實(shí)驗(yàn)11植物的組織培養(yǎng)ppt課件

1、第四部分第四部分 淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù)淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?1 1、進(jìn)展菊花的組織培育、進(jìn)展菊花的組織培育 2 2、嘗試植物激素的運(yùn)用、嘗試植物激素的運(yùn)用 經(jīng)過(guò)必修課的學(xué)習(xí)，我們?cè)?jīng)了解到大多綠色開(kāi)花植物都是靠種子來(lái)繁衍的。那么，有沒(méi)有不用種子來(lái)培育植物的方法呢？ 組織培育組織培育營(yíng)養(yǎng)繁衍營(yíng)養(yǎng)繁衍扦插扦插嫁接嫁接壓條壓條 無(wú)性繁衍無(wú)性繁衍一、根底知識(shí)分析一、根底知識(shí)分析 一組織培育的生殖方式一組織培育的生殖方式 離體器官、 組織或細(xì)胞 脫分化 愈傷組織 再分化 根、芽 植物體 二植物組織培育的根本過(guò)程二植物組織培育的根本過(guò)程知識(shí)要點(diǎn)知識(shí)要點(diǎn): :1.1.細(xì)胞分化的概念；細(xì)胞分化的概念；

2、2.2.離體植物細(xì)胞的脫分化和再分化。離體植物細(xì)胞的脫分化和再分化。三影響植物組織培育的要素三影響植物組織培育的要素 影響植物組織培育的要素有培育基配制、影響植物組織培育的要素有培育基配制、外植體的選取、消毒、接種、培育、移栽和外植體的選取、消毒、接種、培育、移栽和栽培等。栽培等。(1)(1)外植體選?。翰煌闹参锝M織外植體選?。翰煌闹参锝M織 同一植物的不同資料同一植物的不同資料(2)(2)營(yíng)養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)(3)(3)環(huán)境條件環(huán)境條件(pH(pH、溫度、光照、溫度、光照) )(4)(4)植物激素植物激素(5)(5)消毒消毒四生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素運(yùn)用配比對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響四生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素運(yùn)用配比對(duì)實(shí)驗(yàn)

3、結(jié)果的影響運(yùn)用配比運(yùn)用配比實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素 生長(zhǎng)素濃度生長(zhǎng)素濃度誘導(dǎo)芽的生成誘導(dǎo)芽的生成細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素= =生長(zhǎng)素濃度生長(zhǎng)素濃度愈傷組織繼續(xù)生長(zhǎng)而不分化愈傷組織繼續(xù)生長(zhǎng)而不分化細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素 生長(zhǎng)素濃度生長(zhǎng)素濃度誘導(dǎo)根的生成誘導(dǎo)根的生成制備制備MS固體固體培育基培育基外植體消毒外植體消毒 接種接種 培培 養(yǎng)養(yǎng)栽培栽培 移移 栽栽二、實(shí)驗(yàn)操作二、實(shí)驗(yàn)操作 一制備一制備MSMS固體培育基固體培育基1 1、配制母液、配制母液 按照按照MS培育基成分表培育基成分表, 分別配制培育基的母液。分別配制培育基的母液。 (1)大量元素母液大量元素母液(10倍液倍液) 分別稱(chēng)取分

4、別稱(chēng)取10倍用量的各種大量無(wú)機(jī)鹽，依次溶解于大倍用量的各種大量無(wú)機(jī)鹽，依次溶解于大約約800ml熱的熱的60-80蒸餾水中。一種成分完全溶蒸餾水中。一種成分完全溶解后再參與下一種，最后加水，定容至解后再參與下一種，最后加水，定容至1000ml后裝入試后裝入試劑瓶中，冰箱內(nèi)儲(chǔ)存?zhèn)溆?。劑瓶中，冰箱?nèi)儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?2)(2)微量元素母液微量元素母液(100(100倍液倍液) ) (3)(3)鐵鹽母液鐵鹽母液100100倍液倍液(4)(4)有機(jī)物質(zhì)母液有機(jī)物質(zhì)母液(100(100倍數(shù)倍數(shù)) )(5)(5)生長(zhǎng)素母液生長(zhǎng)素母液(6)(6)細(xì)胞分裂素母液細(xì)胞分裂素母液留意留意: :配制培育基時(shí)，一定要留意調(diào)

