結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)

1、結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)一、目的和任務(wù)結(jié)核病人的細(xì)菌學(xué)檢查，是發(fā)現(xiàn)傳染源的最主要途徑和手段，是確定結(jié)核病診斷和化療方案的重要依據(jù),也 是考核療效、評(píng)價(jià)防治效果的可靠標(biāo)準(zhǔn)。因此，結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查是國(guó)家結(jié)核病控制規(guī)劃（NTP）的重要組成部分，在結(jié)核病防治工作中起著不可缺少的重要作用。二、實(shí)驗(yàn)室的職能為落實(shí)國(guó)家結(jié)核病控制規(guī)劃中對(duì)結(jié)核病傳染源監(jiān)控要求，應(yīng)建立各級(jí)結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室，明確其職能和工作 范圍。各級(jí)結(jié)核病細(xì)菌學(xué)參比實(shí)驗(yàn)室（簡(jiǎn)稱參比實(shí)驗(yàn)室），應(yīng)明確為各自轄區(qū)的結(jié)核病控制工作服務(wù)的宗旨。（一）國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室在衛(wèi)生部結(jié)核病控制中心領(lǐng)導(dǎo)下，國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)全國(guó)結(jié)核病細(xì)菌學(xué)工作的規(guī)劃，實(shí)施等技術(shù)

2、管理，并向中心報(bào)告工作國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持適當(dāng)數(shù)量和結(jié)構(gòu)的人員編制：專業(yè)人員1520人,其中高級(jí)專業(yè)技術(shù)職稱3名以上，中級(jí)10名,初級(jí)7名。參比實(shí)驗(yàn)室的職能：1 根據(jù)國(guó)家結(jié)核病控制規(guī)劃的要求，規(guī)劃全國(guó)結(jié)核病細(xì)菌學(xué)工作，制定實(shí)施措施，對(duì)全國(guó)結(jié)核病細(xì)菌學(xué)監(jiān)控質(zhì)量進(jìn)行督導(dǎo)和評(píng)估。國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室負(fù)有指導(dǎo)、協(xié)調(diào)、督導(dǎo)各?。ㄊ?、自治區(qū)）參比實(shí)驗(yàn)室的工作，2 建立結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化準(zhǔn)則、操作規(guī)程及規(guī)章制度。推行WHC推薦的國(guó)際通用的結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查技術(shù)。3 建立可行的涂片鏡檢、分離培養(yǎng)、藥物敏感性試驗(yàn)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量控制系統(tǒng)。4 承擔(dān)非結(jié)核分支桿菌菌種的最后鑒定和其它非常規(guī)分析手段的

3、實(shí)施。5 建立結(jié)核分支桿菌和非結(jié)核分支桿菌臨床菌株而網(wǎng)。制定而網(wǎng)的管理、交流和資源提供辦法。6 開(kāi)展結(jié)核病細(xì)菌學(xué)等實(shí)驗(yàn)診斷新技術(shù)，新方法的基礎(chǔ)研究，及其實(shí)際應(yīng)用可行性評(píng)估,7 對(duì)我國(guó)結(jié)核病控制的實(shí)施性研究，提供細(xì)菌學(xué)服務(wù)。此外，對(duì)常規(guī)結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查方法進(jìn)行實(shí)施性研究8 培訓(xùn)?。ㄊ小⒆灾螀^(qū)）或地、市參比室技術(shù)人員。（-）?。ㄊ小⒆灾螀^(qū)）參比實(shí)驗(yàn)室省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室，是我國(guó)結(jié)核病控制規(guī)劃細(xì)菌學(xué)監(jiān)測(cè)中的重要環(huán)節(jié)。在省結(jié)核病防治所（科）的領(lǐng)導(dǎo)和國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室的指導(dǎo)下負(fù)貢所在轄區(qū)結(jié)核病細(xì)菌學(xué)工作計(jì)劃的制定和實(shí)施等技術(shù)管理。省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)有510名專業(yè)人員，其中含中、高級(jí)專業(yè)技術(shù)職稱人員2名以上。

