第三節(jié)胚胎移植

1、胚胎移植生化學院生化學院 萬紅玲萬紅玲回顧回顧第一節(jié)第一節(jié) 體內(nèi)受精和胚胎早期發(fā)育體內(nèi)受精和胚胎早期發(fā)育第二節(jié)第二節(jié) 體外受精和早期胚胎培養(yǎng)體外受精和早期胚胎培養(yǎng)第三節(jié)第三節(jié) 胚胎移植胚胎移植第四節(jié)第四節(jié) 胚胎分割胚胎分割第五節(jié)第五節(jié) 胚胎嵌合胚胎嵌合第七章第七章 胚胎工程胚胎工程天價牛肉天價牛肉 千元一斤有錢還難買千元一斤有錢還難買 日本神戶牛肉（雪花牛肉）日本神戶牛肉（雪花牛肉）手圖胚胎工程其他技術的最后一道胚胎工程其他技術的最后一道“工序工序”-胚胎移植一、胚胎移植的概念一、胚胎移植的概念 是指將雌性動物的早期胚胎，或者通過體是指將雌性動物的早期胚胎，或者通過體外受精及其他方式得到的胚胎

2、，移植到同外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動物的體種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動物的體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個體的技術。內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個體的技術。 胚胎移植成功的標志是什么？胚胎移植成功的標志是什么？ 移植的胚胎要能夠在受體內(nèi)正常發(fā)育并分娩。移植的胚胎要能夠在受體內(nèi)正常發(fā)育并分娩。 如何使移植的胚胎在如何使移植的胚胎在受體受體的子宮內(nèi)能正常發(fā)的子宮內(nèi)能正常發(fā)育并分娩？育并分娩？ 將胚胎移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他將胚胎移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動物的體內(nèi)雌性動物的體內(nèi)。二、胚胎移植的生理學基礎二、胚胎移植的生理學基礎1 1、供體和受體相同的生理

3、環(huán)境供體和受體相同的生理環(huán)境2 2、早期胚胎處于游離狀態(tài)早期胚胎處于游離狀態(tài), ,為胚胎的收集提供了可能為胚胎的收集提供了可能3 3、受體對移入子宮的胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥受體對移入子宮的胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥4 4、胚胎與受體建立正常的聯(lián)系胚胎與受體建立正常的聯(lián)系, ,但遺傳物質(zhì)沒有改變但遺傳物質(zhì)沒有改變?nèi)?、胚胎移植的基本程序三、胚胎移植的基本程序選擇選擇供體母牛供體母牛受體母牛受體母牛同期發(fā)情處理同期發(fā)情處理超數(shù)排卵超數(shù)排卵供體公牛供體公牛配種配種/ /人工授精人工授精沖卵沖卵收集、質(zhì)量檢查、收集、質(zhì)量檢查、培養(yǎng)或保存培養(yǎng)或保存胚胎移植胚胎移植妊娠檢查妊娠檢查分娩（胚胎移植的犢牛）分娩

4、（胚胎移植的犢牛）1 1、對供、受體母畜進行選擇，并進行同期發(fā)、對供、受體母畜進行選擇，并進行同期發(fā)情處理。情處理。 供體公、母牛應該是具有人類所需的優(yōu)良遺傳性供體公、母牛應該是具有人類所需的優(yōu)良遺傳性狀的個體，而受體母牛必須具有正常的孕育、生狀的個體，而受體母牛必須具有正常的孕育、生殖后代的能力。殖后代的能力。 胚胎移植時，供體胚胎必須與受體子宮內(nèi)膜發(fā)育胚胎移植時，供體胚胎必須與受體子宮內(nèi)膜發(fā)育狀態(tài)高度同步化，才能獲得好的效果，這個過程狀態(tài)高度同步化，才能獲得好的效果，這個過程稱為同期發(fā)情（稱為同期發(fā)情（oestrus ynchronization），包括），包括自然同期發(fā)情和人工同期發(fā)情。

