動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)上課用PPT課件

1、動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、 動(dòng)物細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞融合、 單克隆抗體單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。提問(wèn)：提問(wèn)：v植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng), 植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交第1頁(yè)/共31頁(yè)第2頁(yè)/共31頁(yè)第3頁(yè)/共31頁(yè)第4頁(yè)/共31頁(yè)10代細(xì)胞50代細(xì)胞不死細(xì)胞細(xì)胞核型不變第5頁(yè)/共31頁(yè)第6頁(yè)/共31頁(yè)動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官物的組織、器官細(xì)胞懸

2、浮液細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶1010代細(xì)胞代細(xì)胞5050代細(xì)胞代細(xì)胞細(xì)胞株無(wú)限傳代（不死性）細(xì)胞系遺傳物質(zhì)改變遺傳物質(zhì)未改變第7頁(yè)/共31頁(yè) 多細(xì)胞動(dòng)物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，多細(xì)胞動(dòng)物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的內(nèi)環(huán)境的知識(shí)，思考以下問(wèn)題：根據(jù)你所學(xué)的內(nèi)環(huán)境的知識(shí)，思考以下問(wèn)題： 1. 1.體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提供哪些物質(zhì)？體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提供哪些物質(zhì)？ 2.2.體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？ P46討 論充足營(yíng)養(yǎng)（糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量充足營(yíng)養(yǎng)（糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等合成成分及血清、血漿等天然成分。）

3、元素等合成成分及血清、血漿等天然成分。）適宜溫度、適宜溫度、PHPH和氣體環(huán)境；無(wú)菌無(wú)毒環(huán)境和氣體環(huán)境；無(wú)菌無(wú)毒環(huán)境第8頁(yè)/共31頁(yè)4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清等。）3、溫度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.44、氣體環(huán)境： O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）保證細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖維持培養(yǎng)液的PH第9頁(yè)/共31頁(yè)5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用 大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體） 作為基因工程中的受體細(xì)胞 培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可以用于檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性

4、為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)第10頁(yè)/共31頁(yè)思考：2、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。獨(dú)特之處有：1、液體培養(yǎng)基 2、成分中有動(dòng)物血清等因?yàn)檫@些組織或器官上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細(xì)胞懸浮液利于培養(yǎng)不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體第11頁(yè)/共31頁(yè)細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞

5、株、細(xì)胞系細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體或組織植物體或組織培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白或細(xì)胞分泌蛋白快速繁殖、培育快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清葡萄糖、動(dòng)物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖原理原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目第12頁(yè)/共31頁(yè)第二課時(shí)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)第13頁(yè)/共31頁(yè) 第14頁(yè)/共31頁(yè)卵母細(xì)胞母綿羊母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂卵裂C母綿羊子宮胚胎移植胚胎

6、移植多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育過(guò)程多莉羊的培育過(guò)程融合后的卵母細(xì)胞第15頁(yè)/共31頁(yè)2 2、體細(xì)胞核移植的過(guò)程：、體細(xì)胞核移植的過(guò)程：請(qǐng)看教材請(qǐng)看教材P48P48圖圖2-212-21思考：思考：1.1.核移植的受體細(xì)胞是什么？處在什么時(shí)期？用此細(xì)核移植的受體細(xì)胞是什么？處在什么時(shí)期？用此細(xì)胞作為受體細(xì)胞有什么好處？胞作為受體細(xì)胞有什么好處？2.2.通過(guò)什么手段激活受體細(xì)胞，構(gòu)建重組胚胎？通過(guò)什么手段激活受體細(xì)胞，構(gòu)建重組胚胎？ M M中期卵母細(xì)胞中期卵母細(xì)胞誘導(dǎo)方法：物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞，完成誘導(dǎo)方法：物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞，完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程。細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程。卵母細(xì)

