實(shí)驗(yàn)一通課件

1、實(shí)驗(yàn)一通課件v第一次上課時(shí)間為第一次上課時(shí)間為4月月8日上午日上午8：00，5個(gè)學(xué)個(gè)學(xué)時(shí)。時(shí)。v 第一次課請(qǐng)教師提前第一次課請(qǐng)教師提前20分鐘到，借示教鏡，分鐘到，借示教鏡，留學(xué)生名單及；安排值日分組；學(xué)生實(shí)驗(yàn)報(bào)留學(xué)生名單及；安排值日分組；學(xué)生實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊(cè)標(biāo)出第幾實(shí)驗(yàn)室。告冊(cè)標(biāo)出第幾實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)一通課件v第一次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（第一次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（3個(gè)）個(gè)）一、實(shí)驗(yàn)室生物安全一、實(shí)驗(yàn)室生物安全 (0.5(0.5學(xué)時(shí)學(xué)時(shí)) ) 熟悉熟悉 （1 1）微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全意義）微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全意義 （2 2）實(shí)驗(yàn)室規(guī)則）實(shí)驗(yàn)室規(guī)則實(shí)驗(yàn)一通課件二、革蘭染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察二、革蘭染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察(3

2、(3學(xué)時(shí)學(xué)時(shí)) ) （1 1）革蘭染色（）革蘭染色（2.52.5學(xué)時(shí)），每人一張玻片。學(xué)時(shí)），每人一張玻片。（2 2）細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)（）細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)（0.50.5學(xué)時(shí)），為示教內(nèi)容。學(xué)時(shí)），為示教內(nèi)容。三、細(xì)菌接種技術(shù)三、細(xì)菌接種技術(shù)(1.5(1.5學(xué)時(shí)學(xué)時(shí)) ) 普通固體培養(yǎng)基：普通固體培養(yǎng)基：9個(gè)個(gè) 斜面固體培養(yǎng)基：斜面固體培養(yǎng)基：9個(gè)個(gè)半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基： 9個(gè)個(gè)液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基： 9個(gè)個(gè) 實(shí)驗(yàn)一通課件 一一. . 實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)驗(yàn)室生物安全 二二. . 革蘭染色革蘭染色 三三. . 細(xì)菌接種技術(shù)細(xì)菌接種技術(shù) 實(shí)驗(yàn)一通課件 1.1.介紹實(shí)驗(yàn)室生物安全方面的相關(guān)知識(shí)，介紹實(shí)驗(yàn)

3、室生物安全方面的相關(guān)知識(shí)， 樹立樹立“有菌的意識(shí)，無菌操作的觀念有菌的意識(shí)，無菌操作的觀念” ” 。 2.2.掌握革蘭染色方法，觀察細(xì)菌的基本掌握革蘭染色方法，觀察細(xì)菌的基本 形態(tài)及特殊結(jié)構(gòu)。形態(tài)及特殊結(jié)構(gòu)。 3.3.掌握常用的細(xì)菌接種技術(shù)。掌握常用的細(xì)菌接種技術(shù)。實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)一通課件v生物危害源生物危害源v化學(xué)危害源化學(xué)危害源v物理危害源物理危害源 后兩者的特性：后兩者的特性： 1 1、可感知，易避免、可感知，易避免 2 2、危害范圍有限、危害范圍有限 3 3、危害持續(xù)時(shí)間短、危害持續(xù)時(shí)間短一一. .實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)驗(yàn)室生物安全 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的主要危害源包括哪些醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的主要危害源包

4、括哪些? ?實(shí)驗(yàn)一通課件v慘痛的歷史教訓(xùn)慘痛的歷史教訓(xùn) 例一：例一：19561956年，前蘇聯(lián)的一個(gè)實(shí)驗(yàn)室曾有年，前蘇聯(lián)的一個(gè)實(shí)驗(yàn)室曾有9 9支支裝有感染了裝有感染了委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒的鼠腦的安的鼠腦的安瓿被打破。由于瓿被打破。由于沒采取必要的措施沒采取必要的措施，結(jié)果在，結(jié)果在幾天內(nèi)造成幾天內(nèi)造成2424名名工作人員感染。工作人員感染。一一. .實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)驗(yàn)室生物安全 實(shí)驗(yàn)一通課件 例二：例二：20042004年年4 4月，中國疾病預(yù)防控制中月，中國疾病預(yù)防控制中心科研人員，采用未經(jīng)論證的非典病毒滅心科研人員，采用未經(jīng)論證的非典病毒滅活方法，活方法，在不符合防護(hù)要求的