5、自然同期發(fā)情和人工同期發(fā)情。 自然同期發(fā)情即不經(jīng)任何藥物處理，依靠動物自然同期發(fā)情即不經(jīng)任何藥物處理，依靠動物自身的性周期規(guī)律，選擇處于適當時期的母畜自身的性周期規(guī)律，選擇處于適當時期的母畜作為受體。作為受體。 實際操作中，多用性激素進行人工同期發(fā)情。實際操作中，多用性激素進行人工同期發(fā)情。2 2、配種或人工授精、配種或人工授精3 3、沖卵，收集胚胎、沖卵，收集胚胎對配種或授精后的供體母畜，經(jīng)過一段時間就要進對配種或授精后的供體母畜，經(jīng)過一段時間就要進行胚胎的收集。其具體操作方法是用配制好的沖卵行胚胎的收集。其具體操作方法是用配制好的沖卵液，借助特制的沖卵裝置，把位于子宮或輸卵管的液，借助特制

6、的沖卵裝置，把位于子宮或輸卵管的胚胎沖洗出來，也稱沖卵。沖胚胎的時間一般在配胚胎沖洗出來，也稱沖卵。沖胚胎的時間一般在配種或授精后種或授精后3 38 8天進行，這時的胚胎已發(fā)育到天進行，這時的胚胎已發(fā)育到4 48 8個細胞以上。個細胞以上。u 胚胎質(zhì)量檢查 形態(tài)學標準進行檢測：首先看胚胎的外形，要求形態(tài)學標準進行檢測：首先看胚胎的外形，要求形態(tài)正常，卵裂球均一，透明帶完整。其次要鑒形態(tài)正常，卵裂球均一，透明帶完整。其次要鑒別采卵時間是否與胚胎發(fā)育時期相吻合。如果發(fā)別采卵時間是否與胚胎發(fā)育時期相吻合。如果發(fā)育時間落后于采卵時間，則胚胎本身可能有問題。育時間落后于采卵時間，則胚胎本身可能有問題。

7、也可以用也可以用0.50.5的臺盼藍對胚胎做染色處理，活細的臺盼藍對胚胎做染色處理，活細胞是不被著色。一般有一半以上卵裂球著色的胚胞是不被著色。一般有一半以上卵裂球著色的胚胎發(fā)育能力較差。胎發(fā)育能力較差。4 4、胚胎移植、胚胎移植 手術移植手術移植 非手術移植非手術移植四、胚胎移植的意義四、胚胎移植的意義1 1、加速育種工作和品種改良、加速育種工作和品種改良2 2、大量節(jié)省購買種畜的費用、大量節(jié)省購買種畜的費用3 3、一胎多產(chǎn)、一胎多產(chǎn)4 4、保存品種資源和瀕危物種、保存品種資源和瀕危物種5 5、可充分發(fā)揮優(yōu)秀個體的繁殖潛能、可充分發(fā)揮優(yōu)秀個體的繁殖潛能 縮短繁殖周期，增加一生繁殖的后代數(shù)量縮

8、短繁殖周期，增加一生繁殖的后代數(shù)量.囊胚囊胚桑椹胚桑椹胚卵裂球卵裂球第四節(jié)第四節(jié) 胚胎分割胚胎分割n 胚胎分割的原理胚胎分割的原理根據(jù)卵裂球根據(jù)卵裂球具有具有發(fā)育成為一個個體的全能性的發(fā)育成為一個個體的全能性的特點，人們就考慮用這種實驗技術，生產(chǎn)同卵特點，人們就考慮用這種實驗技術，生產(chǎn)同卵雙胎或多胎，雙胎或多胎，以以加速優(yōu)良種群的繁殖。加速優(yōu)良種群的繁殖。？ 胚胎的分割在不同時期有不同的分離培養(yǎng)方法，胚胎的分割在不同時期有不同的分離培養(yǎng)方法，如如卵裂球分離培養(yǎng)法卵裂球分離培養(yǎng)法、致密化前各期胚胎分割致密化前各期胚胎分割法法、桑椹胚桑椹胚至至囊胚期胚胎分割法囊胚期胚胎分割法等。等。卵裂球分離培養(yǎng)