7、胞體積大，便于操作；含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，卵母細(xì)胞體積大，便于操作；含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，提供早期胚胎發(fā)育所需的營(yíng)養(yǎng)；含有激活細(xì)胞核體提供早期胚胎發(fā)育所需的營(yíng)養(yǎng)；含有激活細(xì)胞核體現(xiàn)全能性的物質(zhì)?，F(xiàn)全能性的物質(zhì)。第16頁(yè)/共31頁(yè)原理：動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性原理：動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性顯微操作第17頁(yè)/共31頁(yè)第18頁(yè)/共31頁(yè)第19頁(yè)/共31頁(yè)討論：（教材P49）1.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？ 為使核移植的胚胎或動(dòng)物的遺為使核移植的胚胎或動(dòng)物的遺傳物質(zhì)全部來(lái)自有重要利用價(jià)值的動(dòng)傳物質(zhì)全部來(lái)自有重要利用價(jià)值的動(dòng)物提供的體細(xì)胞，在供體細(xì)胞的細(xì)胞物提供的體細(xì)胞，在

8、供體細(xì)胞的細(xì)胞核移至受體細(xì)胞之前，必須將受體細(xì)核移至受體細(xì)胞之前，必須將受體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐摹０倪z傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐?。?0頁(yè)/共31頁(yè) 培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至10105050代左右時(shí)，部分細(xì)胞核型可能會(huì)發(fā)生代左右時(shí)，部分細(xì)胞核型可能會(huì)發(fā)生變化，其細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能會(huì)發(fā)生突變，變化，其細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能會(huì)發(fā)生突變，而而1010代以?xún)?nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二代以?xún)?nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。因此，在體細(xì)胞核移植中，倍體核型。因此，在體細(xì)胞核移植中，為了保證供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)，通為了保證供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)，通常采用傳代常采用傳代1010代以?xún)?nèi)

9、的細(xì)胞。代以?xún)?nèi)的細(xì)胞。2.2.用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代1010代以?xún)?nèi)的細(xì)胞，想一想，這是為什么？代以?xún)?nèi)的細(xì)胞，想一想，這是為什么？第21頁(yè)/共31頁(yè)3.3.你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物，是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了物，是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%100%的復(fù)制嗎？的復(fù)制嗎？為什么？為什么？克隆動(dòng)物絕大部分克隆動(dòng)物絕大部分DNADNA來(lái)自于供體細(xì)胞核，但來(lái)自于供體細(xì)胞核，但其核外還有少量的其核外還有少量的DNADNA，即線(xiàn)粒體中的，即線(xiàn)粒體中的DNADNA是是來(lái)自于受體卵母細(xì)胞。來(lái)自于受體卵母細(xì)胞。

10、此外，即便動(dòng)物的遺傳基礎(chǔ)完全相同，但動(dòng)物的一些此外，即便動(dòng)物的遺傳基礎(chǔ)完全相同，但動(dòng)物的一些行為、習(xí)性的形成與所處環(huán)境有很大關(guān)系，核供體動(dòng)行為、習(xí)性的形成與所處環(huán)境有很大關(guān)系，核供體動(dòng)物生活的環(huán)境與克隆動(dòng)物所生活的環(huán)境不會(huì)完全相同，物生活的環(huán)境與克隆動(dòng)物所生活的環(huán)境不會(huì)完全相同，其形成的行為、習(xí)性也不可能和核供體動(dòng)物完全相同，其形成的行為、習(xí)性也不可能和核供體動(dòng)物完全相同，從這一角度看，克隆動(dòng)物不會(huì)是核供體動(dòng)物從這一角度看，克隆動(dòng)物不會(huì)是核供體動(dòng)物100%100%的復(fù)的復(fù)制。制。第22頁(yè)/共31頁(yè)1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)取材時(shí)，一般是取胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官，請(qǐng)解釋原因。細(xì)胞的衰老與動(dòng)物機(jī)體的