5、普通實(shí)驗(yàn)室在不符合防護(hù)要求的普通實(shí)驗(yàn)室內(nèi)內(nèi)操作非典感染材料，造成北京、安徽發(fā)操作非典感染材料，造成北京、安徽發(fā)生非典疫情。生非典疫情。一一. .實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)驗(yàn)室生物安全 實(shí)驗(yàn)一通課件v病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全的核心是防病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全的核心是防擴(kuò)散和防感染。擴(kuò)散和防感染。一一. .實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)驗(yàn)室生物安全 v實(shí)驗(yàn)室感染的主要原因是：防護(hù)意識(shí)不強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)室感染的主要原因是：防護(hù)意識(shí)不強(qiáng)，操作失誤，防護(hù)條件不足。操作失誤，防護(hù)條件不足。實(shí)驗(yàn)一通課件v1.1.進(jìn)實(shí)驗(yàn)室必須穿白大衣，進(jìn)實(shí)驗(yàn)室必須穿白大衣，離室需脫下反折。離室需脫下反折。v2.2.嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)食、飲水，嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)食、

6、飲水，不必需的物品不要攜帶入室。不必需的物品不要攜帶入室。 v3.3.如有傳染性材料的污染，及時(shí)報(bào)告老師。如有傳染性材料的污染，及時(shí)報(bào)告老師。v4.4.實(shí)驗(yàn)后的材料要放在指定容器內(nèi)實(shí)驗(yàn)后的材料要放在指定容器內(nèi)。v5.5.離開實(shí)驗(yàn)室前，要用肥皂洗手；離開實(shí)驗(yàn)室前，要用肥皂洗手；接觸過傳染性強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)接觸過傳染性強(qiáng)的實(shí)驗(yàn) 材料要用材料要用0.1%0.1%的新潔爾滅浸泡消毒。的新潔爾滅浸泡消毒。v6.6.值日生要作好值日工作，關(guān)好水、電、門窗，方可離開值日生要作好值日工作，關(guān)好水、電、門窗，方可離開 實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)室規(guī)則實(shí)驗(yàn)室規(guī)則實(shí)驗(yàn)一通課件 二二. .細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查染色標(biāo)本檢

7、查染色標(biāo)本檢查 單染法單染法：簡(jiǎn)單染色，一種染料（美藍(lán)染色）。：簡(jiǎn)單染色，一種染料（美藍(lán)染色）。 復(fù)染法復(fù)染法：鑒別染色法，兩種以上染料。：鑒別染色法，兩種以上染料。 （革蘭染色、抗酸染色）（革蘭染色、抗酸染色） 實(shí)驗(yàn)一通課件革蘭染色革蘭染色( (Gram stain) )v 18841884年由丹麥細(xì)菌學(xué)家年由丹麥細(xì)菌學(xué)家GramGram創(chuàng)立。創(chuàng)立。v 革蘭染色是最常用的一種染色方法，可以革蘭染色是最常用的一種染色方法，可以將細(xì)菌初步分為將細(xì)菌初步分為革蘭染色陽性菌革蘭染色陽性菌和和革蘭染色革蘭染色陰性菌陰性菌，在臨床上具有非常重要的意義。，在臨床上具有非常重要的意義。實(shí)驗(yàn)一通課件一、目的一

8、、目的1.1.掌握細(xì)菌涂片的制備及革蘭染色的方法。掌握細(xì)菌涂片的制備及革蘭染色的方法。 2.2.熟悉革蘭染色的原理和臨床意義。熟悉革蘭染色的原理和臨床意義。實(shí)驗(yàn)一通課件二、原理二、原理G G+ +菌菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)致密，肽聚糖層厚且交聯(lián)度細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)致密，肽聚糖層厚且交聯(lián)度 高，脂質(zhì)含量少，乙醇不易滲入。高，脂質(zhì)含量少，乙醇不易滲入。G G- -菌菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)疏松，肽聚糖層薄且交聯(lián)度細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)疏松，肽聚糖層薄且交聯(lián)度 低，含大量脂質(zhì)，乙醇易滲入。低，含大量脂質(zhì)，乙醇易滲入。 通透性學(xué)說通透性學(xué)說實(shí)驗(yàn)一通課件 三、器材和試劑三、器材和試劑 1.1.菌種：菌種：白色葡萄球菌白色葡萄球菌 大腸桿菌大腸桿菌