4、省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室，至少具有50平方米以上的實(shí)驗(yàn)工作場(chǎng)所。具備開(kāi)蜴檢查項(xiàng)目的相應(yīng)儀器和設(shè)備，包括：生物安全柜一臺(tái)、高壓蒸汽滅菌鍋一臺(tái)、培養(yǎng)基蒸汽凝固滅菌器一臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱和雙目生物光學(xué)顯 微鏡均不少于兩臺(tái)、熒光顯微鏡一臺(tái)、離心機(jī)一臺(tái)、冰箱12臺(tái)。已建立菌株分原的省參比室，應(yīng)有-20 C或-80 C冷冰箱。參比實(shí)驗(yàn)室的職能：1根據(jù)國(guó)家和省結(jié)核病控制規(guī)劃的褥要，規(guī)劃本省結(jié)核病細(xì)菌學(xué)工作，制定實(shí)施措施，協(xié)調(diào)省內(nèi)各級(jí)細(xì)菌實(shí) 驗(yàn)室工作，對(duì)地、縣結(jié)核病細(xì)菌學(xué)質(zhì)量，進(jìn)行監(jiān)控、督導(dǎo)和評(píng)怙。2 開(kāi)展涂片鏡檢、分離培養(yǎng)、藥物鼓感性檢測(cè)和臨床分離株種的初步鑒定Q有條件的省參比實(shí)險(xiǎn)室，可建立完整的分支懺菌菌種鑒定體系，所

5、有細(xì)菌學(xué)檢查應(yīng)嚴(yán)格遵照國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室制定的標(biāo)準(zhǔn)化準(zhǔn)則、操作規(guī)程及規(guī)章制度進(jìn)行。3 根據(jù)國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室制定的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)全省痰片鏡檢和分離培養(yǎng)工作進(jìn)行質(zhì)量控制。為地、市參比實(shí)驗(yàn) 室開(kāi)展分離培養(yǎng)，提供培養(yǎng)基服務(wù)。核準(zhǔn)地、市實(shí)驗(yàn)室自制培養(yǎng)基4 承擔(dān)藥物坡感性測(cè)定，接受?chē)?guó)家參比實(shí)驗(yàn)室和跨國(guó)參比實(shí)驗(yàn)室，定期藥物坡感性測(cè)定質(zhì)量控制。5 省臨床分離野生侏菌而，應(yīng)參加全國(guó)菌株而網(wǎng)，遵守菌庫(kù)的管理、交流和資源提供辦法。為省結(jié)核病控制規(guī)劃有關(guān)研究工作，提供細(xì)菌學(xué)服務(wù)Q6 將省結(jié)核病細(xì)菌學(xué)監(jiān)測(cè)工作、質(zhì)量控制年報(bào)表上報(bào)國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室Q（三）地（市）級(jí)細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室在省參比實(shí)驗(yàn)室的指導(dǎo)下， 地（市）級(jí)細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室負(fù)貢本地

6、（市）結(jié)核病細(xì)菌學(xué)監(jiān)測(cè)。應(yīng)有相 應(yīng)的專用工作場(chǎng)所和不少于4名專業(yè)人員應(yīng)詼開(kāi)展痰涂片鏡檢工作并具有相應(yīng)的儀器設(shè)備，包括：無(wú)菌柜、雙 目光學(xué)顯微鏡（備油鏡鏡頭）、蒸汽高壓滅菌鍋、紫外線滅菌燈、冰箱、離心機(jī)及染片所需的器材。實(shí)驗(yàn)室職能：1 在省參比實(shí)驗(yàn)室的指導(dǎo)下，制定本地 （市）結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢測(cè)工作計(jì)劃02 依照國(guó)家參比室制定的操作規(guī)程，開(kāi)膜痰直接涂片鏡檢工作。為縣（市）結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供抗酸染色液。3 依照國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室制定的操作規(guī)程，為各縣（市）提供分離培養(yǎng)服務(wù)。其培養(yǎng)基或由省參比實(shí)驗(yàn)室供給，或經(jīng)省參比實(shí)驗(yàn)室核準(zhǔn)后自制4 定期督導(dǎo)和評(píng)價(jià)縣（市）細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查工作，定期向省參比

7、實(shí)驗(yàn)室報(bào)告其督導(dǎo)、評(píng)價(jià)結(jié)果和質(zhì)控報(bào)表。定期培訓(xùn)所僻縣（市）細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員。監(jiān)督轄區(qū)內(nèi)細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)人員培訓(xùn)后上明制度（四）縣（市）級(jí)細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室5 省、地（市）參比實(shí)驗(yàn)室指導(dǎo)下，負(fù)災(zāi)全縣（市）結(jié)核病細(xì)菌學(xué)工作。應(yīng)有1名以上專職工作人員，開(kāi) 展直接痰涂片鏡檢工作。應(yīng)具有單獨(dú)的涂片檢查工作室，配備相應(yīng)的儀器設(shè)備，包括雙目光學(xué)顯微鏡（備油鏡鏡頭）、蒸汽高壓滅菌鍋、紫外線滅菌燈、冰箱及染片所褥的器材?？h（市）實(shí)驗(yàn)室職能：1 在省、地（市）參比實(shí)驗(yàn)室的指導(dǎo)下，制定本縣（市）結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢測(cè)的工作計(jì)劃。2 接受省、地（市）參比實(shí)驗(yàn)室的定期培訓(xùn)。痰檢人員應(yīng)在培訓(xùn)后上陰，并保持穩(wěn)定。3 按照國(guó)家參比室制定的

