高效液相色譜法檢測(cè)西瓜中四種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留

1、目 錄摘 要 .2Abstract .2引言. .31 有機(jī)磷農(nóng)藥及其檢測(cè)方法.31.1 有機(jī)磷農(nóng)藥的基本概況.3 1.2 有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法.5 1.3四種有機(jī)磷農(nóng)藥簡(jiǎn)介.7 2 樣品采集與預(yù)處理 .92.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料.9 2.2 樣品的來源與采集.102.3 樣品預(yù)處理.10 3 四種有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜分離.11 3.1 流動(dòng)相比例、流動(dòng)相pH和流速的選擇.11 3.2 四種有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖.11 3.3 方法學(xué)考察.134 西瓜樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測(cè)定與分析 .15 4.1 色譜條件.16 4.2 測(cè)試樣品.16 4.3 計(jì)算四種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法.174

2、.4 兩種西瓜樣品的檢測(cè)結(jié)果分析.17 5 結(jié)論.17 致謝.18參考文獻(xiàn) .18高效液相色譜法檢測(cè)西瓜中四種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留摘 要 ：本文結(jié)合高效液相色譜法對(duì)青島市城陽區(qū)大潤(rùn)發(fā)中銷售的西瓜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留是否超標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè)，并結(jié)合有機(jī)磷農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)以及性質(zhì)建立了一種在高效液相色譜法的基礎(chǔ)上能夠檢測(cè)四種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法。 關(guān)鍵詞：西瓜；檢測(cè)；農(nóng)藥Checking out the Four Kinds Of Organic Phosphorus Pesticide Residues In Watermelon By HPLCAbstract ：In this paper，combined w

3、ith HPLC method，researched the watermelon of RT-mart supermarket in Chengyang District of Qingdao City. And it established a method combined with the structure characteristics and properties of organophosphorus pesticide to check out four kinds of pesticides.Key words： Watermelon ;Detection; Pestici

4、de引言 青島市最近發(fā)生了毒西瓜事件，以青島市膠州市和即墨市為主要城市，共有12個(gè)人吃了西瓜后，出現(xiàn)頭暈、嘔吐等癥狀，經(jīng)有關(guān)部門鑒定該種西瓜名叫“黑美人”，其中含有農(nóng)藥殘留涕滅威，涕滅威是一種有機(jī)磷農(nóng)藥。如果食用含有涕滅威超標(biāo)的食物會(huì)使人產(chǎn)生惡心等癥狀，重者會(huì)使人昏迷，甚至死亡。盡管城陽地區(qū)還沒發(fā)生西瓜中有機(jī)磷農(nóng)藥超標(biāo)的事件，但已經(jīng)引起該地區(qū)的人恐慌了，所以研究出一種能夠檢測(cè)西瓜中有機(jī)磷農(nóng)藥的現(xiàn)實(shí)可行的方法是十分重要的。這是本論文的出發(fā)點(diǎn)，所以文對(duì)青島市城陽區(qū)大潤(rùn)發(fā)所售西瓜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留進(jìn)行分析，結(jié)合HPLC的原理研究出了能夠檢測(cè)西瓜四種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法。另外，現(xiàn)在基本上沒有對(duì)青島市城陽

5、區(qū)大潤(rùn)發(fā)所售西瓜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的研究。所以在有機(jī)磷殘留方面，本論文對(duì)青島市城陽區(qū)大潤(rùn)發(fā)所售西瓜的質(zhì)量評(píng)價(jià)有很重要的作用。 在我國， 檢測(cè)和分析食品中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法一般都采用氣相色譜法。當(dāng)用氣相色譜法檢測(cè)物質(zhì)的含量時(shí)，盡管在靈敏度方面要優(yōu)于液相色譜法，但是檢測(cè)部分對(duì)熱不穩(wěn)定的農(nóng)藥時(shí)，氣相色譜法就遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如液相色譜法容易操作。因?yàn)橐合嗌V法具有對(duì)那些熱不穩(wěn)定性物質(zhì)有較好的檢測(cè)效果，同時(shí)還具有不會(huì)浪費(fèi)過多實(shí)驗(yàn)用品和所用時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)。1 有機(jī)磷農(nóng)藥及其檢測(cè)方法 1.1 有機(jī)磷農(nóng)藥的基本概況 1.1.1 有機(jī)磷農(nóng)藥的定義和分類 有機(jī)磷農(nóng)藥是含磷有機(jī)化合物，英文簡(jiǎn)寫為OPPs，大多是磷酸酯或酰胺類