11、衰老有著密切的關(guān)系，細(xì)胞細(xì)胞的衰老與動(dòng)物機(jī)體的衰老有著密切的關(guān)系，細(xì)胞的增殖能力與供體的年齡有關(guān)，幼齡動(dòng)物細(xì)胞增殖能的增殖能力與供體的年齡有關(guān)，幼齡動(dòng)物細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，有絲分裂旺盛，老齡動(dòng)物則相反。所以，一般力強(qiáng)，有絲分裂旺盛，老齡動(dòng)物則相反。所以，一般來(lái)說(shuō)幼年動(dòng)物的組織細(xì)胞比老年動(dòng)物的組織細(xì)胞易于來(lái)說(shuō)幼年動(dòng)物的組織細(xì)胞比老年動(dòng)物的組織細(xì)胞易于培養(yǎng)。同樣，組織細(xì)胞的分化程度越低，則增殖能力培養(yǎng)。同樣，組織細(xì)胞的分化程度越低，則增殖能力越強(qiáng)，所以更容易培養(yǎng)。越強(qiáng)，所以更容易培養(yǎng)。腫瘤組織或細(xì)胞腫瘤組織或細(xì)胞 正常組織或細(xì)胞正常組織或細(xì)胞 拓展拓展-動(dòng)物組織或細(xì)胞培養(yǎng)的難易程度動(dòng)物組織或細(xì)胞培養(yǎng)的

12、難易程度幼體組織或細(xì)胞幼體組織或細(xì)胞 老齡組織或細(xì)胞老齡組織或細(xì)胞分化程度低的組織或細(xì)胞分化程度低的組織或細(xì)胞 分化程度高的組織或細(xì)胞分化程度高的組織或細(xì)胞思考與探究思考與探究（教材（教材P50）第23頁(yè)/共31頁(yè)思考與探究思考與探究（教材（教材P50）2.2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)要經(jīng)過(guò)脫分化的過(guò)程嗎？為什么？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)要經(jīng)過(guò)脫分化的過(guò)程嗎？為什么？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需經(jīng)過(guò)脫分化過(guò)程。因高動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需經(jīng)過(guò)脫分化過(guò)程。因高度分化的動(dòng)物細(xì)胞發(fā)育潛能變窄，失去了度分化的動(dòng)物細(xì)胞發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育成完整個(gè)體的能力，所以，動(dòng)物細(xì)胞發(fā)育成完整個(gè)體的能力，所以，動(dòng)物細(xì)胞也就沒(méi)有類(lèi)似植物組織或細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的脫也

13、就沒(méi)有類(lèi)似植物組織或細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的脫分化過(guò)程了。要想使培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞定向分化過(guò)程了。要想使培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞定向分化，通常采用定向誘導(dǎo)動(dòng)物干細(xì)胞，使分化，通常采用定向誘導(dǎo)動(dòng)物干細(xì)胞，使其分化成所需要的組織或器官。其分化成所需要的組織或器官。第24頁(yè)/共31頁(yè)3.19973.1997年，美國(guó)威斯康星州的一個(gè)奶牛場(chǎng)有一頭名叫盧辛達(dá)年，美國(guó)威斯康星州的一個(gè)奶牛場(chǎng)有一頭名叫盧辛達(dá)（LucindaLucinda）的奶牛，年產(chǎn)奶量為）的奶牛，年產(chǎn)奶量為30.8 t30.8 t，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量最高新紀(jì)錄。目前世界各國(guó)高產(chǎn)奶牛場(chǎng)奶牛，年平均產(chǎn)奶量最高新紀(jì)錄。目前世界各國(guó)高產(chǎn)奶牛場(chǎng)奶牛，年平均

14、產(chǎn)奶量一般為十幾噸，而我國(guó)奶牛產(chǎn)奶量年平均水平僅為奶量一般為十幾噸，而我國(guó)奶牛產(chǎn)奶量年平均水平僅為3 34 4 t t。 （1 1）能利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)）能利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)嗎？請(qǐng)說(shuō)明理由。嗎？請(qǐng)說(shuō)明理由?？梢?。盧辛達(dá)的產(chǎn)奶量很高，有高產(chǎn)奶的遺傳基礎(chǔ)，可以。盧辛達(dá)的產(chǎn)奶量很高，有高產(chǎn)奶的遺傳基礎(chǔ)，利用盧辛達(dá)的體細(xì)胞克隆的奶牛其遺傳物質(zhì)基本上利用盧辛達(dá)的體細(xì)胞克隆的奶牛其遺傳物質(zhì)基本上全部來(lái)自該奶牛，其克隆牛具有高產(chǎn)的遺傳基礎(chǔ)，全部來(lái)自該奶牛，其克隆牛具有高產(chǎn)的遺傳基礎(chǔ)，如果精心培育和飼養(yǎng)，有可能在世界范圍內(nèi)推廣，如果精心培育和飼養(yǎng)，有可能在世界范圍內(nèi)推廣

