水產(chǎn)品中泰樂菌素A殘留量的測定高效液相色譜法歡迎光臨

1、ICS67.050X 04DB33浙 江 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB33/T 6732007水產(chǎn)品中泰樂菌素A殘留量的測定高效液相色譜法Determ in atio n of tylosi n A residues in aquatic productshigh performa nee liquid chromatography2008-01-28 實施2007-12-29 發(fā)布浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質(zhì)檢中心（舟山）、浙江海博食品有限公司。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳雪昌、王堅強、陳偉斌、

2、郝云彬、鄭斌。水產(chǎn)品中泰樂菌素 A殘留量的測定 高效液相色譜法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中泰樂菌素A殘留量的高效液相色譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品可食部分中泰樂菌素A殘留量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3原理樣品在堿性條件下用乙酸乙酯提取，正己烷脫脂，反相色譜柱分離，紫外檢測器檢測，外標(biāo)法定量。4試劑與材

3、料實驗用水應(yīng)符合 GB/T 6682中一級水標(biāo)準(zhǔn)。試劑除有實驗要求外，其余均為分析純。4.1正己烷。4.2乙酸乙酯。4.3乙腈。4.4 磷酸：（85% ）。4.5磷酸二氫鉀。4.6磷酸氫二鉀。4.7磷酸鹽緩沖液（pH8.0）:準(zhǔn)確稱取磷酸二氫鉀0.52 g和磷酸氫二鉀16.73 g,加水定容至500 mL。4.8流動相用磷酸鹽緩沖液（pH2.5）： 0.01 mol/L，準(zhǔn)確稱取1.36 g磷酸二氫鉀，加適量水溶解，以磷 酸調(diào)pH為2.5，定容至1000 mL。4.9泰樂菌素A標(biāo)準(zhǔn)品：純度98%。4.10泰樂菌素A標(biāo)準(zhǔn)貯備液：準(zhǔn)確稱取適量的泰樂菌素A標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制成100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)貯

4、備液。避光冷藏保存，保存期為一個月。4.11泰樂菌素A標(biāo)準(zhǔn)工作液：用流動相稀釋成各質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.10 mg/L、0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L、5.00 mg/L，現(xiàn)配現(xiàn)用。5儀器與設(shè)備5.1液相色譜儀：配紫外檢測器。5.2組織搗碎機。5.3 均質(zhì)機：大于10 000 rpm。5.4 離心機：7 000 rpm。5.5旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。5.6旋渦混勻器。5.7 天平：感量 0.01 g 和 0.0001 g。5. 8 pH 計5. 9聚丙烯離心管：50mL、10mL。6分析步驟 6.1取樣魚去鱗、去皮沿背脊取肌肉；蝦去頭、去殼、去附肢，取可食部分；蟹、中華鱉等取可

5、食部分；取 適量樣品經(jīng)組織搗碎機搗碎，放置密閉容器-18 C以下冷凍貯存?zhèn)溆谩?.2提取稱取樣品10 g （精確至0.01 g）,于50 mL聚丙烯離心管中，加入 5 mL磷酸鹽緩沖溶液（4.7），均 質(zhì)30 s,再加入25 mL乙酸乙酯均質(zhì) 30 s,以6000 rpm離心5 min，乙酸乙酯層移入 250 mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 瓶中。加入25 mL乙酸乙酯于離心管中，重復(fù)提取 1次，合并乙酸乙酯于 250 mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶。6.3凈化將提取液于40 C水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入1 mL乙腈溶解殘渣后，移入10 mL聚丙烯離心管中，加入2 mL正己烷渦旋振蕩 15 s萃取脫脂，7000 rpm離心5 m

6、in，棄去正己烷層，下層液體經(jīng) 0.45 （im 微孔濾膜過濾，供高效液相色譜儀測定。7測定7.1色譜條件7. 1. 1色譜柱：ODS C18, 5 （im, 4.6 mm >250 mm或同類型號色譜柱。7.1.2 柱溫：35 C。7.1.3 流動相：乙腈磷酸鹽緩沖液（4.8） =40+60 , （ V/V ）。7.1.4 流速：1.0 mL/min 。7.1.5 進(jìn)樣量：20山。7.1.6 檢測器波長：280 nm。7.2標(biāo)準(zhǔn)曲線制作取泰樂菌素 A標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用流動相稀釋成濃度為 0.10 mg/L、0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L、 5.00 mg/L的標(biāo)

7、準(zhǔn)工作液。分別取 20譏進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)樣品中泰樂菌素A含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.3色譜測定取樣品濾液20 iL進(jìn)樣，記錄峰面積，保留時間為5.2min。從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得樣品提取液中泰樂菌素 A的含量。如果上機液濃度超過線性范圍，用乙腈稀釋后進(jìn)行測試。8計算樣品中泰樂菌素A的含量按公式（1）計算。m(1)式中：X樣品中泰樂菌素A的含量，單位為毫克每千克（ 用/g）;C樣品溶液中泰樂菌素 A的濃度，單位為毫克每升（1/mL ）;m樣品質(zhì)量，單位為克（g）;V樣品溶液體積，單位為毫升（mL ）。注：檢驗結(jié)果保留2位有效數(shù)字。9方法檢出限、回收率和精密度 9.1方法檢出限本方法檢出限為 0.05 mg/kg。9.2回收率在0.05 mg/kg2.5 mg/kg的添加濃度下的回收率為70%110