6、的化合物，對(duì)動(dòng)物和人體具有危害作用，在自然條件下可以自行分解。 現(xiàn)在在我國所有賣農(nóng)藥的地方，有機(jī)磷農(nóng)藥品種有很多，大約占我國所有殺蟲劑品種總量的百分之三十七，但產(chǎn)量卻高的讓人難以想象，大約占農(nóng)藥的百分之七十四。有機(jī)磷農(nóng)藥可以用在農(nóng)業(yè)上，例如消滅害蟲，保護(hù)莊稼，但殘留在莊稼上的農(nóng)藥會(huì)在食物鏈中的富集，人們吃了含有農(nóng)藥殘留的食物便會(huì)中毒，這使得人們的身體健康受到影響。有機(jī)磷農(nóng)藥的種類非常多，相對(duì)應(yīng)的性能也就很多了。比如化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定、殺蟲效率高、易氧化、遇熱易分解等等。 1.1.2 有機(jī)磷農(nóng)藥的基本性質(zhì)及其殘留危害 有機(jī)磷農(nóng)藥純品的顏色大多是白色，呈晶體狀態(tài)，有機(jī)磷農(nóng)藥在工業(yè)上也會(huì)有很重要的用途，

7、但與農(nóng)業(yè)上用的稍有不同，一般為黃色油狀液體，有跟大蒜或韭菜相似的臭味。密度大多比1要大，溶于有機(jī)溶劑,在水中基本上沒有溶解性，具有較高的沸點(diǎn)，在自然條件下能保存較長(zhǎng)時(shí)間，但在堿性條件下比較容易分解。在人和動(dòng)物體內(nèi)容易蓄積，從而使人和動(dòng)物中毒。 農(nóng)藥殘留（pesticide residues）指的是農(nóng)藥在被人們使用之后在環(huán)境中、生物體和農(nóng)副產(chǎn)品中殘存的降解物農(nóng)藥原體、有毒代謝物、農(nóng)藥原體和雜質(zhì)的總稱。 現(xiàn)在人們大多都使用非持久性的有機(jī)磷農(nóng)藥，這種有機(jī)磷農(nóng)藥有幾周至幾個(gè)月的降解半衰期。有相關(guān)數(shù)據(jù)說明在某種生態(tài)環(huán)境下有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留期可以很長(zhǎng)時(shí)間，殘留在在植物體內(nèi)的有機(jī)磷農(nóng)藥被人和動(dòng)物食用后，會(huì)在其

8、體內(nèi)發(fā)生蓄積作用。人們?nèi)绻诤荛L(zhǎng)一段時(shí)期內(nèi)食用農(nóng)殘超標(biāo)的食物，不僅會(huì)危及到自身的身體健康，而且有的甚至?xí)z傳給影響下一代。 1.2 有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法 現(xiàn)在，有百分之七十九的農(nóng)藥殘留是用氣相色譜法(英文簡(jiǎn)寫為GC)來檢測(cè)和分析的，現(xiàn)在許多國家都會(huì)用氣相色譜法檢測(cè)和分析食品中的農(nóng)藥殘留。當(dāng)用氣相色譜法檢測(cè)食品中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留時(shí)，具有不會(huì)浪費(fèi)過多實(shí)驗(yàn)用品和所用時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)，上文中還提到盡管在靈敏度和精確度方面要優(yōu)于液相色譜法，但是檢測(cè)部分對(duì)熱不穩(wěn)定的農(nóng)藥時(shí)，氣相色譜法就遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如液相色譜法容易操作，另外這是在有熟悉和掌握有關(guān)氣相色譜法的實(shí)驗(yàn)儀器的人來操作的前提下才能保證其較高的精確度，精密度

