wú)須進(jìn)行柱前衍生，手性添加劑可視要求而更

8、換，使用比較方便。5、毛細(xì)管電泳的種類有哪些？毛細(xì)管電泳分離的驅(qū)動(dòng)力是什么？毛細(xì)管電泳比高效液相色譜高效的原因是什么？種類：毛細(xì)管電泳根據(jù)分離模式的不同，可以分為毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MECC或MEKC)、毛細(xì)管凝膠電泳 (CaPillary Gel Electrophoresis，CGE)、毛細(xì)管電色 譜(CaPillary eleetrochromatogaphy， CEC)、毛細(xì)管等電聚焦 (CaPillary isoeleetric focusing, CIEF)、毛細(xì)管等速電泳(CaPillary Isotachophoresis， CITP)等。毛細(xì)管區(qū)帶電

9、泳(CZE)是毛細(xì)管電泳的最基本的工作方式。它的分離機(jī)制是基于各被測(cè) 物質(zhì)在溶液中的淌度差異，影響組分淌度的因素有組分的荷質(zhì)比、結(jié)構(gòu)和體積。CZE是最簡(jiǎn)單也是應(yīng)用最廣的一種模式，可用于氨基酸、膚、蛋白質(zhì)、簡(jiǎn)單離子和對(duì)映體等分析。膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MEKC)是采用表面活性劑在運(yùn)行緩沖液內(nèi)形成動(dòng)態(tài)膠束，利用樣 品各組分在水相、膠束相兩相間分配行為上的差異進(jìn)行分離，是色譜技術(shù)和電泳技術(shù)的結(jié)合。毛細(xì)管凝膠電泳(CGE)是將凝膠充入毛細(xì)管中作支持物，不同體積的溶質(zhì)分子在起分子 篩作用的凝膠中得以分離。凝膠粘性大、抗對(duì)流、能減少溶質(zhì)擴(kuò)散，柱效極高，但是CGE制備困難，易產(chǎn)生空泡。后來發(fā)展了無(wú)膠篩分，用粘

10、度低的線性聚合物溶液代替高粘度的聚 丙烯酞胺，同樣起到了分子篩的作用，而且比凝膠柱便宜、壽命長(zhǎng)，但是柱效稍低。CGE現(xiàn)己廣泛用于DNA片段的分析。毛細(xì)管等電聚焦(CIEF)用兩性電解質(zhì)在毛細(xì)管內(nèi)建立pH梯度，使各種不同等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)在電場(chǎng)的作用下遷移到等電點(diǎn)的位置，形成一非常窄的聚焦區(qū)帶?？捎糜跍y(cè)定蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)、分離異構(gòu)體和其它方法難以分離的蛋白質(zhì)。毛細(xì)管等速電泳（CITP）可用較大內(nèi)徑的毛細(xì)管，在微制備中很有用途，可作為柱前濃縮方法用于富集樣品。毛細(xì)管陣列電泳（CapillaryArrayEleetrophoresiS ， CAE）的分離模式漸漸呈現(xiàn)出了廣闊的應(yīng)用發(fā)展前景和趨勢(shì)。與傳統(tǒng)聚丙

11、烯酞胺凝膠板電泳相似，可以進(jìn)行多道平行分析，毛細(xì)管陣列電泳即是采用多根毛細(xì)管組成的陣列進(jìn)行多道分析的一種分離模式。毛細(xì)管電泳分離的驅(qū)動(dòng)力：在毛細(xì)管中陽(yáng)離子、中性分子和陰離子自身淌度或/和分配系數(shù)不同。在高效毛細(xì)管電泳中，電滲流是推動(dòng)溶液移動(dòng)的驅(qū)動(dòng)力，它使柱中溶液整體向前勻速移動(dòng)，界面滯留現(xiàn)象很小，即以塞式移動(dòng)（平流），而高效液相色譜中則是以拋物線形狀流動(dòng)（層流），故高效毛細(xì)管電泳中的峰展很小，柱效要高的多。6、HPLC-ESI-MS聯(lián)用分析條件選擇時(shí)需考慮的主要因素有哪些?流動(dòng)相：常用流動(dòng)相為水，甲醇、乙腈及它們的混合物，需要調(diào)節(jié)pH時(shí)還可使用醋酸、甲酸或它們的銨鹽溶液，應(yīng)避免磷酸鹽或離子對(duì)試

12、劑等。流量：流量對(duì)分析也有較大的影響， 要根據(jù)柱內(nèi)徑和接口的不同來選擇流量。較小的流速可獲得較好離子化效率。 盡量選內(nèi)徑小的色譜柱。 但是要兼顧分析速度的因素， 因此多采用內(nèi) 徑2.1mm的色譜柱，0.20.4ml/min的流速。離子檢測(cè)模式：堿性物質(zhì)選擇正離子檢測(cè)模式，可用醋酸或甲酸使試樣酸化至pH=pKa-2 ；酸性物質(zhì)，pH值在（pKa+2），負(fù)離子檢測(cè)。溫度：接口的干燥氣體溫度應(yīng)高于待分析物沸點(diǎn)20C左右，同時(shí)要考慮物質(zhì)的熱穩(wěn)定性和流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例。7、在進(jìn)行天然藥物HPLC-UV分析時(shí)，是否可以直接對(duì)得到的單一色譜峰進(jìn)行含量測(cè)定？一般來說是不可以直接對(duì)得到的單一色譜峰進(jìn)行含量測(cè)