15、，克隆牛再與高產(chǎn)的公牛自然繁殖，可得到很多高產(chǎn)克隆牛再與高產(chǎn)的公牛自然繁殖，可得到很多高產(chǎn)的后代，從而加快奶牛改良進(jìn)程。的后代，從而加快奶牛改良進(jìn)程。該克隆牛不能無(wú)限制地推廣，其數(shù)量不宜過(guò)多，尤該克隆牛不能無(wú)限制地推廣，其數(shù)量不宜過(guò)多，尤其是在小范圍內(nèi)不能無(wú)限的繁殖，以避免奶牛群出其是在小范圍內(nèi)不能無(wú)限的繁殖，以避免奶牛群出現(xiàn)近親繁殖而引起種質(zhì)衰退。現(xiàn)近親繁殖而引起種質(zhì)衰退。第25頁(yè)/共31頁(yè)（2 2）如果將克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)的任務(wù)交給你，你將如何）如果將克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)的任務(wù)交給你，你將如何對(duì)它進(jìn)行克??？對(duì)它進(jìn)行克隆？從盧辛達(dá)耳朵（也可用別的組織、器官，耳朵在活體從盧辛達(dá)耳朵（也可用別的組

16、織、器官，耳朵在活體上容易?。┥霞羧∫恍K組織，在體外培養(yǎng)獲得該組上容易?。┥霞羧∫恍K組織，在體外培養(yǎng)獲得該組織（如軟骨組織）的細(xì)胞。從屠宰場(chǎng)取廢棄的牛卵巢，織（如軟骨組織）的細(xì)胞。從屠宰場(chǎng)取廢棄的牛卵巢，抽取卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)成熟。用顯微針去除卵母細(xì)胞抽取卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)成熟。用顯微針去除卵母細(xì)胞的核，再將耳細(xì)胞注入卵母細(xì)胞，用電刺激方法使卵的核，再將耳細(xì)胞注入卵母細(xì)胞，用電刺激方法使卵母細(xì)胞與體細(xì)胞融合，這時(shí)供體核就進(jìn)入了受體卵母母細(xì)胞與體細(xì)胞融合，這時(shí)供體核就進(jìn)入了受體卵母細(xì)胞，再用電刺激或化學(xué)物質(zhì)激活注入了體細(xì)胞核的細(xì)胞，再用電刺激或化學(xué)物質(zhì)激活注入了體細(xì)胞核的卵母細(xì)胞，使其完成減數(shù)分

17、裂和發(fā)育過(guò)程。核移植胚卵母細(xì)胞，使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育過(guò)程。核移植胚胎在體外短時(shí)間培養(yǎng)后，挑選正常卵裂的胚胎植入經(jīng)胎在體外短時(shí)間培養(yǎng)后，挑選正常卵裂的胚胎植入經(jīng)同期發(fā)情處理的受體母牛體內(nèi)。同期發(fā)情處理的受體母牛體內(nèi)。第26頁(yè)/共31頁(yè)4.4.體細(xì)胞核移植技術(shù)在研究和應(yīng)用上還存在什么體細(xì)胞核移植技術(shù)在研究和應(yīng)用上還存在什么問(wèn)題？請(qǐng)你查閱資料，了解這方面的前沿動(dòng)態(tài)。問(wèn)題？請(qǐng)你查閱資料，了解這方面的前沿動(dòng)態(tài)。研究方面：克隆動(dòng)物基因組重新編程的機(jī)制研究方面：克隆動(dòng)物基因組重新編程的機(jī)制尚不清楚，克隆技術(shù)效率低，克隆動(dòng)物畸形尚不清楚，克隆技術(shù)效率低，克隆動(dòng)物畸形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問(wèn)題。這些率高