9、高的儀器會(huì)比較貴，而水果蔬菜的保存期又相對(duì)較短，這使得在檢測(cè)農(nóng)藥殘留時(shí)，人們一般不會(huì)選擇氣相色譜法，所以說氣相色譜法一般在實(shí)驗(yàn)室才會(huì)用得到。色譜法(Chromatography)是根據(jù)分析物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離的目的，由于電信號(hào)可以在儀器上顯示出來，所以色譜儀是一種采用電信號(hào)來代替所測(cè)物質(zhì)的濃度，電信號(hào)包括電壓和電流等，最后把所測(cè)得的電信號(hào)接到記錄儀上記錄下來的分離分析方法。現(xiàn)在，氣相色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法及串聯(lián)色譜技術(shù)是檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的主要和首選方法。 高效液相色譜法（HPLC），又稱高壓液相色譜，它來源于色譜法，與色譜法有著密不可分的聯(lián)系，高效液相

10、色譜法作的流動(dòng)相為液體，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入到裝有固定相的色譜柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析，是一種非常重要的分離分析技術(shù)。另外HPLC的色譜柱具有重復(fù)使用多次而幾乎不影響分離效果的特點(diǎn)，經(jīng)高效液相色譜分析后的樣品比較容易回收，同時(shí)對(duì)樣品的破壞壞程度較小。HPLC的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)”。從進(jìn)樣到檢測(cè)器之間，除了柱子以外的任何死空間（進(jìn)樣器、柱接頭和檢測(cè)池等）中，如果流動(dòng)相流型發(fā)生變化，從而導(dǎo)致柱效率降低，所以在用高效液相色譜法分析物質(zhì)時(shí)，一定要盡最大可能保證流動(dòng)相的流型。 1.3 四種有機(jī)磷農(nóng)藥

11、簡(jiǎn)介 1.3.1 馬拉硫磷馬拉硫磷又稱馬拉松，英文名稱為malathion ，實(shí)驗(yàn)式為C10H19O6PS2，相對(duì)分子質(zhì)量為330.358， 化學(xué)名稱為O，O-二甲基-S-1，2-二(乙氧基羰基)乙基硫代磷酸酯，是一種高效殺蟲劑。馬拉硫磷的熔點(diǎn)為2.9-3.7攝氏度，沸點(diǎn)為156-159攝氏度，在15攝氏度時(shí)，每升水可以溶解145 mg。在PH值高于7.0時(shí)就會(huì)失去功效，原因是發(fā)生了水解反應(yīng)，在光照條件下相對(duì)穩(wěn)定，但不耐高溫，溫度過高會(huì)發(fā)生分解，甚至燃燒所以在運(yùn)輸過程中要注意控制溫度。當(dāng)人體發(fā)生馬拉硫磷中毒時(shí)，會(huì)表現(xiàn)出頭痛、惡心和多汗等癥狀，如果誤食的話應(yīng)立即送往醫(yī)院，首先對(duì)病人進(jìn)行催吐。如不

12、慎進(jìn)入到眼睛里，用溫水沖洗即可。 1.3.2 敵敵畏敵敵畏又稱二氯松，英文名稱為dichlorvos，實(shí)驗(yàn)式為C4H7C12O4P ，相對(duì)分子質(zhì)量為221.98，化學(xué)名稱為O，O-二甲基-O-(2，2-二氯乙烯基)磷酸酯，是一種廣泛的高效殺蟲劑。敵敵畏的熔點(diǎn)為-60攝氏度，沸點(diǎn)為74攝氏度，在室溫下，每升水可以溶解10g左右，能與大多數(shù)有機(jī)溶劑混溶。在堿性條件下水解很快，在光照條件下相對(duì)穩(wěn)定，但不耐高溫，溫度過高會(huì)發(fā)生分解，甚至燃燒所以在運(yùn)輸過程中要注意控制溫度。當(dāng)人體發(fā)生敵敵畏中毒時(shí)，會(huì)表現(xiàn)出頭痛、腹瀉和流口水等癥狀，嚴(yán)重者會(huì)動(dòng)作不自主、瞳孔縮小、脈搏和呼吸減慢，甚至停止。人如果誤食，應(yīng)立即

