專(zhuān)題三植物的組織培養(yǎng)技術(shù)-知識(shí)點(diǎn)總結(jié)_4410

1、專(zhuān)題三植物的組織培養(yǎng)技術(shù)3.1菊花的組織培養(yǎng)1. 細(xì)胞分化指在生物個(gè)體發(fā)育過(guò)程中， 相同細(xì)胞的后代在形態(tài)、 結(jié)構(gòu)和生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過(guò)程。 細(xì)胞分化使多細(xì)胞生物體中細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能趨向?qū)ｉT(mén)化，有利于提高各種生理功能的效率。2. 具有某種生物全套遺傳信息的任何一個(gè)活細(xì)胞，都具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能，叫做植物細(xì)胞的全能性。 但在生物體的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中并未表現(xiàn)出來(lái)， 這是因?yàn)樵谔囟ǖ臅r(shí)間和空間條件下， 通過(guò)基因的選擇性表達(dá)， 形成了不同組織和器官。3. 離體的植物組織或細(xì)胞， 在適宜條件下培養(yǎng)了一段時(shí)間以后， 會(huì)通過(guò)細(xì)胞分裂，形成愈傷組織， 這種由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程，

2、稱(chēng)為植物細(xì)胞的脫分化（去分化） 。愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過(guò)程叫做再分化。4. 愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。5. 植物組織培養(yǎng)技術(shù)廣泛應(yīng)用在實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖、 培育無(wú)病毒作物、 制作人工種子、培育作物新品種以及細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等方面。5. 影響植物組織培養(yǎng)的條件有材料、營(yíng)養(yǎng)、激素及環(huán)境條件。(1) 材料：植物材料的選擇直接關(guān)系到試驗(yàn)的成敗。 菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開(kāi)花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。 一般來(lái)說(shuō)，容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。 選取生長(zhǎng)旺盛嫩枝進(jìn)行組培的原因是嫩枝生理狀態(tài)好， 容易誘

3、導(dǎo)脫分化和再分化。(2) 營(yíng)養(yǎng)：常用的培養(yǎng)基是 MS固體培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是 N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I 、Co，它們提供了植物細(xì)胞所必需的無(wú)機(jī)鹽。 有機(jī)物有甘氨酸、 煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。蔗糖提供碳源，維持細(xì)胞滲透壓； 甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿(mǎn)足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)。(3) 激素：植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、 脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果先生長(zhǎng)素，后細(xì)胞分裂素有利于分

4、裂但不分化比值高時(shí)促根分化，抑芽形成先細(xì)胞分裂素，后生長(zhǎng)素細(xì)胞既分裂也分化比值低時(shí)促芽分化，抑根形成同時(shí)使用分化頻率提高比值適中促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)(4) 環(huán)境條件：菊花的組織培養(yǎng)，一般將 pH控制在 5.8 左右，溫度控制在 1822，并且每日用日光燈照射 12h.6. 菊花組織培養(yǎng)的操作流程包括：配制 MS固體培養(yǎng)基外植體的消毒接種培養(yǎng)移栽栽培7. 制備 MS固體培養(yǎng)基的步驟是：配置各種母液配制培養(yǎng)基滅菌。先將各種成分按配方比例配制成濃縮液（培養(yǎng)基母液） 。然后在容器中加入瓊脂（加熱融化），依次加入蔗糖、大量元素、微量元素、有機(jī)物和植物激素的母液，并用蒸餾水定容到 1000 毫升，調(diào)節(jié) PH，