13、定。HPLC-UV作定量分析，依據(jù)的是峰面積（早期也用過峰高），而峰面積會(huì)因多種因素而變化：色譜柱流動(dòng)相柱 溫。上述三個(gè)因素都會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間的變化，峰面積也會(huì)因此有大小不同的變異。另外就是UV檢測(cè)器，波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度會(huì)因使用時(shí)間，儀器設(shè)計(jì)（如雜散光大?。h(huán)境溫濕度的改變等而變化，如果待測(cè)物的最大吸收峰的帶寬較窄，或采用末端吸收的時(shí)候，尤其明顯。所以作含量測(cè)定的時(shí)候一般都用標(biāo)準(zhǔn)曲線法或標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法。另外值得注意的是所謂單一色譜峰，并不一定是單一化合物，需要對(duì)峰的純度作判斷。但是在某些情況下，也可以直接對(duì)得到的單一色譜峰，作出含量（濃度）判斷。比如同 一類化合物（如黃芪皂苷類，黃酮類），可以用隨行的一

14、個(gè)化合物的標(biāo)樣來估算別的化合物， 因?yàn)樗鼈兊淖贤馓卣骱芟嗨?，這也是歸一化法的基礎(chǔ)； 再比如同一套色譜系統(tǒng)上測(cè)出的校正因子或工作曲線，在以后的幾天內(nèi)，可能變化不大，那么這幾天也可以不隨行標(biāo)樣。8簡(jiǎn)述高速逆流色譜的原理HSCCC同-般的逆輒色譜技術(shù)一樣也是星尸液-護(hù)分配原理其獨(dú)特之處在于它 是淫立在單向性流體動(dòng)力平御怵系之上肋一種逆流邑講分離方法儀器匸作時(shí)，互不釧 洛的兩4U瀋刑任繞朮螺桂低的聚囚氟乙烯骨內(nèi)具冇單向性流慷動(dòng)力屮臨忡【邑即在一定 的漲旋管轉(zhuǎn)動(dòng)（襯星運(yùn)動(dòng)）遠(yuǎn)度卜妙堤從尾竭遲人Fi瑞和它將穿過用端松移向首端*同 樣，如黑從庁城送人尾端相它仝穿過tns相而移向螺旗管的搭瓠 如果用其中的幕一

15、 相晤劑仆閒定H仁輸詼泵可以輸送另創(chuàng)溶制c畝動(dòng)相）戲看樣品穿過其申 在離心力的 柞用下，灣相幣劑柱螺齪管中實(shí)現(xiàn)高效的接融、混牛、介配和ftif分在兩相何進(jìn)行不斷的分配一曲于樣品中各組分在兩相中的分配能力不同冷致在聚四龜乙晞 管申和動(dòng)的速度也不同用而能便樣品中各絹分射到分離。9、簡(jiǎn)述膠束形成的條件和原理，以及膠束在分析中的特點(diǎn)。條件：膠束是表面活性劑在溶液中的濃度超過某一臨界值后，其分子或離子自動(dòng)締合成的膠體大小的聚集體質(zhì)點(diǎn)微粒，這種膠體質(zhì)點(diǎn)與離子之間處于平衡狀態(tài)。原理：?jiǎn)蝹€(gè)表面活性劑分子在溶于水后，完全被水分子包圍， 分子中的親水基團(tuán)有被水吸引的趨勢(shì)，而親油基團(tuán)則被水排斥，因此表面活性劑分子占

16、據(jù)溶液表面，在表面吸附，將其親油基團(tuán)伸向空氣。這種表面吸附達(dá)到飽和后，如果表面活性劑的濃度繼續(xù)增加，則溶液內(nèi)部的表面活性劑分子將采取另一種對(duì)水進(jìn)行排斥的方式，即分子中的長(zhǎng)鏈親油基團(tuán)通過分子間吸引力相互締合，自身相互抱成團(tuán)，而親水基團(tuán)則伸向水中，與水分子結(jié)合，形成聚集體， 即膠束。特點(diǎn)：膠束具有增敏作用，提高分析檢測(cè)的靈敏度。膠束具有增穩(wěn)作用，提高反應(yīng)體系或分 析體系的穩(wěn)定性。此外膠束還具有增加對(duì)比度的作用。其中膠束液相色譜法還可以提高色譜分離的選擇性。毛細(xì)管膠束電泳色譜分離原理：MECC中存在有兩相，一相是以膠束形式存在的準(zhǔn)固定相，另一相是作為載體的液相，又稱流動(dòng)相。試樣中的組分在MECC中的