9、 2.2.試劑：試劑： 革蘭染色液革蘭染色液 初染液初染液 結(jié)晶紫結(jié)晶紫 媒染液媒染液 盧戈氏碘液盧戈氏碘液 脫色液脫色液 95%95%乙醇乙醇 復(fù)染液復(fù)染液 稀釋石碳酸復(fù)紅稀釋石碳酸復(fù)紅 3.3.其它：其它：接種環(huán)接種環(huán) 載玻片載玻片 染色盤染色盤 洗液瓶洗液瓶 酒精燈等酒精燈等 實(shí)驗(yàn)一通課件沖洗沖洗3、使用油鏡觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果、使用油鏡觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果 四、四、方法與步驟方法與步驟 1、細(xì)菌涂片的制備、細(xì)菌涂片的制備 涂片涂片 干燥干燥 固定固定 2、染色、染色 初染初染（結(jié)晶紫）（結(jié)晶紫） 媒染媒染（盧戈氏碘液）（盧戈氏碘液） 脫色脫色 （95%乙醇）乙醇） 復(fù)染復(fù)染（稀釋石碳酸復(fù)紅）（稀釋石碳

10、酸復(fù)紅） 吸水紙吸干吸水紙吸干 1min1min30s30s沖洗沖洗沖洗沖洗沖洗沖洗實(shí)驗(yàn)一通課件一一 一一 半半 半半 G+菌菌 G-菌菌 結(jié)晶紫結(jié)晶紫盧戈氏碘液盧戈氏碘液95%95%乙醇乙醇石碳酸復(fù)紅石碳酸復(fù)紅初染初染 媒染媒染 脫色脫色 復(fù)染復(fù)染 五、結(jié)果五、結(jié)果實(shí)驗(yàn)一通課件圖一圖一圖二圖二實(shí)驗(yàn)一通課件v無菌操作（接種環(huán)滅菌和取菌）無菌操作（接種環(huán)滅菌和取菌）v涂片的厚度要適中涂片的厚度要適中v染色的時(shí)間控制，一一半半染色的時(shí)間控制，一一半半v沖洗的方法，不要對(duì)著涂片區(qū)沖洗沖洗的方法，不要對(duì)著涂片區(qū)沖洗六、注意事項(xiàng)六、注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)一通課件 七、意義七、意義 1 1、鑒別細(xì)菌、鑒別細(xì)菌 2

11、2、研究與致病性、研究與致病性 的關(guān)系的關(guān)系 3 3、指導(dǎo)臨床用藥、指導(dǎo)臨床用藥 G+菌菌 G-菌菌G+菌：菌： 外毒素外毒素 G-菌菌： 內(nèi)毒素內(nèi)毒素 G+菌：菌：青霉素、頭孢菌素等青霉素、頭孢菌素等 G-菌：菌：鏈霉素、慶大霉素等鏈霉素、慶大霉素等 實(shí)驗(yàn)一通課件細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)（示教）細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)（示教）（二毛莢一胞）（二毛莢一胞）實(shí)驗(yàn)一通課件實(shí)驗(yàn)一通課件實(shí)驗(yàn)一通課件尋找視野：尋找視野：在使用油鏡之前，必須先經(jīng)低、高倍鏡在使用油鏡之前，必須先經(jīng)低、高倍鏡觀察，然后將需進(jìn)一步放大的部分移到視野的中觀察，然后將需進(jìn)一步放大的部分移到視野的中心。心。增大光照強(qiáng)度：增大光照強(qiáng)度：將聚光器上升到最高

