植物細(xì)胞工程試題庫-華農(nóng)

1、植物細(xì)胞工程試題庫第一章 緒論一、 名詞解釋1、植物細(xì)胞工程:包括植物組織，器官培養(yǎng)技術(shù)，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，原生質(zhì)融合技術(shù)與培養(yǎng)技術(shù)，亞細(xì)胞水平的操作技術(shù)等。2、染色體工程：按照人們預(yù)定的目標(biāo)，采用類似于工程學(xué)的步驟，通過染色體操縱改變生物染色體級成并進而改變其遺傳性的過程。二、判斷題1、現(xiàn)代生物技術(shù)最大的特征是多學(xué)科性。（ ）2、狹義的細(xì)胞工程是指細(xì)胞融合和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。（ ）3、細(xì)胞學(xué)說是由Schleiden和 Schwan提出的。（ ）4、植物細(xì)胞全能性學(xué)說是由Haberlandt提出的。（ ）5、植物細(xì)胞具有變異性。（ ）6、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)使多細(xì)胞生物的單細(xì)胞生命活動研究成為可能。（ ）三、

2、問答題1、植物細(xì)胞工程研究的內(nèi)容有哪些？植物組織，器官培養(yǎng)技術(shù)，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，原生質(zhì)融合技術(shù)與培養(yǎng)技術(shù)，亞細(xì)胞水平的操作技術(shù)2、植物細(xì)胞工程在育種上的應(yīng)用有哪些？1.快速獲得特殊倍性材料；2.克服遠(yuǎn)緣雜交不親和；3.克服雜交胚早期夭折；4.導(dǎo)入外緣基因；5.突變體篩選；6.種質(zhì)資源何在。3、簡述我國植物細(xì)胞工程取得的主要成就。 花藥培養(yǎng)和單倍體育種研究處于國際前列；利用花粉單倍體培育新品種的技術(shù)途徑在我國首先得以應(yīng)用；引進和推廣植物脫毒和快繁技術(shù)；原生質(zhì)體培養(yǎng)再生植株的成功；植物細(xì)胞人工種子、植物細(xì)胞規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)次生產(chǎn)物取得進展等。第二章 植物細(xì)胞全能性1、植物細(xì)胞全能性: 每個植物的體細(xì)胞或

3、性細(xì)胞都具有該植物的全套遺基因，因此在一定培養(yǎng)條件下每個細(xì)胞都可發(fā)育成一個與母體一樣的植株。2、外植體: 從植物體上分離下來的用于離體培養(yǎng)的材料。3、培養(yǎng)基: 人工配制的用于培養(yǎng)植物材料的營養(yǎng)基質(zhì)。4、基本培養(yǎng)基: 只含有無機鹽、蔗糖、維生素和水等最基本成分的合成培養(yǎng)基。如Ms、White、Nitsch、N6等培養(yǎng)基。5、中間繁殖體: 在離體培養(yǎng)過程中形成的具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的中間繁殖材料。6、大量元素: 培養(yǎng)基中濃度超過0.5 mmol/L的元素 C、H、O、氮（N）、磷（P）、硫（S）鉀（K）、鈣（Ca）、鎂（Mg）、九 種大量元素7、微量元素: 培養(yǎng)基中濃度低于0.5 mmol/L 的元素

4、, 鐵（Fe）、硼（B）、錳（Mn）、銅（Cu）、鋅（Zn）、鉬（MO）、氯（Cl）8、愈傷組織: 在離體培養(yǎng)過程中形成的具有分生能力的一團不規(guī)則細(xì)胞，多在外植體切面上產(chǎn)生。9、胚狀體: 在離體植物細(xì)胞、組織或器官培養(yǎng)過程中,由一個或一些體細(xì)胞,經(jīng)過胚胎發(fā)生和發(fā)育過程,形成的與合子胚結(jié)構(gòu)相類似的中間繁殖體。14、繼代培養(yǎng): 更換新鮮培養(yǎng)基來繁殖同種類型的材料（愈傷組織.芽等）。10、脫分化: 已分化好的細(xì)胞在人工誘導(dǎo)條件下，恢復(fù)分生能力，回復(fù)到原始無分化狀態(tài)或分生細(xì)胞狀態(tài)的過程。11、再分化: 脫分化后具有分生能力的細(xì)胞再經(jīng)過與原來相同的分化過程，重新形成各類組織和器官的過程。12、器官發(fā)生:

5、 指在離體培養(yǎng)下的組織或細(xì)胞團分化形成不定根、不定芽等器官的過程。13、體細(xì)胞胚胎發(fā)生: 指體細(xì)胞在未經(jīng)性細(xì)胞融合的情況下，模擬有性胚胎發(fā)生的各個階段而發(fā)育出新個體的形態(tài)發(fā)生過程。14、極性: 指植物的組織、器官甚至單個細(xì)胞在不同的軸向上存在的某種形態(tài)結(jié)構(gòu)以及生理生化梯度的差異.極性是植物細(xì)胞分化的前提15、細(xì)胞周期: 指連續(xù)分裂細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié) 束到下一次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的整個過程。二、判斷題1、分化程度不同的植物細(xì)胞，其脫分化能力不同。（ ）2、不是每一個植物細(xì)胞都能表達(dá)出全能性。（ ）3、植物細(xì)胞全能性的表達(dá)程度是可以調(diào)控的。（ ）4、所有的植物細(xì)胞都具有全能性。（ ×

6、）5、胚狀體和合子胚一樣具有兩極性。（ ）6、生長素/細(xì)胞分裂素的比率平衡時有利于愈傷組織增殖。（ ）7、離體培養(yǎng)條件下，植物細(xì)胞全能性的表達(dá)是通過細(xì)胞脫分化和再分化實現(xiàn)的。（ ）8、細(xì)胞周期運行的動力主要來自cyclin。（ × ）-主要來自CDK,周期蛋白依賴酶9、生長中心是愈傷組織中形成器官的部位，因此生長中心的細(xì)胞體積大 。（ × ）10、體細(xì)胞胚胎發(fā)生是通過先芽后根的方式形成再生植株的。（ × ）11、生活細(xì)胞要表達(dá)全能性必須回復(fù)到分生狀態(tài)。（ ）-或胚性細(xì)胞狀態(tài)12、細(xì)胞脫分化調(diào)控的實質(zhì)是G0期細(xì)胞回復(fù)到分裂周期的調(diào)控過程。（ ）13、在同一個培養(yǎng)體系

7、中可以通過不同器官發(fā)生方式再生植株。（ ）14、連續(xù)的光照有利于培養(yǎng)細(xì)胞微管組織的形成，而一定的晝夜光周期則有利于極性建立和形態(tài)發(fā)生。（ ）15、植物體細(xì)胞胚胎發(fā)生是從合子開始的。（ × ）16、肌醇具有促進生長的作用，所以培養(yǎng)基中必須添加肌醇。（ × ）17、對愈傷組織誘導(dǎo)，被子植物比裸子植物敏感，單子葉植物比雙子葉植物敏感。（ × ）18、幼葉比成熟葉易誘導(dǎo)形成愈傷組織。（ ）19、致密型胚性愈傷組織適合于快速建立細(xì)胞懸浮系。（ ）20、一般認(rèn)為體細(xì)胞胚是多細(xì)胞起源的。（ × ）21、培養(yǎng)物缺鉀時，生長緩慢，葉片變黃。（ ）22、4-CPA具有促進細(xì)