17、分離，從本質(zhì)上來說，是由它們的分子和膠束相及流動(dòng)相分子之間的相互作用的差異造成的，盡管對(duì)不同的膠束相互作用的形式不同， 但是它們所反映的問題本質(zhì)是一樣的。具體來說，溶質(zhì)在毛細(xì)管柱內(nèi)受到兩種力，一是膠束對(duì)它的作用力， 二是流動(dòng)相的溶解力， 即溶質(zhì)處于兩個(gè)作用力場(chǎng)的平衡 之中，作用力強(qiáng)，溶解力差時(shí)，溶質(zhì)有較大的保留；反之，則較早流出毛細(xì)管柱，見圖43也就是說，不同組分分子和膠束相與流動(dòng)相分子相互作用的不同，最終將導(dǎo)致它們?cè)趦上嘀械臐舛缺炔煌?，或者說分配系數(shù)不同。設(shè)X物質(zhì)因相互作用較大，而在膠束相中的濃度較大，Y物質(zhì)因相互作用較小而濃度較小，則X的分配系數(shù)大于 Y的分配系數(shù)（分配系數(shù)K=溶質(zhì)在膠束相

18、的濃度/溶質(zhì)在流動(dòng)相的濃度），在這一 MECC系統(tǒng)中，X在Y的后面流 出。綜上所述，不同組分在毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜中的分離，從根本上來說是由于它們的分子與膠束和流動(dòng)相分子相互作用的差異造成的，而這種相互作用的差異通過分配系數(shù)的差異來反映，分配系數(shù)和上述一系列微觀參量都有明確的定量關(guān)系。10、ELISA檢測(cè)試劑盒的技術(shù)和應(yīng)用。ELISA是一種免疫測(cè)定（immunoassay, IA）?；A(chǔ)：抗原或抗體的固相化及抗原或抗 體的酶標(biāo)記。加入酶反應(yīng)的底物后， 底物被酶催化成為有色產(chǎn)物， 產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物 質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進(jìn)行定性或定量分析。ELISA的基本原理是將特異的抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)和酶

19、學(xué)催化反應(yīng)相結(jié)合，以酶促反 應(yīng)的放大作用來顯示初級(jí)免疫反應(yīng)，它既可測(cè)抗原，也可測(cè)抗體。ELISA用固相載體吸附抗體（抗原）,加待測(cè)抗原（抗體）,再與相應(yīng)的酶標(biāo)記抗體（抗原）進(jìn)行抗原抗體的特異免疫反應(yīng)， 生成抗體（抗原）-待測(cè)抗原（抗體）-酶標(biāo)記抗體（抗原）的復(fù)合物，最后再與該酶的底物反應(yīng)生 成有色產(chǎn)物 待測(cè)抗原（抗體）的定量與有色產(chǎn)物量成正比，根據(jù)吸光度值計(jì)算抗原（抗體）的量ELISA法既可進(jìn)行定性，又可進(jìn)行定量測(cè)定。一般采用商品化的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。完整的ELISA試劑盒包含7個(gè)組分：包被了抗原或抗體的固相載體，酶標(biāo)記的抗 原或抗體，酶的底物，陰性和陽(yáng)性對(duì)照品，參考標(biāo)準(zhǔn)品，控制血清，結(jié)合物及標(biāo)

20、本的稀釋液，洗滌液酶反應(yīng)終止液。， 分類：主要技術(shù)類型有雙抗體夾心法間接法捕獲法競(jìng)爭(zhēng)法應(yīng)用：由于ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒）具有快速、敏感、簡(jiǎn)便、易于標(biāo)準(zhǔn)化 等優(yōu)點(diǎn)，使其得到迅速的發(fā)展和廣泛應(yīng)用。目前ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒）方法已被廣泛應(yīng)用于多種細(xì)菌和病毒等疾病的診斷、動(dòng)物檢疫方面、獸藥殘留檢測(cè)中應(yīng) 用的、農(nóng)藥殘留檢測(cè)、動(dòng)物性食品中藥物殘留檢測(cè)、生物毒素的檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因食品安全性的檢測(cè)。11、 簡(jiǎn)述藥物分析試驗(yàn)方法學(xué)驗(yàn)證的內(nèi)容及其具體含義、表示方法等。 準(zhǔn)確度：指該方法準(zhǔn)確性指的是測(cè)量值與真實(shí)值或認(rèn)可的參考值之間相近程度。一般用百分回收率表示。 精密度：在

