常見腫瘤免疫標記ppt課件

1、1常見腫瘤免疫標記的意義常見腫瘤免疫標記的意義2免疫組化的基本原理v抗原抗體反應抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry) 。 3常用方法vEPOS（一步法）vSP法-鏈霉菌抗生物素蛋白 過氧化酶連接法v二步EnVision（優(yōu)點：敏感性大幅增強，不受內(nèi)源性生物素干擾）vSABC法 （三步法）4結果判定v每項指標都有其抗體結合的對應位點，如果定位不準確，則不能判為陽性。v結果中的“”有相當一

2、部分為背景與腫瘤表達均呈陽性，無法區(qū)分，其原因大致有：孵育過長；抗原抗體交叉反應；沖洗不足；血清封閉不足或錯誤；二抗與組織非特異性結合。v標本沒有按規(guī)范程序固定。（固定液、固定時間）5腸癌中P53的表達6腸癌中的MDR表達7肺癌中的Ki-67表達8胃癌中的EGFR表達9胃癌中的AFP表達10消化道癌的標記v我科常用胃癌標記：VEGF,EGFR,P-gp,GST-,Topo-, Ki-67,AFP,P53,C-erbB-2, C-erbB-3, C-erbB-4,TS,TP.v我科常用大腸癌標記： VEGF,EGFR,P-gp,GST-, Ki-67, P53,MSH2,P21,TS,TP.11

3、耐藥相關基因的標記P-糖蛋白 （P-gp） 谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶 （GST-） DNA拓撲異構酶（Topo-）腫瘤產(chǎn)生耐藥的生物學基礎取決于腫瘤多藥耐藥基因的擴增，瘤組織生成GST- 、TOPO-和P-gp的含量升高，則耐藥性增強。影響化療療效的主要因素是細胞內(nèi)耐藥、抗腫瘤藥的藥代動力學/藥效學、腫瘤血供、藥物擴散Pgp-MDR及腫瘤細胞增殖能力等。其中MDR的關注點是mdri/Pgp、MDR、LRP、拓撲異構酶-、谷胱甘肽代謝和凋亡，或腫瘤細胞增殖活性介導細胞內(nèi)多向耐藥基因的擴增。 12特別提醒v對應耐藥關系： TOPO-陽性對應多柔比星、米托蒽醌、鬼臼類； P-gp陽性對應長春新堿、VP-6、蒽

4、環(huán)類； GST- 陽性對應多種烷化劑耐藥。v據(jù)某些學者統(tǒng)計，近一半的大腸癌對GST- 、TOPO-所介導的抗癌藥物順鉑和拓撲異構酶抑制劑產(chǎn)生耐藥傾向，并大多呈強耐藥性，提示大腸癌聯(lián)合化療用藥時，對順鉑和拓撲異構酶抑制劑的選擇應慎重考慮。P-gp陽性表達者對P-gp相關的主要抗癌藥長春新堿、阿霉素等有耐藥傾向。 13表皮生長因子受體相關標記v表皮生長因子受體（EGFR）、人類表皮生長因子受體-2（C-erbB-2）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）。v C-erbB-2為HER-2癌基因的表達產(chǎn)物，HER-2為原癌基因，廣泛存在于各種組織中。通常處于非激活狀態(tài)，被刺激激活后具有腫瘤轉(zhuǎn)化活性，其表達越

5、高，瘤株對化療越不敏感，越易復發(fā)轉(zhuǎn)移。vVEGF與消化道癌形成密切相關，并參與其侵襲和轉(zhuǎn)移，可作為預后判斷指標。v三者在消化道癌中的表達具有一致性，它們的聯(lián)合檢測可作為判斷胃癌預后、篩選高危轉(zhuǎn)移患者的有效指標 。14酪氨酸激酶I型受體家族vI型表皮生長因子受體是廣泛分布于人體各組織細胞膜上的多功能糖蛋白，分享由細胞外結構域、跨膜結構域及胞漿結構域構成的分子信號傳導通道。v其家族包括：HER1(EGFR)、HER2(C-erbB-2)、HER3、HER4四種同源受體。其受體及配體在多種實體瘤如NSCLC、BC、CC、NPC、GC等中過表達，正常組織中低表達。v據(jù)報道，C-erbB-3蛋白在慢性胰

