細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及耐藥機(jī)制的研究

1、細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及耐藥機(jī)制細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及耐藥機(jī)制研究進(jìn)展研究進(jìn)展安徽省細(xì)菌耐藥監(jiān)控中心安徽省細(xì)菌耐藥監(jiān)控中心安徽醫(yī)科大學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教研室安徽醫(yī)科大學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教研室安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科徐元宏徐元宏一、藥敏試驗(yàn)種類1、 紙片擴(kuò)散法2、稀釋法 稀釋法包括宏量肉湯稀釋法(macrodilution test)、微量肉湯稀釋法(microdilution test)、瓊脂稀釋法(agar dilution test)。 3、e-test法 細(xì)菌藥敏試驗(yàn)-宏量稀釋法minimal inhibitory concentration (mic)reference

2、method. add standard inoculum to dilutions of antibiotic. incubate overnight. mic is lowest concentration that inhibits growth (can also be performed by agar dilution). interpretation (s or r) is based on achievable drug levels 104 cfu420mg/ml微量液體稀釋法細(xì)菌藥敏試驗(yàn)- e-test法e-teststrips containing

3、 a gradient of antibiotic are placed on lawn of bacteria and incubated overnight. mic is determined at point where zone of inhibition intersects scale on strip.combines ease of kb with an mic method. particularly useful for s. pneumoniae.二、藥敏試驗(yàn)基本條件1.腸桿菌科紙片擴(kuò)散法、液體稀釋法、瓊脂稀釋法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 mueller-hinton 瓊脂、c

4、amhb、mueller-hinton 瓊脂 接種物 生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于 0.5 麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。 孵育 352；空氣；16-18 小時(shí) 推薦的質(zhì)控菌株 大腸埃希菌 atcc 25922； 大腸埃希菌 atcc 35218（為監(jiān)控-內(nèi)酰胺酶/-內(nèi)酰胺抑制劑紙片用） （1）對于從糞便中分離的沙門菌和志賀菌屬，常規(guī)僅測試和報(bào)告氨芐西林，一種喹酮類藥和甲氧芐啶/磺胺甲噁唑。此外對于胃腸外分離的沙門菌屬還一定要測試并報(bào)告氯霉素及其某一種代頭孢菌素的結(jié)果。 （2）所有確認(rèn)產(chǎn)esbls的菌株應(yīng)當(dāng)報(bào)告為耐所有青霉素類，頭孢菌素類和氨曲南。（3）出于對流行性，治療及感染控制方面的考慮，應(yīng)該把從尿中分離的

5、所有菌株做esbls 篩選試驗(yàn)作為一個基本制度。（4）僅當(dāng)被認(rèn)為與臨床有關(guān)時(shí)（如菌血癥）才進(jìn)行奇異變形桿菌esbls篩選試驗(yàn)（5）腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌屬和沙雷菌屬可發(fā)展為耐藥。最初分離的敏感菌株在開始治療34天內(nèi)可變?yōu)槟退?，因此對重?fù)分離菌株應(yīng)重新進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。 。 2.銅綠假單胞菌紙片擴(kuò)散法、液體稀釋法、瓊脂稀釋法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 mueller-hinton 瓊脂、camhb、mueller-hinton 瓊脂 接種物 生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5 麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。 孵育 352；空氣；16-18 小時(shí) 推薦的質(zhì)控菌株 大腸埃希菌 atcc 25922；銅綠假單胞菌 atcc27853

6、； 大腸埃希菌 atcc 35218（為監(jiān)控-內(nèi)酰胺酶/-內(nèi)酰胺抑制劑紙片用） 用紙片擴(kuò)散法能可靠地測定分離于囊性纖維化病人的銅綠假單菌的敏感性，但在作為敏感結(jié)果報(bào)告前，應(yīng)將孵育時(shí)間延長至24小時(shí)。 3.不動桿菌屬紙片擴(kuò)散法、液體稀釋法、瓊脂稀釋法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 mueller-hinton 瓊脂、camhb、mueller-hinton 瓊脂 接種物 生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5 麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。 孵育 352；空氣；20-24 小時(shí) 推薦的質(zhì)控菌株 大腸埃希菌 atcc 25922；銅綠假單胞菌 atcc27853； 大腸埃希菌 atcc 35218（為監(jiān)控-內(nèi)酰胺酶/-內(nèi)酰胺抑制劑