18、、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問(wèn)題。這些問(wèn)題尚在研究中。問(wèn)題尚在研究中。應(yīng)用上：生產(chǎn)克隆動(dòng)物費(fèi)用昂貴，距大規(guī)模應(yīng)用上：生產(chǎn)克隆動(dòng)物費(fèi)用昂貴，距大規(guī)模應(yīng)用還有一定距離。應(yīng)用還有一定距離。第27頁(yè)/共31頁(yè)知識(shí)拓展知識(shí)拓展1 1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是如何發(fā)展起來(lái)的？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是如何發(fā)展起來(lái)的？ 19071907年，哈里森（年，哈里森（HarrisonHarrison）在無(wú)菌條件下用淋巴液作培養(yǎng)基，培）在無(wú)菌條件下用淋巴液作培養(yǎng)基，培養(yǎng)蛙胚神經(jīng)組織存活數(shù)周，并觀察到神經(jīng)細(xì)胞突起的生長(zhǎng)過(guò)程，由養(yǎng)蛙胚神經(jīng)組織存活數(shù)周，并觀察到神經(jīng)細(xì)胞突起的生長(zhǎng)過(guò)程，由此創(chuàng)建了蓋片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養(yǎng)法，奠定了動(dòng)物組織體外

19、培養(yǎng)此創(chuàng)建了蓋片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養(yǎng)法，奠定了動(dòng)物組織體外培養(yǎng)的基礎(chǔ)。之后，又有人將懸滴培養(yǎng)法改良為雙蓋片培養(yǎng)，提高了傳的基礎(chǔ)。之后，又有人將懸滴培養(yǎng)法改良為雙蓋片培養(yǎng)，提高了傳代效率并減少了污染。代效率并減少了污染。19231923年，卡雷爾（年，卡雷爾（CarrelCarrel）設(shè)計(jì)了卡氏瓶培）設(shè)計(jì)了卡氏瓶培養(yǎng)法，擴(kuò)大了組織生存空間。養(yǎng)法，擴(kuò)大了組織生存空間。 19511951年，年， 厄爾厄爾 （EarleEarle） 發(fā)明了發(fā)明了體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的人工合成培養(yǎng)基。體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的人工合成培養(yǎng)基。19511951年，波米拉（年，波米拉（PomeratPomerat）設(shè)計(jì)了灌流小室，使細(xì)

20、胞生活在不斷更新的培養(yǎng)液中，便于作顯微設(shè)計(jì)了灌流小室，使細(xì)胞生活在不斷更新的培養(yǎng)液中，便于作顯微攝影和細(xì)胞代謝的研究。攝影和細(xì)胞代謝的研究。19571957年，格拉夫（年，格拉夫（GraffGraff）用灌流技術(shù)進(jìn)）用灌流技術(shù)進(jìn)一步提高了細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的效率。一步提高了細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的效率。19571957年，杜爾貝科（年，杜爾貝科（DulbeccoDulbecco）等人采用胰蛋白酶消化處理和應(yīng)用液體培養(yǎng)基的方法，獲得了單層等人采用胰蛋白酶消化處理和應(yīng)用液體培養(yǎng)基的方法，獲得了單層細(xì)胞培養(yǎng)。單層培養(yǎng)法的出現(xiàn)，對(duì)組織培養(yǎng)的發(fā)展起了很大的推動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)。單層培養(yǎng)法的出現(xiàn)，對(duì)組織培養(yǎng)的發(fā)展起了很大的推動(dòng)作

