超全實驗室試劑配制資料

1、一、實驗室常用試劑、緩沖液的配制方法1、1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)組份濃度 1 M Tris-HCl配制量 1L配制方法 1.稱量121.1 g Tris置于l L燒杯中。 2.加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3.按下表加入濃HCl量調節(jié)所需要的pH值。pH值濃HCl7.4約70 ml7.6約60 ml8.0約42ml4.將溶液定容至1 L。5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高l，溶液的pH值大約降低0.03個單位。2、1.5 M Tris-HCl (pH8.8

2、) 組份濃度 1.5 MTris-HCl配制量 1 L配制方法 1.稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。 2.加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3.用濃HCl調節(jié)pH值至8.8。 4.將溶液定容至1 L。 5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高l，溶液的pH值大約降低0.03個單位。3、1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6，8.0) 組份濃度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1.量取下列溶液，置于l L燒杯中。1

3、M Tris-HCl Buffer(pH7.4，7.6，8.0)100 ml500 mM EDTA(pH8.0)20 ml 2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，均勻混合。 3.將溶液定容至1 L后，高溫高壓滅菌。 4.室溫保存。4、3 M醋酸鈉(pH5.2) 組份濃度 3 M醋酸鈉 配制量 100 ml 配制方法 1.稱量40.8 g NaOAc·3H2O置于100200 ml燒杯中，加入約40 ml的去離子水攪拌溶解。 2.加入冰醋酸調節(jié)pH值至5.2。 3.加去離子水將溶液定容至100 ml。 4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。5、PBS Buffer 組份濃度 137 mM

4、NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 配制量 1 L 配制方法 1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。NaCl 8 gKCl 0.2 gNa2HPO41.42 gKH2PO40.27 g 2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3.滴加濃HCl將pH值調節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。 4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBS Buffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6、10 M醋酸銨 組份濃度 10 M醋酸銨配制量 100 ml配制方法 1.稱量77.

5、1 g醋酸銨置于100200 ml燒杯中，加入約30 ml的去離子水攪拌溶解。 2.加去離子水將溶液定容至100 ml。 3.使用0.22 µm濾膜過濾除菌。4.密封瓶，室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7、Tris-HCl平衡苯酚 配制方法 1.使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應避免使用。同時也應避免使用結晶苯酚，結晶苯酚必須，160對其進行重蒸餾除去諸如醌等氧化產物，這些氧化產物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或導致RNA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質量對DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦

6、使用高質量的苯酚進行分子生物學實驗。 2.操作注意：苯酚腐蝕性極強，并可引起嚴重灼傷，操作時應戴手套及防護鏡等。所有操作均應在通風櫥中進行，與苯酚接觸過的皮膚部位應用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。 3.苯酚平衡：因為在酸性pH條件下DNA分配于有機相，因此使用苯酚前必須對苯酚進行平衡使其pH值達到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚應貯存于-20，此時的苯酚呈結晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達到室溫，然后在68水浴中使苯酚充分融解。 加入羥基喹啉(8-Qulnollnol)至終濃度0.1%。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時

7、因其呈黃色，有助于方便識別有機相。 加入等體積的1 M Tris-HCl(pH8.0)，使用磁力攪拌器攪拌l5min，靜置使其充分分層后，除去上層水相。 重復操作步驟。 加入等體積的0.1 M Tris-HCl(pH8.0)。使用磁力攪拌器攪拌l5min，靜置使其充分分層后，除去上層水相。 重復操作步驟，稍微殘留部分上層水相。 使用pH試紙確認有機相的pH值大于7.8。 將苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。8、苯酚/氯仿/異戊醇 配制方法 l.說明：從核酸樣品中除去蛋白質時常常使用苯酚，氯仿/異戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白質變性并有助于液相與有機相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出

8、現(xiàn)的氣泡。 2.配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24:1)混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4保存。9、10%(W/V)SDS 組份濃度 10%(W/V)SDS配制量 100 ml配制方法 1.稱量10 g高純度的SDS置于100200 ml燒杯中，加入約80 ml的去離子水，68加熱溶解。 2.滴加濃HCl調節(jié)pH值至7.2。 3.將溶液定容至100 ml后，室溫保存。10、2 N NaOH 組份濃度 2 N NaOH配制量 100 ml配制方法 1.量取80 ml去離子水置于100200 ml塑料燒杯中(NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂)。 2.稱取8