7、紙片用） 4.洋蔥伯克霍爾德菌紙片擴(kuò)散法、液體稀釋法、瓊脂稀釋法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 mueller-hinton 瓊脂、camhb、mueller-hinton 瓊脂 接種物 生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于 0.5 麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。 孵育 352；空氣；20-24 小時(shí) 推薦的質(zhì)控菌株 大腸埃希菌 atcc 25922；銅綠假單胞菌 atcc27853； 大腸埃希菌 atcc 35218（為監(jiān)控-內(nèi)酰胺酶/-內(nèi)酰胺抑制劑紙片用） （1）洋蔥伯克霍爾德菌紙片擴(kuò)散法解釋標(biāo)準(zhǔn) 抑菌環(huán)直徑（mm） 相對應(yīng) mic 值 （g/ml） 試驗(yàn)/報(bào)告 分組 抗微生物藥紙片含藥量 r i s r s 注釋 頭孢類（注

8、射藥物）（包括頭孢菌素,和代） b 頭孢他啶 30g 17 18-20 21 32 8 碳青霉烯類 b 美洛培南 10g 15 16-19 20 16 4 四環(huán)素類 b 米諾環(huán)素 30g 14 15-18 19 16 4 葉酸代謝途徑抑制劑 a 甲氧芐啶/磺胺甲噁唑 1.25/23.75g 10 11-15 16 8/152 2/38 （2）洋蔥伯克霍爾德菌液體稀釋法、瓊脂稀釋法解釋標(biāo)準(zhǔn) mic 值（g/ml） 試 驗(yàn) /報(bào)告 分組 抗微生物藥 s i r 注釋 內(nèi)酰胺類/內(nèi)酰胺類抑制劑 b 替卡西林/克拉維酸 16/2 32/2-64/2 128/2 頭孢類（注射藥物）（包括頭孢菌素,和代）

9、 b 頭孢他啶 8 18 32 碳青霉烯類 b 美洛培南 4 8 16 四環(huán)素類 b 米諾環(huán)素 4 8 16 氟喹諾酮類 b 左氧沙星 2 4 8 phenicols b 氯霉素 8 16 32 葉酸代謝途徑抑制劑 a 甲氧芐啶/磺胺甲噁唑 2/38 - 4/76 5.嗜麥芽窄食單胞菌紙片擴(kuò)散法、液體稀釋法、瓊脂稀釋法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 mueller-hinton 瓊脂、camhb、mueller-hinton 瓊脂 接種物 生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于 0.5 麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。 孵育 352；空氣；20-24 小時(shí) 推薦的質(zhì)控菌株 大腸埃希菌 atcc 25922；銅綠假單胞菌 atcc278

10、53； 大腸埃希菌 atcc 35218（為監(jiān)控-內(nèi)酰胺酶/-內(nèi)酰胺抑制劑紙片用） （1）嗜麥芽窄食單胞菌紙片擴(kuò)散法解釋標(biāo)準(zhǔn) 抑菌環(huán)直徑（mm） 相對應(yīng) mic 值 （g/ml） 試驗(yàn)/報(bào)告 分組 抗微生物藥 紙片含藥 量 r i s r s 注釋 四環(huán)素類 b 米諾環(huán)素 30g 14 15-18 19 16 4 氟喹諾酮類 b 左氧氟沙星 5g 13 14-16 17 8 2 葉酸代謝途徑抑制劑 a 甲氧芐啶/磺胺甲噁唑 1.25/23.75g 10 11-15 16 8/152 3/38 （2）嗜麥芽窄食單胞菌液體稀釋法、瓊脂稀釋法解釋標(biāo)準(zhǔn) mic 值（g/ml） 試驗(yàn)/報(bào)告 分組 抗微生

11、物藥 s i r 注釋 內(nèi)酰胺類/內(nèi)酰胺類抑制劑 b 替卡西林/克拉維酸 16/2 32/2-64/2 128/2 頭孢類（注射藥物）（包括頭孢菌素,和代） b 頭孢他啶 8 16 32 四環(huán)素類 b 米諾環(huán)素 4 8 16 氟喹諾酮類 b 左氧沙星 2 4 8 phenicols b 氯霉素 8 16 32 葉酸代謝途徑抑制劑 a 甲氧芐啶/磺胺甲噁唑 2/38 - 4/76 6.葡萄球菌屬紙片擴(kuò)散法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 mueller-hinton瓊脂 接種物 直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。 孵育 352；空氣；1618 小時(shí)；測苯唑西林、甲氧西林、萘夫西林和萬古霉素需24 小時(shí)。試