21、規(guī)定的條件下，用該法測(cè)得的一組測(cè)量值彼此之間的接近程度。一般用偏差、 標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（變異系數(shù)）來表示。 專屬性（選擇性）：專屬性是指在一些可能存在的組分如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、基質(zhì)等的存在下，對(duì)被分析物質(zhì)的準(zhǔn)確可靠的測(cè)定。專屬性常用添加了雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、相關(guān)化合物的樣品與未曾添加的樣品所得的分析結(jié)果的偏離程度來表示。 檢測(cè)限：是指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。常用百分?jǐn)?shù)、ppm、ppb表示。 定量限：指樣品中北側(cè)無(wú)能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具有一定的準(zhǔn)確度和精密度。常用信噪比法來確定。 線性：是指設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)量結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。?？疾鞚舛扰c信號(hào)的線性

22、程度來表示。 范圍：指能達(dá)到一定精密度、 準(zhǔn)確度和線性的條件下， 該測(cè)試方法使用的高低限濃度或量 的區(qū)間。需考慮方法的具體應(yīng)用、線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求來確定。 耐用性：是指在測(cè)定條件有少的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。經(jīng)常用考察不同條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果來確定方法的耐用性。12、 簡(jiǎn)述質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂的基礎(chǔ)、原則，以及起草說明的原則。（P489）制訂基礎(chǔ)：在新藥的研究開發(fā)期間，要對(duì)新藥的制備工藝、結(jié)構(gòu)確認(rèn)、一般藥理學(xué)、主要藥效學(xué)、毒理學(xué)等方面進(jìn)行研究，還需要進(jìn)行系統(tǒng)的質(zhì)量研究和藥品穩(wěn)定性考察 原則：藥品的安全性和有效性 方法的科學(xué)性和先進(jìn)性 控制指標(biāo)的針對(duì)性和合理性 起草說明的原則：A原料

23、藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的起草說明應(yīng)包括下列內(nèi)容 概況：說明本品的臨床用途；我國(guó)投產(chǎn)歷史，有關(guān)工藝改革及重大科研成就；國(guó)外藥典收載情況；目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)情況和質(zhì)量水平。 生產(chǎn)工藝：用化學(xué)反應(yīng)式表明合成的路線， 或用簡(jiǎn)明的工藝流程表示； 要說明成品的精制 方法及可能引入成品中的雜志。 如國(guó)內(nèi)生產(chǎn)采用有不同的工藝路線或精制方法， 應(yīng)分別列出， 并盡可能注明生產(chǎn)廠家。 標(biāo)準(zhǔn)制訂的意見或理由：按標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容依次說明（包括產(chǎn)品質(zhì)量的具體數(shù)據(jù)或生產(chǎn)廠檢驗(yàn)結(jié) 果的統(tǒng)計(jì)）。對(duì)鑒別、檢查和含量測(cè)定方法，除已載入藥典附錄以外，要根據(jù)現(xiàn)有資料（引用文獻(xiàn)）說明其原理，特別是操作中的注意事項(xiàng)應(yīng)加以說明。對(duì)個(gè)別進(jìn)行過方法學(xué)研究的項(xiàng)目，應(yīng)另附專

24、題研究報(bào)告。 與國(guó)外藥典及原標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比，并對(duì)本標(biāo)準(zhǔn)的水平進(jìn)行評(píng)價(jià)。 列出起草單位和復(fù)核單位對(duì)本標(biāo)準(zhǔn)的意見（包括本標(biāo)準(zhǔn)中尚存在的問題，以及今后的改進(jìn)意見）。 列出主要的參考文獻(xiàn)B新增制劑標(biāo)準(zhǔn)的起草說明還應(yīng)包括 處方：列出附加劑的品名和用量，如國(guó)內(nèi)生產(chǎn)有多種處方時(shí)，應(yīng)盡可能分別列出（注明生產(chǎn)廠），并進(jìn)行比較。 制法：列出簡(jiǎn)要的制備方法。 標(biāo)準(zhǔn)制訂的意見和理由：除了與新增原料藥要求相同外，還應(yīng)有對(duì)制劑的穩(wěn)定性考察材料 并提出有效建議的說明。C上版藥典已收載品種的修訂說明對(duì)修訂部分，根據(jù)下列情況分別說明： 對(duì)附錄方法有實(shí)質(zhì)性修改的項(xiàng)目（如崩解時(shí)限檢查法、栓劑、氣霧劑），應(yīng)說明照新附錄對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行考核的

25、結(jié)果，并列出具體數(shù)據(jù)； 對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)方法進(jìn)行過修改的項(xiàng)目，或新增的檢驗(yàn)項(xiàng)目，要說明增修訂的理由、方法和來源，并寫出產(chǎn)品的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)，含量測(cè)定方法的修改要附有專題研究材料；對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)限度的修改，要說明理由并列表說明當(dāng)時(shí)產(chǎn)品的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)，以及與國(guó)外藥典相應(yīng)項(xiàng)目的比較。對(duì)于不修訂的部分，要寫出綜合材料說明不修訂的理由。D其他 值得強(qiáng)調(diào)的是，起草說明中應(yīng)闡明曾經(jīng)做過的有關(guān)實(shí)驗(yàn)，包括不成熟的、尚待完善的或失敗的，暫未或不能收載于正文的檢定方法的理由，并提供相關(guān)的實(shí)驗(yàn)資料，以便有關(guān)部門審查其實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理，以確定為主觀或客觀原因，從而判定是否需要做進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。起草說明的書寫格式應(yīng)按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目依次予以說明