13、送往醫(yī)院，首先對(duì)病人進(jìn)行催吐，如果不進(jìn)行救治，可在數(shù)十分鐘內(nèi)死亡 。如果皮膚接觸到敵敵畏，應(yīng)最快速用肥皂水反復(fù)沖洗。1.3.3 樂果樂果又稱樂戈，英文名稱為dimethoate實(shí)驗(yàn)式為C5H12NO3PS2，相對(duì)分子質(zhì)量為229.12 ，化學(xué)名稱為O，O-二甲基S-(N-甲基氨基甲酰甲基)二硫代磷酸酯，是一類光譜殺蟲劑。樂果的熔點(diǎn)為52-52.5攝氏度，沸點(diǎn)為86攝氏度，微溶于水，溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑。在堿性條件下水解很快，在光照條件下相對(duì)穩(wěn)定，但不耐高溫，溫度過高會(huì)發(fā)生分解，甚至燃燒，與強(qiáng)氧接觸會(huì)發(fā)生反應(yīng)。當(dāng)人體發(fā)生樂果中毒時(shí)，會(huì)出現(xiàn)中間期肌無力綜合癥的癥狀，嚴(yán)重者會(huì)呼吸困難，甚至死亡。人如果

14、口服中毒，應(yīng)立即送往醫(yī)院，首先對(duì)病人用生理鹽水反復(fù)洗胃 。如果皮膚接觸到樂果，盡快用流動(dòng)著的肥皂水及清水反復(fù)沖洗。如不慎入眼，提起眼瞼，用流動(dòng)清水或生理鹽水沖洗，并及時(shí)趕往醫(yī)院就醫(yī)。1.3.4 對(duì)硫磷對(duì)硫磷又稱乙基對(duì)硫磷，英文名稱為Parathion，實(shí)驗(yàn)式為C10H14NO5PS， 相對(duì)分子質(zhì)量為291.27，化學(xué)名稱為O，O-二乙基-O-(4-硝基苯基)硫代磷酸酯，是一種高效、廣譜的有機(jī)磷殺蟲劑和殺螨劑。對(duì)硫磷的熔點(diǎn)為6.1攝氏度，沸點(diǎn)為157-162攝氏度（在壓強(qiáng)為80Pa的條件下），相對(duì)密度為1.2656，難溶于水，溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑。在堿性條件下水解很快，在光照條件下相對(duì)穩(wěn)定，但不耐

15、高溫，溫度過高會(huì)發(fā)生分解，甚至燃燒，與強(qiáng)氧接觸會(huì)發(fā)生反應(yīng)。當(dāng)人體發(fā)生對(duì)硫磷中毒時(shí)，會(huì)出現(xiàn)嘔吐、頭痛和全身軟弱無力等癥狀，嚴(yán)重者會(huì)呼吸困難，甚至死亡。人如果口服中毒，應(yīng)立即送往醫(yī)院，首先對(duì)病人用生理鹽水反復(fù)洗胃 。如果皮膚接觸到對(duì)硫磷，盡快用流動(dòng)著的肥皂水及清水反復(fù)沖。2 樣品采集及預(yù)處理 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料 2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 配有紫外檢測(cè)器的HPLC(1100型)，孔徑為1504.6mmi.d 的色譜柱（Zorbax elipse XDB C18），濾膜的厚度為0.45微米，高速組織搗碎機(jī)，氮吹濃縮儀，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。 2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料和試劑 甲醇，超純水，二氯甲烷，無水硫酸鈉、氯化鈉

16、；馬拉硫磷標(biāo)準(zhǔn)樣品、敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)樣品、對(duì)硫磷標(biāo)準(zhǔn)樣品、樂果標(biāo)準(zhǔn)樣品。采用每毫升100微克作為四種有機(jī)磷農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)濃度。 配制有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)液步驟： 先用微量進(jìn)樣器量取1mL四種有機(jī)磷農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)品，然后用甲醇分別定容為每毫升10微克的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，并放在冰箱里保存?zhèn)溆谩?1)從冰箱里取出儲(chǔ)備液，用微量進(jìn)樣器量取每毫升10微克的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1毫升于100毫升容量瓶中，然后用甲醇定容為每毫升0.1微克的混合標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)液備用； (2) 用微量進(jìn)樣器量取每毫升10微克的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1毫升于20毫升容量瓶中，用甲醇定容為每毫升0.5微克的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)液備用； (3) 用微量進(jìn)樣器量取每毫升10微克標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)液1毫