12、驗(yàn)溫度超過35不能檢測mrs。 推薦的質(zhì)控菌株 金黃色葡萄球菌atcc25923；大腸埃希菌a tcc 35218（為監(jiān)控-內(nèi)酰胺酶/-內(nèi)酰胺抑制劑紙片用） ；金黃色葡萄球菌 atcc baa-977 和金黃色葡萄球菌atcc baa-976（用于克林霉素誘導(dǎo)試驗(yàn)質(zhì)量評估） 7.葡萄球菌屬液體稀釋法、瓊脂稀釋法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 肉湯稀釋法：camhb；2nacl+ camhb 用于檢測苯唑西林、甲氧西林、萘夫西林； 瓊脂稀釋法：mueller-hinton瓊脂；2nacl+ mha用于檢測苯唑西林、甲氧西林、萘夫西林 接種物 直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。 孵育 352；空氣；161

13、8 小時(shí)；測苯唑西林、甲氧西林、萘夫西林和萬古霉素需24 小時(shí)。試驗(yàn)溫度超過35不能檢測mrs。 推薦的質(zhì)控菌株 金黃色葡萄球菌atcc29213；大腸埃希菌atcc 35218（為監(jiān)控-內(nèi)酰胺酶/-內(nèi)酰胺抑制劑紙片用） ；金黃色葡萄球菌 atcc baa-977 和金黃色葡萄球菌atcc baa-976（用于克林霉素誘導(dǎo)試驗(yàn)質(zhì)量評估） 8.腸球菌屬紙片擴(kuò)散法、液體稀釋法、瓊脂稀釋法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 mueller-hinton瓊脂，camhb,mha 接種物 生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。 孵育 352；空氣；16-18小時(shí)；測萬古霉素需24小時(shí) 推薦的質(zhì)控菌株 金黃色葡萄

14、球菌atcc25923(mueller-hinton瓊脂);糞腸球菌a tcc29212 （1）對于腸球菌屬，頭孢菌素，氨基糖苷類（篩選高水平耐藥除外），克林霉素和甲氧芐啶-磺胺甲噁唑可以在體外顯示活性但臨床上無效，因此這些菌株不應(yīng)該報(bào)告為敏感。（2）腸球菌心內(nèi)膜炎要求大劑量青霉素或氨芐西林，或萬古霉素或替考拉寧聯(lián)合慶大霉素或鏈霉素以增加殺菌作用。（3）慶大霉素和鏈霉素篩選試驗(yàn)，能夠預(yù)測氨芐西林、青霉素或萬古霉素與一種氨基糖苷類抗生素之間的協(xié)同效應(yīng)。其它的氨基糖苷類不需進(jìn)行測試，因?yàn)樗鼈儗δc球菌的活性并不優(yōu)于慶大霉素和鏈霉素。（4）對血和腦脊液分離株推薦用頭孢硝噻吩-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)。-內(nèi)酰胺酶試

15、驗(yàn)陽性提示青霉素耐藥，同時(shí)也對酰胺基，羧基和脲基青霉素耐藥。9.流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌紙片擴(kuò)散法、液體稀釋法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 嗜血桿菌試驗(yàn)培養(yǎng)基(htm)，htm肉湯 接種物 直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn) 孵育 352；5%co2;16-18小時(shí)（紙片擴(kuò)散法）；空氣，20-24小時(shí)（液體稀釋法） 推薦的質(zhì)控菌株 流感嗜血桿菌 a tcc49247；流感嗜血桿菌 a tcc49766；大腸埃希菌a tcc35218（測試阿莫西林/克拉維酸時(shí)） 10.淋 病 奈 瑟 菌 紙 片 擴(kuò) 散 法 、 瓊 脂 稀 釋 法 試 驗(yàn) 條 件 培 養(yǎng) 基 g c瓊 脂 基 礎(chǔ) +1% 特 定 的