8、胞分裂的作用，而TDZ具有促進芽增殖的作用 。（ ） 三、問答題1、實現(xiàn)植物細(xì)胞全能性的條件是什么？ 1）內(nèi)在條件：有生命力的核；完整的膜系統(tǒng)，如：A、莖尖、根尖和形成層細(xì)胞; B、表皮細(xì)胞和各種薄壁細(xì)胞;C、特化細(xì)胞：導(dǎo)管、篩管、氣孔保衛(wèi)細(xì)胞2）組織或細(xì)胞和母體分離3）外在條件：溫、光、水、氣、營養(yǎng)2、簡述Skoog和Miller（1957）提出的有關(guān)植物激素控制器官形成的理論及意義。Skoog和Miller等所提出的生長素和激動素比例決定根和芽分化的觀點：生長素/細(xì)胞分裂素的比例高，誘導(dǎo)形成根，而當(dāng)生長素/細(xì)胞分裂素的比例低，誘導(dǎo)形成芽。這種器官發(fā)生激素調(diào)控模式的建立為植物組織培養(yǎng)中植物器

9、官的再分化奠定了理論基礎(chǔ)。3、植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中的大量元素、微量元素都主要包括哪些，它們主要以哪些化合物的形式提供？大量元素：C、H、O、氮（N）、磷（P）、硫（S）鉀（K）、鈣（Ca）、鎂（Mg）九種大量元素；微量元素: 鐵（Fe）、硼（B）、錳（Mn）、銅（Cu）、鋅（Zn）、鉬（MO）、氯（Cl）。C：從培養(yǎng)基中加入的各種糖類獲得，H和O主要從水中獲得，氮（N）從有機氮，無機氮（硝態(tài)氮，銨態(tài)氮）中獲得；磷通常以正磷酸（H2PO4）形式被植物吸收，因此培養(yǎng)基配制時常采用 KH2PO4；鉀（K）由KCl、KNO3或者KH2PO4供給；鈣（Ca）由CaCl2·2H2O和Ca（NO3

10、）2·4H2O 提供；鎂（Mg）由硫酸鎂（MgSO4·7H2O）提供；硫（S）由硫酸鎂（MgSO4·7H2O）提供4、蔗糖在培養(yǎng)基中有何作用？作為碳源為植物提供能源，為有機化合物的合成提供碳架，細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)滲透壓，對形態(tài)的發(fā)生的特殊作用等。5、生長素類物質(zhì)大致可分為哪幾類，目前植物組織培養(yǎng)中主要使用了哪些生長素，生長素在離體培養(yǎng)中有何作用？1.吲哚類，2.奈酸類，3.苯氧羧酸類，生長素中常用的吲哚乙酸、萘乙酸、2，4-二氯苯氧乙酸、吲哚丁酸；2-（3-氯-苯氧）丙酸 （3-CPA）；4-碘苯氧乙酸 （ ICPA ）。植物組織培養(yǎng)中生長素一方面用于誘導(dǎo)愈傷組織的形成和

11、生根，另一方面是與一定量的細(xì)胞分裂素配合共同誘導(dǎo)不定芽的分化、側(cè)芽的萌發(fā)與生長以及某些植物胚狀體的誘導(dǎo)。6、在植物組織培養(yǎng)中，細(xì)胞分裂素有何作用？在植物組織培養(yǎng)中細(xì)胞分裂素的主要功能是促進細(xì)胞的分裂和分化，打破頂端優(yōu)勢，誘導(dǎo)芽分化與增殖，促進組織和器官的不定芽發(fā)育。7、影響器官發(fā)生的因素有哪些？（1）外植體：母體植株的遺傳基礎(chǔ)與生理狀態(tài)，（2）激素(激素調(diào)控理論)，（3）培養(yǎng)基種類和培養(yǎng)方法（物理因素，化學(xué)因素），（4）環(huán)境條件（溫度，光照）8、影響體細(xì)胞胚發(fā)生的因素有哪些？（1）、外源激素：生長素特別是2，4-D；（2）培養(yǎng)基：低無機鹽濃度和較高的硝態(tài)氮濃度；（3）基因型；（4）組織起源，距

12、活體胚胎發(fā)育較近的組織和成熟及未成熟的胚胎在離體條件下更有利于細(xì)胞胚的誘導(dǎo)。9、簡述植物細(xì)胞脫分化的過程啟動階段：蛋白體的出現(xiàn)和細(xì)胞質(zhì)增生；演變階段：細(xì)胞核移向中央、質(zhì)體轉(zhuǎn)化成原質(zhì)體；脫分化終結(jié)期：回復(fù)到分生細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞開始分裂10、簡述器官發(fā)生的過程1.愈傷組織誘導(dǎo)，2.“生長中心”形成，3. 器官原基和器官形成11、培養(yǎng)基內(nèi)加入活性炭的目的是什么？應(yīng)注意什么問題？活性碳可以吸附非極性物質(zhì)和色素等大分子物質(zhì)，包括瓊脂中所含的雜質(zhì)、培養(yǎng)物分泌的酚和醌類物質(zhì)、蔗糖在高在壓消毒時產(chǎn)生的5-羥甲糖醛、激素等。 12、何謂胚狀體?與合子胚有何異同?在離體植物細(xì)胞、組織或器官培養(yǎng)過程中,由一個或一些體

13、細(xì)胞,經(jīng)過胚胎發(fā)生和發(fā)育過程,形成的與合子胚結(jié)構(gòu)相類似的中間繁殖體。與合子胚相比體細(xì)胞胚子葉不規(guī)范，胚小、含水量高、對脫水敏感、沒有休眠13、胚狀體的發(fā)育大約要經(jīng)過哪幾個時期?體細(xì)胞胚的大多首先起源于一個胚性細(xì)胞，胚性細(xì)胞經(jīng)過一次分裂形成二細(xì)胞原胚，最后經(jīng)過球性胚、魚雷形胚、心形胚和子葉形胚形成胚狀體。14、離體培養(yǎng)條件下，胚狀體產(chǎn)生有幾種方式?（1）直接途徑：即不經(jīng)過愈傷組織階段，從外植體直接產(chǎn)生體細(xì)胞胚； （2）間接方式：外植體首先誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，再在愈傷組織上產(chǎn)生體細(xì)胞胚。 15、離體培養(yǎng)條件下，莖、芽和根的再生方式大致有幾種?在組織培養(yǎng)中，通過莖芽和根而再生植株的方式大致有3種：1.

14、先芽后根：多數(shù)植物；2.先根后芽：顛茄；3.在不同部位分別形成芽和根，最后通過微管組織聯(lián)系形成再生植株。 16、長期培養(yǎng)物形態(tài)發(fā)生潛力喪失的原因是什么？1.由于細(xì)胞或組織內(nèi)激素關(guān)系的改變成的。當(dāng)改變外部的處理條件時這種內(nèi)在潛力能得到恢復(fù)。2.經(jīng)過長期培養(yǎng)后，由于培養(yǎng)細(xì)胞中發(fā)生染色體結(jié)構(gòu)、數(shù)目變異、基因突變、染色體重排、DNA的甲基化等自發(fā)體細(xì)胞變異，這種由遺傳原因造成的形態(tài)發(fā)生潛力喪失是不可逆的。第三章 基本設(shè)備和基本技術(shù)一、基本概念1、滅菌是指用物理或化學(xué)的方法，殺死或者去除物品上所有生活的微生物的方法。2、消毒是指用消毒劑對活的植物材料進行處理，以殺死其上所有生活的微生物的方法。3、繼代周