17、升于10毫升容量瓶中，然后用甲醇定容為每毫升1.0微克的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)液備用；(4) 用微量進(jìn)樣器量取每毫升10微克的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)液1毫升于10毫升容量瓶中，然后用微量進(jìn)樣器量取1毫升甲醇加到容量瓶中定容為每毫升5.0微克的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)液備用；(5) 用微量進(jìn)樣器量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1毫升制成每毫升10.0微克的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)液備用。 2.2 樣品的來源與采集 2.2.1 樣品來源 樣品取自青島市城陽區(qū)大潤(rùn)發(fā)中銷售的京欣西瓜和浙江平湖西瓜 。 2.2.2 樣品的采集從青島市城陽區(qū)大潤(rùn)發(fā)中挑選個(gè)頭大、品質(zhì)好的兩種西瓜樣品各五個(gè)，帶回實(shí)驗(yàn)室。2.3 樣品的預(yù)處理用清水對(duì)采集的兩種西瓜樣品進(jìn)行清洗，然后用去離子水清洗，用紗布

18、輕輕擦干。取一個(gè)京欣西瓜樣本其中可以食用的部分用高速組織搗碎機(jī)搗碎混勻。 取1升勻漿于分液漏斗中進(jìn)行萃取，剩下的勻漿放入-20攝氏度冰箱長(zhǎng)期保存?zhèn)溆?，將溶液的PH值調(diào)節(jié)為中性，加入約40克氯化鈉，待氯化鈉完全溶解，然后加入二氯甲烷50 毫升于水樣中，振蕩萃取5 分鐘，靜置分層后，收集有機(jī)相，共萃取 3 次，合并3次萃取液，用無水硫酸鈉干燥。將干燥后的萃取液轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至 5毫升，然后在氮吹濃縮儀上繼續(xù)濃縮至1毫升。浙江平湖西瓜樣本的處理過程如京欣西瓜。 3 四種有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜分離 3.1 流動(dòng)相比例、流動(dòng)相pH和流速的選擇實(shí)驗(yàn)選擇甲醇:水= 68.5:31.5（體積比），選

19、擇中性或微酸性條件下來對(duì)流動(dòng)相pH進(jìn)行選擇，選擇 pH 為 6 作為流動(dòng)相的最優(yōu)pH;一般的實(shí)驗(yàn)流速分為每分鐘0.6毫升， 每分鐘0.8毫升和每分鐘1.0毫升，流速對(duì)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響可以忽略不計(jì)，所以用每分鐘1.0毫升的流速來進(jìn)行試驗(yàn)，在此條件下可以對(duì)四種農(nóng)藥殘留分離和分析。 3.2 四種有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖 在色譜條件下：紫外檢測(cè)器，流速為每分鐘1毫升，流動(dòng)相pH為6，甲醇:水 = 68.5:31.5（體積比）， 進(jìn)樣量均為20L， 對(duì)不同的濃度下四種有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)樣品做色譜圖。圖3.2-11 樂果、2 敵敵畏、3 馬拉硫磷、4 對(duì)硫磷圖3.2-21 樂果、2 敵敵畏、3 馬拉硫磷、4

20、對(duì)硫磷圖3.2-31 樂果、2 敵敵畏、3 馬拉硫磷、4 對(duì)硫磷圖3.2-41 樂果、2 敵敵畏、3 馬拉硫磷、4 對(duì)硫磷圖3.2-51 樂果、2 敵敵畏、3 馬拉硫磷、4 對(duì)硫磷3.3 方法學(xué)考察 3.3.1 工作曲線 從上圖的分析結(jié)果中可以得出，四種標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)磷農(nóng)藥的的峰面積與質(zhì)量濃度的有很好的線性關(guān)系，可以滿足定量分析的要求。由高效液相色譜儀得出的色譜圖，可以觀察到四種農(nóng)藥的峰面積，做出峰面積與有機(jī)磷農(nóng)藥在不同濃度下時(shí)的線性回歸，如下圖根據(jù)美國EPA，方法檢出限為 MDL=St(n，1-a)，若對(duì)本實(shí)驗(yàn)做七次重復(fù)試驗(yàn)，置信水平就會(huì)達(dá)到百分之99，查t 值為3. 14。T表示自由度為n-1時(shí)