16、 生 長 補(bǔ) 充 品 。 紙 片 擴(kuò) 散 法 不 需 要 使 用 無 半 胱 氨 酸的 生 長 補(bǔ) 充 品 。 接 種 物 直 接 菌 落 懸 液 法 ， 相 當(dāng) 于0.5麥 氏 標(biāo) 準(zhǔn) 孵 育 36 1 (不 超 過37 )； 5% co 2； 20-24 小 時(shí) 。 推 薦 的 質(zhì) 控 菌 株 淋 病 奈 瑟 菌a tcc49226 11.肺 炎 鏈 球 菌 片 擴(kuò) 散 法 、 液 體 稀 釋 法 試 驗(yàn) 條 件 培 養(yǎng) 基 m ueller-h inton瓊 脂 +5% 羊 血 ； ca m h b+2.55% v /v融 解 的 馬 血 接 種 物 直 接 菌 落 懸 液 法 ， 相

17、當(dāng) 于0.5麥 氏 標(biāo) 準(zhǔn) 孵 育 35 2 ； 5% co 2； 20-24小 時(shí) 推 薦 的 質(zhì) 控 菌 株 肺 炎 鏈 球 菌a tcc49619 （1）肺炎鏈球菌對苯唑西林的抑菌環(huán)20mm的菌株對青霉素敏感(mic0.06g/ml) （2）苯唑西林的抑菌環(huán)19mm的菌株應(yīng)當(dāng)測定青霉素、美洛培南和頭孢噻肟或頭孢曲松的mics 12.肺炎鏈球菌之外其它鏈球菌的紙片擴(kuò)散法、液體稀釋法、瓊脂稀釋法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 mueller-hinton 瓊脂+5%羊血; camhb+2.55%v/v 融解的馬血；mueller-hinton瓊脂+5%羊血 接種物 直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)

18、孵育 352； 5%co2； 20-24小時(shí) （紙片擴(kuò)散法、 瓊脂稀釋法） ； 空氣， 20-24小時(shí)（液體稀釋法） 推薦的質(zhì)控菌株 肺炎鏈球菌a tcc49619 13.幽門螺桿菌的瓊脂稀釋法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 mueller-hinton瓊脂+5%羊血 接種物 生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于2麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。 孵育 352；微需氧；3天 推薦的質(zhì)控菌株 幽門螺桿菌atcc43504 幽 門 螺 桿 菌 的 瓊 脂 稀 釋 法 解 釋 標(biāo) 準(zhǔn) mic值 （ g/ml） 試驗(yàn)/報(bào) 告 分 組 抗 微 生 物 藥 s i r 注 釋 大 環(huán) 內(nèi) 酯 類 a 克 拉 霉 素 0.25 0.5 1.0 1

19、4.霍亂弧菌紙片擴(kuò)散法、液體稀釋法、瓊脂稀釋法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 mueller-hinton瓊脂，camhb,mha 接種物 生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。 孵育 352；空氣；16-18小時(shí) 推薦的質(zhì)控菌株 大腸埃希菌atcc25922 （ 1） 霍 亂 弧 菌 紙 片 擴(kuò) 散 法 解 釋 標(biāo) 準(zhǔn) 抑 菌 環(huán) 直 徑 （ mm） 相 對 應(yīng)mic值 （ g/ml） 試驗(yàn)/報(bào) 告 分 組 抗微生物藥 紙 片 含 藥 量 r i s r s 注 釋 青 霉 素 類 a 氨 芐 西 林 10g 13 14-16 17 32 8 四 環(huán) 素 類 c 四 環(huán) 素 30g 14 15-

20、18 19 16 4 葉 酸 代 謝 途 徑 抑 制 劑 b 甲氧芐啶/磺胺甲噁 唑 1.25/23.75g 10 11-15 16 8/152 2/38 c 磺 胺 藥 250 g或 300g 12 13-16 17 350 100 phenicols c 氯 霉 素 30g 12 13-17 18 32 8 （ 2） 霍 亂 弧 菌 液 體 稀 釋 法 、 瓊 脂 稀 釋 法 解 釋 標(biāo) 準(zhǔn) m ic值 （ g/ml） 試驗(yàn)/報(bào) 告 分 組 抗 微 生 物 藥 s i r 注 釋 青 霉 素 類 a 氨 芐 西 林 8 16 32 四 環(huán) 素 類 c 四 環(huán) 素 4 8 16 o 多 西