15、期從接種培養(yǎng)開始到下一次接種繼代所經(jīng)歷的時間（周或天）4、生長曲線在一個繼代周期內(nèi)中間繁殖體生長變化的曲線5、接種經(jīng)表面消毒的試驗材料按不同的要求經(jīng)過剪切和整理后，移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)的過程。6、啟始脫分化時間外植體接種到第一個外植體開始形成中間繁殖體所經(jīng)歷的時間二、判斷題1、接種器械一般采用照射滅菌。（ x ）2、IAA通常采用濕熱滅菌。（x ）3、紫外照射滅菌的時間為5 h。（x ）4、油污嚴(yán)重的器皿應(yīng)采用酸洗法。（ x ）5、過濾滅菌微孔濾膜的直徑以0.22mm為宜。（ ）6、用于滅菌的抗生素濃度通常為40-50 mg/L。（ ）7、采用氯化汞對外植體進行消毒，時間越長越好。（ x）8、大量

16、元素一般用感量為0.001g天平稱量。（x ）9、培養(yǎng)室通常采用紫外線滅菌。（ ）三、問答題1、怎樣洗滌污染的培養(yǎng)瓶？p253、簡述高壓滅菌鍋的工作原理和使用方法. 原理是通過較強的蒸汽壓力及高溫使蛋白質(zhì)變性，從而殺滅微生物。 4、簡述培養(yǎng)基中鐵鹽母液的配制方法。配法是將5.57克的硫酸亞鐵和7.45克的乙二胺四乙酸二鈉分別溶于蒸餾水中,加熱溶解,然后兩者混合,冷卻后定容至1升,再加熱制成穩(wěn)定溶液,用時每配1升培養(yǎng)基取5毫升。5、 生長素和細(xì)胞分裂素母液如何制備？生長素類(NAA、IBA等)先用12毫升95%酒精將其溶解,然后緩緩加入蒸餾水定容。細(xì)胞分裂素類(6BA、KT等)先用少量(0.51

17、當(dāng)量濃度鹽酸),然后緩緩加入蒸餾水定容,倒入瓶內(nèi),存于冰箱。如發(fā)現(xiàn)貯存后又產(chǎn)生沉淀,可加溫使之溶解后再用。6、 簡述固體培養(yǎng)基的制備過程。 （1）量取母液（2）稱取瓊脂、蔗糖和其他相關(guān)物質(zhì)（3）溶化瓊脂，加母液、蔗糖和其他相關(guān)物質(zhì)（4）加水約至所需體積（5）調(diào)酸堿度 （6）定容（7）分裝7、已知所有激素母液濃度為0.5 mg/ml，問:欲配制MS+6-BA2 mg/L+KT1mg/L+NAA0.5 mg/L+蔗糖2.5%+瓊脂0.5%的培養(yǎng)基400 ml，應(yīng)取6-BA、KT和NAA母液各多少ml，稱取蔗糖和瓊脂各多少g？若配制MS+2,4-D1 mg/L+蔗糖3%+瓊脂0.5%的培養(yǎng)基250

18、ml，則應(yīng)吸取2,4-D多少ml，稱取蔗糖和瓊脂各多少g？8、 目前，常用的培養(yǎng)基種類有哪些？各有什么特點？p479、 配制培養(yǎng)基時，為什么要先配母液？如何配制母液？p5010、怎樣進行外植體的消毒？消毒：消毒液浸泡； 沖洗：無均水沖洗; 材料內(nèi)部帶菌處理11、如何減少接種過程中造成的污染？環(huán)境無菌控制呼吸控交叉污染控制接種動作快12、簡述超凈工作臺的工作原理和使用方法原理是以過濾裝置凈化空氣，在操作者和操作臺之間形成無菌風(fēng)幕，保證臺面及其上空呈無菌空間,同時紫外光燈可以殺滅臺面上的微生物防止交叉污染。 13、怎樣管理培養(yǎng)室？（1）消毒殺菌（2）溫度和濕度控制（3）光照控制（4）污染材料的處理

19、14、怎樣對初代培養(yǎng)進行觀察的記錄？15、現(xiàn)要研究活性炭對芽分化的影響，怎樣進行實驗設(shè)計？16、簡述采用紫外線滅菌的原理和方法。P2517、簡述過濾滅菌的原理和方法。P27第四章 培養(yǎng)方法一、名詞解釋1.分批培養(yǎng)2.連續(xù)培養(yǎng)是在培養(yǎng)過程中不斷加入培養(yǎng)基，使培養(yǎng)液中的營養(yǎng)物質(zhì)能夠連續(xù)得到補充的培養(yǎng)方法3.半連續(xù)培養(yǎng)是介于成批培養(yǎng)和連續(xù)培養(yǎng)之間的一種培養(yǎng)方法。是在完成成批培養(yǎng)一個周期后，只從反應(yīng)器中取出大部分的細(xì)胞懸浮液，保留小部分細(xì)胞懸浮液作為下一次培養(yǎng)的種子細(xì)胞，然后加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)的方法。4、固體培養(yǎng)在培養(yǎng)基中加入一定量的凝固劑（如瓊脂、明膠等）形成固體培養(yǎng)基，將植物的植物器官、組織、

20、細(xì)胞或原生質(zhì)體接種于培養(yǎng)基上（中）的組織培養(yǎng)方法。5、靜止液體培養(yǎng)是指在培養(yǎng)基中不加入凝固劑，而直接將培養(yǎng)物接種到液體中或其他支持物上進行培養(yǎng)的方法。6、懸浮培養(yǎng)是指將離體的細(xì)胞或小細(xì)胞團懸浮在液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)的方法。7、光自養(yǎng)培養(yǎng)是指培養(yǎng)容器中的植物在人工光照條件下，吸收CO2進行光合作用，通過完全自養(yǎng)的方法進行生長和繁殖的方法。二、判斷題1、培養(yǎng)方法是影響植物組織培養(yǎng)效率的重要因素。（ ）2、固體培養(yǎng)是組織培養(yǎng)中最常用的方法。（ ）3、靜止液體培養(yǎng)易使培養(yǎng)物玻璃化。（ ）4、懸浮培養(yǎng)只能用于細(xì)胞培養(yǎng)。（ x ）5、光自養(yǎng)培養(yǎng)因不需糖，因而減少了污染。（ ）三、問答題1、比較分析固體培養(yǎng)

21、和懸浮培養(yǎng)的優(yōu)缺點。適合于各種外植體和組織培養(yǎng) 的各個階段有利于氣體交換防止或減少玻璃化不利于代謝物的擴散可用于組織培養(yǎng)的誘導(dǎo)、繁殖和分化階段增加培養(yǎng)物與液體接觸面，促進營養(yǎng)吸收利于代謝物的擴散有利于氣體交換需要一定的設(shè)備2、研究培養(yǎng)方法有何重要意義？培養(yǎng)方法是影響植物組織培養(yǎng)效率的重要因素 培養(yǎng)方法研究推動植物細(xì)胞工程研究的進步 3、靜止液體培養(yǎng)的特點是什么？可用于組織培養(yǎng)的各個階段減少成本（淺層液體培養(yǎng)）利于代謝物的擴散,減小自體抑制效應(yīng)擴大營養(yǎng)接觸面不利于氣體交換易誘導(dǎo)玻璃化4、懸浮培養(yǎng)有什么作用？能夠提供大量均一的懸浮細(xì)胞5、試比較成批培養(yǎng)和聯(lián)系培養(yǎng)的特點。6、光自養(yǎng)培養(yǎng)的特點是什么？