8、操作規(guī)程開(kāi)展痰直接涂片鏡檢工作。4 應(yīng)用統(tǒng)一的“結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室登記本“，記錄痰涂片鏡檢結(jié)果。5 保存3個(gè)月的全部痰涂片，留待上級(jí)實(shí)驗(yàn)室坦驗(yàn)質(zhì)控后方可銷毀。6 運(yùn)送需作分離培養(yǎng)的標(biāo)本至上級(jí)實(shí)驗(yàn)室待檢。7 條件具備的縣（市）實(shí)驗(yàn)室，經(jīng)省參比實(shí)驗(yàn)室核準(zhǔn)后，依照國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室制定的操作規(guī) 程進(jìn)行分離培養(yǎng)工作。并從省/地（市）參比實(shí)驗(yàn)室獲得分離培養(yǎng)基。8 接受省參比實(shí)驗(yàn)室的定期質(zhì)控檢查。（五）鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院鏡檢站在一些遠(yuǎn)離縣（市）結(jié)防所、交通不便的鄉(xiāng)鎮(zhèn)，可選擇鄉(xiāng)鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院建立涂片鏡檢站，鏡檢人員需經(jīng)地（市）或縣（市）實(shí)驗(yàn)室培訓(xùn)后方可上肉，人員保持穩(wěn)定，接受定期更訓(xùn)。其涂片應(yīng)全部保存，每13月由縣（市）

9、實(shí)驗(yàn)室負(fù)貢人更驗(yàn)一次。三、實(shí)驗(yàn)室人員培訓(xùn)（-）國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室1 國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室，每年召開(kāi)省參比實(shí)驗(yàn)室負(fù)貢人會(huì)議一次：報(bào)告工作，交流經(jīng)驗(yàn)，研究和討論工作中出現(xiàn)的問(wèn)題及解決辦法。2 結(jié)合工作會(huì)議，每二年舉辦一次結(jié)核病細(xì)菌學(xué)研討會(huì)介紹有關(guān)結(jié)核病細(xì)菌學(xué)流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的新理論、新技術(shù)和新方法。3 舉辦省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室專題培訓(xùn)。4 接受省、地（市）實(shí)驗(yàn)人員的進(jìn)修。（二）省級(jí)參比實(shí)驗(yàn)室每年至少斃流培訓(xùn)下轄地（市）細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室人員一次。培訓(xùn)可擴(kuò)展至縣（市）專業(yè)人員，或安排地（市） 實(shí)驗(yàn)室對(duì)縣（市）專業(yè)人員的培訓(xùn)。培訓(xùn)內(nèi)容包括：1 結(jié)核病流行病概念和我國(guó)及本省結(jié)核病流行現(xiàn)狀和問(wèn)題。2 國(guó)家結(jié)核病控制規(guī)劃

10、的原則。3 結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查在國(guó)家結(jié)核病控制規(guī)劃中的作用。4 痰涂片檢查的規(guī)范，包括細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室的安全、顯微鏡使用和保養(yǎng)、涂片的制作染色液的制備、染色和鏡檢操作，正確的記錄、報(bào)告方法等。5 痰涂片鏡檢，分離培養(yǎng)的質(zhì)量控制和報(bào)告方式。6 結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)工作督導(dǎo)、訪視技術(shù)督導(dǎo)報(bào)告及要求。（三）地（市）細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室地（市）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按省參比實(shí)驗(yàn)室的安排，結(jié)合痰片鏡檢和分離培養(yǎng)質(zhì)量控制，每年對(duì)縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室專業(yè)人員進(jìn)行培訓(xùn)?？h（市）新任痰檢人員，需經(jīng)不少于兩周的技術(shù)培訓(xùn)，方可上陰。四、痰標(biāo)本收集和送檢的有關(guān)規(guī)定（-）對(duì)象1因癥求診者檢查：凡因肺結(jié)核癥狀求診者及轉(zhuǎn)診的可疑肺結(jié)核病人均應(yīng)送痰標(biāo)本作涂片鏡檢（詳見(jiàn)

