Wyatt多角度激光光散射凝膠色譜聯(lián)用系統(tǒng)操作規(guī)程

1、Wyatt 多角度激光光散射凝膠色譜聯(lián)用系統(tǒng)操作規(guī)程（Wyatt GPC/SEC -MALS ）一 試驗(yàn)前準(zhǔn)備1 溶劑準(zhǔn)備水相體系準(zhǔn)備：超純水或配制其它鹽溶液 1L,并使用0.22um濾膜過濾（必須 含 0.02%NaN3 抑菌劑 ）。有機(jī)相體系準(zhǔn)備：HPLC級(jí)溶劑；建議使用0.22um濾膜過濾（進(jìn)口試劑視具 體情況而定）。2 樣品準(zhǔn)備濃度配制（定量環(huán) 100uL）：分子量 1000kda： 0.5 - 1mg/mL；分子量100kda： 1 - 2mg/mL； 分子量 10kda： 3 - 5mg/mL； 分子量 5kda： 5 - 10mg/mL。3 檢查儀器電路連接檢查儀器電源線是否連接

2、， 電源開關(guān)、 交換機(jī)（適用于信號(hào)連接通過 網(wǎng)線的情 形）是否打開。二 儀器系統(tǒng)開機(jī)及平衡操作1 分別依次打開泵、柱溫箱 （設(shè)定溫度 ）、進(jìn)樣系統(tǒng)（手動(dòng) /自動(dòng)進(jìn)樣器）、示差或 紫外檢測(cè)器、粘度檢測(cè)器、 多角度激光光散射檢測(cè)器電源及計(jì)算機(jī)。 待儀器正 常開機(jī)后，打開工作站 Astra 軟件。2開啟泵，使用超純水purge泵5min;關(guān)閉purge閥。沖洗系統(tǒng)。待系統(tǒng)平衡 完畢，使用最新配制的流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)。 （注：有機(jī)體系：直接使用流動(dòng)相沖 洗系統(tǒng)）3將其流速調(diào)至0.1mL/min （若接入粘度檢測(cè)器，必須待粘度檢測(cè)器進(jìn)入工作界 面才能開啟泵的流速，且 IP &DP 處于 purge

3、on）；若系統(tǒng)中未接入GPC/SEC柱，可直接將流速調(diào)至0.1 -1.0mL/min沖洗系統(tǒng)（無 粘度檢測(cè)器），示差檢測(cè)器purge閥必須處于Purge Or”狀態(tài)。若系統(tǒng)中已接入GPC/SEC柱，則必須以0.1ml/min的起始流速，每1 2分鐘提高0.1ml的速度，將流速調(diào)整至0.4 -0.5 mL/min，充分平衡系統(tǒng)；（注：為了使系統(tǒng)充分平衡，建議提前一天沖洗和平衡系統(tǒng)；第二天開始試驗(yàn) （水相系統(tǒng)）。對(duì)于有機(jī)相體系，一般平衡時(shí)間在 3 12h）。三 試驗(yàn)操作及數(shù)據(jù)采集與處理1 待系統(tǒng)充分平衡。逐步調(diào)整流速至試驗(yàn)流速；調(diào)節(jié)示差檢測(cè)器的Purge 閥處于處于“Purge Off犬'

4、態(tài)；待信號(hào)穩(wěn)定后，歸零（Zero）;粘度計(jì)（Visco Star）的 操作方法見附件。待基線穩(wěn)定。2 在 Astra 軟件中調(diào)用相應(yīng)的試驗(yàn)?zāi)０澹?推薦使用安裝工程師創(chuàng)建的Template/Method）;點(diǎn)擊 Experiment- Run （此時(shí)，軟件出現(xiàn)“ waiting for對(duì)話框”）；（注： 單針進(jìn)樣 調(diào)用模板的基本操作如下：File New -Experiment from Template/Method My Templates/methods 選擇相 應(yīng)試驗(yàn) Tempalte/method。自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣調(diào)用模板的基本操作如下：File -New -sample set Tem

5、plate/blank sequenee -My Templates/method; 選擇 相應(yīng)試驗(yàn) Template/method。）3 進(jìn)樣，并將進(jìn)樣閥由 load 轉(zhuǎn)至 inject 狀態(tài)。將已配制樣品， 通過進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣。（注：樣品必須使用0.22um或0.45膜過濾或離心處理。樣品盡可能使用流動(dòng) 相配制）。4 數(shù)據(jù)采集。一旦進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣。 Astra 軟件自動(dòng)開始采集數(shù)據(jù)；當(dāng)數(shù)據(jù)采集完 畢；軟件根據(jù)事先設(shè)定時(shí)間運(yùn)行至停止。 也可采用手動(dòng)停止的方式： Experiment -Stop。5 數(shù)據(jù)保存。待數(shù)據(jù)采集完畢。依次點(diǎn)擊 File -Save as. ；命名文件。6 數(shù)據(jù)處理。其流程

6、為：Baselines -peaks -dn/dc輸入（且 normalise） 查看 report。注：（若該Template/Method中，已使用 50kDa標(biāo)準(zhǔn)樣品（例如BSA、dextran） 在該體系下normalize，貝U不需要重復(fù)進(jìn)行該操作）7 查看 report。四 關(guān)機(jī)操作1關(guān)閉激光檢測(cè)器、紫外檢測(cè)器；調(diào)節(jié)示差檢測(cè)器、粘度檢測(cè)器purge閥處于“On” 狀態(tài)。充分沖洗系統(tǒng)；水相體系：使用流動(dòng)相充分沖洗系統(tǒng)；待系統(tǒng)處于平衡 狀態(tài)；逐步降低流速至零；流動(dòng)相更換為0.05%NaN3沖洗柱子至少50mL （ 根柱子），然后摘下柱子，擰堵頭，收起，備用；2系統(tǒng)保存液：使用超純水沖洗系統(tǒng)（一般3 -2h）。最后使用10 -）0%甲醇或乙 醇水溶液沖洗系統(tǒng)（不能沖洗GPC柱子）。3 關(guān)閉所有儀器電源開關(guān)。注意事項(xiàng)1 對(duì)于樣品處理、溶解要嚴(yán)格按照要求2 樣品和溶劑都要嚴(yán)格過濾3 示差結(jié)構(gòu)特殊，不要忘記