9、 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。 3.待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液定容至100 ml。 4.將溶液轉移至塑料容器中后，室溫保存。11、2.5 N HCl 組份濃度 2.5 N HCl配制量 100 ml配制方法 1.在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃HCl(11.6 N)，均勻混合。 2.室溫保存。12、5 M NaCl 組份濃度 5 M NaCl配制量 1 L配制方法 1.稱量292.2 g NaCl置于1 L燒杯中，加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。 2加去離子水將溶液定容至1 L后，適量分成小份。 3.高溫高壓滅菌后，4保存。13、20%

10、(W/V)Glucose(葡萄糖)組份濃度 20%(W/V)Glucose配制量 100 ml 配制方法 1.稱取20 g Glucose置于100200 ml燒杯中，加入約80 ml的去離子水后。攪拌溶解。 2.加去離子水將溶液定容至l 00 ml。 3.高溫高壓滅菌后，4保存。14、Solution l (質粒提取用) 組份濃度 25 mM Tris-HCl(pH8.0)，10 mM EDTA，50 mM Glucose配制量 1 L配制方法 1.量取下列溶液，置于l L燒杯中。1 M Tris-HCl(pH8.0)25 m0.5 M EDTA(pH8.0)20 m20% Glucose(

11、1.11 M)45 mdH2O910 m 2.高溫高壓滅菌后，4保存。 3.使用前每50 ml的Solution l中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。15、Solution (質粒提取用)組份濃度 200 mM NaOH，1%(W/V)SDS配制量 500 ml配制方法 1.量取下列溶液，置于500 ml燒杯中。10%SDS50 ml2NNa0H50 ml 2.加滅菌水定容至500 ml，充分混勻。 3.室溫保存。此溶液保存時間最好不要超過一個月。注意：SDS易產生氣泡，不要劇烈攪拌。16、Sol ution (質粒提取用)組份濃度 3 M KOAc，5 M Ethanoic

12、 acid (乙酸)配制量 500 ml配制方法 1.稱量下列試劑，置于500 ml燒杯中。KOAc147gEthanoic acid57.5ml 2.加入300 ml去離子水后攪拌溶解。 3.加去離子水將溶液定容至500 ml。 4.高溫高壓滅菌后，4保存。17、0.5 M EDTA (pH8.0) 組份濃度 0.5 M EDTA配制量 1 L配制方法 1.稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L燒杯中。 2.加入約800 ml的去離子水，充分攪拌。 3.用NaOH調節(jié)pH值至8.0(約20gNaOH)。 注意：pH值至8.0時，EDTA才能完全溶解。 4加去離子水

13、將溶液定容至1 L。 5.適量分成小份后，高溫高壓滅菌。 6.室溫保存。18、1 M DTT 組份濃度 1 M DTT配制量 20 ml配制方法 1.稱取3.09 g DTT，加入到50 ml料離心管內。 2.加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2)，溶解后使用0 22 µm濾膜過濾除菌。 3.適量分成小份后，-20保存。19、10 mM ATP 組份濃度 10 mM ATP配制量 20 mL配制方法 1.稱取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料離心管內。 2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0)，攪拌溶解。 3.適量

14、分成小份后，-20保存。二、蛋白質電泳相關試劑、緩沖液的配制方法1、30%(W/V)Acrylamide(丙烯酰胺)組份濃度 30%(W/V)Acrylamide配制量 1 L配制方法 1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。Acrylamide290 gBIS(雙丙烯酰胺)10 g 2.向燒杯中加入約600 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3.加去離子水將溶液定容至l L，用0.45 µm濾膜濾去雜質。 4.于棕色瓶中4保存。注意：丙烯酰胺具有很強的神經(jīng)毒性，并可通過皮膚吸收，其作用具有積累性，配制時應戴手套等。聚丙烯酰胺無毒，但也應謹慎操作，因為有可能含有少量的未聚合成份。2、40%