21、用。此后單層培養(yǎng)成為組織培養(yǎng)普遍應(yīng)用的技術(shù)。作用。此后單層培養(yǎng)成為組織培養(yǎng)普遍應(yīng)用的技術(shù)。2020世紀(jì)世紀(jì)6060年代年代后，動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)開(kāi)始起步，并逐步發(fā)展。后，動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)開(kāi)始起步，并逐步發(fā)展。2020世紀(jì)世紀(jì)8080年年代后，隨著基因工程和其他細(xì)胞工程技術(shù)的發(fā)展，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)已代后，隨著基因工程和其他細(xì)胞工程技術(shù)的發(fā)展，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)已成為轉(zhuǎn)基因技術(shù)、生物制藥及其他許多技術(shù)的基礎(chǔ)，在現(xiàn)代生物技成為轉(zhuǎn)基因技術(shù)、生物制藥及其他許多技術(shù)的基礎(chǔ)，在現(xiàn)代生物技術(shù)中發(fā)揮著重要的作用。術(shù)中發(fā)揮著重要的作用。第28頁(yè)/共31頁(yè)知識(shí)拓展知識(shí)拓展2 2.為什么動(dòng)物細(xì)胞要分散成單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)？

22、用酶消化的為什么動(dòng)物細(xì)胞要分散成單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)？用酶消化的是什么物質(zhì)？是什么物質(zhì)？ 細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)可以分散成單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)，也可以用細(xì)胞細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)可以分散成單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)，也可以用細(xì)胞群（團(tuán)）、組織塊培養(yǎng)，經(jīng)傳代培養(yǎng)后，最終都為細(xì)胞培群（團(tuán)）、組織塊培養(yǎng)，經(jīng)傳代培養(yǎng)后，最終都為細(xì)胞培養(yǎng)。養(yǎng)。分散成單個(gè)細(xì)胞、細(xì)胞群（團(tuán)）后容易培養(yǎng)，細(xì)胞所需的分散成單個(gè)細(xì)胞、細(xì)胞群（團(tuán)）后容易培養(yǎng)，細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)容易供應(yīng)，其代謝廢物容易排出；而用大塊組織培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)容易供應(yīng)，其代謝廢物容易排出；而用大塊組織培養(yǎng)時(shí)，內(nèi)部細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)和代謝廢物的排出都較困難，因時(shí)，內(nèi)部細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)和代謝廢物的排出都較困難，因此，這些細(xì)

23、胞在體外長(zhǎng)時(shí)間的生存和生長(zhǎng)就較困難。同時(shí)，此，這些細(xì)胞在體外長(zhǎng)時(shí)間的生存和生長(zhǎng)就較困難。同時(shí)，分散成單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)，可使得在細(xì)胞水平操作的其他技術(shù)分散成單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)，可使得在細(xì)胞水平操作的其他技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)。得以實(shí)現(xiàn)。用酶消化的是細(xì)胞間基質(zhì)，細(xì)胞間基質(zhì)主要成分有膠原蛋用酶消化的是細(xì)胞間基質(zhì)，細(xì)胞間基質(zhì)主要成分有膠原蛋白、層粘連蛋白、纖粘連蛋白、彈性蛋白等成分。用蛋白白、層粘連蛋白、纖粘連蛋白、彈性蛋白等成分。用蛋白酶可使其消化，從而使細(xì)胞相互分離。酶可使其消化，從而使細(xì)胞相互分離。第29頁(yè)/共31頁(yè)知識(shí)拓展知識(shí)拓展3 3.體細(xì)胞核移植技術(shù)為什么要選擇體細(xì)胞核移植技術(shù)為什么要選擇MM期的卵母細(xì)期的卵母細(xì)胞做受體細(xì)胞？胞做受體細(xì)胞？ 細(xì)胞核移植技術(shù)中能用作受體細(xì)胞的通常有細(xì)胞核移植技術(shù)中能用作受體細(xì)胞的通常有MM期卵母細(xì)胞期卵母細(xì)胞和受精卵（合子）。早期核移植技術(shù)中常用受精卵，后來(lái)和受精卵（合子）。早期核移植技術(shù)中常用受精卵，后來(lái)基本上用基本上用MM期卵母細(xì)胞取代了受精卵，主要因?yàn)?/p>