21、的Students t 值；1-a表示置信水平；S表示n次加標(biāo)測(cè)定濃度的標(biāo)準(zhǔn)偏差；N表示重復(fù)測(cè)定的加標(biāo)樣品數(shù)。 四種農(nóng)藥的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、最低檢出限如下表所示。表3.3.1-1 四種有機(jī)磷農(nóng)藥組分的線性關(guān)系和最低檢出限有機(jī)磷農(nóng)藥線性方程相關(guān)系數(shù)最低檢出限(g/L) 對(duì)硫磷 y = 82.90x + 45.780.9991.0馬拉硫磷 y = 117.48x + 88.40 0.9931.5樂果y = 208.89x + 445.68 0.9991.1敵敵畏y = 177.79x + 678.81 0.9991.13.3.2 計(jì)算西瓜樣品回收率和精密度 精密度用以表示測(cè)量方法的重現(xiàn)性，一

22、般測(cè)定 5到10 次，用來說明所測(cè)的數(shù)據(jù)之間相互的接近程度。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）指的是：標(biāo)準(zhǔn)偏差與計(jì)算結(jié)果算術(shù)平均值的比值，即：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）=標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）/計(jì)算結(jié)果的算術(shù)平均值（X）100%。分析測(cè)試結(jié)果的精密度一般用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差來表示。用微量進(jìn)樣器量取濃度為每毫升9微克的超純水1毫升，加入濃度為每毫升10微克的標(biāo)準(zhǔn)濃度混合液中，按照3.2的實(shí)驗(yàn)方法來分析，進(jìn)行7次重復(fù)試驗(yàn)后得下表。 表3.3.2-1 樣品回收率（n=7）有機(jī)磷農(nóng)藥加標(biāo)量/g/m L平均測(cè)定量/g/m L平均回收率/%對(duì)硫磷1.00.9191馬拉硫磷1.00.8383敵敵畏1.00.9596樂果1.00.929

23、2表3.3.2-2 四種有機(jī)磷農(nóng)藥的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD) （n=7）有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）算術(shù)平均值相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）對(duì)硫磷0.0490.915.4%馬拉硫磷0.0470.835.7%敵敵畏0.0340.953.6%樂果0.0350.923.8%通過上表可以得知：樣品的平均回收率在百分之八十三至百分之九十五之間，說明用高效液相色譜法對(duì)樣品進(jìn)行試驗(yàn)的回收率較高；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在百分之三點(diǎn)六至百分之五點(diǎn)七之間,說明用高效液相色譜法對(duì)樣品進(jìn)行試驗(yàn)的精密度也很高。 4西瓜樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測(cè)定與分析 4.1 色譜條件 檢測(cè)器使用紫外檢測(cè)器； 流動(dòng)相為甲醇和超純水，使用甲醇：超純水=67:3

24、3作為體積比；流速為每分鐘1毫升，進(jìn)樣的體積為20L；流動(dòng)相的pH 為7。 4.2 測(cè)試樣品 對(duì)青島市城陽區(qū)大潤(rùn)發(fā)所售西瓜進(jìn)行有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測(cè)與分析，檢測(cè)結(jié)果如下圖。京欣西瓜液相色譜圖圖4.2-2浙江平湖西瓜液相色譜圖4.3 計(jì)算四種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法 測(cè)定西瓜樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的濃度，用 c2/c1 =a2/a1進(jìn)行計(jì)算：a1表示標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖上的峰面積；a2表示被測(cè)定樣品的色譜圖上的峰面積；c1表示標(biāo)準(zhǔn)樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥濃度，單位為g/m L； c2表示被測(cè)定樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥濃度，單位為g/m L。4.4 兩種西瓜樣品的檢測(cè)結(jié)果分析 兩種西瓜樣品檢測(cè)結(jié)果匯總?cè)缦?樣品有機(jī)磷農(nóng)藥濃度