11、第三 章“肺結(jié)核病人發(fā)現(xiàn)“，第17頁(yè)）。2 療效考核：凡已確診、登記、治療的肺結(jié)核病人，在化療期間應(yīng)按規(guī)定定期作痰菌更查：1）初治涂陽(yáng)病人在療程滿2、5、6月時(shí)，究治涂陽(yáng)病人在療程滿2、5、8月時(shí)，各查痰一次。2）初、熨治涂陽(yáng)病人在療程滿2月時(shí)痰菌仍為陽(yáng)性者，應(yīng)在治療滿3月時(shí)增加查痰一次。 曳治涂陽(yáng)病人若滿5個(gè)月治療時(shí)痰菌仍陽(yáng)性，應(yīng)在滿7個(gè)月時(shí)增加查痰一次。3） 確診、登記的涂陰肺結(jié)核病人，即使病人因故未接受治療，也應(yīng)在登記后滿2和6月時(shí) 進(jìn)行痰菌檢查。（-）要求1 初診病人應(yīng)送3份痰標(biāo)本（夜間痰、清晨痰和即時(shí)痰）如無(wú)夜間痰，在留取清晨痰后2 3小時(shí)再留取一份痰標(biāo)本；或在送痰時(shí)，留取兩份即時(shí)痰

12、。療程中或更診隨訪病人按期每次送檢兩份痰（晨痰和夜間痰）Q2 痰標(biāo)本采集：即時(shí)痰為病人就診時(shí)咳出的痰液。清晨痰為清晨深咳出的痰液Q夜間痰為 就診前夜間咳出的痰液。痰標(biāo)本應(yīng)以膿樣、干酪樣或膿性粘液樣性質(zhì)的痰液為合格標(biāo)本，痰量應(yīng)為35亳升。 應(yīng)由檢驗(yàn)人員或?qū)Ｈ蓑?yàn)收痰標(biāo)本，痰液不合格者，要求重新送檢。難以獲得合格標(biāo)本時(shí)，也應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查，但應(yīng)注明標(biāo)本性狀，以供分析結(jié)果時(shí)參考。 痰標(biāo)本的容器，應(yīng)采用國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室推薦的國(guó)際通用痰瓶，或采用直徑4厘米、高2厘米的塑料或涂蠟紙密閉盒。留痰容器上應(yīng)注明病人姓名、編號(hào)（門(mén)診序號(hào)，或病人登記號(hào)）及日期。3 痰標(biāo)本的保存和輸送：痰標(biāo)本容器密封，勿倒置，嚴(yán)防痰液外

13、溢。不能立即作分離培養(yǎng)的痰標(biāo)本須置 4c冰箱保存，防止痰液干洞或污染。需送上一級(jí)細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的痰標(biāo)本，夕卜送前應(yīng)認(rèn)真核對(duì)痰標(biāo)本容器上標(biāo)注是否正確和清晰是否與化驗(yàn)單 一致。痰容器應(yīng)采用專用的結(jié)核桿菌和痰標(biāo)本冰盒這送，或以紙張和塑料袋封裝、扎牢，順序放置于包裝袋內(nèi)。盒外注明勿倒置標(biāo)志。4 送檢時(shí)，縣（市、區(qū)）結(jié)防所（科）醫(yī)師應(yīng)填寫(xiě)檢驗(yàn)單。填寫(xiě)項(xiàng)目包括：病人姓名、地址、登記號(hào)（或 門(mén)診序號(hào)）、送檢日期（或初診日期）、送檢原因（初診病人或陰訪病人）。檢驗(yàn)單應(yīng)與痰標(biāo)本分別放置在不同 容器中，一齊送交上級(jí)實(shí)驗(yàn)室5 收到痰標(biāo)本后，實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員仔細(xì)核對(duì)標(biāo)本和檢驗(yàn)單各項(xiàng)內(nèi)容，察看痰標(biāo)本是否合格。隨后按順序編

14、號(hào)，及時(shí)檢查和登記。對(duì)不合格標(biāo)本要求重送。填寫(xiě)說(shuō)明：均用同一實(shí)驗(yàn)序1）實(shí)驗(yàn)序號(hào)：初診病人的3份標(biāo)本，及其后每次檢查的痰標(biāo)本，號(hào)編號(hào)。2）痰標(biāo)本來(lái)源：初診病人門(mén)診序號(hào)以門(mén)診登記本為據(jù)；隨訪病人登記號(hào) 登記本為據(jù)“3）痰標(biāo)本性質(zhì)，按膿樣痰、干酪樣痰、血性樣痰、膿性粘液痰和水樣痰6 廢棄標(biāo)本和污染物的處理：以病人分類登記。嚴(yán)禁不經(jīng)滅1）痰盒和廢棄標(biāo)本等污染物，均須經(jīng)高壓蒸汽滅菌后才能丟棄或清洗，菌隨意處理。2)化不徹底焚燒是有害的。痰檢工作面 片操作。痰盒等污染物如采用焚燒處理，須比于焚燒爐內(nèi)徹底焚化。焚，或暴露3)的消毒：可將痰標(biāo)本置干一搪鎏盤(pán)中，在操作廚中進(jìn)行痰涂涂片操作完成后，將盤(pán)與廢棄物等一

