桶裝純凈水的微生物學(xué)測定及保質(zhì)期探討

1、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗設(shè)計 題目：桶裝純凈水的微生物學(xué)測定及保質(zhì)期探討班級：2008級預(yù)防醫(yī)學(xué)本科一班姓名： 朱琳 4108029027朱曉敏 5108041037 陳贊 5108041038崔朋偉 5108041039 付凱 5108041040 李巖 5108041041推薦精選桶裝純凈水的微生物學(xué)測定及保質(zhì)期探討作者及學(xué)號朱琳 4108029027 朱曉敏 5108041037陳贊 5108041038 崔朋偉 5108041039付凱 5108041040 李巖 5108041041研究背景：隨著人們物質(zhì)生活的提高，桶裝純凈水作為一種方便快捷的飲用水開始逐步走進千家萬戶，辦公室、會議室等公共

2、場所也隨處擺放著桶裝純凈水。由于桶裝純凈水來源繁多，各種品牌魚目混雜，并且已有不少人對其質(zhì)量提出質(zhì)疑。據(jù)中國消費者協(xié)會對72種品牌桶裝純凈水抽樣調(diào)查反映：有20個樣本衛(wèi)生指標未達到瓶（桶）裝飲用水標準的要求，特別是有14個樣本菌落數(shù)指標連基本的生活飲用水衛(wèi)生標準都達不到，衛(wèi)生狀況遠不如合格的自來水。這與飲用水廠家宣傳的無菌相去甚遠，若在炎熱的夏季還會危及健康，衛(wèi)生指標令人擔憂。實驗?zāi)康模猴嬘脙?yōu)質(zhì)水是保證人類健康的基石，為了提高在校大學(xué)生對桶裝純凈水的認識和了解，保證大學(xué)生的身體健康，防止因飲用被污染的純凈水而引發(fā)大腸桿菌性腦膜炎、痢疾、霍亂等腸道疾病，因而設(shè)計本實驗針對泰山醫(yī)學(xué)院內(nèi)所銷售的桶裝

3、純凈水進行微生物的測定，及飲用水保質(zhì)期的探討。實驗原理：水中致病微生物種類繁多，現(xiàn)在還不能用單一方法來分離和鑒定水中所有致病微生物，也沒有可從飲用水中定量分離出數(shù)量很少病原體的有效方法，所以，通常以水中指示微生物代替致病微生物進行檢測，從而估計污染狀況。已提出的指示微生物包括大腸桿菌、細菌總數(shù)、產(chǎn)氣莢膜梭菌等。其中，大腸桿菌一直被作為推薦精選常規(guī)的水質(zhì)細菌學(xué)標準，而細菌的總數(shù)是水體被細菌污染程度的判斷標準，細菌總數(shù)越多，說明水體受污染的程度越重。實驗材料：泰山醫(yī)學(xué)院桶裝飲用水樣本、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿、燒瓶、試管（試管內(nèi)含倒立管）、接種環(huán)、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、伊紅美藍培養(yǎng)基（選擇培養(yǎng)基）、乳糖蛋

4、白胨培養(yǎng)基，3倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)基試驗方法1 細菌總數(shù)測定： 以無菌吸管分別加入1、2兩個培養(yǎng)皿1ml水樣，3號培養(yǎng)皿不加水樣作對照試驗，重復(fù)做一組實驗。 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基冷卻4550時立即傾注于1、2、3號培養(yǎng)皿中各15ml，速與水混勻加蓋待凝。 將平板倒置于37恒溫箱中培養(yǎng)24小時后計算菌落。1號2號3號一組二組平均2 大腸桿菌的檢測 初發(fā)酵試驗：無菌操作條件下分別取水樣100ml，依次加入2個盛有50ml 3倍濃縮的無菌乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的燒瓶中（瓶內(nèi)置倒立管以指示細菌培養(yǎng)時有無產(chǎn)氣）。然后取10支裝有5ml無菌3倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管，分別加入10ml水樣（試管內(nèi)均有倒立管）。

5、然后將培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)管置于37培養(yǎng)24小時。推薦精選 指示培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)：取出發(fā)酵后的燒瓶或試管，將上述培養(yǎng)后產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸的培養(yǎng)物，分別接種于伊紅美藍培養(yǎng)基平板上，37培養(yǎng)24小時，挑選符合以下特征的菌落涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢。1 深紫黑色，有金屬光澤2 紫黑色，不帶或略帶金屬光澤3 淡紫紅色，中心顏色較深 復(fù)發(fā)酵試驗：上述菌落經(jīng)革蘭染色觀察，若為陰性，無芽孢桿菌，取其相應(yīng)的典型菌落1-3個接種于普通濃度的乳糖蛋白胨培養(yǎng)基（內(nèi)放倒立管），37培養(yǎng)24小時后，有產(chǎn)酸、產(chǎn)氣者證實有大腸桿菌群存在。依據(jù)有大腸桿菌群的陰性管或瓶數(shù)，報告每升水樣的大腸桿菌群數(shù)。3 桶裝水保質(zhì)期測定：檢測項目放置

6、不同時間后的細菌數(shù)0天7天14天30天60天細菌總數(shù)（cfu/ml）大腸菌群（mpn/100ml） 運用1、2的方法來完成上述指標的統(tǒng)計。（標準：細菌總數(shù)（cfu/ml）50 大腸菌群（mnp/100ml）3）預(yù)期結(jié)果：1 對于細菌總數(shù)的檢測：3號培養(yǎng)皿應(yīng)該是沒有菌落產(chǎn)生，而1、2號培養(yǎng)皿應(yīng)該有一定量的菌落。2 大腸桿菌群檢測：對于初次發(fā)酵的2個燒瓶可能是產(chǎn)酸產(chǎn)氣或是產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，而發(fā)酵管內(nèi)可能產(chǎn)酸產(chǎn)氣，也可能產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，也有可能既不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣。推薦精選3隨著放置時間的不斷增加，樣品細菌總數(shù)應(yīng)該是不斷增加的，而大腸桿菌數(shù)可能不變，也有可能增加。討論分析：1 由于水中細菌種類繁多，要求的營養(yǎng)和其

7、它生長條件差別也很大，不可能在一種培養(yǎng)基和一種培養(yǎng)條件下是水中所有的細菌都能生長繁殖，因此以一定的培養(yǎng)基平板上生長出來的菌群，計算出來的水中細菌總數(shù)僅是一種的近似值。2 多管發(fā)酵法是將適量水樣接種于一系列有培養(yǎng)基的試管中進行培養(yǎng)，根據(jù)產(chǎn)生陽性反應(yīng)的試管數(shù)來估計原始水樣中菌的最大可能數(shù)（MPN）。此方法僅僅提供水樣中含菌量的估計值，又受固有誤差限制，在確定陽性結(jié)果之前還要做確證實驗，費時費力。3 由預(yù)期結(jié)果可知：大腸桿菌對保質(zhì)期影響不大，只有細菌總數(shù)影響保質(zhì)期。但由于處于夏季，氣溫較高，固保質(zhì)期可能會有所降低。參考文獻1沈萍,范秀榮,李廣武. 微生物學(xué)實驗（第三版）M.北京高等教育出版社.2000: 151-152.2中華人民共和國衛(wèi)生部,解讀瓶（桶）裝飲用水衛(wèi)生標準M.北京中國標準出版社, 2003: 17-19.3李宗義,劉國生,李學(xué)梅.微生物學(xué)實驗技術(shù)M.北京:氣象出版社.1997:160-161.4王子石,等