初研克隆在癌癥治療中的運用

1、初研克隆在癌癥治療中的運用1腫瘤細胞中c-flip的過表達在一系列癌癥，如結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、黑色素瘤、卵巢癌、前列腺癌中表達較高。在大多數(shù)情況下，c-flipl在惡性腫瘤中表達增加;另有研究表明c-flips表達也上調(diào)，如在胃癌snu-216細胞和胰腺癌中c-flips表達上調(diào)。c-flip的過表達可增加拮抗fas、tail介導的細胞凋亡。研究證實，在某些組織中c-flip的高表達水平還與腫瘤的遷徙有關(guān)。在結(jié)腸癌、宮頸癌、伯基特淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和膀胱癌中，c-flip的表達水平升高與不良預后有關(guān)。c-flip異構(gòu)體在腫瘤細胞中過表達，其表達水平不僅與死亡受體靶向的治療有關(guān)，還與傳統(tǒng)治

2、療有關(guān)，因為c-flip抑制抗癌藥物誘導的細胞凋亡。2c-flip的作用在外部凋亡通路中，c-flip募集到disc中可以抑制caspase-8前體的二聚化和活性，從而抑制凋亡事件的發(fā)生。c-flipl與caspase-8前體可以形成一個異源二聚體，c-flipl與caspase-8前體的異源二聚化，可以誘導caspase-8的活性。復合體中caspase-8的有限激活可以產(chǎn)生p43-c-flip和p41/p43-caspase-8亞單元，然而由于c-flipl缺乏蛋白酶水解活性，進一步的切割不能發(fā)生，切割的產(chǎn)物繼續(xù)與disc結(jié)合，阻止凋亡信號的進一步轉(zhuǎn)導。盡管如此，活化的caspase-8能

3、夠接近部分底物，如ip。ip在細胞膜上不同的切割，可以導致由fas配體激活c-flipl和c-flips對下游信號通路中c-fos或者nf-b的不同調(diào)節(jié)。3c-flip的轉(zhuǎn)錄表達調(diào)節(jié)越來越多的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子被發(fā)現(xiàn)結(jié)合在c-flip的啟動子上，轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子對c-flip異構(gòu)體的不同調(diào)節(jié)，可能是以一種細胞依賴的方式，在特定刺激條件下決定細胞的命運。實驗證明，調(diào)控c-flip的轉(zhuǎn)錄因子有nf-b、p53、p63、foxo3a、eg1、a、sp1、e2f1、c-myc、if5、c-fos、nfatc2和hnnpk。nf-b、p53、p63、nfat、eg1、hnnpk、a和sp1誘導c-flip的表達;

4、而c-myc、foxo3a、c-fos、if5和sp3抑制c-flip的轉(zhuǎn)錄。許多信號通路通過激活這些轉(zhuǎn)錄因子來調(diào)控c-flip，其中涉及到tnf配體、生長因子、白介素、趨化因子、dna損傷試劑或者非傳統(tǒng)的化療試劑。tnf-和cd40配體可激活nf-b，導致c-flip表達上調(diào)從而抑制fas、tnf1和tail受體介導的細胞凋亡。另外pi3k、akt、mapk信號通路的激活或者生長因子刺激，也可以誘導c-flip的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)。趨化因子il-8在前列腺癌細胞系中，通過激活nf-b和雄性激素依賴的轉(zhuǎn)錄方式而增加c-flips和c-flipl的mna水平。干擾素-介導的的激活與pma或者tail誘

5、導的c-fos的激活可抑制c-flip的表達。c-flip異構(gòu)體的調(diào)節(jié)機制現(xiàn)在還不完全清楚，可能依賴于轉(zhuǎn)錄因子或者激活的信號通路，還可能依賴于特定的細胞系。在肺癌中，e2f1可抑制c-flips而不是c-flipl的表達;在活性t-細胞中c-flips的表達上調(diào)特別依賴于nfatc2;cd40介導的c-flip的表達上調(diào)可抑制fas誘導的細胞凋亡。盡管c-flipl和c-flips都受nf-b調(diào)節(jié)，但在紅白血病細胞系tf-1中，c-flip的表達是以不依賴于nf-b的方式被tnf激活所誘導。在hacat細胞系中用nai篩選p63靶標發(fā)現(xiàn)，同一種轉(zhuǎn)錄因子對不同c-flip異構(gòu)體的調(diào)節(jié)可能不同。p

6、63可能專門誘導c-flip的表達，而抑制c-flip并不影響c-flipl表達水平。因此，有必要在不同細胞中研究c-flip異構(gòu)體的表達調(diào)控機制。3.1pkc/nf-b信號通路對c-flip的調(diào)節(jié)nf-b是真核細胞的轉(zhuǎn)錄因子，幾乎存在于所有的細胞中。在有害刺激(如病毒、脂多糖、佛波酯及dsna)等作用下，pkc活化并激活nf-b轉(zhuǎn)位到細胞核，與多種細胞因子、應激相關(guān)等基因啟動子和增強子上的b序列特異結(jié)合，促進細胞因子的過表達和細胞在應激條件下的存活和生長。研究發(fā)現(xiàn)，pkc的活化可以增強c-flipmna的轉(zhuǎn)錄，誘導c-flip表達上調(diào);而nf-b活性的抑制則能抑制pkc誘導的c-flip的表

