楊浦五角場(chǎng)恒高一對(duì)一土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

1、第3課時(shí) 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)目標(biāo)導(dǎo)讀1了解尿素的作用原理及能被細(xì)菌分解的原因。2. 理解并掌握篩選菌落和統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法及對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)方法。3. 掌握土壤微生物的取樣、稀釋、培養(yǎng)和觀察。4. 掌握尿素分解菌的鑒定方法。重難點(diǎn)擊1.研究培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用，進(jìn)行微生物數(shù)量的測(cè)定。2.能利用選擇培養(yǎng)基分離 細(xì)菌，運(yùn)用相關(guān)技術(shù)解決生產(chǎn)生活中有關(guān)微生物的計(jì)數(shù)問(wèn)題。一篩選微生物的研究思路n知識(shí)梳理夯實(shí)基礎(chǔ)突破要點(diǎn) 要把某種微生物和其他的微生物分廿，就要利用其代謝特點(diǎn)設(shè)計(jì)合適的培養(yǎng)基。1. 篩選菌株(1) 實(shí)例：dna多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)是一種在體外將少量dna大量復(fù)制的技術(shù)，此

2、項(xiàng)技術(shù)要求使 用耐高溫(93 °c左右)的dna聚合酶。1966年美國(guó)微生物學(xué)家布魯克在美國(guó)黃石國(guó)家公園的一個(gè)熱泉中發(fā)現(xiàn)了水生耐熱細(xì)菌tach從該細(xì) 菌中分離得到了耐高溫的帀qdna聚合酶。(2) 原因：因?yàn)闊崛獪囟?080 °c淘汰了絕大多數(shù)微生物，而使耐熱的 血細(xì)菌被篩選出來(lái)。(3) 啟示：尋找目的菌種吋要根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。(4) 實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、沮等)，同 時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。(5) 選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許貸定種類的微生物主長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生 長(zhǎng)的

3、培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。(6) 下面是本課題使用的培養(yǎng)基的配方，請(qǐng)分析：kh2po41.4 gna2hpo42.1 gmgso4-7h2o0.2 g葡萄糖lo.og尿素l.og瓊脂15.0 g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸鐳水定容到1 000 ml從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基,是由于加入了凝固劑瓊脂。從功能上看屬于選擇培養(yǎng)基,此培養(yǎng)基的氮源只有尿素,能利用尿素的微生物可分泌眠酶，因此 能在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，此培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。2. 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目的方法是稀釋涂布平板法。(1) 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 稀釋：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的個(gè)活菌

4、。 計(jì)數(shù)：一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。 統(tǒng)計(jì)：通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品屮大約含有多少活菌。為使結(jié)果接近真實(shí)值， 可將同一稀釋度加到三個(gè)或三個(gè)以上的平皿屮，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù)。(2) 活菌數(shù)的計(jì)算方法：每克樣品中的菌株數(shù)=(某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)三涂布平板時(shí) 所用的稀釋液的體積)x稀釋倍數(shù)。(3) 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尪?。一般以三個(gè)稀釋度中的第二個(gè)稀釋度所出現(xiàn)的平均菌落數(shù) 在50個(gè)左右為最好。(4) 統(tǒng)訃的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到 的只是一個(gè)菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)來(lái)表示。小

5、貼士顯微鏡直接計(jì)數(shù)也是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。(1) 原理：此法利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品 中微生物的數(shù)量，但不能區(qū)分細(xì)菌的死活。計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個(gè)特 定的面積1 mn?和高0.1 mm的計(jì)數(shù)室，在1 mm?的面積里又被劃分成25個(gè)(或16個(gè)) 中格，每個(gè)中格進(jìn)一步劃分成16個(gè)(或25個(gè))小格，計(jì)數(shù)室由400個(gè)小格組成。(2) 操作：將稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計(jì)數(shù)45個(gè)中格 中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再按公式求出每毫升樣品中所含的細(xì) 菌數(shù)。(3) 計(jì)數(shù)公式：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)=每小格平均細(xì)菌

6、數(shù)x400x10 000x稀釋倍數(shù)。(4) 缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)；需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度；個(gè) 體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察。亍疫置對(duì)照 (1)教材屮兩位同學(xué)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果屮，笫二位同學(xué)的結(jié)果接近真實(shí)值。實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)的操 作是第一位同學(xué)需設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)組;第二位同學(xué)統(tǒng)計(jì)的三個(gè)菌落數(shù)相差太大,說(shuō)明操作有誤,需重 新實(shí)驗(yàn)。(2) 設(shè)置對(duì)照的主要冃的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。設(shè)置對(duì)照的方法：空白對(duì)照：不給對(duì)照組任何處理因素；條件對(duì)照：給對(duì)照組施以部分實(shí)驗(yàn)因素, 但不是所要研究的處理因素；自身對(duì)照：對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組都在同一研究對(duì)象上進(jìn)行；相互對(duì)照:

7、 不單設(shè)對(duì)照組，而是幾個(gè)實(shí)驗(yàn)組相互對(duì)照。(3) 教材提供的案例中a同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能的解釋有兩種。一是由于土樣不同，二是 由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。如何設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)來(lái)確泄原因？答案 方案一：其他同學(xué)用與a同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與a同學(xué)一致，則證明a同學(xué) 操作無(wú)誤；如果結(jié)果不同，則證明a同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問(wèn)題。方案二：將a同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否 受到污染。通過(guò)這個(gè)事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說(shuō)服力，對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)置是必不可少的?！練w納提煉】1. 選擇培養(yǎng)基(1) 選擇培養(yǎng)基的含義：在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑

8、制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)需要的 微生物的生長(zhǎng)。目的是從眾多微生物中分離出所需要的微生物。(2) 常見的選擇培養(yǎng)基 加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。 無(wú)氮源培養(yǎng)基可以分離固氮微生物。石油是唯一碳源的培養(yǎng)基，可以分離能消除石油污染的微 生物。將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)，分離耐高溫的微生物。2. 用稀釋涂布平板法對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)的注意事項(xiàng)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置35個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取其平均 值。(2)統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的 只是一個(gè)菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌

9、落數(shù)而不是活菌數(shù)來(lái)表示?；顚W(xué)活用即時(shí)訓(xùn)練鞏固提升1. 在缺乏氮源的培養(yǎng)基上，大部分微生物無(wú)法生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入青芻素對(duì)以抑制細(xì)菌和放線菌 的生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基屮加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)。利用上述選擇培養(yǎng)基依次能從混雜 的微生物群體屮分離出()a. 乳酸菌、金黃色葡舖球菌、放線菌 b.固氮細(xì)菌、大腸桿菌、放線菌c.固氮細(xì)菌、霉菌、放線菌d.固氮細(xì)菌、金黃色葡萄球菌、放線菌問(wèn)題導(dǎo)析缺乏氮源的培養(yǎng)基，只有固氮菌能夠生長(zhǎng);加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng), 金黃色葡萄球菌、大腸桿菌都是細(xì)菌,不能生長(zhǎng)；培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌的生 長(zhǎng)，放線菌能夠生長(zhǎng)。解析 固氮細(xì)菌可以在

10、無(wú)氮培養(yǎng)基上生長(zhǎng)；青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng)，但不會(huì)抑制霉菌 的生長(zhǎng)；加入10%的酚的培養(yǎng)基可以抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)，但不會(huì)抑制放線菌的生長(zhǎng)。2. 用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)在某稀釋濃度下某同學(xué)做了若干個(gè)平板并統(tǒng)計(jì)每個(gè) 平板的菌落數(shù)，最接近樣品中菌體數(shù)真實(shí)值的是()a. 菌落數(shù)量最多的平板 b.菌落數(shù)量最少的平板c.菌落數(shù)量適中的平板 d.取若干個(gè)平板菌落數(shù)量的平均值問(wèn)題導(dǎo)析(1)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(2)為使結(jié)果接近真實(shí)值，需取多個(gè)平板培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù)。解析 用稀釋涂布平板法對(duì)樣品中活菌數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，只是一種估測(cè)，根據(jù)此方法的實(shí)驗(yàn)過(guò)

11、程可知, 在某一柿釋度下涂布的平板菌體數(shù)具有一定的偶然性，并不是絕對(duì)均勻，所以取若干個(gè)平板菌落數(shù) 量的平均值比較接近樣品中菌株數(shù)的真實(shí)值。二實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作n知識(shí)梳理夯實(shí)基礎(chǔ)突破要點(diǎn) 下面是土壤屮尿素分解菌的分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)流程示意圖，請(qǐng)結(jié)合教材提供的資料分析:i ml 1 ml 1 ml i ml i ml1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和操作提示步驟實(shí)驗(yàn)操作操作提示土壤取樣從酸堿度接近中性的潮濕土壤中取 樣。先鏟去表層土 3 cm左右，再取 樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中 取樣用的小鐵儼和盛土樣的信封 都要經(jīng)過(guò)滅菌； 土壤中的微生物主要分布在距地 表38 cm的近中性土壤中，約 70%90%為細(xì)菌制備培養(yǎng)基分

