生物化學實驗1-糖類的性質實驗

1、生物化學實驗n一、糖類的性質實驗 n二、可溶性蛋白質含量的測定 n三、粗脂肪的提取和定量測定 n四、維生素C含量測定 n五、氨基酸的分離與鑒定濾紙層析法n六、蛋白質的性質實驗 課程任務n對理論知識的鞏固和應用，培養(yǎng)理論聯(lián)系實際的意識，培養(yǎng)用基礎知識分析問題、解決問題的能力n復習鞏固實驗基本技能，學習新的實驗方法和操作技能，學習儀器設備的使用n培養(yǎng)進行科學實驗應具備的基本素質：誠實、科學、嚴謹、探索創(chuàng)新精神、能吃苦耐勞等。紀 律n每批次人員、分組固定，上課準時點名，遲到5min以上者拒絕進入教室n實驗室內不得高聲閑談嬉笑，必須保持安靜的實驗環(huán)境。n愛護儀器，不浪費藥品，節(jié)約水電，遵守實驗室的安全

2、措施。n濾紙、火柴棒、碎玻璃等固體廢棄物切勿丟入水池內，有毒有害試劑應統(tǒng)一回收入廢液桶。n儀器或實驗器材如有損壞，應自行登記，并立即向指導老師報告。n 保持實驗室的整齊清潔，個人所帶與實驗無關的東西，不得亂放在實驗桌上。n實驗室內一切物品，未經實驗室負責老師批準嚴禁帶出室外，借物必須辦理登記手續(xù)。n 每次實驗后各小組清洗干凈實驗器材、打掃本組實驗臺桌、提每次實驗后各小組清洗干凈實驗器材、打掃本組實驗臺桌、提交實驗記錄，老師驗收合格后方可離開實驗室；每次留下一個大交實驗記錄，老師驗收合格后方可離開實驗室；每次留下一個大組負責當天實驗室的地面衛(wèi)生和公用儀器設備整理復位，以及一組負責當天實驗室的地面

3、衛(wèi)生和公用儀器設備整理復位，以及一些其它服務性工作。最后離開實驗室時，應檢查水、電、門窗等些其它服務性工作。最后離開實驗室時，應檢查水、電、門窗等是否關好。是否關好。n實驗課上禁止播放音樂、禁止玩游戲。實驗室禁止飲食和吸煙。實驗要求n每次實驗前必須詳細預習預習實驗教材，明了實驗目的、原理方法及操作步驟，并在記錄本上擬出簡單的操作步驟、儀器使用方法及實驗操作注意事項。n在實驗過程中，要聽從老師的指導，嚴格按照實驗步驟進行，不能任意更改，不熟悉的儀器設備，切勿隨意亂動不熟悉的儀器設備，切勿隨意亂動，應先請老師指導后使用n實驗時如有問題發(fā)生，應首先用自己學過的知識，獨立思考加以解決，努力培養(yǎng)獨立分析

4、問題和解決問題的能力，如自己不能解決可與指導老師共同討論研究，提出解決問題的辦法。 n實驗進行時，必須隨時把觀察到的現(xiàn)象和實驗數據，如實地記錄在記錄本上，不得記在散頁紙上，要養(yǎng)成良好的做原始記錄的習慣養(yǎng)成良好的做原始記錄的習慣。n環(huán)境和儀器的清潔整齊是搞好實驗的重要條件，實驗臺面試劑藥品架上必須保持整潔，儀器藥品要井然有序，所用的試劑，用完應立即蓋嚴放回原處。用完應立即蓋嚴放回原處。注意瓶塞切勿張冠李戴。勿使試劑藥品灑在實驗臺面和地上。實驗完畢后，實驗完畢后，需將藥品試劑排列整齊，儀器設備要恢復原狀。將實驗臺面打掃干凈，經教需將藥品試劑排列整齊，儀器設備要恢復原狀。將實驗臺面打掃干凈，經教師驗

5、收儀器后，方可離開實驗室。師驗收儀器后，方可離開實驗室。n對實驗的內容和安排不合理的地方可提出改進意見對實驗中出現(xiàn)的一切反?，F(xiàn)象應進行討論，并大膽提出自己的看法，做到生動活潑，主動地學習。實驗記錄n實驗課前應認真預習，將實驗名稱、目的和要求、原理、實驗內容、操作方法和步驟簡單扼要地寫在記錄本上 n實驗中觀察到的現(xiàn)象，結果和數據應及時如實地記在記錄本上。絕對不可以用單片紙做記錄或草稿。原始記錄必須準確、簡練詳盡、清楚。從實驗開始就應養(yǎng)成這種良好的習慣。n記錄時應做到正確記錄實驗結果，切勿夾雜主觀因素，并根據儀器的精確度準確記錄有效數字。重復觀測時即使數據完全相同也應如實記錄下來 n實驗中使用儀器

6、的類型，編號以及試劑的規(guī)格、化學式、分子量準確的濃度等，都應記錄清楚，以便總結實驗時，進行核對和作為查找失敗原因的參考依據 實驗報告的格式 實驗結束后，應及時整理和總結實驗結果，寫出實驗報告，報告的形式可參照下列方式： n實驗時間 實驗項目名稱 實驗地點 n一、目的和要求： n二、原理：n三、實驗材料及預處理n四、試劑及配制n五、實驗儀器：n 六、操作步驟：n七、實驗結果(數據記錄及處理)： n八、討論：報告書寫總體說明n在實驗報告中，目的和要求、原理以及操作步驟部分應簡單扼要的敘述。但是，對于實驗條件(試劑配制及儀器)和操作的關鍵環(huán)節(jié)必須寫清楚。n實驗結果部分實驗結果部分：應根據實驗的要求將