21、環(huán) 素 4 8 16 葉 酸 代 謝 途 徑 抑 制 劑 b 甲氧芐啶/磺胺甲噁唑 2/38 - 4/76 c 磺 胺 藥 256 - 512 phenicols c 氯 霉 素 8 18 32 15.腦膜炎奈瑟菌紙片擴(kuò)散法、液體稀釋法、瓊脂稀釋法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 含 5%綿羊血的 mueller-hinton 瓊脂；camhb+25%融解的馬血；mha+5脫纖維羊血 接種物 直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5 麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)（紙片擴(kuò)散法）；來自20-24 小時(shí)co2 環(huán)境巧克力平板的直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5 麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)（液體稀釋法、瓊脂稀釋法）。 孵育 352；5%co2；20-24 小時(shí) 推薦的質(zhì)

22、控菌株 肺炎鏈球菌atcc49619，5%co2 環(huán)境；大腸埃希菌atcc25922（在空氣或5%co2 環(huán)境）用于環(huán)丙沙星、萘啶酸和米諾環(huán)素監(jiān)控 （1）腦膜炎奈瑟菌紙片擴(kuò)散法解釋標(biāo)準(zhǔn) 抑菌環(huán)直徑（mm） 相對應(yīng) mic 值 （g/ml） 試 驗(yàn) /報(bào)告 分組 抗微生物藥 紙片 含藥量 r i s r s 注釋 青霉素類 c 青霉素 10u - - - 0.5 0.06 c 氨芐西林 10g - - - 2 0.12 頭孢類 c 頭孢噻肟 30g - - 34 - 0.12 c 頭孢曲松 30g - - 34 - 0.12 碳青霉烯類 c 美羅培南 10g - - 30 - 0.12 大環(huán)內(nèi)酯

23、類 c 阿齊霉素 15g - - 20 - 2 四環(huán)素類 c 米諾環(huán)素 30g - - 26 - 2 氟喹諾酮類 c 環(huán)丙沙星 5g 32 33-34 35 0.12 0.03 c 萘啶酸 30g 25 - 26 8 4 葉酸代謝途徑抑制劑 c 甲氧芐啶/磺胺甲噁唑 1.25/23.75g 25 26-29 30 0.5/9.5 0.12/2.3 phenicols c 氯霉素 30g 19 20-25 26 8 2 ansamycins c 利福平 5g 19 19 25 2 2 （2）腦膜炎奈瑟菌液體稀釋法、瓊脂稀釋法 mic 值（g/ml） 試 驗(yàn) /報(bào)告 分組 抗微生物藥 s i r

24、注釋 青霉素類 c 青霉素 0.06 0.12-0.25 0.5 c 氨芐西林 0.12 0.25-1 2 頭孢類（包括頭孢菌素,和代） c 頭孢噻肟 0.12 - - c 頭孢曲松 0.12 - - 碳青霉希類 c 美羅配南 0.25 - - 大環(huán)內(nèi)酯類 c 阿齊霉素 四環(huán)素類 c 米諾環(huán)素 2 - - 氟喹諾酮類 c 環(huán)丙沙星 0.03 0.06 0.12 c 左氧沙星 0.03 0.06 0.12 葉酸代謝途徑抑制劑 c 甲氧芐啶/磺胺甲噁唑 0.12/2.4 0.25/4.75 0.5/9.5 c 磺胺藥 2 4 8 phenicols c 氯霉素 2 4 8 ansamycins c

25、 利福平 0.5 1 2 16.炭疽芽孢桿菌、鼠疫耶爾森菌、鼻疽伯克霍爾德菌、類鼻疽伯克霍爾德菌、土拉熱弗朗西絲菌、布魯氏菌屬液體稀釋法 試驗(yàn)條件 培養(yǎng)基 布氏肉湯： ph7.07.2,適合布魯氏菌屬； camhb適合炭疽芽孢桿菌、 鼠疫耶爾森菌、鼻疽伯克霍爾德菌、類鼻疽伯克霍爾德菌；土拉熱弗朗西絲菌需加2生長物質(zhì) 接種物 生長法或直接菌落懸液法，相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。 孵育 352，空氣，20-24 小時(shí)；對于鼠疫耶爾森菌需要 24 小時(shí)；對于布魯氏菌屬、土拉熱弗朗西絲菌需要48小時(shí)。 推薦的質(zhì)控菌株 大腸埃希菌atcc25922 （適合所有微生物） ； 大腸埃希菌atcc35218 （適合