26、，與其研究報(bào)告不同，不能以綜述性討論代替。13、寫出4G的英文簡(jiǎn)稱、中英文全稱，并說明其具體含義。 GLP :良好藥品實(shí)驗(yàn)研究規(guī)范（ Good Laboratory Practices）含義：該規(guī)范從各個(gè)方面明確規(guī)定了如何嚴(yán)格控制藥物研制的質(zhì)量，以確保實(shí)驗(yàn)研究的質(zhì)量與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠。 GMP :良好藥品生產(chǎn)規(guī)范（藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范）（Good Manufacturing Practices）含義：是藥品生產(chǎn)和質(zhì)量管理的基本準(zhǔn)則。 GCP :良好藥品臨床試驗(yàn)規(guī)范（ Good Clinical Practices）含義：保證藥品臨床試驗(yàn)資料的科學(xué)性、可靠性和重現(xiàn)性。本規(guī)范主要起兩個(gè)作用：保護(hù)

27、志愿受試者和病人的安全和權(quán)力；有助于生產(chǎn)廠家申請(qǐng)臨床試驗(yàn)和銷售許可時(shí)能夠提供有價(jià)值的臨床資料。 GSP：良好藥品供應(yīng)規(guī)范（ Good Supply Practices）含義：要求藥品供應(yīng)部門保證藥品在運(yùn)輸、貯存和銷售過程中的質(zhì)量和效力，以保護(hù)消費(fèi)者合法權(quán)益。14、分子烙印技術(shù)分子烙印技術(shù)(Moleculeim printing tech no logy,MIT),又可稱為分子印跡技術(shù)，是近年來迅 速發(fā)展起來的一項(xiàng)新型技術(shù)，利用具有分子識(shí)別能力的分子烙印聚合物(Moleculeim printingpolymer , MIP)來分離、篩選、純化化合物的一種仿生技術(shù).MIP的制備方法是以目標(biāo)烙印分

28、子為模板，選用能與目標(biāo)烙印分子產(chǎn)生特定相互作用的功能性單體，在烙印分子周圍與交聯(lián)劑進(jìn)行聚合，形成三維交聯(lián)的聚合物網(wǎng)絡(luò)通過萃取除去烙印分子，在聚合物網(wǎng)絡(luò)中形成形態(tài)和化學(xué)功能團(tuán)與烙印分子互補(bǔ)的孔穴，其對(duì)烙印分子具有特殊的親合性MIT最大的特點(diǎn)就是對(duì)模板分子的識(shí)別具有可預(yù)見性，對(duì)于特定物質(zhì)的分離極具針對(duì)性 具有抗惡劣環(huán)境能力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、使用壽命長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)分子烙印技術(shù)日益受到關(guān)注 ，得到了蓬勃的發(fā)展，已被應(yīng)用于手性拆分、仿生傳感器、固相萃取、抗體模擬、酶樣催化劑以及控 釋藥物等領(lǐng)域的研究MIT要經(jīng)過3個(gè)步驟:(1)功能單體和模板分子在一定條件下通過共價(jià)或非共價(jià)作用形成 可逆復(fù)合物；(2)加入交聯(lián)劑將這

29、種復(fù)合物通過交聯(lián)聚合反應(yīng)固化，制得高聚物；(3)將模板分子除去，形成的聚合物即分子烙印聚合物(MIP)，MIP依靠分子形狀、大小及官能團(tuán)進(jìn)行選擇性的分子識(shí)別。按照單體與模板分子結(jié)合方式的不同，MIT可分為共價(jià)型(預(yù)組裝型)、非共價(jià)型(自組裝型)及半共價(jià)型(犧牲空間法)。MIP具有構(gòu)效預(yù)定性、特異識(shí)別性、廣泛實(shí)用性三大特點(diǎn)， 此外還具有抗惡劣環(huán)境能力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、使用壽命長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。這些特點(diǎn)使其在臨床藥物分析、手性物質(zhì)的分離等許多領(lǐng)域得到應(yīng)用。15、中藥指紋圖譜中藥含有的活性成分是中藥藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，任何一種活性成分均不能體現(xiàn)出中醫(yī)臨床用藥的整體療效。若以個(gè)別活性成分的含量作為中藥的質(zhì)量控制指標(biāo)，

