《食品安全國家標準 食品中氨基甲酸乙酯的測定》編制說明

1、食品安全國家標準 食品中氨基甲酸乙酯的測定編制說明一、標準起草的基本情況（包括簡要的起草過程、主要起草單位、起草人）1、根據衛(wèi)生部辦公室關于印發(fā)2011年食品安全國家標準制（修）訂項目計劃的通知（衛(wèi)辦監(jiān)督函2011668號）要求，浙江省疾病預防控制中心承擔了食品中氨基甲酸乙酯的測定國家標準的制定工作，項目編號為spaq-2011-54。課題組依據標準制定程序和要求，查閱了國內外的相關資料，本著標準應符合我國國情，方便快速、實用性強，同時與aoac方法接軌的原則，對方法的技術參數(shù)進行了研制，按標準化工作導則編寫標準檢驗方法和編制說明。選擇了5家不同行業(yè)的食品檢測機構對本方法進行驗證，發(fā)放了檢驗方

2、法征求意見稿，通過廣泛征求意見，增強標準的科學性和可操作性。2、標準起草單位：浙江省疾病預防控制中心3、主要起草人：吳平谷、沈向紅、王立媛、張 晶、趙永信、潘曉東、譚 瑩、應 英二、標準的重要內容及主要修改情況1、各項技術條件的確定1.1 色譜柱的選擇： aoac 994.07采用db-innowax柱，sn/t0285-1993采用hp-20m色譜柱，食品化學污染物及有害因素監(jiān)測手冊中采用db-innowax柱，這幾種色譜柱均屬于極性柱，且填料均為peg20m。因此本標準規(guī)定為db-innowax毛細管色譜柱(填料為peg20m)：30 m0.25 mm（內徑）0.25 m（膜厚）或相當色譜

3、柱。2.2 氣相色譜條件的選擇：酒及醬油中含有較多揮發(fā)性化合物，特別是酯類化合物對氨基甲酸乙酯的測定有一定干擾，氨基甲酸乙酯屬于小分子化合物（分子量為89），測定時容易受其他化合物干擾，通過本標準升溫模式可以獲得較好分離效果，在該條件下，目標化合物的保留時間為12min-14min之間。2.3 內標的選擇：目前食品中氨基甲酸乙酯的測定使用的內標有氨基甲酸丙酯、氨基甲酸丁酯、d5-氨基甲酸乙酯等?？紤]到內標物與目標化合物性質越相近越好，且同位素內標稀釋法越來越多地用在微量化合物的檢測，d5-氨基甲酸乙酯價格也可以接受，因此本標準采用d5-氨基甲酸乙酯作為內標。2.4 質譜條件的確定：選擇氨基甲酸

4、乙酯的44、62、74、89m/z和d5-氨基甲酸乙酯64、76m/z為定性離子，根據質譜定性檢測要求、離子強度、樣品測定抗干擾性，分別選擇62、64作為氨基甲酸乙酯和d5-氨基甲酸乙酯的定量離子。2.5 標準曲線：氨基甲酸乙酯在10g/l-1000g/l的范圍內，其濃度與氨基甲酸酯峰面積與內標峰面積的比值（以比值62/64表示）呈線性關系，其回歸程式為y=0.0043x+0.0363, r2=0.9984。因不同樣品中氨基甲酸乙酯含量相差很大，可根據其氨基甲酸乙酯濃度，選擇合適的標準曲線范圍，建議低濃度選擇10g/l-200g/l，高濃度選用50g/l-1000g/l濃度范圍內的標準曲線計算

5、樣品中氨基甲酸乙酯的含量。3、樣品前處理條件的確定3.1固相萃取柱的選擇及凈化條件的優(yōu)化：本標準采用4000mg/12ml的堿性硅藻土柱進行樣品凈化，堿性硅藻土柱可以除去樣品中大量酸性化合物（如乙酸、乳酸等）。樣品中添加0.3g氯化鈉（基本達到飽和）提高氨基甲酸乙酯回收率（醬油含有氯化鈉，不需要添加氯化鈉），樣品上柱后，用10ml正己烷淋洗，除去酒樣中烷烴等干擾物。3.2洗脫液的選擇：分別用二氯甲烷、乙醚及5%乙酸乙酯/乙醚3種溶劑進行洗脫，以d5-氨基甲酸乙酯絕對回收率為指標，其平均回收率分別是71.8%、70.1%、80.2%，本方法采用5%乙酸乙酯/乙醚作為固相萃取洗脫液，洗脫體積為10