15、(W/V)Acrylamide(丙烯酰胺) 組份濃度 40%(W/V)Acrylamide配制量 1 L配制方法 1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。Acrylamide380 gBIS20 g 2.向燒杯中加入約600 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3.加去離子水將溶液定容至l L，用0.45 µm濾膜濾去雜質。 4.于棕色瓶中4保存。注意：丙烯酰胺具有很強的神經(jīng)毒性，并可通過皮膚吸收，其作用具有積累性，配制時應戴手套等。聚丙烯酰胺無毒，但也應謹慎操作，因為有可能含有少量的未聚合成份。3、10%(W/V) AP (過硫酸銨)組份濃度 10%(W/V)AP配制量 10 ml配制方法

16、 1.稱取0.1 g AP，置于1.5 ml EP管。 2.加入1 ml的去離子水后攪拌溶解。 3.貯存于4。注意：1 0%過硫酸銨溶液在4保存時可使用2周左右，超過期限會失去催化作用。4、5×Tris-Glyclne Buffer (SDS-PAGE電泳緩沖液)組份濃度 0.125 M Tris，1.25 M Glyclne(甘氨酸)，0.5%(W/V)SDS配制量 1 L配制方法 1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。Tris15.1 gGlyclne94 gSDS5.0 g 2.加入約800 ml的去離子水，攪拌溶解。 3.加去離子水將溶液定容至1 L后，室溫保存。5、2

17、5;SDS -PAGE Loading Buffer組份濃度100 mMTris-HCl(pH6.8)100 mM-巰基乙醇(2-ME)4%(W/V)SDS0.2%(W/V)溴酚蘭(BPB)20%(V/V)甘油配制量 5 ml配制方法 1.量取下列試劑，置于10 ml塑料離心管中。0.25 M Tris-HCl(pH6.8)0.25 ml-巰基乙醇0.5 mlSDS0.2 g甘油1 ml1%溴酚蘭0.1 ml，2.加去離子水溶解后定容至5 ml。 3.小份(500 µl/份)分裝后，于室溫保存。 4.加入2-ME的Loading Buffer可在室溫下保存一個月左右6、5×

18、SDS-PAGE Loading Buffer250 mMTris-HCl(pH6.8)10%(W/V)SDS0.5%(W/V)BPB50%(V/V)甘油5%(W/V)2-ME組份濃度配制量 5 ml配制方法 1.量取下列試劑，置于10 ml塑料離心管中。1 M Tris-HCl(pH6.8)1.25 mlSDS0.5 gBPB25 mg甘油2.5 ml 2.加去離子水溶解后定容至5 ml。 3.小份(500 µl/份)分裝后，于室溫保存。 4.使用前將25 µl的2-ME加到每小份中。 5.加入2-ME的Loading Buffer可在室溫下保存一個月左右。7、考馬斯亮藍

19、R-250染色液組份濃度 0.1%(W/V)考馬斯亮藍R-250，25%(V/V)異丙醇，10%(V/V)冰醋酸配制量 1 L配制方法 1.稱取1 g考馬斯亮藍R-250，置于1 L燒杯中。 2.量取250 ml的異丙醇加入上述燒杯中，攪拌溶解。 3.加入100 ml的冰醋酸，攪拌均勻。 4.加入650 ml的去離子水，攪拌均勻。 5.用濾紙除去顆粒物質后，室溫保存。8、考馬斯亮藍染色脫色液 組份濃度 10%(V/V) Ethanoic acid，30%(V/V)乙醇 配制量 1 L 配制方法 1.量取下列溶液，置于l L燒杯中。Ethanoic acid100 ml乙醇300 mldH2O6