22、是植物組織培養(yǎng)的一種創(chuàng)新，也是環(huán)境控制技術(shù)和生物技術(shù)的結(jié)合。它采用環(huán)境控制的手段，用二氧化碳代替糖來作為植物體的碳源，通過人工控制，提供適宜植株生長的光、溫、水、氣、營養(yǎng)等條件，以促進植株的光合作用。其適用范圍涵蓋所有植物的微繁殖。第五章 薄層培養(yǎng)和單細(xì)胞培養(yǎng)一、名詞解釋1、薄層細(xì)胞培養(yǎng)：從外植體的表皮撕下數(shù)層細(xì)胞于合適的培養(yǎng)基上進行的離體培養(yǎng)；現(xiàn)也將外植體橫切成1mm厚的薄片2、單細(xì)胞培養(yǎng):指從植物器官，愈傷組織或細(xì)胞懸浮培養(yǎng)液中游離出單個細(xì)胞，于無菌條件下，進行體外培養(yǎng)，使其繁殖，生長，發(fā)育的一門技術(shù)。3、平板培養(yǎng)法 ：將懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞接種到一薄層固體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)的技術(shù)。 4、最低有效

23、密度：在植物懸浮培養(yǎng)液中，使懸浮培養(yǎng)細(xì)胞能夠增殖的最少接種量。5、看護培養(yǎng)法：指用一塊愈傷組織或植物離體組織看護單細(xì)胞使其生長并增殖的一種單細(xì)胞培養(yǎng)方法。 6、植板率：長出的細(xì)胞團的單細(xì)胞在接種細(xì)胞中所占的百分比數(shù)。二、判斷題1、細(xì)胞培養(yǎng)周期是指一定起始密度的單細(xì)胞，從開始培養(yǎng)到細(xì)胞數(shù)目和總重量停止增長的過程。（ ）2、薄層細(xì)胞培養(yǎng)是從外植體的表皮撕下數(shù)層細(xì)胞于合適的培養(yǎng)基上進行的離體培養(yǎng)。（ ）3、能被酚臧紅花染成紅色的細(xì)胞為活細(xì)胞。（ × ）-死細(xì)胞4、細(xì)胞密度是影響細(xì)胞培養(yǎng)的重要因素。（ ）5、Gelrite是懸浮劑，而Ficoll是凝固劑。（×）三、問答題1、為什么

24、要進行單細(xì)胞培養(yǎng)？1.建立單細(xì)胞無性系（cell line）2.排除體細(xì)胞干擾3.觀察單細(xì)胞如何進行分裂、分化、生長及發(fā)育，為大規(guī)模培養(yǎng)作準(zhǔn)備2、薄層培養(yǎng)有什么特點？1.薄層培養(yǎng)細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)簡單 2.對調(diào)控因子敏感 3.培養(yǎng)容易成功3、怎樣進行薄層培養(yǎng)？外植體 外植體消毒 切取或分離材料 接入培養(yǎng)基中培養(yǎng) 結(jié)果觀察4、制備單細(xì)胞的方法有哪些？機械分離法 酶解法 愈傷組織誘導(dǎo)法1.從培養(yǎng)愈傷組織中游離單細(xì)胞，通過反復(fù)繼代使愈傷增殖并提高其松散性；2.機械研磨法； 3.果膠酶分離法5、簡述從愈傷組織中游離單細(xì)胞的步驟600800mg生長旺盛的愈傷組織250mL含3040mL培養(yǎng)基的三角瓶中9013

25、0r/min連續(xù)振蕩培養(yǎng)23周用100130目網(wǎng)過濾除去大的細(xì)胞團濾液離心收集游離細(xì)胞，棄上清液加入適當(dāng)體積的培養(yǎng)基使細(xì)胞懸浮6、怎樣進行平板培養(yǎng)？（1.）單細(xì)胞懸浮液的制備（2）調(diào)節(jié)細(xì)胞密度（3）培養(yǎng)基和凝固劑選擇，澆平板 （4）接種培養(yǎng) 做好標(biāo)記7、簡述影響單細(xì)胞培養(yǎng)的因素。1.條件培養(yǎng)基的作用；2.細(xì)胞密度；3.生長激素；4.揮發(fā)性物質(zhì)的影響；5.適當(dāng)?shù)腜H值，提高培養(yǎng)基中鐵的含量等第六章 植物原生質(zhì)體培養(yǎng)一、名詞解釋1、植物原生質(zhì)體：原生質(zhì)體（protoplast）是指除去細(xì)胞壁的裸細(xì)胞2、植物原生質(zhì)體培養(yǎng)：原生質(zhì)體培養(yǎng)是指將原生質(zhì)體放在人工配制的培養(yǎng)基上和人工控制的條件下培養(yǎng)成再生植

26、株的過程。 3、亞原生質(zhì)體：不完整的原生質(zhì)體經(jīng)物理化學(xué)處理得到的小原生質(zhì)體。4、微小原生質(zhì)體亞原中具薄層細(xì)胞質(zhì)和完整細(xì)胞核的部分5、微核原生質(zhì)體亞原中具薄層細(xì)胞質(zhì)和部分細(xì)胞核的部分6、胞質(zhì)體： 即無細(xì)胞核，只有細(xì)胞質(zhì)的原生質(zhì)體二、判斷題1、原生質(zhì)體起始材料的特性和生理狀態(tài)是決定原生質(zhì)體質(zhì)量的重要因素之一。（ ）2、用沉降法純化原生質(zhì)體常引起原生質(zhì)體破碎，這是因為高滲溶液的作用。（ × ）3、對分離原生質(zhì)體的材料進行低溫預(yù)處理的目的是為了提高原生質(zhì)體的產(chǎn)量。（ ）4、植物原生質(zhì)體是觀察大分子吸收和轉(zhuǎn)移的良好材料。（ ）5、機械法適合于從分生組織細(xì)胞中分離原生質(zhì)體。（×）6、分

27、離原生質(zhì)體的酶液中加入氯化鈣是為了穩(wěn)定原生質(zhì)膜。（ ）7、在原生質(zhì)體分離和培養(yǎng)中，蔗糖是一種廣泛使用的滲透壓調(diào)節(jié)劑。（ ）8、酶解處理一般在光照條件下進行。（ ×）9、分離原生質(zhì)體的原始細(xì)胞狀態(tài)影響其脫分化的進行。（ ）10、一般認(rèn)為原生質(zhì)體出芽與培養(yǎng)基成分有密切關(guān)系。（ ）三、問答題1何謂原生質(zhì)體，原生質(zhì)體作為遺傳飾變和生理生化研究的材料有何特點？Ø 原生質(zhì)體（protoplast）是指除去細(xì)胞壁的裸細(xì)胞v 是體細(xì)胞雜交育種的材料v 是轉(zhuǎn)基因的良好受體v 是開展基礎(chǔ)理論研究的良好材料v 是分離細(xì)胞器的良好材料2簡述酶法分離植物原生質(zhì)體的基本原理。植物細(xì)胞壁由纖維素，半纖維

28、素，果膠質(zhì)等組成，通過用酶把原生質(zhì)體外的細(xì)胞壁分解，便能得到完整的原生質(zhì)體。3簡述兩步法分離植物原生質(zhì)體的程序。先用果膠酶離析植物組織，使植物組織從組織細(xì)胞中分離出來，然后手機細(xì)胞經(jīng)洗滌后用纖維素酶解離細(xì)胞壁，最后獲得原生質(zhì)體。4如何純化原生質(zhì)體并鑒定其活力?P2725與其它組織、細(xì)胞培養(yǎng)相比，原生質(zhì)體培養(yǎng)有何特點?v 是體細(xì)胞雜交育種的材料v 是轉(zhuǎn)基因的良好受體v 是開展基礎(chǔ)理論研究的良好材料v 是分離細(xì)胞器的良好材料6簡述X平板法培養(yǎng)植物原生質(zhì)體的原理和方法。為了減少一部恩細(xì)胞和組織所產(chǎn)生的有害物質(zhì)對其他存活細(xì)胞的影響，將一定量的活性炭加到培養(yǎng)基，以改善細(xì)胞或組織的生長與細(xì)胞群落的形成。將