6、ml。4、方法的精密度和準確度4.1 精密度：對市售啤酒、葡萄酒、黃酒、白酒、醬油樣品進行日內和日間平行測定，結果日內精密度啤酒、醬油等低濃度樣品相對標準偏差（rsd）為9.1%和11.5%，其余樣品相對標準偏差（rsd）在1.1%8.3%之間，符合方法學的要求。日間相對標準偏差范圍3.8%6.4%,。其精密度符合方法學的要求4.2 準確度：對啤酒、葡萄酒、黃酒、白酒、醬油進行氨基甲酸乙酯加標試驗，每類樣品添加34個濃度水平。結果啤酒回收率為72.5%111.3%，平均回收率92.3%；葡萄酒回收率74.2%113.3%，平均回收率94.5%；黃酒回收率82.6%101.7%，平均回收率89.

7、7 %；白酒回收率75.9%107.0%，平均回收率92.4%；醬油回收率96.8%109.0%，平均回收率為102.2%。5、方法檢出限及定量限根據儀器靈敏度和3倍信噪比，方法檢出限為2.0g/kg，選擇5種不同基質的低濃度樣品加標5.0g/kg，結果5種基質的樣品回收率在84.0%114.%之間，,rsd在5.5%7.7%之間，故確定本方法定量限為5.0g/kg。6、樣品測定本方法已用于國家食品安全風險監(jiān)測中白酒、葡萄酒、黃酒中氨基甲酸乙酯的監(jiān)測，也進行醬油和黃酒生產過程中氨基甲酸乙酯形成進行的過程性監(jiān)測。其典型樣品譜圖見圖1、2。圖1 葡萄酒中氨基甲酸乙酯的總離子流圖圖2 黃酒中氨基甲酸

8、乙酯的總離子流圖三、國內外標準情況1、世界上多個國家已制定了部分食品中氨基甲酸乙酯的限量標準。如加拿大規(guī)定了各類酒中的氨基甲酸乙酯限量值：佐餐葡萄酒30gl,強化葡萄酒100gl；美國佐餐葡萄酒15gl，餐后甜葡萄酒60gl。2002年聯(lián)合國糧食及農業(yè)組織將氨基甲酸乙酯列為重點監(jiān)控物質，規(guī)定飲料中氨基甲酸乙酯的含量不得超過20gl。2、目前國內外氨基甲酸乙酯的檢驗方法有：aoac official method 993.04蒸餾酒中氨基甲酸乙酯測定，采用gc-熱導檢測器直接進樣，單點標準定量法，無定量限；aoac official method 994.07含酒精飲料和醬油中氨基甲酸乙酯的測定

9、，采用硅藻土柱層析-二氯甲烷洗脫的gc/ms內標（氨基甲酸丙酯）標準曲線法，定量限10.0g/kg；sn 0285-1993出口酒類中氨基甲酸乙酯殘留量檢驗方法，采用正己烷去雜-二氯甲烷液液萃取-gc/ms外標曲線法, 定量限10.0g/kg。四、方法驗證為驗證本方法的有效性和適用性，選擇5家不同行業(yè)的食品檢測機構對本方法進行驗證，驗證內容為方法的線性范圍、檢出限、定量限、精密度、準確度及相關樣品的檢測。5家單位的氨基甲酸乙酯在10g/l-1000g/l濃度范圍內，濃度和標準峰面積與內標峰面積比值呈線性，相關系數(shù)均r0.999，方法檢出限（lod ）為 2.0g/kg（s/n=3），通過樣品加標確定定量限（loq）為5.0g/kg。5家單位對黃酒、白酒、葡萄酒、醬油分別進行的日內和日間6次重復測定，其日內測定結果的相對標準偏差為1.2%8.0%，日間測定相對標準偏差為0.5%8.8%。5家驗證單位對黃酒、白酒、葡萄酒和醬油進行3個加標水平的回收試驗，黃酒回收率為93.2 %115.6%；白酒回收率為93.5%118.4%；葡萄