20、00 ml 2.充分混合后使用。9、凝膠固定液(SDS-PAGE銀氨染色用) 組份濃度 50%(V/V)甲醇，10%(V/V) Ethanoic acid 配制量 100 ml配制方法 1.量取下列試劑，加入100200 ml的試劑瓶中。甲醇500 mlEthanoic acid100 mldH2O400 ml 2.均勻混合后室溫保存。10、凝膠處理液(SDS-PAGE銀氨染色用) 組份濃度 50%(V/V)甲醇，10%(V/V)戊二醛配制量 100 ml配制方法 1.量取下列試劑，加入100200 ml的試劑瓶中。甲醇50 ml戊二醛10 mldH2O40 ml 2.均勻混合后室溫保存。11

21、、顯影液 (SDS-PAGE銀氨染色用)組份濃度 0.005%(W/V)檸檬酸，0.02%(V/V)甲醛配制量 1 L配制方法 1.稱量下列試劑，置于l L試劑瓶中。檸檬酸50 mg甲醛0.2 ml 2.加入1 L去離子水后，搖動混合溶解。 3.室溫保存。三、核酸電泳相關試劑、緩沖液的配制方法1、50×TAE Buffer (pH8.5)組份濃度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.稱量下列試劑，置于1 L燒杯中。Tris242 gNa2EDTA·2H2O37.2 g 2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3.加入5

22、7.1 ml的乙酸，充分攪拌。 4.加去離子水將溶液定容至l L后，室溫保存。2、10×TBE Buffer (pH8.3) 組份濃度 890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 l.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。Tris108 gNa2EDTA·2H2O7.44 g硼酸55 g 2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3.加去離子水將溶液定容至l L后，室溫保存。3、10×MOPS(3-嗎啉基丙磺酸)Buffer 組份濃度 200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配

23、制方法 1.稱41.8 g MOPS，置于1 L燒杯中。 2.加約700 ml DEPC處理水，攪拌溶解。 3.使用2 N NaOH調節(jié)pH值至7.0。 4.再向溶液中加入下列試劑。1 M NaOAc(DEPC處理)20 ml0.5 M EDTA(pH8.0)(DEPC處理)20 ml 5.用DEPC處理水將溶液定容至1 L。 6.用0.45 m濾膜過濾除去雜質。 7.室溫避光保存。注：溶液見光或高溫滅菌后會變黃。變黃時也可使用，但變黑時不要使用。4、溴乙錠 (10 mg/ml)組份濃度 10 mg/ml溴乙錠配制量 100 ml配制方法 1.稱量1 g溴乙錠，加入到100 ml容器中。 2.

24、加入去離子水100 ml，充分攪拌數(shù)h完全溶解溴乙錠。 3.將溶液轉移至棕色瓶中，室溫避光保存。 4.溴乙錠的工作濃度為0.5 g/ml。注意：溴乙錠是一種致癌物質，必須小心操作。5、Agarose凝膠 配制方法 1.配制適量的電泳及制膠用的緩沖液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。 2.根椐制膠量及凝膠濃度，準確稱量瓊脂糖粉，加入適當?shù)腻F形瓶中。 3.加入一定量的電泳緩沖液(總液體量不宜超過錐形瓶的50%容量)。 注：用于電泳的緩沖液和用于制膠的緩沖液必須統(tǒng)一。 4.在錐形瓶的瓶封上保鮮膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波爐中加熱熔化瓊脂糖。加熱過程中，當溶液沸騰后，請戴上

25、防熱手套。小心搖動錐形瓶。使瓊脂糖充分均勻熔化。此操作重復數(shù)次，直至瓊脂糖完全熔化。必須注意，在微波爐中加熱時間不宜過長，每次當溶液起泡沸騰時停止加熱，否則會引起溶液過熱暴沸，造成瓊脂糖凝膠濃度不準，也會損壞微波爐。熔化瓊脂糖時，必須保證瓊脂糖充分完全熔化，否則，會造成電泳圖像模糊不清。 5.使溶液冷卻至60左右，如需要可在此時加入溴乙錠溶液(終濃度0.5 µg/ml)。并充分混勻。 注：溴乙錠是一種致癌物質。使用含有溴乙錠的溶液時，請戴好手套。 6.將瓊脂糖溶液倒入制膠模中，然后在適當位置處插上梳子。凝膠厚度 一般在35 min之間。 7.在室溫下使膠凝固(大約30 min1 h)