25、（ug/L）樂果敵敵畏馬拉硫磷對(duì)硫磷京欣西瓜34.222.500浙江平湖西瓜24.838.200國家標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于蔬菜和水果農(nóng)藥殘留最高限量規(guī)定中樂果1.00mgkg、敵敵畏0.20mgkg、對(duì)硫磷0.00 mgkg、馬拉硫磷0.00 mgkg。所以兩種西瓜四種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留都符合國家標(biāo)準(zhǔn)。 5 結(jié)論 使用高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)西瓜中四種有機(jī)磷農(nóng)藥的方法是本研究首次采用的。四種有機(jī)磷農(nóng)藥可以同時(shí)被HPLC分離和制備，pH 為7時(shí)的流動(dòng)相、每分鐘流動(dòng)相的進(jìn)入量為1.0毫升以及20微升作為進(jìn)樣量時(shí)，高效液相色譜法能夠分離對(duì)硫磷、敵敵畏、馬拉硫磷、樂果這四種有機(jī)磷農(nóng)藥。在該條件下，每升1.5微克、每升1.

26、1微克、 每升1.0微克、每升1.1微克分別為馬拉硫磷、樂果、對(duì)硫磷、敵敵畏的最小檢出限；回收率在百分之八十四至百分之九十五之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為百分之三點(diǎn)七至百分之五點(diǎn)六3.，具有較高的精密度。 另外，HPLC測(cè)定西瓜中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，主要有以下四點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)： (1)相對(duì)于流動(dòng)相來說，以甲醇與水的比為67:33（體積比）為流動(dòng)相，比用甲醇與水的比為7030（體積比）做流動(dòng)相，有很樂觀的分離效果，并且在操作上也更容易。 (2)相對(duì)于流動(dòng)相的 pH 來說，在pH 為6時(shí)的流動(dòng)相下，有機(jī)磷農(nóng)藥中的的對(duì)硫磷、馬拉硫磷、敵敵畏、樂果這四種成分能夠分離出來，出來的峰的對(duì)稱性和峰的個(gè)數(shù)具有良好的效果。 (3)

27、對(duì)于精密度來說，此次實(shí)驗(yàn)中，四種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在百分之三點(diǎn)七至百分之五點(diǎn)六之間，所以在精密度上也很高。(4)相對(duì)于檢出限來說， 樂果和對(duì)硫磷的檢出限每升1.0微克和每升1.1微克分別為對(duì)硫磷和樂果的檢出限，檢出限降低之后，檢測(cè)的靈敏度自然就會(huì)得到提高。 經(jīng)過上述實(shí)驗(yàn)，說明在檢測(cè)西瓜中敵敵畏、對(duì)硫磷、樂果和馬拉硫磷這四種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留時(shí)，此種方具有比較樂觀的法分離效果，通過四種農(nóng)藥殘留的檢出限來看，該方法也具有較高的靈敏度。致謝 現(xiàn)在，本論文基本完成，首先我要深深地感謝我的導(dǎo)師孫萍老師！為了我能順利完成此篇論文，孫老師花費(fèi)了很多寶貴的時(shí)間，給予了我頗多的耐心，精心指導(dǎo)我完成了本篇論

28、文。在此，我十分感謝孫老師對(duì)我的關(guān)懷和幫助，感謝導(dǎo)師兩年來對(duì)我的培育之恩。本文的研究，大多數(shù)工作是在海潤(rùn)農(nóng)大第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和青島農(nóng)業(yè)大學(xué)圖書館完成的，期間多虧了孫萍等老師和好友陳浩東同學(xué)、馬圣聽同學(xué)的無私的付出和悉心關(guān)懷，我對(duì)他們表示深深地感謝。另外，我的父母在我大學(xué)期間給于我無私的關(guān)懷與照料，無微不至的支持和幫助，這樣才使我的學(xué)業(yè)能夠順利完成。還要感謝在本論文評(píng)議、評(píng)閱過程中提出寶貴建議的老師、專家，在此獻(xiàn)上我真誠的敬意。 參考文獻(xiàn)：1楊克欽.俞宏.劉彥.何為華.張勁強(qiáng).李君 國內(nèi)外西瓜甜瓜農(nóng)藥殘留最高限量及其檢測(cè)技術(shù)期刊論文-中國西瓜甜瓜2002(2)2 林逢春 農(nóng)藥污染與生態(tài)環(huán)境 200

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