5、理配制培育基時(shí)，一定要留意調(diào)理pHpH。MSMS培育基配制方法培育基配制方法他能說(shuō)出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同微生物他能說(shuō)出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同微生物培育基的配方相比，培育基的配方相比，MSMS培育基的配方有哪些明培育基的配方有哪些明顯的不同？顯的不同？ 微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無(wú)機(jī)鹽；微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無(wú)機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，同時(shí)可以維持細(xì)胞的浸透壓；甘氨酸、維蔗糖提供碳源，同時(shí)可以維持細(xì)胞的浸透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿(mǎn)足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑生素等物質(zhì)主要是為了滿(mǎn)足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑遭到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。遭到一

6、定影響后所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。 微生物培育基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。與微生物的培育不同，微生物培育基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。與微生物的培育不同，MSMS培育基那么需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，無(wú)機(jī)鹽混合物包括培育基那么需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，無(wú)機(jī)鹽混合物包括植物生長(zhǎng)必需的大量元素和微量元素兩大類(lèi)。植物生長(zhǎng)必需的大量元素和微量元素兩大類(lèi)。 (1) (1) 取取1000ml1000ml燒杯一只，加大量元素?zé)恢?，加大量元?010倍母液倍母液100ml100ml，微量元素，微量元素100100倍母液倍母液10ml10ml，鐵鹽，鐵鹽100100倍母液倍母液10ml,10ml,有機(jī)物質(zhì)有機(jī)物質(zhì)100100倍母液倍母液10ml1

7、0ml。此外。此外, ,根據(jù)培育資料根據(jù)培育資料和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪€要附加一定量的生長(zhǎng)素和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪€要附加一定量的生長(zhǎng)素, ,細(xì)胞分裂素及蔗細(xì)胞分裂素及蔗糖等糖等, ,然后加水至然后加水至1000ml,1000ml,待蔗糖充分溶解后用待蔗糖充分溶解后用1mol/L 1mol/L 的的NaOHNaOH或或HClHCl調(diào)酸堿度為調(diào)酸堿度為pH5.8,pH5.8,最后參與最后參與瓊脂粉瓊脂粉6.5g,6.5g,如用瓊脂條如用瓊脂條, ,那么要加那么要加8g8g。2.2.培育基配制與分裝：培育基配制與分裝： (2) (2)將盛有培育基的燒杯在電磁爐上，煮至瓊脂完全將盛有培育基的燒杯在電磁爐上，煮至瓊脂完全融化

8、，補(bǔ)加蒸餾水至融化，補(bǔ)加蒸餾水至1000ml1000ml。 將配制好的培育基分裝到培育用三角瓶中，每只將配制好的培育基分裝到培育用三角瓶中，每只100ml100ml三角瓶約裝三角瓶約裝40ml40ml培育基。培育基。 分裝時(shí)要防止把培育基倒在瓶口上，否那么培育時(shí)分裝時(shí)要防止把培育基倒在瓶口上，否那么培育時(shí)容易引起雜菌污染。容易引起雜菌污染。 1 1把裝好的培育基的三角瓶放入把裝好的培育基的三角瓶放入高壓滅菌鍋中，蓋好鍋蓋。高壓滅菌鍋中，蓋好鍋蓋。 2 2設(shè)置滅菌溫度參數(shù)為設(shè)置滅菌溫度參數(shù)為121121，20min20min，開(kāi)場(chǎng)滅菌。，開(kāi)場(chǎng)滅菌。 3 3、滅菌、滅菌無(wú)菌技術(shù)是植物組織培育能否獲

9、得勝利的關(guān)鍵無(wú)菌技術(shù)是植物組織培育能否獲得勝利的關(guān)鍵 二外植體離體組織消毒二外植體離體組織消毒留意：對(duì)培育資料進(jìn)展外表滅菌時(shí)，一留意：對(duì)培育資料進(jìn)展外表滅菌時(shí)，一方面要思索藥劑的消毒效果；另一方面還要方面要思索藥劑的消毒效果；另一方面還要思索植物資料的耐受才干。不同藥劑、不同思索植物資料的耐受才干。不同藥劑、不同植物資料，甚至不同器官要區(qū)別對(duì)待。植物資料，甚至不同器官要區(qū)別對(duì)待。 1 1、7070酒精中浸泡酒精中浸泡10min10min，無(wú)菌水沖洗，無(wú)菌水沖洗2 2、5%5%次氯酸鈉溶液中浸泡，無(wú)菌水沖洗次氯酸鈉溶液中浸泡，無(wú)菌水沖洗3 3、用另一、用另一5%5%次氯酸鈉溶液浸泡次氯酸鈉溶液浸