26、，然后放置于電泳槽中進行電泳。 注：凝膠不立即使用時，請用保鮮膜將凝膠包好后在4下保存，一 般可保存25天。6、 瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的最佳分辨范圍瓊脂糖濃度最佳線形DNA分辨范圍(bp) 0.5% 0.7% 1.0% 1.2% 1.5% 2.0% 1,00030,000 80012,000 50010,000 4007,000 2003,000 502,0007、 6 × Loading Buffer(DNA電泳用) 組份濃度30 mMEDTA36%(V/V)Glycerol0.05%(W/V)Xylene Cyanol FF0.05%(W/V)Bromophenol Blu

27、e 配制量 500 ml 配制方法 1.稱量下列試劑，置于500 ml燒杯中。EDTA4.4gBromophenol Blue250 mgXylene Cyanol FF250 mg 2.向燒杯中加入約200 ml的去離子水后，加熱攪拌充分溶解。 3.加入180 ml的甘油(Glycerol)后，使用2 N NaOH調節(jié)pH值至7.0。 4.用去離子水定容至500 ml后，室溫保存。8、10 × Loadlng Buffer (RNA電泳用)組份濃度10 mMEDTA50%(V/V)Glycerol0.25%(W/V)Xylene Cyanol FF0.25%(W/V)Bromoph

28、enol Blue配制置 10 ml配制方法 1.稱量下列試劑，置于10 ml離心管中。0.5 M EDTA(pH8.0)200 µlBromophenol Blue25 mgXylene Cyanol FF25 mg 2.向離心管中加入約4 ml的DEPC處理水后，充分攪拌溶解。 3.加入5 ml的甘油(Glycerol)后，充分混勻。 4.用DEPC處理水定容至10 ml后，室溫保存。四、核酸、蛋白質雜交用相關試劑、緩沖液的配制方法1、20×SSC 組份濃度 3.0 M NaCl，0.3 M Na3citrate·2H2O(檸檬酸鈉)配制量 1 L配制方法 1

29、.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。NaCl175.3 gNa3citrate·2H2O88.2 g 2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3滴加14 N HCl，調節(jié)pH值至7.0后，加去離子水將溶液定容至1 L。 4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。2、20×SSPE Buffer 組份濃度 3.0 M NaCl，0.2 M NaH2PO4，0.02 M EDTA配制量 1.L配制方法 1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。NaCl175.3 gNaH2PO4·H2O27.6 gNa2EDTA·2H2O7.4 g 2.向燒杯中加入約800

30、ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3.加NaOH調節(jié)pH值至7.4(約6.5 ml的10 N NaOH)。 4.加去離子水將溶液定容至l L。 5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。3、50 X DenhardtS溶液 1%(W/V)Ficoll 400(菲可400/水溶性聚蔗糖400)1%(W/V)Polyvinylpyrrolidone(聚維酮/聚乙烯吡咯烷酮)1%(W/V)BSA組份濃度配制量 500 ml配制方法 1.稱量下列試劑，置于500 ml燒杯中。Flcoll 4005 gPoLyvlnylpyrrolldone5 gBSA5 g 2.加去離子水約400 ml，充分攪拌溶解 3.加去離子

31、水將溶液定容至500 ml。 4.用0.45µm濾膜過濾后，分裝成每份25 ml。 5.-20保存。4、0.5 M磷酸鹽Buffer 組份濃度 0.5 M Na2HPO4。 配制量 l L 配制方法 1.稱量134 g Na2HPO4·7H2O置于l L燒杯中。 2.加入約800 ml的去離子水充分攪拌溶解。 3.加入85%的H3PO4(濃磷酸)調節(jié)溶液pH值至7.2。 4.加去離子水定容至1 L。 5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。5、Salmon DNA (鮭魚精DNA) 組份濃度 10 mg/ml Salmon DNA配制量 約100 ml配制方法 1.稱取鮭魚精DNA