12、位置，光圈開將聚光器上升到最高位置，光圈開到最大，凹面鏡取光。到最大，凹面鏡取光。轉(zhuǎn)高倍鏡頭、滴加鏡油、換油鏡頭：轉(zhuǎn)高倍鏡頭、滴加鏡油、換油鏡頭：轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使高倍鏡頭離開通光孔，在需觀察部位的玻片上使高倍鏡頭離開通光孔，在需觀察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)油鏡，在轉(zhuǎn)換油滴加一滴香柏油，然后慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)油鏡，在轉(zhuǎn)換油鏡時(shí)，從側(cè)面水平注視鏡頭與玻片的距離，使鏡鏡時(shí)，從側(cè)面水平注視鏡頭與玻片的距離，使鏡頭浸入油中而又不以壓破載玻片為宜。頭浸入油中而又不以壓破載玻片為宜。注：油鏡的使用方注：油鏡的使用方法法實(shí)驗(yàn)一通課件物物 鏡鏡工作距離工作距離(mm)(mm)低倍鏡低倍鏡105.

13、40高倍鏡高倍鏡400.39油鏡頭油鏡頭1001000.110.11實(shí)驗(yàn)一通課件 透鏡 折光率 油 1.515 1.0 空氣 玻 1.52 璃 空 氣 油鏡原理示意圖油鏡原理示意圖實(shí)驗(yàn)一通課件v 概念：概念：人工配制的專供微生物生長(zhǎng)繁殖的人工配制的專供微生物生長(zhǎng)繁殖的 混合營養(yǎng)物制品?；旌蠣I養(yǎng)物制品。v 成分：成分：充足的營養(yǎng)物質(zhì)（水分、碳源、氮源、充足的營養(yǎng)物質(zhì)（水分、碳源、氮源、 無機(jī)鹽）；合適的無機(jī)鹽）；合適的PHPH；適宜的溫度；適宜的；適宜的溫度；適宜的 氣體環(huán)境。氣體環(huán)境。 一、培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基 實(shí)驗(yàn)一通課件三三. .細(xì)菌接種技術(shù)細(xì)菌接種技術(shù) 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?1. 1. 掌握常用

14、的細(xì)菌接種方法。掌握常用的細(xì)菌接種方法。 2. 2. 熟悉細(xì)菌生長(zhǎng)現(xiàn)象的觀察方法。熟悉細(xì)菌生長(zhǎng)現(xiàn)象的觀察方法。 實(shí)驗(yàn)一通課件二、培養(yǎng)基分類二、培養(yǎng)基分類 按按物理性狀物理性狀分分 液體液體培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：大量大量繁殖繁殖細(xì)菌細(xì)菌 固體固體培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)細(xì)菌細(xì)菌 半固體半固體培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：觀察動(dòng)力觀察動(dòng)力及保存菌種及保存菌種 實(shí)驗(yàn)一通課件二、培養(yǎng)基分類二、培養(yǎng)基分類 按按用途用途分分 營養(yǎng)營養(yǎng)培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：血液血液瓊脂培養(yǎng)基瓊脂培養(yǎng)基 基礎(chǔ)基礎(chǔ)培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：普通普通瓊脂培養(yǎng)基瓊脂培養(yǎng)基 選擇選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：S-SS-S培養(yǎng)基培養(yǎng)基 鑒別鑒別培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：雙糖鐵雙糖鐵

15、培養(yǎng)基培養(yǎng)基 厭氧厭氧培養(yǎng)基：庖肉培養(yǎng)基培養(yǎng)基：庖肉培養(yǎng)基 實(shí)驗(yàn)一通課件v普通固體培養(yǎng)基接種法普通固體培養(yǎng)基接種法 1.1.平板分區(qū)劃線平板分區(qū)劃線接種法：分離培養(yǎng)細(xì)菌。接種法：分離培養(yǎng)細(xì)菌。 2.2.斜面固體培養(yǎng)基斜面固體培養(yǎng)基接種法：純菌的移種，接種法：純菌的移種，短時(shí)間保存菌種。短時(shí)間保存菌種。v半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基穿刺穿刺接種法接種法 保存菌種或觀察細(xì)菌的動(dòng)力保存菌種或觀察細(xì)菌的動(dòng)力v液體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法 用于肉湯、蛋白胨水、糖發(fā)酵管等。用于肉湯、蛋白胨水、糖發(fā)酵管等。三、細(xì)菌的接種方法三、細(xì)菌的接種方法 實(shí)驗(yàn)一通課件1.1.平板分區(qū)劃線接種平板分區(qū)劃線接種- -得單個(gè)