10、泡5min5min，無(wú)菌水沖洗，無(wú)菌水沖洗4 4、超凈臺(tái)中用無(wú)菌水多次沖洗、超凈臺(tái)中用無(wú)菌水多次沖洗三切段后接種三切段后接種 1 1、先用肥皂洗手，穿上、先用肥皂洗手，穿上任務(wù)服，戴上口罩和任務(wù)帽任務(wù)服，戴上口罩和任務(wù)帽。 2 2、放入培育瓶和滅菌后、放入培育瓶和滅菌后的接種器具的接種器具( (鑷子、解剖刀、鑷子、解剖刀、接種針接種針) )，把鑷子、解剖刀、，把鑷子、解剖刀、接種針插入內(nèi)盛接種針插入內(nèi)盛70%70%酒精的酒精的廣口瓶中。廣口瓶中。 3 3、在酒精燈火焰旁，、在酒精燈火焰旁，翻開(kāi)三角瓶，把花莖用無(wú)翻開(kāi)三角瓶，把花莖用無(wú)菌解剖刀切成幾段，每段菌解剖刀切成幾段，每段至少有一張葉片至少

11、有一張葉片 4 4、切段插入培育基，、切段插入培育基，誘導(dǎo)愈傷組織，蓋上封口誘導(dǎo)愈傷組織，蓋上封口膜。膜。 5 5、愈傷組織插入生芽、愈傷組織插入生芽培育基，蓋上封口膜。培育基，蓋上封口膜。 6 6、用記號(hào)筆在瓶壁上、用記號(hào)筆在瓶壁上寫(xiě)明培育資料、培育基代寫(xiě)明培育資料、培育基代號(hào)、號(hào)、 接種日期。接種日期。本卷須知本卷須知 全部接種操作都是在無(wú)菌條件下進(jìn)展的，所以全部接種操作都是在無(wú)菌條件下進(jìn)展的，所以要特別仔細(xì)仔細(xì)，以防雜菌污染。要特別仔細(xì)仔細(xì)，以防雜菌污染。四培育四培育接種后的錐形瓶最好放在無(wú)菌箱中培育。培接種后的錐形瓶最好放在無(wú)菌箱中培育。培育期間應(yīng)定期消毒，溫度控制在育期間應(yīng)定期消毒，

12、溫度控制在55，并且每日照光并且每日照光4.54.5小時(shí)小時(shí) 。察看記錄生長(zhǎng)情況，。察看記錄生長(zhǎng)情況，并照相存檔。并照相存檔。 2-3 2-3周后將生長(zhǎng)強(qiáng)壯的叢狀苗在無(wú)菌條件下周后將生長(zhǎng)強(qiáng)壯的叢狀苗在無(wú)菌條件下一個(gè)個(gè)轉(zhuǎn)入生根培育基中，在上述條件下繼續(xù)一個(gè)個(gè)轉(zhuǎn)入生根培育基中，在上述條件下繼續(xù)培育培育五移栽五移栽六栽培六栽培 生根后，將苗移生根后，將苗移至消毒的草炭土或蛭至消毒的草炭土或蛭石中，用玻璃罩或塑石中，用玻璃罩或塑料布堅(jiān)持料布堅(jiān)持80%80%以上濕以上濕度，度，2-32-3天后翻開(kāi)玻天后翻開(kāi)玻璃罩低濕度鍛煉璃罩低濕度鍛煉轉(zhuǎn)移至土中培育轉(zhuǎn)移至土中培育定植定植三、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)三、結(jié)果分析與

