實驗二十四尿藥法測定核黃素片劑消除速度常數(shù)

1、實驗二十四尿藥法測定核黃素片劑消除速度常數(shù)、實驗目的1 熟悉尿藥法在藥物動力學實驗中的應用。2 掌握尿藥法計算消除速度常數(shù)的方法。二、實驗原理藥物在體內過程是一個整體，吸收、分布、代謝、排泄等過程既有區(qū)別，又有 聯(lián)系，觀察一個方面的變化， ?？砷g接地認識另一方面的情況，所以藥物在體內的速度過程變化規(guī)律，既可用血藥法來估算，也可用尿藥法來估算。在多數(shù)情況下，尿藥濃度高于血藥濃度， 定量分析精密度好， 測定方法較易建 立，而且取樣方便，受試者可免受多次抽血的痛苦。因此，在體內藥物大部分以原形從尿中排除條件下，通常可用尿藥法估算消除速度常數(shù)、生物半衰期等動力學參數(shù)。尿中原形藥物的瞬時排泄速度，可用下

2、列微分式表示：(1)dXU=KeXdtKe為表觀一級排泄速度常數(shù)，Xu為t時尿中原形藥物的累計排泄量，X為t時間體內存有的藥量。在靜脈給藥時，體內藥量的經時過程可由下式表示：-ktX=Xoe（2）Xo為給藥劑量，K為表觀一級消除速度常數(shù)。將（2）式中X值代入（1）式后得：dXu -kt dXU=KeXoedt(3)兩邊取對數(shù)得:log=lOgK eXo-Kt（4）dt2.303由（4）式可見，原形藥物排泄速度的對數(shù)對時間作圖為一直線，其斜率為K2.303與血藥濃度的對數(shù)對時間作圖所求的斜率相同。（4）式適用于靜脈給藥后求算消除速度常數(shù)。若口服給藥，則體內藥量經時過程可由下式表示：X=KaX&#

3、176;F（ e-Kt 尹）（5）Ka KKa為表觀一級吸收速度常數(shù)。尿中原形藥物的瞬時排泄速度可用（5）式代入（1）式得：dXu KeKaFXodt Ka K/ -Kt(e-Kat)(6)當Ka>K, t充分大時，則e-katT 0, （5）式簡化為:dXu = KeKaFXo e-Kt=edt Ka K兩邊取對數(shù)得：(7)logdXu =|°g KeKaFXo Kt "dTKa K 2.303(8)由上述關系式可見，若以logXu/dt對t作圖，可得到一條二項指數(shù)曲線，從其后段直線的斜率可求出一級消除速度常數(shù)K。由于尿中原形藥物排泄速度的瞬時變化率是不可能用實驗方

4、法求算的，通過實驗只可求出平均排泄速度，設在一段時間間隔t內藥物的排泄速度量為厶Xu,則平均排泄速度為Xu，這樣（4 ）或（8 ）式可改寫如下：tlog=logKeX。一 一K t 中 t2.303(9)logXu | KeKaXoFK +=logt 中(10)tKa K 2.303由于實驗中采取平均排泄速度代替瞬時排泄速度，求得的消除速度常數(shù) K會出現(xiàn)一些誤差。但若以恒定的時間間隔集尿， 其時間間隔不大于一個藥物的半衰期時， 則僅發(fā)生2%M內的偏差。三、實驗內容與操作（一） 服藥及尿樣收集1. 服藥前一天收集 24小時尿液，每次收集尿液后量體積，取10ml保留，其余 倒掉。2. 臨服藥前排空

5、小便。3. 早餐后立即服用核黃素片三片（ 5毫克/片），用溫水吞服不嚼碎，記錄服藥時間。4. 按藥片服下后的第 2、4、6、& 10小時收集尿液，用量筒取并記錄尿液體積，然后，將尿液倒入盛有0.2毫升冰醋酸的刻度試管內至20毫升，搖勻，于陰涼避光處保存。5. 注意點：（1）每次收集尿液后飲 200毫升左右水以維持尿量。（2）每次大便時收集小便，切勿損失。（3）試驗期間（包括服藥前一天）控制食譜，不能吃含有核黃素的食物，如：蛋類、牛奶、麥乳精、奶糖等。并不得服用含有B族維生素的藥品。（二）尿液中核黃素含量的測定1. 原理：核黃素的異咯嗪環(huán)上具有活潑的雙鍵，能接受和放出氫原子，在保險粉（連

6、二亞硫酸鈉）的作用下，能還原為無色雙氫核黃素，利用這一特性，可以由加入保險粉前后二次測得的吸收度 （核黃素在波長444nm處有吸收）的差值，來計算尿液 中核黃素的含量。CH2(CHOH)3CH2OHCH2(CHOH)3CH2OH2. 方法（1）標準溶液的制備精密稱取105 C干燥2小時的核黃素對照品 50毫克于500毫升容量瓶中，加 0.02mol/L醋酸液稀釋至300毫升，置水浴加熱溶解后， 放冷至室溫，用0.02mol/L 醋酸液稀釋至刻度， 搖勻即得，每1毫升中含核黃素100微克，然后加入甲苯覆蓋 上面，置涼暗處保存。（2）標準曲線的制備精密吸取標準液 0.1、0.3、0.5、1.0、2

7、.0、3.0毫升分別置于10毫升容量 瓶中，用酸化蒸餾水（每 100毫升蒸餾水中含1毫升冰醋酸）稀釋至刻度，搖勻。 以酸化蒸餾水作空白，用721或722型分光光度計，在 444nm波長處測定吸收度，然后，在每管中各加保險粉約3毫克，搖勻。在一分鐘內再次測定吸收度。兩次測定值之差，即為核黃素的吸收度，以此值為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。（3）尿樣中核黃素含量測定尿樣測定照標準曲線制備項下的方法。從“以酸化蒸餾水作空白”起，依法測 定吸收度，以兩次測定值之差，從標準曲線上查出尿液中核黃素的含量。以上操作步驟，均須注意避光。四、實驗結果與討論1. 原始記錄服藥后尿液收集與測定數(shù)據(jù)表1空白尿藥測定數(shù)據(jù)A （未加保險粉）A （加保險粉）A-A 2C空白尿體積（毫升）：空白尿中排泄核黃素的總 Xu量: 平均每2小時排泄核黃素的yg數(shù)：表2尿樣的原始記錄試管號集尿時刻（hr）集尿時間間隔（hr）尿量（ml）空白12345表3尿藥測定記錄試管號A1 （未加保險粉）A（加保險粉）A1-A2C空白12345表4尿藥法動力學分析記錄試管號集尿時間間 隔t）中點時間（t中） Xu(mg平均排泄速度（ Xu/ t）log Xu t空白123452.繪制尿藥排泄速率二項指數(shù)曲線。3