15、并進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，或與操作臺(tái)面同時(shí)以3%石碳酸或其它可靠的消毒液擦拭后再以紫外然滅菌燈(距離1米)照射30分鐘五、痰直接涂片檢查法(-) 涂片取經(jīng)95%乙醇擦拭脫脂過(guò)的干燥、清潔、無(wú)油污、無(wú)劃痕的新玻理片，于破片背面的左端1/3處以藍(lán)色或黑色 記號(hào)筆(玻璃鉛筆)編號(hào)。用接種環(huán)或折斷的竹簽茬端，挑取痰標(biāo)本的膿樣、干酪樣部分約0050.1ml，于破片正面的右惻三分之二處均勻涂沫成2X25厘米卵切形痰膜自然T燥后待檢一張破片只可涂沫一份標(biāo)本。玻片只應(yīng)使用一次，不得清洗后再次使用。(二)姜爾-尼爾遜氏染色法(Ziehl-Neelsen)簡(jiǎn)稱姜尼氏染色法：1 試劑：1) 堿性現(xiàn)紅乙醇染色儲(chǔ)存液：堿性熨

16、紅液：8克堿性更紅溶于95%L醇100亳升中。5%石碳酸水溶液：5克石碳酸溶于100亳升蒸鏘水中。2) 堿性現(xiàn)紅乙醇染色液：10軍升堿性史紅儲(chǔ)存液與90軍升5%石碳酸水溶液混合。3) 5%鹽酸乙醇脫色液：5亳升濃鹽酸與95亳升95%乙醇混合。4) 0.3%亞甲蘭復(fù)染儲(chǔ)存液：0.3克亞甲絲溶于50亳升95%乙醇中，完全溶解后加蒸鏘水至終體積100亳升。5) 亞甲絲復(fù)染液：以蒸飾水10倍稀釋0.3%亞甲蘭更染儲(chǔ)存液即得亞甲蘭更染液。2 染色步驟：1) 火焰固定涂片。2) 滴加堿性更紅乙醇染色液，蓋滿痰膜。小心火焰加熱至出現(xiàn)蒸汽后，脫離火焰，保持染色三分鐘。染色期間應(yīng)始終保持痰膜被染色液裝蓋，必要時(shí)

17、可續(xù)加染色液。切勿使染色液沸騰。3) 流水自破片背面上端輕洗，洗清染色液。4) 自痰膜上端外緣滴加脫色液，流過(guò)痰膜。褥脫至痰膜無(wú)可視紅色為止。脫色應(yīng)單片進(jìn)行。5) 流水自破片背面上端輕洗，去脫色液。6) 滴加亞甲蘭身染液，染色 30秒鐘。7) 流水自破片背面上端輕洗，去究染液。8) 待干后鏡檢。3鏡檢與報(bào)告：光學(xué)顯微鏡鏡檢（目鏡10X ,油鏡100X）染色痰片在淡藍(lán)色背景下，抗酸桿菌呈紅色，其它細(xì)菌和細(xì)胞呈藍(lán)色按照下列標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告所得結(jié)果:1）抗酸桿菌陰性：連續(xù)觀察300個(gè)不同視野,未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌2）抗酸桿菌可疑（士）3）抗酸桿菌陽(yáng)性（1 +）12條抗酸桿菌/300視野。39條抗酸桿菌/100視野

18、。4）抗酸桿菌陽(yáng)性（2+）19條抗酸桿菌/10視野“5） 抗酸桿菌陽(yáng)性（3+）19條抗酸桿菌/每個(gè)視野>> 1。條抗酸桿菌/每視野鏡檢結(jié)果，應(yīng)及時(shí)記錄在“結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室登記本“和化驗(yàn)報(bào)告單上。痰涂片化驗(yàn)單應(yīng)包括痰標(biāo)本的性狀。陰性結(jié)果應(yīng)填記"陰性"不得以""表達(dá)。300個(gè)視野內(nèi)僅見(jiàn)12條抗酸桿菌者，應(yīng)在報(bào)告單.匕主明條數(shù)，醫(yī)生可結(jié)合胸片進(jìn)行判斷0必要時(shí)再取標(biāo)本更查證實(shí)，仍見(jiàn)12條抗酸桿菌/300個(gè)視野，該病例可確診為涂陽(yáng)病人，標(biāo)本應(yīng)在送檢48小時(shí)內(nèi)報(bào)告結(jié)果,六、疾培養(yǎng)檢查法<-）痰標(biāo)本采集新發(fā)病人應(yīng)在抗結(jié)核藥物治療前留取痰標(biāo)本、治療中