13、評(píng)價(jià) 一對(duì)接種操作中污染情況的分析一對(duì)接種操作中污染情況的分析接種34 d后，在接種操作中被雜菌污染的培育物會(huì)表現(xiàn)出被污染的景象。請(qǐng)學(xué)生適時(shí)統(tǒng)計(jì)污染率，分析接種操作能否符合無(wú)菌要求。 二能否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化二能否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化察看實(shí)驗(yàn)結(jié)果，看看能否培育出了愈傷組織，記察看實(shí)驗(yàn)結(jié)果，看看能否培育出了愈傷組織，記錄多長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng)出愈傷組織。統(tǒng)計(jì)改換培育基后愈傷錄多長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng)出愈傷組織。統(tǒng)計(jì)改換培育基后愈傷組織進(jìn)一步分化成根和芽的比例和時(shí)間。組織進(jìn)一步分化成根和芽的比例和時(shí)間。三能否進(jìn)展了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄三能否進(jìn)展了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄做好統(tǒng)計(jì)和對(duì)照，填好結(jié)果記錄表，培育嚴(yán)謹(jǐn)

14、的科學(xué)做好統(tǒng)計(jì)和對(duì)照，填好結(jié)果記錄表，培育嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度。從實(shí)驗(yàn)的第一步開(kāi)場(chǎng)就要求做好實(shí)驗(yàn)記錄，實(shí)驗(yàn)態(tài)度。從實(shí)驗(yàn)的第一步開(kāi)場(chǎng)就要求做好實(shí)驗(yàn)記錄，實(shí)驗(yàn)小組配制不同培育基，如誘導(dǎo)愈傷或直接分化叢芽的培小組配制不同培育基，如誘導(dǎo)愈傷或直接分化叢芽的培育基，然后做不同配方的比較。育基，然后做不同配方的比較。四生根苗的移栽能否合格四生根苗的移栽能否合格生根苗移栽技術(shù)的關(guān)鍵是既要充分清洗根系外表生根苗移栽技術(shù)的關(guān)鍵是既要充分清洗根系外表的培育基，又不能傷及根系。普通運(yùn)用無(wú)土栽培的的培育基，又不能傷及根系。普通運(yùn)用無(wú)土栽培的方法。培育基質(zhì)要提早消毒，可以向培育基質(zhì)噴灑方法。培育基質(zhì)要提早消毒，可以向培育基質(zhì)

15、噴灑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%5%的高錳酸鉀，并用塑料薄膜覆蓋的高錳酸鉀，并用塑料薄膜覆蓋12 h12 h。掀開(kāi)塑料薄膜后掀開(kāi)塑料薄膜后24 h24 h才干移栽。新移栽的組培苗要才干移栽。新移栽的組培苗要在溫室過(guò)渡幾天，等壯苗后再定植大田或進(jìn)展盆栽。在溫室過(guò)渡幾天，等壯苗后再定植大田或進(jìn)展盆栽。學(xué)生可以在課后統(tǒng)計(jì)本人移栽的成活率，看看移栽學(xué)生可以在課后統(tǒng)計(jì)本人移栽的成活率，看看移栽能否合格。能否合格。四、本課題知識(shí)小結(jié)四、本課題知識(shí)小結(jié) 菊花的組織培育菊花的組織培育原理：細(xì)胞的全能性原理：細(xì)胞的全能性條件條件根底根底概念概念植物組織培育植物組織培育的根本過(guò)程：的根本過(guò)程：環(huán)境要素溫度、環(huán)境要素溫

16、度、PH、光照、光照外植體的選擇外植體的選擇營(yíng)養(yǎng)要素營(yíng)養(yǎng)要素植株植株根、芽根、芽愈傷愈傷組織組織外植體外植體影響植物組織影響植物組織培育的要素培育的要素植物激素配比植物激素配比實(shí)驗(yàn)過(guò)程：實(shí)驗(yàn)過(guò)程：移栽移栽栽培栽培培育培育接種接種外植體外植體消毒消毒制備制備MS培培育基育基五、練習(xí)五、練習(xí) 植物組織培育所利用的植物資料體積小、抗性差，植物組織培育所利用的植物資料體積小、抗性差，對(duì)培育條件的要求較高。用于植物組織培育的培育基同樣對(duì)培育條件的要求較高。用于植物組織培育的培育基同樣適宜于某些微生物的生長(zhǎng)，如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。適宜于某些微生物的生長(zhǎng)，如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。而培育物一旦遭到微生物