29、固體平板分成四塊，在2和4中加入儲備培養(yǎng)基（含1%活性炭），1和3不加活性炭培養(yǎng)原生質(zhì)體。7簡述幾種原生質(zhì)體培養(yǎng)方法的特點。固體：培養(yǎng)基用瓊脂固化，滅菌后在45度植入原生質(zhì)體。生長速度慢，容易觀察培養(yǎng)效果和生長情況。液體利用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，通氣性好，排泄物容易擴散，易于補加培養(yǎng)基，易于轉(zhuǎn)移，一旦有污染就導(dǎo)致實驗失敗?；旌蟽上啵杭骖櫼陨稀?簡述影響植物原生質(zhì)體培養(yǎng)的因素。植物種類，原生質(zhì)體活力，原生質(zhì)體起始密度，滲透調(diào)節(jié)，原生質(zhì)體粘連，培養(yǎng)條件和方法。9簡述滲透劑在植物原生質(zhì)游離中的作用。使酶能較快地發(fā)揮作用而原生質(zhì)體有維持在一定滲透壓下，使之不漲破不收縮。10.生質(zhì)體培養(yǎng)的應(yīng)用。體細(xì)胞雜交，遺

30、傳轉(zhuǎn)化以及細(xì)胞器轉(zhuǎn)移，無性系變異的良好體系，分離植物細(xì)胞器的理想材料，基礎(chǔ)研究的實驗系統(tǒng)。第七章 植物胚胎培養(yǎng)一、名詞解釋1、離體胚培養(yǎng)：胚培養(yǎng)就是采用人工的方法將胚從種子中分離出來，在人工培養(yǎng)的條件下，使其他發(fā)育成正常植株。2、成熟胚培養(yǎng)3、幼胚培養(yǎng)4、早熟萌發(fā)：幼胚接種后，離體胚不繼續(xù)進行胚性生長，而是在培養(yǎng)基上迅速發(fā)成幼苗5、植物胚乳組織培養(yǎng)6、胚性發(fā)育：幼胚接種到培養(yǎng)基上以后，仍然按照在活體內(nèi)的發(fā)育方式發(fā)育，最后形成成熟胚(有時甚至可能類似種子)，然后再按種子萌發(fā)途徑出苗形成完整植株二、判斷題1、胚培養(yǎng)可用于克服雜種不活性。（ ）2、早熟萌發(fā)的胚一般能形成許多植株。（） 3、幼胚培養(yǎng)的

31、初期需在黑暗條件下進行。（ ） 4、胚乳培養(yǎng)的再生植株都是三倍體。（ X ）5、游離胚乳核時期和成熟胚乳時期是胚乳培養(yǎng)的最佳時期。（ ）三、問答題1 何謂胚培養(yǎng)？簡述胚培養(yǎng)的意義。胚培養(yǎng)就是采用人工的方法將胚從種子中分離出來，在人工培養(yǎng)的條件下，使其他發(fā)育成正常植株。2 離體幼胚培養(yǎng)胚發(fā)育有幾種類型？各有何特點？1)、胚性發(fā)育：幼胚接種到培養(yǎng)基上以后，仍然按照在活體內(nèi)的發(fā)育方式發(fā)育，最后形成成熟胚(有時甚至可能類似種子)，然后再按種子萌發(fā)途徑出苗形成完整植株，這種途徑發(fā)育的幼胚一般一個幼胚將來就是一個植株。(2)、早熟萌發(fā)：幼胚接種后，離體胚不繼續(xù)胚性生長，而是在培養(yǎng)基上迅速萌發(fā)成幼苗，通常稱

32、之為早熟萌發(fā)。在大多數(shù)情況下，一個幼胚萌發(fā)成一個植株，但有時會由于細(xì)胞分裂產(chǎn)生大量的胚性細(xì)胞，以后形成許多胚狀體，從而可以形成許多植株，這種現(xiàn)象就是所謂的叢生胚現(xiàn)象。(3)、愈傷組織： 在許多情況下，幼胚在離體培養(yǎng)中首先發(fā)生細(xì)胞增殖，形成愈傷組織。一般來講由胚形成的愈傷組織大多為胚3 影響離體幼胚培養(yǎng)的主要因素有哪些？1. 基因型2、胚齡和放置方式3、培養(yǎng)基：蔗糖：球形胚8-12%，魚雷形胚4-6%外源激素：赤霉素，生長素和細(xì)胞分裂素有機附加物：活性炭，椰子汁等滲透壓：提高滲透壓，防止早熟萌發(fā)培養(yǎng)基的酸堿度：大麥4.9；水稻5.0 番茄6.5 桃5.8 4、培養(yǎng)條件光照：培養(yǎng)早期采用暗培養(yǎng)；培

33、養(yǎng)后期給予光照溫度：有些幼胚早期培養(yǎng)需要一定的低溫處理，然后轉(zhuǎn)入適宜溫度下培養(yǎng)4 胚培養(yǎng)中用“小液流法”測定幼胚滲透壓的目的是什么?有何意義？5 簡述胚乳培養(yǎng)的意義。1）胚乳細(xì)胞的全能性。在離體培養(yǎng)條件下，胚乳細(xì)胞是否與其它體細(xì)胞和花粉一樣，具有全能性而再生植株。 2）大多數(shù)被子植物的胚乳是三倍體，能否通過胚乳培養(yǎng)獲得三倍體植株而得到無籽結(jié)實；通過胚乳培養(yǎng)技術(shù)，探索改良農(nóng)、林及園藝植物三倍體育種技術(shù)的可能性。3） 研究離體培養(yǎng)條件下胚和胚乳的關(guān)系。6.簡述被子植物的胚乳發(fā)育類型與胚乳愈傷組織器官發(fā)生的關(guān)系。第八章 胚珠和子房培養(yǎng)一、名詞解釋1、 胚珠和胚珠培養(yǎng)2、 子房和子房培養(yǎng)3、 離體授粉

34、:在離體培養(yǎng)的胚珠、胎座或柱頭上授粉，然后通過胚珠或子房培養(yǎng)形成有萌發(fā)能力的種子的過程，稱為離體受精4、 離體受精:應(yīng)用人工培養(yǎng)的方法在人工控制的條件下分離精卵細(xì)胞，并使其融合形成合子的過程5、 合子培養(yǎng)6、 6、雌核發(fā)育二判斷題1、采用授粉后的子房培養(yǎng)不可能得到單倍體。（ ）2、處于四核胚囊期的子房離體培養(yǎng)成功率高。（ X ）3、離體授粉可以克服自交不親和性。（ ）4、離體受精合子培養(yǎng)與精卵細(xì)胞親緣關(guān)系遠(yuǎn)近有關(guān)，親緣關(guān)系越近，越難培養(yǎng)。（ X ）5、子房的離體培養(yǎng)效果與接種方式無關(guān)。（ X ）三、問答題1、簡述胚珠培養(yǎng)的方法2、影響胚珠培養(yǎng)的因素有哪些？3、怎樣進行子房培養(yǎng)選取適宜大小的花蕾