19、的病人應(yīng)停藥23天后留取痰標(biāo)本。病人于清晨漱口后，咳痰35亳升留作培養(yǎng)檢查”如需送上級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢查，應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)痰瓶中，加入與標(biāo)本等體積的防腐液0 6%溟化十六烷基吐院（CPB）的2%氨化鈉（NaCI）液，密封保存。此標(biāo)本應(yīng)及時(shí)送交上級(jí)實(shí)驗(yàn)室。防腐處理后，痰標(biāo)本可在室溫 下短期存放 >但仍以4C保存為宜存放時(shí)間不應(yīng)超過(guò)2周。<-）分離培養(yǎng)基分離培養(yǎng)采用酸性歲氏培養(yǎng)基和丙酮酸鈉培養(yǎng)基。1 酸性改良?xì)q氏培養(yǎng)基：成份：基礎(chǔ)液谷氨酸鈉（純度99%以上）RWB 7.2克磷酸二氫鉀14.0克硫酸鎂0.24克檸檬酸鎂06克丙三醇12亳升蒸餌水600軍升無(wú)機(jī)鹽試劑應(yīng)采用化學(xué)純（CP）試劑新鮮雞卵液100

20、0吆升2%孔雀綠水溶液20兆升制備方法：1） 基礎(chǔ)液制備：量取蒸儲(chǔ)水600亳升,加入各無(wú)機(jī)鹽成份、谷氨酸鈉和丙三醇，100 C加熱30分鐘，冷卻>2） 新鮮雞卵液制備：洗凈新鮮雞卵表面，浸泡在 70%乙醇或其它稀釋消毒液中2030分鐘。取出，擦干，開(kāi)口，收集雞卵液，攪勻。通過(guò)消毒的紗布過(guò)濾成雞卵液。3） 將600亳升基礎(chǔ)液和1000名升新鮮雞卵液混勻。加2%孔雀綠水溶液20吆升混勻，靜比1小時(shí)后，分裝6亳升至標(biāo)準(zhǔn)螺旋蓋培養(yǎng)管或7亳升于中試管（1518X 180亳米）中。雙層放置于擱架中，經(jīng)培養(yǎng)基蒸汽凝固滅菌器，85 c滅菌50分鐘。培養(yǎng)基斜面應(yīng)占試管的2/3。滅菌后37C無(wú)菌試驗(yàn)24小時(shí)

21、。制成的培養(yǎng)基斜面應(yīng)顏色鮮艷,表面光滑，有一定韌性和酸堿緩沖能力。無(wú)菌試驗(yàn)后新 制備的培養(yǎng)基應(yīng)4c避光保存 一月內(nèi)使用2 丙酮酸鈉培養(yǎng)基：基礎(chǔ)液谷氨酸鈉（純度99%以上）7.2克璘酸二氫鉀2.4克硫酸鎂 （ MgSO 4 - 7H 20） 0.24 克檸檬酸鎂06克丙酮酸鈉1.6克葡萄楷4.0克蒸餌水600軍升無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)物試劑均應(yīng)采用化學(xué)純（CP）試劑新鮮雞卵液1000軍升2%孔雀綠水溶液20兆升制備方法：基礎(chǔ)液制備：除冷卻后加入葡萄糖外，丙酮酸鈉培養(yǎng)基制備同h。（三）前處理視痰標(biāo)本性狀，加12倍體積4%氫氧化鈉（NaOH）消化液于痰瓶中，渦旋振蕩器振蕩23分鐘，使痰液 充分勻化，室溫放置。

22、自加入氫氧化鈉消化液后起，整個(gè)處理時(shí)間不得超過(guò)20分鐘。樣本數(shù)較多時(shí)，應(yīng)分批處理。（四）接種吸取經(jīng)前處理后的痰液01亳升，均勻接種在整個(gè)培養(yǎng)基斜面。每份標(biāo)本接種兩支酸性歲氏培養(yǎng)基，同時(shí)可補(bǔ)充接種一支丙酮酸鈉培養(yǎng)基，以利于牛分支桿菌和一些耐藥結(jié)核分支桿菌的生長(zhǎng)?；蛲瑫r(shí)接種酸性羅氏和丙酮酸鈉培養(yǎng)基各1支。接種后，37 C平臥放置斜面24小時(shí)。然后擰緊培養(yǎng)瓶蓋或塞緊試管膠塞直立放置，37 c繼續(xù)培養(yǎng)。 含溟化十六烷基吐咤（CPB）防腐的痰標(biāo)本，在接種前褥用生理鹽水或蒸鏘水定溶至30軍升,3 OOOxg離心30分鐘，再以生理鹽水或蒸儲(chǔ)水洗滌沉渣2次低溫時(shí),因溟化十六烷基吐咤（CPB）產(chǎn)生沉淀， 需先將