26、阿莫西林/克拉維酸和類鼻疽伯克霍爾德菌） ；金黃色葡萄球菌atcc29213(適合炭疽芽孢桿菌和土拉熱弗朗西絲菌)；銅綠假單胞菌atcc27853（適合鼻疽伯克霍爾德菌、類鼻疽伯克霍爾德菌、土拉熱弗朗西絲菌）；肺炎鏈球菌atcc49619（只適合布魯氏菌屬） 炭疽芽孢桿菌、鼠疫耶爾森菌、鼻疽伯克霍爾德菌、類鼻疽伯克霍爾德菌、土拉熱弗朗西絲菌、布魯氏菌屬液體稀釋法解釋標(biāo)準(zhǔn) mic 值（g/ml） 微生物分組 抗微生物藥 s i r 注釋 青霉素類 炭疽芽孢桿菌 青霉素 0.12 - 0.25 內(nèi)酰胺類/內(nèi)酰胺類抑制劑 類鼻疽伯克霍爾德菌 阿莫西林/克拉維酸 8/4 16/8 32/16 頭孢類（

27、注射藥物）（包括頭孢菌素,和代） 鼻疽伯克霍爾德菌、 類鼻疽伯克霍爾德菌 頭孢他啶 8 16 32 碳青霉烯類 鼻疽伯克霍爾德菌、 類鼻疽伯克霍爾德菌 亞胺培南 4 8 16 氨基糖苷類 慶大霉素 4 8 16 鼠疫耶爾森菌 鏈霉素 4 8 16 慶大霉素 4 土拉熱弗朗西絲菌、 布魯氏菌屬 鏈霉素 8 四環(huán)素類 四環(huán)素 1.0 炭疽芽孢桿菌、 布魯氏菌屬 多西環(huán)素 1.0 四環(huán)素 4 8 16 鼠疫耶爾森菌、 鼻疽伯克霍爾德菌、 類鼻疽伯克霍爾德菌 多西環(huán)素 4 8 16 四環(huán)素 4 土拉熱弗朗西絲菌 多西環(huán)素 4 氟喹諾酮類 炭疽芽孢桿菌 環(huán)丙沙星 0.5 鼠疫耶爾森菌 環(huán)丙沙星 1 2

28、4 環(huán)丙沙星 0.5 土拉熱弗朗西絲菌 左氧沙星 0.5 葉酸代謝途徑抑制劑 類鼻疽伯克霍爾德菌、鼠疫耶爾森菌 甲氧芐啶/磺胺甲噁唑 2/38 - 4/76 布魯氏菌屬 甲氧芐啶/磺胺甲噁唑 2/38 - phenicols 鼠疫耶爾森菌 氯霉素 8 16 32 土拉熱弗朗西絲菌 氯霉素 8 三、耐藥表型的檢驗(yàn)1、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、大腸埃希菌和奇異變形桿菌中esbls檢測的篩選與確證試驗(yàn) 紙片法 ：初篩和確證液體稀釋法：初篩和確證 （1）肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、大腸埃希菌和奇異變形桿菌中esbls檢測的篩選與確證試驗(yàn) （紙片法） 方法 初步篩選試驗(yàn) 表型確證試驗(yàn) 培養(yǎng)基 muel

29、ler-hinton瓊脂 mueller-hinton瓊脂 抗微生物藥物紙片濃度 肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌和大腸埃希菌： 頭孢泊肟 10g 或頭孢他啶 30g 或氨曲南 30g 或頭孢噻肟 30g 或頭孢曲松 30g 奇異變形桿菌： 頭孢泊肟 10g 或頭孢他啶 30g 或頭孢噻肟 30g (使用一種以上的藥物進(jìn)行篩選將會提高檢測的敏感性) 頭孢他啶30g， 頭孢他啶/克拉維酸 30g/10g 和頭孢噻肟30g，頭孢噻肟/克拉維酸 30g/10g 確證試驗(yàn)需要同時(shí)使用頭孢噻肟和頭孢他啶，單獨(dú)和聯(lián)合克拉維酸的復(fù)合制劑） 接種 按標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法的規(guī)定進(jìn)行 按標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法的規(guī)定進(jìn)行 孵育條件 3