6、腺炎、外分泌胰腺癌與胃腸道腫瘤中有明顯表達。15p53v正常p53的生物功能好似“基因組衛(wèi)士（guardian of the genome）”，在G1期檢查DNA損傷點，監(jiān)視基因組的完整性。如果修復失敗，P53蛋白則引發(fā)細胞凋亡。 v如果p53基因突變，對細胞的增殖將失去控制(顯性負調(diào)控)。vp53基因突變與人類50%的腫瘤有關 。16p21vp21可以和p53共同構成細胞周期G1檢查站，減少受損DNA的復制 ，發(fā)揮抑癌作用. vP21作為一種負性調(diào)節(jié)因子,在依賴野生型p53的表達通路上與腫瘤的表達、表達含量、表達位置,以及預后都密切相關.v當P21、Cyclin、CDK、PCNA四聚體的功能

7、受到抑制,則使增殖信號大量活化,導致細胞異化和惡變. 17PCNA: Proliferating cell nuclear antigen18p53是是G1期能否進入期能否進入S期的分子警察期的分子警察復制復制DNA損傷損傷p53p21P21-cyclin-CDK復合物復合物Rb-E2FRb-P+ E2F阻滯阻滯G1期期修復修復無法修復無法修復凋亡凋亡誘導誘導（P21 CIP1）（Cyclin-CDK活性抑制）活性抑制）啟動增殖啟動增殖19聯(lián)合表達意義vP53、c-erbB-2、P21的表達與消化道癌的分化程度,浸潤程度,轉(zhuǎn)移程度及臨床分期呈正相關. v多基因聯(lián)合表達檢測對消化道癌預后判斷明顯

8、優(yōu)于單基因表達檢測. v據(jù)國外文獻報道，分化差的大腸癌中，P53、P21蛋白的過表達常伴隨著K ras、p53基因的高突變，所以該對應關系很可能參與了大腸癌的形成及演進。20Ki-67v增殖細胞核抗原(Ki-67)對于研究腫瘤細胞的生物化學特性、惡性程度及預后判斷等具有一定的價值。Ki-67是真核細胞G1和S期合成的一種36kD的核蛋白，是DNA聚合酶輔助蛋白，直接參與細胞增殖過程中DNA的復制。在靜止期的細胞內(nèi)含量很少，從G1晚期開始增加，S期達到高峰，G2期和M期呈明顯下降，其表達程度能客觀反映瘤細胞增殖活性。 21AFPvAFP（甲胎蛋白）是在體液中發(fā)現(xiàn)的70kD的癌胚抗原，正常表達于胎

9、肝，常態(tài)下成人組織中呈陰性。在部分生殖細胞腫瘤（尤其卵黃囊瘤）和多數(shù)肝細胞肝癌中高表達。v依據(jù)其病理組織形態(tài)學特點和癌細胞內(nèi)AFP染色陽性表達，并對比3個月胚胎胃腸組織學的改變，將組織學類型分為4個亞型：肝樣型（34.9），胎兒胃腸型（23.8）和肝樣型伴腸胚分化混合型（38.1）以及卵黃囊瘤樣型（3.2）。v結論：AFP陽性胃癌與普通型胃癌不同，是一組具有獨特臨床病理特征的高度惡性腫瘤。 22MSH2vMSH2基因是錯配修復基因的重要成員之一,其表達的蛋白參與DNA的錯配修復反應。MSH2等錯配修復基因缺陷導致錯配修復蛋白的失表達及微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI+)進而引起基因組的不穩(wěn)定,誘發(fā)腫瘤,

10、尤其是在遺傳性非息肉性大腸癌(HNPCC)常見有MSH2基因缺陷。 Muir-Torre 綜合征、卵巢癌也與該基因密切相關。v有文獻稱，若錯配修復蛋白2在回腸與結腸中隱窩細胞有失表達，隱窩細胞會快速更新，產(chǎn)生分化細胞遷移至隱窩腺腔內(nèi)，參與了腫瘤的形成。23vHNPCC的遺傳因素： (1) 家庭成員中有三人以上患有結直腸癌，其中兩人以上為同一代； (2) 至少相近的兩代人均有發(fā)??； (3) 其中至少有一人是在50歲以前診斷為結直腸癌。 若滿足上述因素中一條，一級親屬亦應進行HNPCC突變檢測。攜帶MLH1和MSH2突變者罹患結直腸癌的一生累計風險高達80 %。 v若免疫組化檢測出腫瘤細胞核為陰性