35、 無菌的花蕾 分離子房 接種培養(yǎng) 試管苗移栽 單倍體植株4、為什么要進行離體子房培養(yǎng)？可以獲得單倍體 獲得種子 建立離體受精系統(tǒng)7、 影響子房培養(yǎng)的因素有哪些？1.基因型 2. 胚囊發(fā)育時期，培養(yǎng)時選接近成熟的子房 3.培養(yǎng)基1）基本培養(yǎng)基的影響2）植物激素的影響 3）蔗糖濃度 蔗糖濃度多在310之間，因不同植物材料而異，一般是誘導(dǎo)培養(yǎng)階段蔗糖濃度要高一些，分化培養(yǎng)時蔗糖濃度要低一些。 4.接種方式 極性； 營養(yǎng)吸收：花柄直接插入誘導(dǎo)頻率高 5單倍體的來源和發(fā)育途徑8、 簡述離體受精的一般程序。精卵細(xì)胞的分離精卵細(xì)胞的融合1、電融合2、高Ca，高pH 3、一般鈣條件下的融合4、PEG誘導(dǎo)融合合

36、子的培養(yǎng) 微室培養(yǎng) 飼喂層培養(yǎng)第九章 植物快繁技術(shù)一、名詞解釋1、快速繁殖：利用細(xì)胞的再生特性，在組織培養(yǎng)條件下加速繁殖材料的個體生產(chǎn)，提高繁殖系數(shù)的方法。2、組織培養(yǎng)快速繁殖: 應(yīng)用組織和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖植物新品種或新品系，使其在一定時間內(nèi)繁衍出一定數(shù)量與母本相同的植株。3、芽分化4、根分化5、污染:指在組織培養(yǎng)過程中，微生物進入培養(yǎng)體系，在培養(yǎng)的材料上或培養(yǎng)容器內(nèi)的其他部位繁殖和生長的現(xiàn)象。6、玻璃化：植物組織培養(yǎng)中分化出半透明的畸形試管植株（玻璃化苗）的現(xiàn)象，稱為玻璃化現(xiàn)象。7、褐變：外植體在脫分化和再分化過程中，分泌褐色物質(zhì)使培養(yǎng)基和外植體本身變褐的現(xiàn)象。8、變異：在試管苗中出現(xiàn)和

37、供體材料不一樣植株的現(xiàn)象9、繁殖系數(shù)：指在一次繼代培養(yǎng)中由一個苗（芽或芽叢）得到新苗的個數(shù)。二、判斷題1、以10個芽為材料，如果增殖倍率為3、繼代周期為1個月，則6個月內(nèi)最多可生產(chǎn)7290個芽。（ ）2、植物離體微繁屬無性繁殖范疇。（ ）3、植物快速繁殖中，繁殖系數(shù)越高越好。（ × ）4、褐變是植物離體組織中的多酚氧化酶被激活造成的。（ ）5、繼代培養(yǎng)次數(shù)越多，變異率越高。（ ）6、提高培養(yǎng)中的細(xì)胞分裂素濃度能有效降低玻璃化苗的形成。（ × ）-與細(xì)胞分裂素呈正相關(guān)三、問答題1、 什么叫植物快速繁殖2、 植物的快速繁殖有什么優(yōu)點快速 周年生產(chǎn) 省地、省勞力 提高種苗質(zhì)量 固

38、定雜種優(yōu)勢 適合于各種類型的作物3、 采用組織培養(yǎng)快速繁殖種苗的條件（1）快繁植物有較高的科學(xué)、經(jīng)濟或生產(chǎn)利用價值;（2）增殖效率高，能產(chǎn)生經(jīng)濟效益;（3）用其他方法繁殖速度慢4、 植物快速繁殖種苗的程序是什么1. 培養(yǎng)材料的選擇1）母株的選擇：健壯無病蟲害；具有該品種的典型性狀；生命力旺盛2. 中間繁殖體誘導(dǎo) 1）外植體消毒（2）接種培養(yǎng)3）觀察記錄和污染材料的處理特點：一般用固體培養(yǎng)基；每瓶接種的外植體數(shù)少；及時搶救污染材料；對培養(yǎng)條件要求高3. 中間繁殖體的繁殖 1）選擇無污染的材料2）確定繁殖培養(yǎng)方法、配制培養(yǎng)基（3）切割接種4）培養(yǎng)和繼代 直接關(guān)系到植物快繁的效益4. 中間繁殖體再生

39、1）芽分化（2）根分化3）壯苗5. 試管苗移栽：（1）移栽基質(zhì)的選擇、消毒（2）試管苗出瓶（3）試管苗移栽（4）移栽后的管理5、 植物快速繁殖種苗的具體方法是什么6、 什么叫外植體？怎樣選取外植體？外植體: 從植物體上分離下來的用于離體培養(yǎng)的材料。 確定外植體的原則:植物在自然條件下繁殖特點外植體的取材部位、大小和生理狀態(tài)易培養(yǎng)易消毒7、 怎樣獲得無菌的外植體？P1098、 什么叫中間繁殖體？中間繁殖體包括那些類別？在離體培養(yǎng)過程中形成的具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的中間繁殖材料。包括：原球莖、根狀莖、叢芽、胚狀體、愈傷組織等。9、 影響中間繁殖體誘導(dǎo)的因素有那些？10、怎樣進行中間繁殖的繁殖？（1）選擇

40、無污染的材料（2）確定繁殖培養(yǎng)方法、配制培養(yǎng)基（3）切割接種（4）培養(yǎng)和繼代直接關(guān)系到植物快繁的效益11、影響中間繁殖體繁殖的因素有那些？12、什么叫芽分化？影響芽分化的因素有那些？13、什么叫根分化？影響根分化的因素有那些？14、怎樣進行試管苗移栽？（1）移栽基質(zhì)的選擇、消毒（2）試管苗出瓶（3）試管苗移栽（4）移栽后的管理15、影響試管苗苗移栽成活率的因素有那些？1.試管苗出瓶后的水分平衡；2.栽培介質(zhì)的疏松通氣；3.周邊環(huán)境中的細(xì)菌滋生；4.光照與溫度16、什么叫褐變？影響褐變的因素有那些？褐變：外植體在脫分化和再分化過程中，分泌褐色物質(zhì)使培養(yǎng)基和外植體本身變褐的現(xiàn)象。影響褐變的因素：基

41、因型；外植體：取材部位、時間和大小等；光照；溫度；培養(yǎng)基：培養(yǎng)基狀態(tài)、無機鹽、植物生長調(diào)節(jié)劑、抗氧化劑、吸附劑；抗氧化劑；吸附劑；鰲合劑；pH值；培養(yǎng)方式：外植體在培養(yǎng)基中的放置方式，培養(yǎng)方法，轉(zhuǎn)瓶時間、原生質(zhì)體密度。在導(dǎo)致褐變的諸多因素中,膜結(jié)構(gòu)的破壞或細(xì)胞中物質(zhì)區(qū)域化分布的破壞是酚類物質(zhì)的酶促氧化和組織發(fā)生褐變的關(guān)鍵。17、怎樣減輕褐變？1.選擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w；2.加入抗氧化劑和抑制劑對外植體進行預(yù)處理；3.控制培養(yǎng)基的成分、硬度、pH值等；4.培養(yǎng)條件：適宜的溫度，光照強度等18、什么叫玻璃化，為什么會出現(xiàn)玻璃化？植物組織培養(yǎng)中分化出半透明的畸形試管植株（玻璃化苗）的現(xiàn)象，稱為玻璃化現(xiàn)象。