30、5空氣 35空氣 孵育時(shí)間 16-18 小時(shí) 16-18 小時(shí) 判讀結(jié)果 肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌和大腸埃希菌： 頭孢泊肟抑菌環(huán)直徑17mm 頭孢他啶抑菌環(huán)直徑22mm 氨曲南抑菌環(huán)直徑 27mm 頭孢噻肟抑菌環(huán)直徑27mm 頭孢曲松抑菌環(huán)直徑25mm 奇異變形桿菌： 頭孢泊肟抑菌環(huán)直徑22mm 頭孢他啶抑菌環(huán)直徑22mm 頭孢噻肟抑菌環(huán)直徑27mm 上述抑菌環(huán)直徑提示菌株可能產(chǎn)生 esbls 2 個藥物中有任何一個， 在加克拉維酸后，抑菌環(huán)直徑與不加克拉維酸的抑菌環(huán)相比，增大值5mm 時(shí)，判定為產(chǎn) esbls（ 如 ， 頭 孢 他 啶 的 抑 菌 環(huán) 16mm；頭孢他啶/克拉維酸的抑菌環(huán)2

31、1mm） 質(zhì)控建議 當(dāng)執(zhí)行 esbl 篩選試驗(yàn)時(shí)，肺炎克雷伯菌atcc700603 被用于質(zhì)量評估（如訓(xùn)練，能力或試驗(yàn)評價(jià)） ， 肺炎克雷伯菌 atcc700603 或 大腸埃希菌 atcc25922 用于常規(guī) qc（如：每周或每日） 。 大腸埃希菌 atcc25922（應(yīng)在敏感范圍） 肺炎克雷伯菌 atcc700603： 頭孢泊肟抑菌環(huán) 9-16mm 頭孢他啶抑菌環(huán) 10-18mm 氨曲南抑菌環(huán) 9-17mm 頭孢噻肟抑菌環(huán) 17-25mm 頭孢曲松抑菌環(huán) 16-24mm 當(dāng)執(zhí)行 esbl 確認(rèn)試驗(yàn)時(shí)，肺炎克雷伯菌 atcc700603* 和大腸埃希菌 atcc25922 用于常規(guī) qc（如

32、：每周或每日） 大腸埃希菌 atcc25922：所測試藥物聯(lián)合克拉維酸后的抑菌環(huán)直徑與單藥抑菌環(huán)相比，增大值2mm。 肺炎克雷伯菌 atcc700603： 頭孢他啶/克拉維酸抑菌環(huán)直徑增大5mm； 頭孢噻肟/克拉維酸抑菌環(huán)直徑增大3 mm。 （2）肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、大腸埃希菌和奇異變形桿菌中esbls 檢測的篩選與確證試驗(yàn) （液體稀釋法） 方法 初篩試驗(yàn) 確證試驗(yàn) 培養(yǎng)基 camhb camhb 藥物濃度 肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌和大腸埃希菌： 頭孢泊肟4g/ml 或 頭孢他啶1g/ml 或 氨曲南1g /ml 或 頭孢噻肟1g/ml 或 頭孢曲松1g/ml 奇異變形桿菌： 頭孢泊

33、肟1g/ml或 頭孢他啶1g/ml或 頭孢噻肟1g/ml （使用一種以上的藥物進(jìn)行篩選將會提高檢測的敏感性） 頭孢他啶 0.25-128g/ml, 頭孢 他 啶 /克 拉 維 酸0.25/4-128/4g/ml 和頭孢噻肟 0.25-64g/ml,頭孢噻肟/克拉維酸0.25/4-64/4g/ml。確證試驗(yàn)需要同時(shí)使用頭孢他啶、頭孢噻肟，單獨(dú)和聯(lián)合克拉維酸復(fù)合制劑。 接種 按標(biāo)準(zhǔn)肉湯稀釋法的規(guī)定進(jìn)行 按標(biāo)準(zhǔn)肉湯稀釋法的規(guī)定進(jìn)行 孵育條件 35空氣 35空氣 孵育時(shí)間 16-20 小時(shí) 16-20 小時(shí) 結(jié)果判讀 生長=可疑esbls產(chǎn)生 肺炎克雷伯菌、 產(chǎn)酸克雷伯菌和大腸埃希菌對于頭孢泊肟mic