23、樣本置37 C，使沉淀重新完全溶解后，再洗滌離心。同上，接種0.1ml沉渣。（五）結(jié)果與報(bào)告1抗酸桿菌生長(zhǎng)報(bào)告：接種后第3天、第7天各觀察一次。3天發(fā)現(xiàn)菌落生長(zhǎng)者,經(jīng)抗酸染色證實(shí)后，可報(bào)告快速生長(zhǎng)抗酸桿菌。 以后，每周觀察一次，記錄菌落生長(zhǎng)及污染情況。陽(yáng)性生長(zhǎng)物經(jīng)抗酸染色證實(shí)后，可報(bào)告抗酸桿菌生長(zhǎng)。培養(yǎng)陰性結(jié)果須在滿8周時(shí)即第9周開(kāi)始時(shí)仍未見(jiàn)菌落者方可報(bào)告o觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)非抗酸桿菌生長(zhǎng)時(shí)，應(yīng)報(bào)告污染培養(yǎng)污染率應(yīng)在25%范圍內(nèi)污染率高,提示培養(yǎng)基滅菌不佳，標(biāo)本處理、接種等環(huán)節(jié)有誤，應(yīng)當(dāng)分析原因，采取相應(yīng)措施。培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告方式:抗酸桿菌培養(yǎng)陰性：斜面無(wú)菌落生長(zhǎng)，抗酸桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性(1+)菌落生長(zhǎng)占斜面面

24、積的1/4抗酸桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性(2+)菌落生長(zhǎng)占斜面面積的1/2抗酸桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性(3+)菌落生長(zhǎng)占斜面面積的3/4抗酸桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性(4+)菌落生長(zhǎng)布滿全斜面?？顾釛U菌培養(yǎng)陰性應(yīng)以“（培養(yǎng)陰性）”報(bào)告，不能以”（-）”表示菌落生長(zhǎng)不足以斜面面積1/4時(shí)，實(shí)報(bào)菌落數(shù)。污染菌生長(zhǎng)程度報(bào)告方式：C1+污染菌占培養(yǎng)基斜面1/4以下者C2+污染菌占培養(yǎng)基斜面1/2以下者C3+污染菌占培養(yǎng)基斜面3/4以下者C4+污染菌占培養(yǎng)基全斜面。LQ:培養(yǎng)基液化。若抗酸桿菌和污染同時(shí)存在于同一斜面上，應(yīng)同時(shí)報(bào)告。2饕別培養(yǎng)基：在分離培養(yǎng)基上緩慢生長(zhǎng)的抗酸桿菌需經(jīng)PNB和TCH鑒別培養(yǎng)后，方可初饕為結(jié)核分支桿菌、牛分支釬茵或

25、非結(jié)核分支釬菌。 制備：4 ）對(duì)硝基苯甲酸（PNB）培養(yǎng)基：二甲基甲酰胺少量溶解PNB后，加入改良羅氏培養(yǎng)基的基礎(chǔ)液中，使整個(gè)培養(yǎng)基終濃度為0 5亳克佬升培養(yǎng)基凝固滅菌同前。2）噬吩2痰酸腫（TCH）培養(yǎng)基：5宅克TCH溶于10亳升蒸餡水中，取1亳升加入100亳升羅氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)液中，使整個(gè)培養(yǎng)基終濃度為5微克佬升，培養(yǎng)基凝固滅菌同前、接種：于玻璃研磨器中研磨臨床分離培養(yǎng)物成種鑒10-2 亳克/亳升均勻菌液，接種0.1吆升于上述兩別培養(yǎng)基上和對(duì)照改良?xì)q氏培養(yǎng)基上37 c培養(yǎng)，每周觀察一次，四周后報(bào)告生長(zhǎng)結(jié)果。鑒定:在藥物敏感性測(cè)驗(yàn)同時(shí)，進(jìn)行PNB和TCH鑒別培養(yǎng)基測(cè)驗(yàn)，可提供臨床分離株的初步種的