42、 1.外植體類型及大小顯著影響玻璃化的發(fā)生；2. 試管苗在培養(yǎng)過程中的光照，溫度，溫度，PH；3.培養(yǎng)基的成分；4.固化劑的種類和數(shù)量；5.激素和糖濃度等19、怎樣克服玻璃化？ 1.選擇合適的外植體；2.改善培養(yǎng)基組成；3.改善培養(yǎng)條件：加強氣體交換，提高光強，降低相對濕度等；4.采用適宜的激素、糖和固化劑；5.采用其他化學(xué)物質(zhì)如青霉素、氯化膽堿，激素合成前體等。20、植物快繁過程中污染的類型和原因是什么？（1）材料帶菌(各種種細(xì)菌、真菌等微生物);（2）接種污染;（3）環(huán)境污染21、怎樣控制污染，提高快繁效率？（1）材料帶菌:選擇帶菌少或不帶菌材料;材料的預(yù)處理;建立可靠高效消毒技術(shù)體系;培

43、養(yǎng)基中加入抗生素;（2）接種污染:防止呼吸污染;維護超凈工作臺的功能;防止交叉污染;減少接種室的菌源;（3）控制環(huán)境污染: 及時清理污染物;經(jīng)常對環(huán)境進行滅菌處理;環(huán)境溫濕度控制;用塑料袋代替培養(yǎng)瓶22、什么叫變異？植物快繁過程中為什么會出現(xiàn)變異？變異：在試管苗中出現(xiàn)和供體材料不一樣植株的現(xiàn)象。影響組培苗變異頻率的因素：基因型；外植體；植物生長調(diào)節(jié)劑；培養(yǎng)條件；繼代次數(shù)23、怎樣檢驗變異？怎樣減少變異？檢驗：1.遺傳分析；2.與基因產(chǎn)物改變相關(guān)的生化機制分析；3.變異頻率；4.變異細(xì)胞離開選擇劑后的穩(wěn)定性；5.分子差異分析。 減少試管苗變異的措施：選擇合適的基因型；選擇合適的外植體；采用適宜的

44、植物生長調(diào)節(jié)劑；采用適宜的培養(yǎng)條件；控制繼代次數(shù)24、簡述植物快速繁殖現(xiàn)狀和展望？1快繁植物的種類不斷增加；2快速繁殖的方法不斷改進；3快速繁殖的規(guī)模不斷擴大；4快速繁殖技術(shù)向自動化、標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展；5種苗質(zhì)量不斷提高第十章 植物脫毒苗生產(chǎn)一、名詞解釋 1、植物脫毒培養(yǎng)2、脫毒苗3、指示植物：具有能夠辨別某種病毒?；誀畹募纳参?、酶聯(lián)免疫吸附測定二、判斷題1、植物莖尖中病毒少，而根尖中病毒較多，因此脫毒苗生產(chǎn)常以莖尖分生組織為外植體。（ X ）2、孔雀綠能夠抑制病毒的合成，但不能使病毒失活。（X ）3、植物脫毒處理的溫度和時間因植物的種類而異，和處理器官的生理狀況無關(guān)。（X ）4、莖尖越小，脫

45、毒效果越好。（ ）5、指示植物法是病毒檢測中最古老最準(zhǔn)確的方法。（X ）三、問答題1.植物組織培養(yǎng)在生產(chǎn)脫毒苗木上有何意義？ 2.植物脫毒的主要方法有哪些？各有何優(yōu)缺點？應(yīng)如何選擇應(yīng)用?3.熱處理為什么可以去除部分植物病毒？熱處理方法分為幾種，常用的是哪一種？ 4.論述莖尖培養(yǎng)脫毒的原理，方法及影響其脫毒效果的因素。 脫毒的原理：病毒在植物體內(nèi)的分布是不均一的，越靠近生長點，病毒濃度越稀，因此，采用小的莖尖進行離體培養(yǎng)有可能消除植物病毒。方法：1、被脫毒植物攜帶病毒的診斷：根據(jù)病毒病的癥狀特征；借助指示植物；血清學(xué)（；2、母體材料的選擇母體植株性狀的典型性外植體的健康程度 3、莖尖分生組織的分

46、離和培養(yǎng)（1）外植體消毒（2）莖尖剝離 解剖鏡，解剖針，鑷子和手術(shù)刀（3）莖尖培養(yǎng)1)病毒種類（2）莖尖大?。?）快繁途徑（4）脫毒方法（5）其他病毒干擾5.什么叫脫毒苗?6.如何鑒定莖尖培養(yǎng)而成的苗確實是無毒的？1）指示植物鑒定:將待測植物的汁液接種到指示植物上，如果被測植物帶有病毒，指示植物就會出現(xiàn)特定癥狀（ 2）血清鑒定試管沉淀反應(yīng):在抗原和抗體最適比例的條件下觀察有無沉淀來確定被測植物是否帶有病毒的方法 免疫雙擴散 ：是在半固體的凝膠中測定在其中擴散的抗原和抗體間沉淀反映的一種方法 酶聯(lián)免疫吸附測定 分子檢測 RT-PCR法 7.怎樣保存和利用無毒苗？脫毒苗的保存與繁殖；脫毒苗的離體保

47、存與繁殖；建立脫毒種苗生產(chǎn)繁殖網(wǎng)絡(luò)體系；木本植物建立隔離的脫毒苗母本園第十一章 花藥和花粉培養(yǎng)一、名詞解釋1、花藥和花藥培養(yǎng)：植物花藥培養(yǎng)是指在離體條件下，對植物花藥組織進行培養(yǎng)，通過誘導(dǎo)花藥中小孢子的雄核發(fā)育，產(chǎn)生植物單倍體，進而通過染色體加倍產(chǎn)生加倍單倍體的技術(shù)。2、花粉和花粉培養(yǎng)：處于一定發(fā)育階段的花粉從花藥中分離出來，再加以離體培養(yǎng)成為植株的過程。有時花粉培養(yǎng)也稱為小孢子培養(yǎng)3、雄核發(fā)育：在離體條件下由花粉產(chǎn)生單倍體胚和植株的過程。4、花粉的二型性：在天然花粉群體中，除正?；ǚ弁?，還存在一部分發(fā)育遲緩、體積小、染色淺的異常花粉的現(xiàn)象叫花粉的二型性。這些異常花粉具有雄核發(fā)育的潛力（胚胎發(fā)

48、生能力），叫E花粉。5、E花粉6、預(yù)處理7、預(yù)培養(yǎng)二、判斷題1、花藥和花粉培養(yǎng)屬于同一組織培養(yǎng)范疇。（ X ）組織、細(xì)胞2、花藥培養(yǎng)的再生植株均為單倍體。（X ）雙子葉3、首先進行花藥培養(yǎng)的科學(xué)家是Guha和 Maheshwari。（x ）4、對花藥進行預(yù)處理的主要目的是為了提高誘導(dǎo)率。（ ）5、培養(yǎng)基中銨離子含量過高對花藥培養(yǎng)不利。（ ）6、外源激素不僅影響花粉發(fā)育類型，而且會影響體細(xì)胞二倍體組織的脫分化和增值。（ ）7、花藥培養(yǎng)一步成苗的基本培養(yǎng)基和多步成苗基本相同。（ ）8、花藥和花粉培養(yǎng)中，雄核發(fā)育具有階段性。（ ）9、白化苗是禾本科植物花藥培養(yǎng)中常見現(xiàn)象。（ ）10、花粉植株的白化現(xiàn)