34、8 g/ml或?qū)τ陬^孢他啶、 氨曲南、 頭孢噻肟、 頭孢曲松mic2 g/ml； 奇異變形桿菌對于頭孢泊肟、 頭孢他啶、 頭孢噻肟mic2g/ml 對2個中任何一個藥物的mic，在加入克拉維酸后， mic與不加克拉維酸的mic 值降低3 個以上對倍稀釋度，判定為 esbls（如頭孢他啶的 mic=8 g/ml，頭孢他啶/克拉維酸的mic為1g/ml） 質(zhì)控建議 大腸埃希氏菌atcc25922不長 肺炎克雷伯氏菌atcc700603應(yīng)當(dāng)生長 頭孢泊肟mic8g/ml 頭孢他啶mic2g/ml 氨曲南mic2g/ml 頭孢噻肟mic2g/ml 頭孢曲松mic2g/ml 肺炎克雷伯氏菌 atcc70

35、0603：聯(lián)合克拉維酸的復(fù)合制劑的mic與單藥的mic相比， 應(yīng)當(dāng)降低3個以上對倍稀釋度 2.耐甲氧西林葡萄球菌檢測 （1）耐甲氧西林葡萄球菌紙片初篩法： 抗菌藥物(紙片含藥量) 微生物群 抑菌環(huán)直徑（mm） 注釋 頭孢西丁（30g） 金黃色葡萄球菌和路鄧葡萄球菌 21 22 頭孢西丁對金黃色葡萄球菌紙片擴(kuò)散法抑菌環(huán)直徑19mm應(yīng)報(bào)告對苯唑西林耐藥20mm應(yīng)報(bào)告對苯唑西林敏感。 除路鄧葡萄球菌外的凝固酶陰性葡萄球菌 24 25 頭孢西丁對凝固酶陰性葡萄菌紙片擴(kuò)散法抑菌環(huán)直徑24mm應(yīng)報(bào)告對苯唑西林耐藥，25mm報(bào)告對苯唑西林敏感。 （2）耐甲氧西林葡萄球菌瓊脂初篩法： 篩選試驗(yàn) 苯唑青霉素耐藥

36、 培養(yǎng)基 含 nacl 的 m-h 瓊脂（4%w/v；0.68mol/l） 抗生素含量 6g/ml 苯唑青霉素或 10g/ml 甲氧西林 接種 直接菌落懸液約 0.5 麥?zhǔn)媳葷峁?，用拭子浸潤菌懸液后，在平板表面點(diǎn)種或劃線。 培養(yǎng)條件 35空氣 培養(yǎng)時(shí)間 24 小時(shí)，對于甲氧西林/苯唑青霉素耐藥的凝固酶陰性葡萄球菌，孵育48 小時(shí)后再檢測最可靠。 結(jié)果 1 菌落=耐藥 推薦質(zhì)控菌 金黃色葡萄球菌 atcc29213敏感，金黃色葡萄球菌 atcc43300-耐藥 3.d試驗(yàn)-克林霉素誘導(dǎo)耐藥試驗(yàn)（1）機(jī)制：對大環(huán)內(nèi)酯耐藥的葡萄球菌可能有天然或誘導(dǎo)性對克林霉素的耐藥通過erm 基因編碼的23s rr

37、na 甲基化也稱為mlsb（大環(huán)內(nèi)酯、林可和b 型鏈陽霉素）耐藥，或只對大環(huán)內(nèi)酯類耐藥（由msra 基因編碼的外排機(jī)制）。（2）方法：mha或血平板，紙片相鄰試驗(yàn)，對于葡萄球菌，距紅霉素紙片（15g/片）邊緣1526mm 處放置克林霉素紙片(2g/片)來進(jìn)行檢測；對于-溶血鏈球菌，將克林霉素紙片(2g/片)和紅霉素紙片（15g/片）貼在相鄰的位置，紙片邊緣相距12mm。（3）結(jié)果判讀：35空氣，16-20小時(shí)孵育后，克林霉素抑菌環(huán)不出現(xiàn)“截平”現(xiàn)象，應(yīng)報(bào)告分離株對其敏感。鄰近紅霉素紙片側(cè)克林霉素抑菌環(huán)出現(xiàn)“截平”現(xiàn)象（稱為“d”抑菌環(huán)），提示存在可誘導(dǎo)的克林霉素耐藥，應(yīng)報(bào)告分離株對其耐藥，在報(bào)告中應(yīng)注明“通過誘導(dǎo)克林霉素耐藥試驗(yàn)，推測此菌株對克林霉素耐藥，克林霉素對某些病人可能仍有效”；若無“截平”現(xiàn)象，則應(yīng)報(bào)告菌株對克林霉素敏感。 葡萄