30、而忽略中藥的其他成分的作用，則難以確保中藥及其制劑的質(zhì)量。中藥指紋圖譜是一種多指標(biāo)的質(zhì)量控制模 式，雖然它不能代替含量測(cè)定，但它比測(cè)定任何單一成分所提供的信息卻豐富得多，可以比較全面的反映所含化學(xué)成分的種類和數(shù)量，能夠更加有效地體現(xiàn)出中藥成分的整體性和綜合作用，從而更好地評(píng)價(jià)中藥及其制劑的質(zhì)量。中藥指紋圖譜就是借用了法醫(yī)學(xué)“指紋鑒定”的概念，是指中藥經(jīng)過適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段 ，得到的能夠標(biāo)示該中藥特性的某類或數(shù)類成分的色譜或光譜的圖譜。中藥指紋圖譜作為一種綜合的、宏觀的、 可量化的鑒別手段，能全面的反映中藥所含成分的相對(duì)關(guān)系，是當(dāng)前符合中藥特色的評(píng)價(jià)中藥真實(shí)性、穩(wěn)定性和一致性的質(zhì)量控

31、制模式。整體性和模糊性是它的基本屬性。指紋圖譜應(yīng)該反映藥材的完整面貌即整體性，但是由于植物藥中化學(xué)成分天然潛在的不穩(wěn)定性，所以指紋圖譜又具有模糊性。中藥指紋圖譜的構(gòu)建方法：中藥指紋圖譜的測(cè)定方法種類較多，主要采用色譜法分離特征成分，采用紫外光譜(UV)、紅外光譜(IR)、核磁共振波譜(NMR)、質(zhì)譜(MS)等光 譜、波譜方法鑒定化合物的結(jié)構(gòu)，現(xiàn)階段用于構(gòu)建中藥指紋圖譜的色譜法主要有：薄層色譜(TLC)、氣相色譜(GC)、高效液相色譜(HPLC)、高效毛細(xì)管電泳(HPCE)、高速逆 流色譜(HSCCC)，其中又以HPLC法分離效率高、分析速度快、樣品適應(yīng)性廣、檢測(cè)器種類多、靈敏度高、穩(wěn)定性強(qiáng)、重

32、復(fù)性好而倍受推崇，成為中藥指紋圖譜的首選方法。16、高效毛細(xì)管電泳毛細(xì)管區(qū)帶電泳、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜、毛細(xì)管等電聚焦、毛細(xì)管凝膠電泳、毛細(xì)管等速電泳、毛細(xì)管電色譜、陣列毛細(xì)管電泳。17、液相色譜 -質(zhì)譜聯(lián)用的原理和應(yīng)用原理： 液質(zhì)聯(lián)用（ HLPC-MS ）又叫液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，它以液相色譜作為分離系統(tǒng)， 質(zhì)譜為檢測(cè)系統(tǒng)。 樣品在質(zhì)譜部分和流動(dòng)相分離， 被離子化后， 經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器將離子 碎片按質(zhì)量數(shù)分開， 經(jīng)檢測(cè)器得到質(zhì)譜圖。 液質(zhì)聯(lián)用體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢(shì)的互補(bǔ)， 將色譜 對(duì)復(fù)雜樣品的高分離能力， 與 MS 具有高選擇性、 高靈敏度及能夠提供相對(duì)分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu) 信息的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來

33、，在藥物分析、食品分析和環(huán)境分析等許多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。LC-MS 技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：適用范圍廣、檢測(cè)靈敏度高、提供結(jié)構(gòu)信息、高樣品通量。LC-MS 技術(shù)的應(yīng)用：在中藥成分分析中的應(yīng)用、藥物代謝產(chǎn)物鑒定、藥物動(dòng)力學(xué)研究。 與氣質(zhì)聯(lián)用相比的優(yōu)點(diǎn)：HLPC-MS 除了可以分析氣相色譜 -質(zhì)譜（ GC-MS ）所不能分析的強(qiáng)極性、難揮發(fā)、熱不穩(wěn) 定性的化合物之外，還具有以下幾個(gè)方面的優(yōu)點(diǎn)： 分析范圍廣， MS 幾乎可以檢測(cè)所有的化合物，比較容易地解決了分析熱不穩(wěn)定化合物的 難題； 分離能力強(qiáng)， 即使被分析混合物在色譜上沒有完全分離開， 但通過 MS 的特征離子質(zhì)量色 譜圖也能分別給出它們各自的色譜圖來

34、進(jìn)行定性定量； 定性分析結(jié)果可靠，可以同時(shí)給出每一個(gè)組分的分子量和豐富的結(jié)構(gòu)信息； 檢測(cè)限低， MS 具備高靈敏度，通過選擇離子檢測(cè)（ SIM ）方式，其檢測(cè)能力還可以提高 一個(gè)數(shù)量級(jí)以上； 分析時(shí)間快， HPLC-MS 使用的液相色譜柱為窄徑柱， 縮短了分析時(shí)間， 提高了分離效果； 自動(dòng)化程度高， HPLC-MS 具有高度的自動(dòng)化。LC/MS 常用接口技術(shù)有：熱噴霧接口、傳送帶接口直接液體導(dǎo)入技術(shù)。離子化方式：大氣壓化學(xué)電離離子化、離子蒸發(fā)離子化離子的分離系統(tǒng)： 磁場(chǎng)型質(zhì)量分離器： 飛行時(shí)間質(zhì)量分離器： 離子被加速電場(chǎng)加速后， 在忽略初始動(dòng)能的前提， 可以認(rèn)為離子獲 得的動(dòng)能相同。 故不同質(zhì)