5、分裝到錐形瓶中，用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行無(wú)菌處理。8. 外植體是指用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。 取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝用流水移向細(xì)胞一側(cè)（單核靠邊期） ，并分裂成 1 個(gè)生殖細(xì)胞核和 1 個(gè)花粉管細(xì)胞核，沖洗加少許洗衣粉刷洗在流水下沖洗20min 左右無(wú)菌吸水紙吸干表面水進(jìn)而形成兩個(gè)細(xì)胞， 一個(gè)是生殖細(xì)胞， 一個(gè)是營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。 生殖細(xì)胞將再分裂一次，分體積分?jǐn)?shù)為 70%的酒精中搖動(dòng) 23 次，持續(xù) 67s，無(wú)菌水中清洗用無(wú)菌形成兩個(gè)精子（基因組成完全相同） 。吸水紙吸干表面水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.1%的氯化汞溶液中 12min無(wú)菌水中至少4. 通過(guò)花藥培養(yǎng)產(chǎn)生單倍體植株有兩種途徑， 一種是花粉通過(guò)胚狀體

6、階段發(fā)育為清洗 3 次，漂洗消毒液。 應(yīng)注意對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒時(shí)， 就要考慮藥劑的消毒植物，另一種是花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再將其誘導(dǎo)分化成植株。效果，又要考慮植物的耐受能力。這兩種途徑不同主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類(lèi)及其濃度配比。9. 接種過(guò)程中插入外植體時(shí)形態(tài)學(xué)上端朝上，每個(gè)錐形瓶接種78 個(gè)外植體，5. 胚狀體是植物體細(xì)胞組織培養(yǎng)過(guò)程中， 誘導(dǎo)產(chǎn)生的形態(tài)與受精卵發(fā)育成的胚類(lèi)整個(gè)過(guò)程要求無(wú)菌操作。似的結(jié)構(gòu)，有胚芽、胚根、胚軸等完整結(jié)構(gòu)，就像一粒種子。10. 放在無(wú)菌箱中培養(yǎng)， 定期進(jìn)行消毒， 保持適宜的溫度（1822）和光照（12h） 6. 影響花藥培養(yǎng)的主要因素是材料的選擇與

7、培養(yǎng)基的組成。應(yīng)該選月季的初花11移栽前先打開(kāi)培養(yǎng)瓶的封口膜， 讓其在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日， 然后用流水清洗根期（花粉早期的花藥比后期更容易產(chǎn)生花粉植株；選擇單核靠邊期（花藥培養(yǎng)成部培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過(guò)毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時(shí)間壯苗，最功率最高）；選擇完全未開(kāi)放的花蕾（有利于材料的消毒） 。后進(jìn)行露天栽培。7. 選擇花藥時(shí)，用醋酸洋紅法使細(xì)胞核中的染色體著色， 通過(guò)鏡檢來(lái)選擇單核靠12. 外植體在培養(yǎng)過(guò)程中可能會(huì)被污染，原因有外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌邊期的花粉。若不易著色，需采用焙花青 - 鉻礬法將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。不徹底；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。8. 滅菌后的花蕾

8、，要在無(wú)菌條件下除去萼片和花瓣， 并立即將花藥接種到培養(yǎng)基3.2 月季的花藥培養(yǎng)上。在剝離花藥時(shí)， 要盡量不損傷花藥 （否則接種后容易從受傷部位長(zhǎng)出愈傷組1.被子植物的雄蕊包含花絲、 花藥兩部分?；ㄋ帪槟覡罱Y(jié)構(gòu)， 內(nèi)部含有許多花粉。織），同時(shí)還要徹底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體花粉是由花粉母細(xì)胞經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞。的形成。2.被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時(shí)期、單核期和雙核期等階段。9. 每瓶接種花藥 710 個(gè), 溫度控制在 25左右 , 幼小植株形成后給予光照，培3.在小孢子四分體時(shí)期， 4 個(gè)單倍體細(xì)胞連在一起，進(jìn)入單核期時(shí)，四分體的4養(yǎng) 2030 天后 , 花藥開(kāi)裂長(zhǎng)出愈傷組織或形成胚狀體。 此時(shí)要將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)個(gè)單倍體細(xì)胞彼此分離， 形成 4 個(gè)具有單細(xì)胞核的花粉粒， 這時(shí)的細(xì)胞含濃厚的移到分