7、一定實驗條件下獲得的實驗結果和數據進行整理、歸納，分析和對比，并盡量總結成各種圖表，如原始數據及其處理的表格，標準曲線圖以及比較實驗組與對照實驗結果的圖表等。另外，還針對實驗結果進行必要的說明和分析。n討論部分：討論部分：可以包括關于實驗方法(或操作技術)的一些問題、實驗的正常結果和異?，F(xiàn)象以及思考題進行探討，對于實驗設計的認識、體會和建議，對實驗課的改進意見等?？己朔绞絥實驗操作占35%，實驗報告占60%，考勤占5%n操作分主要根據預習記錄和實驗過程記錄，結合課堂表現(xiàn)評分實驗一 糖的性質實驗實驗一 糖類的性質實驗 實驗目的：實驗目的：n了解某些糖類顏色反應的原理n學習用糖的顏色反應鑒別糖類的

8、方法n通過實驗手段了解糖的基本性質及還原糖的鑒定方法n為后續(xù)課程中有關糖類的知識的學習打下基礎；為后續(xù)設計行、研究性實驗提供定性檢測的方法與手段Molish反應10Molish（紫環(huán)）反應原理n糖在濃無機酸作用下脫水生成糠醛及糠醛衍生物，后者與-萘酚生成紫紅色物質。n該反應不是糖類的特異性反應（丙酮、甲酸、乳酸、草酸和葡萄糖醛酸 ）n對葡萄糖的檢出極限可達0.001，對蔗糖的檢出極限可達0.0001。Molish反應Molish反應操作注意事項n添加Molish試劑時切記充分搖勻n加濃硫酸時用移液管沿管壁緩慢加入，切勿搖動n注意觀察各管紫色環(huán)出現(xiàn)時間的先后、環(huán)的寬度、顏色的深淺，并做好記錄。操

9、作方法操作方法n在試管中加入1 mL 樣品水溶液，滴入4滴10%的-萘酚乙醇溶液，混合均勻后將試管傾斜約45度，沿管壁慢慢加入1 mL濃硫酸(勿搖動)。此時樣品在上層，硫酸在下層、若在兩層交界處出現(xiàn)紫色的環(huán)，表明樣品中含有糖類化合物。-萘酚反應(Molisch Test)Seliwanoff反應Seliwanoff（謝里瓦諾夫）反應（間苯二酚反應） n酮糖脫水生成羥甲基糠醛，后者與間苯二酚作用生成紅色物質n醛糖在同樣條件下反應緩慢，只有在糖濃度較高或煮沸時間較長時才呈微弱的陽性反應Seliwanoff反應Seliwanoff反應操作要點n注意試劑添加量：糖溶液0.5ml，塞氏試劑5mln混勻，

10、同時同時放入沸水浴n注意觀察各管顏色變化的時間及顏色的變化過程，并做好記錄 塞氏試劑：塞氏試劑： 溶解50mg間苯二酚（resorcinol）于100mL鹽酸（鹽酸：水=1:2v/v）中 操作方法操作方法n在試管中加入1滴2% (5滴5%)的樣品溶液，再加人10滴(1 mL)間苯二酚鹽酸試劑，在沸水浴中加熱，記錄溶液轉變?yōu)榧t色所需要的時間。若溶液在12分鐘內變?yōu)榧t色，說明樣品為酮糖。否則為醛糖。還原糖的鑒定還原糖的鑒定原理n糖類分子中的還原性基團在堿性條件下將Cu2+還原成Cu+，生成Cu2O沉淀。n沉淀顏色與沉淀顆粒大小有關，沉淀顆粒大小與反應速度有關：速度慢顆粒大顏色偏紅，速度快顆粒小顏色

11、偏黃。n反應速度取決于糖的濃度和還原性的強弱還原糖的鑒定還原糖鑒定實驗操作要點n實驗前鑒定試劑有效性：試劑與水1：4，加熱煮沸無沉淀方可使用。n先加鑒定試劑后加糖n從沸水?。?-3min）中同時取出后取出后觀察試管中的變化n注意Benedict試劑與Fehling試劑在反應時間和沉淀生成量等方面的區(qū)別。 操作方法操作方法取取FehlingFehling試劑試劑A,BA,B兩種溶液各兩種溶液各1.0mL1.0mL在試管中混勻，在試管中混勻，再加入再加入4 4滴滴1%1%的樣品溶液，在沸水浴中加熱的樣品溶液，在沸水浴中加熱2 23 3分分鐘，若有鐘，若有紅色或黃綠色沉淀紅色或黃綠色沉淀生成，表明樣品為還原生成，表明樣品為還原性糖。性糖。Fehling試劑試劑A,B：試劑A：稱取3.5g五水合硫酸銅溶于100mL蒸餾水中。試劑B：稱取17g五結晶水酒石酸鉀鈉溶于20mL熱水中，然后加入20mL含5g NaOH 水溶液，稀釋到100mL Benedic試劑：試劑：400m