32、2 g置于500 ml燒杯中，加入約200 ml的TE Buffer。 2用磁力攪拌器室溫攪拌24 h，溶解后加入4 ml的5 M NaCl，使其終濃度為0.1 M。 3.用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。 4.回收水相溶液后，使用17號皮下注射針頭快速吸打溶液約20次，以切斷DNA。 5.加入2倍體積的預冷乙醇進行乙醇沉淀。 6.離心回收DNA，溶解于100 ml去離子水中。測定溶液的OD260值。 7.計算溶液的DNA濃度后，稀釋DNA溶液至10 mg/ml。 8.煮沸10min后，分裝成小份(1 ml/份)。-20保存。 9.使用前在沸水浴中加熱5min后，迅速冰浴冷卻。6、DNA變性緩沖液

33、 組份濃度 1.5 M NaCl，0.5 M NaOH 配制量 1 L 配制方法 1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。NaCl87.7 gNaOH20 g 2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3.加去離子水將溶液定容至l L后，室溫保存。7、預雜交液/雜交液 (DNA雜交用) 組份濃度6×SSC(或SSPE)5×Denhardts0.5%(W/V)SDS100 µg/mlSalmon DNA 配制置 100 ml配制方法 1.稱量下列試劑，置于200 ml燒杯中。20×SSC(或SSPE)30 ml50×Denhardts

34、10 ml10% SDS 5 ml10 mg/ml Salmon DNA1 mldH2O54 ml2.充分混勻后，使用0.45 µm濾膜濾去雜質后使用。8、膜轉移緩沖液(Western雜交用) 組份濃度 39 mM Glycine，48 mM Tris，0.037%(W/V)SDS，20%(V/V)甲醇配制量 1 L配制方法 1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。Glycine2.9 gTris5.8 gSDS0.37 g 2.向燒杯中加入約600 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3.加去離子水將溶液定溶至800 ml后，加入200 ml的甲醇。 4.室溫保存。9、TBST Buffe

35、r(Western雜交膜清洗液) 組份濃度 20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，0.05%(V/V)Tween 20配制量 1 L配制方法 1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。NaCl8.8 g1 M Tris-HCl(pH8.0)20 ml 2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3.加入0.5 ml Tween 20后充分混勻。 4.加去離子水將溶液定容至l L后，4保存。10、封閉緩沖液(Western雜交用)組份濃度 5%(W/V)脫脂奶粉/TBST Buffer配制量 100 ml配制方法 1.稱5 g脫脂奶粉加入到100 ml TBST Buff

36、er中，充分攪拌溶解。 2.4保存待用(本封閉液應該現(xiàn)配現(xiàn)用)。11、預雜交液/雜交液(RNA雜交用)6×SSC(或SSPE)5×Denhardts0.5%(W/V)SDS100 g/mlSalmon DNA50%(V/V)Formamlde組份濃度配制量 100 mL配制方法 1.稱量下列試劑，置于200 ml燒杯中。20×SSC(或SSPE)30 ml50×Denhardts10 ml10% SDS5 ml10 mg/ml Salmon DNA1 mlFormamide(甲酰胺)50 mldH2O4 ml2.充分混勻后，使用0.45µm濾膜

37、濾去雜質后使用。五、分子生物學實驗常用培養(yǎng)基的配制方法1、Ampicillin（100mg/ml） 組份濃度 100mg/ml Ampicillin 配制量 50mL 配置方法 1. 稱量5g Ampicillin置于50mL離心管中。 2. 加入40mL滅菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22m濾膜過濾除菌。 4. 小份分裝（1mL/份）后，-20保存。 2、IPTG （24mg/mL） 組份濃度 24mg/mL IPTG 配制量 50mL 配置方法 1. 稱量1.2g IPTG置于50mL離心管中。 2. 加入40mL滅菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.