7、達上調(diào)。人t細胞白血病型病毒癌蛋白tax可以通過激活nf-b誘導c-flip的表達，抑制fas介導的細胞凋。nf-b抑制劑dhmeq可抑制cll細胞內(nèi)nf-b的活性誘導細胞凋亡，并伴隨nf-b依賴的抗凋亡基因，如c-iap、bfl-1、bcl-xl和c-flip等基因的表達下調(diào)。由此可見在上調(diào)c-flip表達的過程中，pkc/nf-b信號通路以及nf-b的活性起了至關(guān)重要的作用。3.2pi3k/akt信號通路對c-flip的調(diào)節(jié)pi3k/akt信號通路與細胞生長、增殖及癌變密切相關(guān)，是細胞內(nèi)一條重要的信號轉(zhuǎn)導通路。pi3k催化磷脂酰肌醇(pi)磷酸化生成pip3，在pip3存在的情況下，磷脂酰

8、肌醇依賴性激酶，pdk-1)能磷酸化akt/pkb并使之活化。在腫瘤細胞內(nèi)，pi3k通過akt的磷酸化可增強c-flipmna的轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)表達水平。pi3k抑制劑下調(diào)c-flip的表達，增強fas介導的hl-60細胞凋亡的敏感性。盡管在口腔磷狀上皮細胞癌(oscc)中，pi3k抑制劑waltman和ly294002不影響oscc細胞中fas的表達，卻能強烈抑制akt的磷酸化、顯著降低細胞內(nèi)c-flip的水平，促進fas介導的細胞凋亡。c-myc作為一個癌基因，在細胞增殖和細胞凋亡中具有雙重作用。pi3k/akt信號通路的激活可誘導c-myc的轉(zhuǎn)錄，而c-myc表達增加可使c-flip表達降低

9、，促進tail誘導的細胞凋亡。染色質(zhì)免疫沉淀及熒光標記分析顯示，c-myc結(jié)合并抑制了c-flip的啟動子，c-myc的表達增強了tail誘導的disc中caspase-8的活性，從而促進了c-flip的降解。在對tail敏感的細胞系中，c-myc的表達水平與細胞對tail的敏感性呈正相關(guān)。過表達c-myc或激活融合的myc-e(雌激素受體)，可增加tail耐受細胞對tail敏感性;如果用sina抑制c-myc活性，能顯著降低c-myc的表達和tail誘導的細胞凋亡。c-flip是c-myc的直接靶向作用蛋白，無論是在培養(yǎng)細胞還是在c-myc誘導腫瘤發(fā)生的小鼠動物模型中，過表達c-myc或者活

10、化myc-e都能降低c-flip的表達水平，而用sina抑制c-myc的活性則能增強c-flip的表達。另外，補體c5b-9復合物可以抑制凋亡蛋白caspase-8的活化以及對bid的切割，顯著提高c-flipl蛋白的表達水平。但是，pi3k抑制劑ly294002可逆轉(zhuǎn)c5b-9復合物的抗凋亡效應。綜上所述，pi3k/akt信號通路對c-flip的表達調(diào)控具有很重要的作用。3.3轉(zhuǎn)錄因子e2f1對c-flip的調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子e2f1是在細胞周期s期及細胞凋亡過程中起作用的轉(zhuǎn)錄因子。研究發(fā)現(xiàn)，低水平表達e2f1的肺癌細胞中，c-flips特異性過表達;在不同的肺癌細胞系中，e2f1可以通過下調(diào)c-

11、flips并激活死亡誘導信號復合體disc中caspase-8，誘導細胞凋亡。e2f1可促進fas和tail介導的腫瘤細胞凋亡，增強t淋巴細胞抗腫瘤的細胞毒效應。在原發(fā)性肺癌細胞中低水平的e2f1可能是促成細胞癌變的一個重要因素，其表達水平的下調(diào)將促成腫瘤細胞的免疫逃逸。因此，在死亡受體介導的細胞凋亡通路中，e2f1是一個至關(guān)重要的細胞凋亡轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。3.4其他干細胞因子(scf)可增強c-flipmna的轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)表達，減弱ifn-誘導的細胞凋亡。研究認為，雄激素可以提供前列腺上皮細胞生存信號，前列腺中雄激素的去除會誘導細胞凋亡。在雄激素存在的情況下，雄激素受體被募集到c-flip基因的啟動子上，誘導c-flip基因的表達，研究表明在雄激素作用下，雄激素受體可以通過調(diào)節(jié)c-flip基因影響前列腺細胞的存活和凋亡。ta