9、卵裂球分離培養(yǎng)l卵裂球分離培養(yǎng)是卵裂球分離培養(yǎng)是將桑椹胚以前的卵裂胚去掉將桑椹胚以前的卵裂胚去掉透明帶，分離每個卵裂球，將其包埋于瓊脂中，透明帶，分離每個卵裂球，將其包埋于瓊脂中，將包有卵裂球的瓊脂柱，移到中間受體小鼠或?qū)新蚜亚虻沫傊?，移到中間受體小鼠或兔的輸卵管中，經(jīng)數(shù)日活體內(nèi)培養(yǎng)后，再取出兔的輸卵管中，經(jīng)數(shù)日活體內(nèi)培養(yǎng)后，再取出已經(jīng)發(fā)育到多細胞的胚胎，移于受體子宮。已經(jīng)發(fā)育到多細胞的胚胎，移于受體子宮。 l這種方法已經(jīng)在牛、羊、馬生出同卵多胎。這種方法已經(jīng)在牛、羊、馬生出同卵多胎。 l對研究卵裂球位置與分化方向以及研究嵌合胚、對研究卵裂球位置與分化方向以及研究嵌合胚、不同卵裂球遺傳性

10、等，都是一種很有用的技術。不同卵裂球遺傳性等，都是一種很有用的技術。致密化以前各期的胚胎分割致密化以前各期的胚胎分割l對于致密化以前各期的胚胎，由于卵裂球之間彼此尚對于致密化以前各期的胚胎，由于卵裂球之間彼此尚未建立起緊密聯(lián)系，分割時較容易進行。根據(jù)胚胎的未建立起緊密聯(lián)系，分割時較容易進行。根據(jù)胚胎的直徑，制作適宜口徑的固定吸管和吸取卵裂球用的微直徑，制作適宜口徑的固定吸管和吸取卵裂球用的微吸管。在顯微操作儀上，用固定吸管固定住胚胎，然吸管。在顯微操作儀上，用固定吸管固定住胚胎，然后用微玻璃針自上而下切開透明帶，使其成為一個切后用微玻璃針自上而下切開透明帶，使其成為一個切口。將微吸管自切口處伸

11、入，吸住半數(shù)卵裂球，慢慢口。將微吸管自切口處伸入，吸住半數(shù)卵裂球，慢慢取出，這樣即可以把胚胎一分為二。把吸出的半胚或取出，這樣即可以把胚胎一分為二。把吸出的半胚或卵裂球，納入空透明帶中?？胀该鲙菍U棄的卵母卵裂球，納入空透明帶中?？胀该鲙菍U棄的卵母細胞或不合適的胚胎，去除其內(nèi)容物即可。然后將分細胞或不合適的胚胎，去除其內(nèi)容物即可。然后將分割后的胚胎包入瓊脂柱，通過中間受體培養(yǎng)。依照同割后的胚胎包入瓊脂柱，通過中間受體培養(yǎng)。依照同樣的方法，可以將胚胎分割成為四或八分胚。樣的方法，可以將胚胎分割成為四或八分胚。桑椹期的胚胎分割桑椹期的胚胎分割l用微玻璃針或微刀進行分割，無需固定吸管，用微玻璃