35、量的離子飛行時(shí)間不同， 質(zhì)量大的離子飛行速度慢， 到達(dá)檢測(cè)器時(shí) 間晚。 四級(jí)桿質(zhì)量分離器： 四級(jí)桿質(zhì)量分離器是由四根兩兩相對(duì)的電極組成的， 在四根兩兩相對(duì) 的電極上分別施加變化的直流電壓和高頻交流電場(chǎng)， 在二者的相互作用下， 由加速電壓加速 發(fā)射出的離子， 在四極桿中產(chǎn)生特定的震蕩軌道。 在一定的直流電壓和高頻交變電場(chǎng)的作用 下，只有某一特定的離子才會(huì)通過四極桿，被檢測(cè)到。離子阱分離器：和四極桿的原理非常相似，不同的是和諧的留在離子阱中，不和諧的振蕩則脫離離子阱被檢測(cè)到。接口技術(shù)：電噴霧接口 ESI電噴霧接口是將 LC 的流出物在大氣壓條件下電離，然后再將電離物送入高真空的質(zhì)質(zhì)譜。ESI 接口

36、包括三個(gè)基本過程：電噴霧，離子形成和離子輸送。 大氣壓化學(xué)電離接口 APCIAPCI 是將化學(xué)電離的原理延伸到大氣壓下進(jìn)行，與 ESI 同屬大氣壓電離范疇。 粒子束接口 PB 主要根據(jù)流體力學(xué)原理，將溶質(zhì)轉(zhuǎn)變成中性粒子，利用動(dòng)量差與溶劑分開后送入質(zhì)譜電離。 包括：形成氣溶膠，脫溶膠和動(dòng)量分離。主要用于分析非極性和中等極性的化合物。熱噴霧接口 TS是一種軟電離技術(shù)，許多極性化合物和熱不穩(wěn)定化合物在TS接口中直接蒸發(fā)，或受大量溶劑保護(hù)，可以完整的離子形式進(jìn)入氣態(tài)，得到分子離子峰，準(zhǔn)分子離子峰或分子加成物峰， 由此得到準(zhǔn)確分子量。移動(dòng)帶接口 MB對(duì)高沸點(diǎn)和遇熱易分解的化合物分析有一定用途。優(yōu)點(diǎn)能使用

37、EI電離源電離。18、手性拆分 結(jié)晶法拆分結(jié)晶法拆分包括直接結(jié)晶法拆分和非對(duì)映異構(gòu)體拆分，分別適用于外消旋混合物和外消旋化合物的拆分。在一種外消旋混合物的過飽和溶液中，直接加入某一對(duì)映體的晶種，即可得到一 定量的該對(duì)映體，這種直接結(jié)晶的拆分方法僅適用于外消旋混合物，其應(yīng)用幾率不到10%。 動(dòng)態(tài)動(dòng)力學(xué)拆分經(jīng)典的動(dòng)力學(xué)拆分與底物消旋化相結(jié)合的方法即為動(dòng)態(tài)動(dòng)力學(xué)拆分，經(jīng)典動(dòng)力學(xué)拆分的缺點(diǎn)是最大理論產(chǎn)率僅為50% ,而動(dòng)態(tài)動(dòng)力學(xué)拆分的理論產(chǎn)率可以達(dá)到100%。底物消旋化有化學(xué)法消旋和酶法消旋，酶法較化學(xué)法副反應(yīng)少、產(chǎn)率高、條件溫和，而且無(wú)毒、易降解,具有環(huán)境友好性，因此更適合工業(yè)化生產(chǎn)。 色譜分離法拆

38、分： 膜拆分：本質(zhì)是實(shí)現(xiàn)對(duì)兩種對(duì)映異構(gòu)體的選擇性轉(zhuǎn)運(yùn)，依據(jù)其轉(zhuǎn)運(yùn)方式可分為手性液膜拆分和手性固膜拆分兩類。手性液膜拆分的機(jī)理是將具有手性識(shí)別功能的物質(zhì)溶解在一定溶劑中制成有機(jī)相液膜，以膜兩側(cè)濃度差為動(dòng)力，外消旋體有選擇地從高濃相向低濃相遷移，由于液膜對(duì)兩種異構(gòu)體的選擇性差異使二者遷移速率不同，即遷移較快的一種異構(gòu)體在低濃相中得到富集，從而達(dá)到手性分離目的。固膜拆分則利用膜內(nèi)外自身的手性位點(diǎn)對(duì)兩種異構(gòu)體親 和力的差異，在壓力差、濃度差或電勢(shì)差等推動(dòng)力下造成兩種異構(gòu)體的選擇性通過，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)拆分的目的。根據(jù)手性拆分的要求，所用的拆分膜應(yīng)具有較高的對(duì)映體選擇性、較大的膜通量、且選擇性及通量應(yīng)穩(wěn)定。 萃