11、，提示該基因失活，發(fā)生了hMLH1和hMSH2的基因的胚系突變 。 24TS & TPv5-FU代謝(DPD，TP，dUTPase)、DNA修復(ERCC2，XRCC1)，血管生成(COX-2，EGFR，IL-8，PLA2)以及藥物解毒(GST- )基因的mRNA水平影響著晚期消化道癌患者的預后。vTS（胸苷酸合成酶）是DNA合成中的限速酶，在DNA合成與修復中起重要作用，并與細胞分裂和增生關系密切。TS的高表達預示著腫瘤的高侵襲性。TS與ERCC1（切除修復交叉互補基因 ）分別為標志氟尿嘧啶(5-Fu)、奧沙利鉑(L-OHP)耐藥的指標。 vTP（胸苷磷酸化酶 ）基質(zhì)TP表達對腫瘤微

12、血管密度產(chǎn)生顯著影響 。TP表達對預測5-FU化療療效、判斷結腸癌預后有一定的指導意義。25肺癌的標記v我科常用肺癌標記：VEGF-C3,EGFR,P-gp,p53,Ki-67, PE,CD24,CA125,bcl-2,Tslc1.26VEGF-C3v血管內(nèi)皮生長因子-C(vascular endothelial growthfactor,VEGF-C)是迄今發(fā)現(xiàn)的最重要的淋巴管生成因子,VEGF-C誘導的淋巴管生成與腫瘤淋巴結轉(zhuǎn)移密切相關。因此,以VEGF-C為靶點抑制淋巴管生成已成為抗腫瘤轉(zhuǎn)移的重要策略之一。27CA125vCA125（糖鏈抗原125）又稱卵巢癌抗原（OCA）是由一組糖基轉(zhuǎn)

13、移酶綜合作用而產(chǎn)生，主要存在于癌組織中。肺癌中CA125敏感性56.43%、特異性84.72%。 vCA125的檢測在對NSCLC的診斷、NSCLC與SCLC的鑒別診斷中具有一定價值,對肺癌的療效觀察、轉(zhuǎn)移、復發(fā)監(jiān)測及預后有較大的輔助診斷意義. 28bcl-2vBcl-2蛋白是bcl-2 原癌基因的編碼產(chǎn)物 ，是一種定位于線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和連續(xù)的核周膜的 25kD膜蛋白，廣泛分布。vBcl-2蛋白家族是一個特別的家族，成員中有些促進凋亡，如Bad、Bid 、Bax，有些成員阻止細胞凋亡,如Bcl-2、 Bcl-x、Bcl-w。Bcl-2能夠阻止細胞色素c從線粒體釋放到細胞質(zhì)，從而抑制了細胞凋亡。

14、 v有文獻稱，Bcl- 2蛋白過度表達在肺癌發(fā)生中起重要作用 ,是肺癌的早期表現(xiàn) ,有可能成為肺癌早期診斷的重要參考指標。 29Tslc1vTSLC1（腫瘤阻抑基因1 ）是一種新的抑癌基因,其失活與消化系腫瘤的發(fā)生,浸潤轉(zhuǎn)移及預后有著重要的關系.vTSLC1的失活重要機制之一是基因甲基化.vTSLC1抑癌機制目前還不完全明確,認為與細胞黏附,細胞間信號傳導,參與腫瘤免疫,誘導細胞凋亡和抑制細胞生長周期有關. 30CD24vCD24是一種低分子量高度糖基化的黏蛋白樣的黏附分子 ，通過糖基磷脂酰肌醇黏附在細胞膜上，最初被認為是一種B細胞標志物，在B細胞分化早期階段表達。 v最近國外一些研究發(fā)現(xiàn)，CD24在上皮細胞來源的腫瘤如非小細胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌等腫瘤中呈高表達，同時還發(fā)現(xiàn)CD24的表達和腫瘤的侵襲性有一定的關