12、針或微刀進行分割，無需固定吸管，由于透明帶韌性較強。由于透明帶韌性較強。 l切割之前需要對其進行軟化處理，處理標準切割之前需要對其進行軟化處理，處理標準是：是：4 48 8細胞胚胎用細胞胚胎用0.50.5酶液處理酶液處理1 12 2分鐘；分鐘；桑椹胚用桑椹胚用0.20.20.30.3酶液處理酶液處理3030秒鐘；囊胚秒鐘；囊胚則用則用0.20.20.30.3酶液處理酶液處理3030秒以下。秒以下。過程過程l把經(jīng)過軟化處理的胚胎，與少量培養(yǎng)液一起置把經(jīng)過軟化處理的胚胎，與少量培養(yǎng)液一起置于載片上，把針或微刀的刃部調(diào)節(jié)到胚胎的正于載片上，把針或微刀的刃部調(diào)節(jié)到胚胎的正上方。然后自胚胎的等分線向下移

13、動，把胚胎上方。然后自胚胎的等分線向下移動，把胚胎輕輕壓住，繼續(xù)下切，胚胎就被壓扁，繼而被輕輕壓住，繼續(xù)下切，胚胎就被壓扁，繼而被切開。再把切割的胚胎納入空透明帶。切開。再把切割的胚胎納入空透明帶。 l囊胚切割時，需將內(nèi)細胞團一分為二，早期的囊胚切割時，需將內(nèi)細胞團一分為二，早期的囊胚的二分胚發(fā)育率，比桑椹胚的二分胚發(fā)育囊胚的二分胚發(fā)育率，比桑椹胚的二分胚發(fā)育率要低，可能是因為囊胚正處于進一步的細胞率要低，可能是因為囊胚正處于進一步的細胞分化狀態(tài)，操作后胚胎的調(diào)整能力比桑椹胚差。分化狀態(tài)，操作后胚胎的調(diào)整能力比桑椹胚差。相對而言，二分胚、四分胚比較容易培養(yǎng)，而相對而言，二分胚、四分胚比較容易培

14、養(yǎng)，而八分胚的存活率很低。八分胚的存活率很低。 第第五五節(jié)節(jié) 胚胎嵌合胚胎嵌合l嵌合體（嵌合體（chimerachimera）是指在同一個體中，由于基因型不是指在同一個體中，由于基因型不同的細胞或組織互相接觸，且各自獨自并存的狀態(tài)發(fā)同的細胞或組織互相接觸，且各自獨自并存的狀態(tài)發(fā)育早期，如卵裂球甚至受精卵所形成的嵌合體稱為育早期，如卵裂球甚至受精卵所形成的嵌合體稱為原原發(fā)性嵌合體發(fā)性嵌合體，而把在發(fā)育的較晚期，如胚層已經(jīng)分化，而把在發(fā)育的較晚期，如胚層已經(jīng)分化，或器官開始形成后，通過組織移植或嫁接等方法所形或器官開始形成后，通過組織移植或嫁接等方法所形成的部分組織或器官的嵌合，稱為成的部分組織或

15、器官的嵌合，稱為次生性嵌合體次生性嵌合體 l19011901年，年，SpemannSpemann最早開始進行動物嵌合體的最早開始進行動物嵌合體的研究，他進行了蛙嵌合個體的培育，其目的是研究，他進行了蛙嵌合個體的培育，其目的是為了研究兩棲類動物的發(fā)育機制。為了研究兩棲類動物的發(fā)育機制。 l19601960年，年，MintzMintz開始研究嵌合體制作技術，到開始研究嵌合體制作技術，到19651965年第一次獲得活至成體的正常小鼠嵌合體。年第一次獲得活至成體的正常小鼠嵌合體。 制作過程制作過程小鼠嵌合體的制作過程胚胎嵌合的意義胚胎嵌合的意義l胚胎嵌合技術可以作為研究分析哺乳動物發(fā)生機制胚胎嵌合技術可以作為研究分析哺乳動物發(fā)生機制的重要手段，例如研究卵裂球分化潛力，研究性分的重要手段，例如研究卵裂球分化潛力，研究性分化機制與性比，研究化機制與性比，研究X X染色體失活及其作用和研究胚染