16、菌落得單個(gè)菌落實(shí)驗(yàn)一通課件實(shí)驗(yàn)一通課件分區(qū)劃線分區(qū)劃線注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)v劃線時(shí)接種環(huán)與平皿約成劃線時(shí)接種環(huán)與平皿約成30304040度角度角, ,輕輕接觸輕輕接觸, , 以以腕力腕力在瓊脂在瓊脂表面表面輕快滑動(dòng)輕快滑動(dòng), ,不能劃破瓊脂。不能劃破瓊脂。 v第一次劃線應(yīng)占平皿面積的第一次劃線應(yīng)占平皿面積的1/10,1/10,以后每次劃線以后每次劃線 約占面積的約占面積的1/4 1/4 1/51/5。v劃線為劃線為連續(xù)劃線連續(xù)劃線, ,不能間斷。應(yīng)不能間斷。應(yīng)占滿平皿。占滿平皿。劃線劃線 不能交叉重復(fù)不能交叉重復(fù)。v每次劃完后應(yīng)每次劃完后應(yīng)滅菌滅菌。實(shí)驗(yàn)一通課件實(shí)驗(yàn)一通課件2.2.斜面接種法斜面接

17、種法實(shí)驗(yàn)一通課件3.3.液體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法4.4.半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基穿刺穿刺接種法接種法 實(shí)驗(yàn)一通課件四、細(xì)菌生長(zhǎng)現(xiàn)象的觀察四、細(xì)菌生長(zhǎng)現(xiàn)象的觀察 1.1.固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基- -菌落菌落 單個(gè)單個(gè)細(xì)菌分裂繁殖形成一堆肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)。細(xì)菌分裂繁殖形成一堆肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)。觀察菌落的形態(tài)、顏色、大小、表面、邊緣、濕度、透觀察菌落的形態(tài)、顏色、大小、表面、邊緣、濕度、透明度；在血平板上還要觀察溶血情況等。明度；在血平板上還要觀察溶血情況等。 實(shí)驗(yàn)一通課件 2.2.半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基- -鞭毛鞭毛 觀察細(xì)菌的動(dòng)力觀察細(xì)菌的動(dòng)力實(shí)驗(yàn)一通課件三. 細(xì)菌 在 液體培 養(yǎng)基

18、中的生長(zhǎng) 情 況菌 膜菌 沉 淀均勻渾 濁對(duì)照3.3.液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基 混濁生長(zhǎng)混濁生長(zhǎng)（大多數(shù)細(xì)菌）（大多數(shù)細(xì)菌） 沉淀生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)（鏈球菌）（鏈球菌） 膜樣生長(zhǎng)膜樣生長(zhǎng)（專性需氧菌，（專性需氧菌， 如結(jié)核分枝桿菌）如結(jié)核分枝桿菌） 實(shí)驗(yàn)一通課件操作內(nèi)容操作內(nèi)容 1. 1. 平板分區(qū)劃線法。平板分區(qū)劃線法。 2. 2. 斜面培養(yǎng)基的接種方法。斜面培養(yǎng)基的接種方法。 3. 3. 半固體培養(yǎng)基穿刺接種法。半固體培養(yǎng)基穿刺接種法。 4. 4. 液體培養(yǎng)基的接種方法。液體培養(yǎng)基的接種方法。實(shí)驗(yàn)一通課件 實(shí)驗(yàn)報(bào)告的撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告的撰寫1.1.細(xì)菌接種技術(shù)的具體操作步驟及注意事項(xiàng)。細(xì)菌接種技術(shù)的具體操作步驟及注意事項(xiàng)。2.2.革蘭染色革蘭染色一、目的一、目的二、原理二、原理三、材料三、材料四、方法四、方法五、五、結(jié)果（結(jié)果（2+32+3幅圖）幅圖）六、意義六、意義七、注意事項(xiàng)七、注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)一通課件結(jié)果（結(jié)果（2+32+3幅圖）幅圖）1 1、繪制涂片染色的、繪制涂片染色的G G+ +及及G G- -菌的形態(tài)圖并注明放大倍數(shù)菌的形態(tài)圖并注明放大倍數(shù)（紅藍(lán)鉛筆）（紅藍(lán)鉛筆）2