17、的污染，就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄，而培育物一旦遭到微生物的污染，就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄，因此要進(jìn)展嚴(yán)厲的無(wú)菌操作。因此要進(jìn)展嚴(yán)厲的無(wú)菌操作。外植體的生理形狀是勝利進(jìn)展組織培育的重要條件外植體的生理形狀是勝利進(jìn)展組織培育的重要條件之一。生長(zhǎng)旺盛的嫩枝生理情況好，容易誘導(dǎo)脫分化之一。生長(zhǎng)旺盛的嫩枝生理情況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。和再分化。在植物組織培育過(guò)程中，為什么要進(jìn)展一系列在植物組織培育過(guò)程中，為什么要進(jìn)展一系列的消毒，滅菌，并且要求無(wú)菌操作？的消毒，滅菌，并且要求無(wú)菌操作？在選取菊花莖段的時(shí)候，為什么要選取生長(zhǎng)旺盛的在選取菊花莖段的時(shí)候，為什么要選取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝？嫩枝？3 3、不同植物、不同

18、組織的生根和生芽能否都可以運(yùn)用與本實(shí)驗(yàn)一、不同植物、不同組織的生根和生芽能否都可以運(yùn)用與本實(shí)驗(yàn)一樣的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素濃度樣的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素濃度4 4、本實(shí)驗(yàn)用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，為、本實(shí)驗(yàn)用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，為什么？什么？5 5、假設(shè)在自然界取植物樣本進(jìn)展組織培育，他以為應(yīng)采取什么措、假設(shè)在自然界取植物樣本進(jìn)展組織培育，他以為應(yīng)采取什么措施保證樣本不被污染？施保證樣本不被污染？任何植物物種或種類(lèi)都不可貿(mào)然運(yùn)用與本實(shí)驗(yàn)一樣的生長(zhǎng)素任何植物物種或種類(lèi)都不可貿(mào)然運(yùn)用與本實(shí)驗(yàn)一樣的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素濃度，必需求套索運(yùn)用如何合成激素和何種激和細(xì)胞分

19、裂素濃度，必需求套索運(yùn)用如何合成激素和何種激素濃度才可以。學(xué)習(xí)者可以參考已有文獻(xiàn)上成熟的閱歷，也素濃度才可以。學(xué)習(xí)者可以參考已有文獻(xiàn)上成熟的閱歷，也可以本人探求可以本人探求植物中存在的天然激素有相應(yīng)的使之分解的酶，這樣，天植物中存在的天然激素有相應(yīng)的使之分解的酶，這樣，天然激素在植物體內(nèi)作用和存在的時(shí)間就較短，而人工合成然激素在植物體內(nèi)作用和存在的時(shí)間就較短，而人工合成的激素在植物中沒(méi)有相應(yīng)使之分解的酶，所以作用和存在的激素在植物中沒(méi)有相應(yīng)使之分解的酶，所以作用和存在時(shí)間長(zhǎng)，作用效果也更明顯。時(shí)間長(zhǎng)，作用效果也更明顯。1 1操作環(huán)境干凈操作環(huán)境干凈2 2植物樣本干凈植物樣本干凈3 3操作過(guò)程無(wú)

20、菌操作過(guò)程無(wú)菌由于污染物的來(lái)源是操作過(guò)程中和植物本身帶來(lái)的，主要是由于污染物的來(lái)源是操作過(guò)程中和植物本身帶來(lái)的，主要是微生物的污染，要采用各種措施防止微生物污染，詳細(xì)做法微生物的污染，要采用各種措施防止微生物污染，詳細(xì)做法和操作在微生物培育實(shí)驗(yàn)中曾經(jīng)引見(jiàn)。除仔細(xì)消毒除菌外，和操作在微生物培育實(shí)驗(yàn)中曾經(jīng)引見(jiàn)。除仔細(xì)消毒除菌外，操作矯捷迅速，也可以降低污染率操作矯捷迅速，也可以降低污染率 6 6右圖為植物體細(xì)胞雜交過(guò)程表示圖。右圖為植物體細(xì)胞雜交過(guò)程表示圖。據(jù)圖回答：據(jù)圖回答：1 1步驟是步驟是 ，最，最常用的方法是常用的方法是 。2 2步驟普通常用的化學(xué)試劑步驟普通常用的化學(xué)試劑是是 ，目的是，目的是 。 (3)