49、象是不可逆轉(zhuǎn)的。（ ）三、問答題1、什么是花藥和花藥培養(yǎng)？什么是花粉和花粉培養(yǎng)？2、為什么要進行花藥和花粉培養(yǎng)？3、怎樣進行花藥和花粉培養(yǎng)？外植體選擇 外植體(花蕾)預(yù)處理 外植體消毒 剝?nèi)』ㄋ?接種 誘導(dǎo)培養(yǎng) 分化培養(yǎng) 染色體加倍 植株倍性鑒定4、影響花藥和花粉培養(yǎng)的因素？1）外植體的選擇：供試材料的遺傳背景 不同種品種花藥培養(yǎng)能力不同： 花藥培養(yǎng)能力是可以遺傳的供試材料的生理狀態(tài)：供體植株的年齡和所處的生長環(huán)境條件均影響花藥培養(yǎng)2.花粉發(fā)育時期3.花藥的預(yù)處理： 花藥培養(yǎng)前給予一定的低溫處理是十分必要的。預(yù)處理的方法包括冷處理、熱處理、化學(xué)物質(zhì)（乙烯利）、滲透處理等4.培養(yǎng)基：（1）花藥培

50、養(yǎng)常用的基本培養(yǎng)基：MS ； Nitsch；N6；B5。（2）無機鹽成分 無機鹽濃度、銨態(tài)氮和硝態(tài)氮的濃度和比值（3）蔗糖濃度： （4）、激素對花藥培養(yǎng)有重要影響：高濃度的2,4-D主要誘導(dǎo)花藥形成愈傷組織，而不能形成胚狀體，從而增加了二倍體細(xì)胞發(fā)育的機會。（5）有機附加物：水解酪蛋白，水解乳蛋白等 （6）活性炭，加0.5-1%有利5、培養(yǎng)方法 6、接種密度4、培養(yǎng)條件對花藥培養(yǎng)有一定的影響溫度：不同植物對溫度的要求不同，如：光照：先弱后強5、花藥培養(yǎng)中存在的問題、原因和解決方法1）提高愈傷組織誘導(dǎo)率和植株再生率（2）白化苗禾谷類植物經(jīng)常會出現(xiàn)白化苗，影響白化苗形成的因素有： 供體植物基因型

51、花粉發(fā)育時期 培養(yǎng)基成分 培養(yǎng)溫度6、花藥培養(yǎng)的現(xiàn)狀和展望7、一步成苗有哪些優(yōu)點？8、影響白化苗形成的因素都有哪些？9、簡述白化苗的形成機理。10、與常規(guī)育種比較，花粉單倍體育種有哪些優(yōu)點？11、與花藥培養(yǎng)比較，花粉培養(yǎng)有何優(yōu)點？12、分離花粉有哪些方法？（1）機械分離花藥 少量培養(yǎng)基或等滲的蔗糖溶液中 平頭玻璃棒輕壓 過篩 離心（500-1000rpm，1-5min） 洗滌 懸浮 活力和密度測定（適合于雙子葉植物）（2）花粉漂浮培養(yǎng)自然釋放（3）磁拌法花藥+少量玻璃珠 放入盛液體培養(yǎng)基的三角瓶中 用磁力攪拌器攪拌 其余步驟同上第十二章 體細(xì)胞雜交一、名詞解釋1、體細(xì)胞雜交：兩種不同基因型個體

52、或不同種、屬、科生物細(xì)胞的原生質(zhì)體分別分離出來，再用一定的技術(shù)融合成一個新的雜種細(xì)胞，乃至發(fā)育成雜種植株的過程。2、 微細(xì)胞雜交3.自體融合：發(fā)生在親本原生質(zhì)體自身，結(jié)果是獲得“同核體”。4、異體融合：由不同種的雙親原生質(zhì)體融合而得到“異核體5、對稱融合：是指兩個完整的細(xì)胞原生質(zhì)體融合6、非對稱融合：利用物理或化學(xué)的方法使親本的核或細(xì)胞質(zhì)失活后再進行融合7、胞質(zhì)雜種8、核質(zhì)雜種9、亞原生質(zhì)體10、互補選擇法： 兩個具有不同遺傳或生理特性的親本，在形成雜種細(xì)胞時能產(chǎn)生互補作用，根據(jù)這一特性進行雜種細(xì)胞選擇的方法11、機械選擇法：利用原生質(zhì)體的某些可見標(biāo)志，如形態(tài)色澤上的差異將融合的細(xì)胞從混合群體

53、中選擇出來的方法。12、組織培養(yǎng)篩選法：根據(jù)不同植物細(xì)胞對培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件的要求與反應(yīng)的不同來選擇雜種細(xì)胞的方法二、判斷題1、原生質(zhì)體融合首先是細(xì)胞質(zhì)融合，最后是細(xì)胞核融合。（x ）細(xì)胞質(zhì)不融合2、羅丹明是一種親脂染料，能夠抑制線粒體的氧化磷酸化過程而使細(xì)胞質(zhì)失活。（ ）3、亞原生質(zhì)體可以通過密度梯度離心的方法制備。（ ）4、細(xì)胞松弛素B能引起植物原生質(zhì)體排核，因此可以獲得胞質(zhì)體。（ ）5、不同來源的原生質(zhì)體融合需要誘導(dǎo)才能實現(xiàn)。（ ）6、原生質(zhì)體培養(yǎng)是體細(xì)胞雜交的基礎(chǔ)。（ ）7、體細(xì)胞雜交能克服遠(yuǎn)緣雜交障礙。（ ）三、問答題1、簡述影響原生質(zhì)體融合的因素1)、原生質(zhì)體的質(zhì)量2）、融合方法

54、3、融合參數(shù)4.融合體的類型Ø 影響PEG融合率的因素主要有：PEG的相對分子質(zhì)量、純度、濃度、處理時間、原生質(zhì)體的生理狀況和密度等。Ø 影響電融合的因素主要有：原生質(zhì)體的密度，融合液的成分，電極的材料和間距，交變電場強度，直流脈沖的強度、寬幅及次數(shù)等。2、何謂亞原生質(zhì)體？用于原生質(zhì)體融合的亞原生質(zhì)體都有哪些？3、何謂胞質(zhì)雜種和核質(zhì)雜種？它們是怎樣形成的?4、以激素自養(yǎng)型互補、營養(yǎng)缺陷型互補和抗性互補為例，說明利用互補選擇體細(xì)胞雜種的原理和方法。5、簡述非對稱融合體細(xì)胞雜種的遺傳特點。6、簡述體細(xì)胞雜種cpDNA的遺傳特點。7、簡述體細(xì)胞雜種mtDNA的遺傳特點。8、試論原

55、生質(zhì)體融合在外源基因轉(zhuǎn)移上的作用和潛力。9、細(xì)胞雜種的選擇方法有哪些？10、 簡述體細(xì)胞雜交技術(shù)的應(yīng)用。1）、通過體細(xì)胞雜交合成新物種2、培育作物新種質(zhì)和新品種3、轉(zhuǎn)移細(xì)胞質(zhì)基因控制的性狀11、與有性雜交相比，原生質(zhì)體融合有何特點？第十三章 突變體篩選一、名詞解釋1、突變體篩選：從離體培養(yǎng)的植物材料中，篩選擬定目標(biāo)突變體的方法，稱為突變體篩選2、正選擇：是指在培養(yǎng)物中加入對正常細(xì)胞有毒的化學(xué)物質(zhì)，使正常細(xì)胞不能生長，而突變體可以生長，從而選出突變體的方法。3.負(fù)選擇：在特定的培養(yǎng)基上或培養(yǎng)條件下使突變的細(xì)胞死亡，而正常細(xì)胞可以生長，從而選出突變體的方法。4、變異體：不加任何選擇壓力而篩選出的變異個體