26、斐定結(jié)果需要 時(shí)，可輔以硝酸還原試驗(yàn)、煙酸試驗(yàn)和耐68C熱觸酶試驗(yàn)?；蛱峤皇⒈葘?shí)驗(yàn)室饕定。 臨床分離株種的初步饕定七、痰菌檢驗(yàn)質(zhì)量控制方案（-）痰涂片檢查質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室痰檢質(zhì)量控制，包括室內(nèi)質(zhì)控和空間質(zhì)控兩種形式01室內(nèi)質(zhì)控：室內(nèi)質(zhì)控范圍包括痰標(biāo)本收集、染色劑制備、涂片制備、染色、顯微鏡維護(hù)、顯微鏡鏡檢、標(biāo)本、結(jié)果 登記以及痰片的保存。室內(nèi)質(zhì)控內(nèi)容：1）痰標(biāo)本收集：痰盒采用國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一的螺旋蓋痰瓶，或可密封有蓋塑料盒、蟒紙盒收集痰標(biāo)本疾容器應(yīng)標(biāo)明病人姓名、送檢日期及初診病人門(mén)診序號(hào)（或隨訪病人登記號(hào)）痰標(biāo)本性質(zhì)合格的痰標(biāo)本應(yīng)為深咳痰液。肉眼觀察痰標(biāo)本按下列類別記錄痰液性狀：膿樣痰、干

27、酪樣痰、血性樣痰、膿性粘液痰和水樣痰。2）姜-尼氏染色液的制備：檢查配制記錄和配方。染色液試劑瓶加標(biāo)明染色液名稱、濃度和制備時(shí)間染色液須于棕色瓶?jī)?nèi)存放避光保存3）破片：用于涂片的載玻片，應(yīng)95%乙解脫脂后的清潔無(wú)劃痕的新玻片。1份痰標(biāo)本1張載玻片只能涂沫載破片只允許使用載破片背面的左側(cè)載玻片正面的右畫(huà)1次不得清洗后重更使用。1/3處，標(biāo)明病人姓名、實(shí)驗(yàn)序號(hào)。2/3中央媯涂沫0.050.1室升痰標(biāo)本，面積為2.5 X 2.0阻米，厚度括當(dāng)。4）染色：肉眼觀察染色后的痰膜應(yīng)呈均勻淡藍(lán)色，無(wú)紅色斑塊。染色后的成片的痰膜脫落部分應(yīng)小于整個(gè)涂沫面積的10%。5）鏡檢：鏡頭清晰，無(wú)霉菌生長(zhǎng)。油鏡下視野背景

28、清晰。鏡下抗酸桿菌應(yīng)為紅色，背景為淡藍(lán)色。鏡下可見(jiàn)炎性細(xì)胞，支氣管粘膜細(xì)胞等痰細(xì)胞，平均每油鏡視野細(xì)胞數(shù)不少于10個(gè)6）厚?。喝庋塾^察痰膜應(yīng)均勻，厚薄適當(dāng)。鏡檢可見(jiàn)23水平層。合格片應(yīng)）90%7）讀片：抗酸桿菌陽(yáng)性片符合率98%陰性片符合率96%。不允許1 +以上的陽(yáng)性片出現(xiàn)假陰性。8）登記和痰片保存：登記對(duì)所檢查的每一份痰標(biāo)本,應(yīng)按“結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室登記本“準(zhǔn)確記錄。痰片保存鏡檢后的痰片必須用二甲苯充分去除表面的香柏油不得用它物擦拭膜待玻片干燥后，重新在每張玻片的左例1/3處貼標(biāo)簽，注明序號(hào)、鏡檢結(jié)果與日期。存放于玻片內(nèi)°按陽(yáng)性和陰性片分類保存近期3個(gè)月內(nèi)的全部痰涂片，備上級(jí)實(shí)驗(yàn)室史驗(yàn)。質(zhì)控方式：自查：查痰員當(dāng)日抽片自查；互查：多名查痰員應(yīng)由輪值人員抽查當(dāng)日10%痰片。結(jié)果應(yīng)有室質(zhì)控記錄備查。2空間質(zhì)控：質(zhì)控模式：質(zhì)控范囹：1）督導(dǎo)內(nèi)容： 實(shí)驗(yàn)室布局 實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)和污染物處理 涂片'染色操作 顯微鏡維護(hù)狀況抽取痰涂片史驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室日常工作記錄（包括室內(nèi)和室間質(zhì)控） 2） 督導(dǎo)方式：現(xiàn)場(chǎng)督導(dǎo).上級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員赴基層實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)，抽取痰片組驗(yàn)。非現(xiàn)場(chǎng)督導(dǎo)基層實(shí)驗(yàn)室將保存近期3個(gè)月的全部痰片，及實(shí)驗(yàn)記錄送上級(jí)實(shí)驗(yàn)室熨驗(yàn)。國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室以非現(xiàn)場(chǎng)督導(dǎo)為主。省級(jí)參比