39、取拆分：與傳統(tǒng)的萃取分離不同，萃取拆分技術(shù)要求互相接觸的兩種液相中至少有一種具有旋光性。從理論上講，只要兩個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的分離因數(shù)大于1,在足夠多的級(jí)數(shù)下，即可實(shí)現(xiàn)拆分。目前至少存在配位萃取拆分體系、親和萃取拆分體系以及形成非對(duì)映體異構(gòu)體萃取拆分體系等3種萃取拆分體系。 旋轉(zhuǎn)帶蒸餾技術(shù)是一種分離能力較強(qiáng)的新型蒸餾技術(shù)，通過選擇旋轉(zhuǎn)帶蒸餾塔中的電機(jī)轉(zhuǎn)速和加熱套溫度，進(jìn)而控制采樣速度，經(jīng)過數(shù)次重復(fù)蒸餾、富集、再蒸餾來達(dá)到分離目的。19、高速逆流色譜高速逆流色譜的分離基礎(chǔ)是流體動(dòng)力學(xué)平衡。由于螺旋管柱的行星式運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生了一個(gè)在強(qiáng)度和方向上變化的離心力場(chǎng)，使在螺旋柱中互不相溶的兩相不斷混合從而達(dá)到穩(wěn)定的流

40、體動(dòng)力學(xué)平衡。兩相溶劑的流體動(dòng)力學(xué)分布如圖2所示?？拷行妮S的將近1/4的區(qū)域是兩相混合區(qū)， 在此處兩相發(fā)生劇烈的混合。在其余的區(qū)域，兩相分離成兩層，重相占據(jù)螺旋管的每一段的外部，輕相占據(jù)每一段的內(nèi)部，并且兩相沿螺旋管形成一個(gè)清晰的線性界面?；旌虾蛢A析區(qū)域交替出現(xiàn)在螺旋管中，并且兩相液體在螺旋管中總是處于接觸狀態(tài)，沒有死體積的存在。所以可以根據(jù)所用體系液體的流動(dòng)趨勢(shì)選用合適的模式，使得其中一相作為固定相保留在螺旋管中，另一相作為流動(dòng)相帶著樣品在螺旋管內(nèi)穿過固定相相，在此過程中使樣品在兩相中不斷混合和分配，從而根據(jù)樣品在兩相中分配系數(shù)的不同達(dá)到樣品之間相互分離的目的。高速逆流色譜的特點(diǎn)HSCCC

41、作為一種常用的分離純化技術(shù)，具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）無(wú)不可逆吸附。聚四氟乙烯管中的固定相不需要載體，可以消除固-液色譜中因使用載體而帶來的吸附現(xiàn)象，避免樣品在分離過程可能存在的變性，適用于分離極性物質(zhì)和生物活性物質(zhì)；（2）回收率高。由于液體作為流動(dòng)相和固定相，滯留在柱中的樣品可以通過多種洗脫方式予以完全回收， 能夠同時(shí)完成分離純化與制備，適于制備性分離；（3）操作簡(jiǎn)單快捷。因其固定相為液體，體系更換與平衡較常規(guī)方法方便、快捷；（4）進(jìn)樣量大。與 HPLC相比，HSCCC進(jìn)樣量最多可達(dá)到克級(jí)水平，是HPLC的數(shù)百倍。（5）分離效率高。與常壓、低壓色譜相比，HSCCC的分離能力強(qiáng)，有些樣品經(jīng)一次分離即

42、得到1個(gè)甚至多個(gè)化合物，并且分離時(shí)間短，純度高。高速逆流色譜的影響因素：由于高速逆流色譜是無(wú)需任何固態(tài)載體支撐的液-液色譜，其中作為固定相的液體在色譜柱中的保留程度對(duì)于高速逆流色譜的分離過程是十分重要的。首 先，所選擇的溶劑體系對(duì)固定相保留率有很大的影響，如兩相密度差、粘度、界面張力等。通過研究表明， 兩相的密度差對(duì)固定相保留率的影響最大，固定相保留率和密度差基本呈線性關(guān)系。其次，還存在一些人為可以操控的條件會(huì)對(duì)固定相保留率產(chǎn)生影響，如高速逆流色譜的轉(zhuǎn)速、流速、 以及柱溫等。其中，螺旋管柱的轉(zhuǎn)速以及它產(chǎn)生的離心力場(chǎng)對(duì)兩相的混合程度具有決定性的影響。因此，對(duì)于界面張力較高的溶劑系統(tǒng)，應(yīng)使用較高的轉(zhuǎn)速，以使兩相之間能夠劇烈的混合，從而促進(jìn)分配和減少質(zhì)點(diǎn)傳遞的阻力。對(duì)于界面張力較低的溶劑系統(tǒng)，應(yīng)使用較低的轉(zhuǎn)速，以避免過分混合引起的乳化作用，以及固定相流失的