38、22m濾膜過濾除菌。 4. 小份分裝（1mL/份）后，-20保存。 3、X- Gal （20mg/mL） 組份濃度 20mg/mL X- Gal 配制量 50mL 配置方法 1. 稱取1g X-Gal置于50mL離心管中。 2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 小份分裝（1mL/份）后，-20保存。 4、LB培養(yǎng)基 組份濃度 1（W/V）Tryptone，0.5（W/V）Yeast Extract，1（W/V）NaCl 配制量 1L 配置方法 1. 稱量下列試劑，置于1L燒杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl

39、10g 2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（約0.2mL），調節(jié)pH值至7.0。 4. 高溫高壓滅菌后，4保存。 5、LB/Amp培養(yǎng)基 組份濃度1（W/V）Tryptone；0.5（W/V）Yeast Extract；1（W/V）NaCl；0.1mg/mL Ampi 配制量 1L 配置方法 1. 稱量下列試劑，置于1L燒杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（約0.2mL），調節(jié)pH值至7.0。 4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。

40、5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至室溫。 6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均勻混合。 7. 4保存。 6、TB培養(yǎng)基 組份濃度 1.2（W/V）Tryptone；2.4（W/V）Yeast Extract；0.4（V/V）Glycerol； 17mM KH2PO4；72mM K2HPO4 配制量 1L 配置方法 1. 配制磷酸鹽緩沖液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。 2.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。

41、4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。 5. 待溶液冷卻至60以下時，加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液。 6. 4保存。 7、TB/Apm培養(yǎng)基 組份濃度 1.2（W/V）Tryptone；2.4（W/V）Yeast Extract； 0.4（V/V）Glycerol； 17mM KH2PO4； 72mM K2HPO4；0.1mg/mL Ampicillin 配制量 1L 配置方法 1. 配制磷酸鹽緩沖液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。溶解2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至1

42、00mL，高溫高壓滅菌。 2. 稱取下列試劑，置于1L燒杯中。 Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。 4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。 5. 待溶液冷卻至60以下時，加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液和1mL Ampicillin（100mg/mL）。 6. 均勻混合后4保存。 8、SOB培養(yǎng)基 組份濃度 2（W/V）Tryptone； 0.5（W/V）Yeast Extract； 0.05（W /V） NaCl；2.5mM KCl； 10mM MgCl2 配制量 1L 配

43、置方法 1. 配制250mM KCl溶液。 在90mL的去離子水中溶解1.86g KCl后，定容至100mL。 2. 配制2M MgCl2溶液。在90mL的去離子水中溶解19g MgCl2后，定容至100mL，高溫高壓滅菌。 3. 稱取下列試劑，置于1L燒杯中。 Tryptone 20g Yeast Extract 5g NaCl 0.5g 4. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。 5 量取10mL 250 mM KCl溶液，加入到燒杯中。 6. 滴加5N NaOH溶液（約0.2mL），調節(jié)pH值至7.0。 7. 加入去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。 8. 高溫高壓滅菌后，4保存。 9.

44、使用前加入5mL滅菌的2M MgCl2溶液。 9、SOC培養(yǎng)基 組份濃度 2（W/V）Tryptone；0.5（W/VYeast Extract； 0.05（W /V）NaCl ；2.5mM KCl；10mM MgCl2； 20mM葡萄糖 配制量 100mL 配置方法1. 配制1M葡萄糖溶液。將18g葡萄糖溶于90mL去離子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22m濾膜過濾除菌。 2. 向100mL SOB培養(yǎng)基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均勻混合。 3. 4保存。 10、2×YT培養(yǎng)基 組份濃度 1.6（W/V）Tryptone， 1（W/V）Yeast Extract，

45、0.5（W/V）NaCl 配制量 1L 配置方法 1.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。 Tryptone 16g Yeast Extract 10g NaCl 5g 2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。 3. 滴加1N KOH，調節(jié)pH值至7.0。 4. .加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。 5. 高溫高壓后，4保存。 11、b×broth培養(yǎng)基 組份濃度 2（W/V）Tryptone， 0.5（W/V）Yeast Extract，0.5（W/V）MgSO47H2O 配制量 1L 配置方法 1.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。 Tryptone 20g Yeast Extract 5g MgSO47H2O 5g 2. 加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。3. 滴加1N KOH，調節(jié)pH值至7.5。 4. .加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。 5. 高溫高壓后，4保存。 12、NZCYM培養(yǎng)基 組份濃度 0.5（W/