12、別配制牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基和尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基可以作為對(duì)照， 用來(lái)判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選 拯作用樣品的稀釋和涂布 稱hxio g 土樣加到盛有90 ml無(wú)菌 水的錐形瓶中，充分搖勻； 吸取上清液丄ml,轉(zhuǎn)移至盛有9 ml的生理鹽水的無(wú)菌大試管中，按 應(yīng)在火焰旁稱取土樣； 由于初次實(shí)驗(yàn)，對(duì)于稀釋的范圍沒(méi) 有把握，因此選擇了一個(gè)較為寬泛的 范圍lolo?倍的稀釋液：照上圖流程進(jìn)行樣品的稀釋；按照由107103稀釋度的順序分別 吸hzo.lml進(jìn)行平板涂布操作。按照 濃度從低到高的順序涂布平板，不必 更換移液管實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)所用的平板、試管作好 標(biāo)記。如培養(yǎng)皿要注明培養(yǎng)基類型

13、、 培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物等培養(yǎng)將涂布好的培養(yǎng)皿放在3037 °c溫 度下培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，會(huì) 有不同的菌落產(chǎn)生。比較牛肉膏蛋白 腺培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù) 量、形態(tài)等，并做好記錄在牛肉膏蛋白豚培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌 落數(shù)冃應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的 數(shù)目，才說(shuō)明選擇培養(yǎng)基有選捶作用計(jì)數(shù)當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在 30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀 釋度下，至少對(duì)工個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì) 數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所 對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的 數(shù)目 如果得到了 2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù) 目符合要求的平板，則說(shuō)明稀釋操作 比較成功； 如果同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的 菌落數(shù)相差較

14、大，表明實(shí)驗(yàn)不精確， 需要重新實(shí)驗(yàn)； 在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24 h統(tǒng)計(jì)一 次菌落數(shù)目o選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的 記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不 足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目2. 討論(1)為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？答案 原因：土壤中各類微生物的數(shù)量(單位：株/kg)是不同的，因此為獲得不同類型的微生物就 需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離。 稀釋度微生物細(xì)菌放線菌真菌稀釋度10 105> 10610 104、105102> 10 104 目的：保證獲得菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(2)不同的微生物培養(yǎng)的溫度和時(shí)間相同嗎？答案 培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。微生物

15、細(xì)菌放線菌霉菌培養(yǎng)溫度3037 °c25 28 °c25 28 °c培養(yǎng)天數(shù)12d57d34d3. 菌落特征：包括菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等。4. 菌種的鑒定挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含酚紅培養(yǎng)基的斜面中，由于細(xì)菌合成的碾酶分解尿素產(chǎn)牛 了氨，使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，ph上升，使指示劑變色，菌落周圍變紅。【歸納提煉】分離尿素分解菌操作中的注意事項(xiàng)(1) 在實(shí)驗(yàn)操作中，每個(gè)步驟都要注意無(wú)菌操作，以防培養(yǎng)基被污染，影響實(shí)驗(yàn)效果。(2) 樣品稀釋液的最佳濃度為獲得每個(gè)平板上有3030()個(gè)菌落，這個(gè)稀釋度細(xì)菌一般為1(/、10io'倍液，放線菌一般為

16、10 10 105倍液，真菌一般為10 10 10°倍液。為排除非測(cè)試因素(培養(yǎng)基)的干擾，實(shí)驗(yàn)需設(shè)置空白牛肉膏蛋白月東培養(yǎng)基進(jìn)行對(duì)照。(4) 每一稀釋倍數(shù)的菌液都至少要涂布3個(gè)平板，作為實(shí)驗(yàn)重復(fù)，求其平均值，若其中有菌落數(shù)與其 他實(shí)驗(yàn)差距懸殊的，需要對(duì)該平板重新制作。活學(xué)活用即時(shí)訓(xùn)練嘰固提升1下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是()a. 用蒸憾水配制牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板b. 取10 10 1()6倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.iml,分別涂布于各組平板上c. 將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37 °c恒溫培養(yǎng)2448小時(shí)d. 確定對(duì)

17、照組無(wú)菌后，選擇菌落數(shù)在3()0以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)問(wèn)題導(dǎo)析(1)設(shè)置不同稀釋度的土壤稀釋液,可以對(duì)照說(shuō)明稀釋倍數(shù)對(duì)細(xì)菌計(jì)數(shù)的影響。(2)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)吋，制作的平板大小為每個(gè)平板上生長(zhǎng)有30300個(gè)菌落。解析檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)，用蒸鐳水配制牛肉膏蛋白月東培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板，a 項(xiàng)正確；取10= 10 10&倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0ml,分別涂布于不同的平板上，b項(xiàng)正確； 接種后要將培養(yǎng)皿倒置，37 °c恒溫培養(yǎng)2448小時(shí)，c項(xiàng)正確；在確定對(duì)照組無(wú)菌后，應(yīng)選擇菌落 數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，d項(xiàng)錯(cuò)誤。2.測(cè)定土壤中細(xì)菌數(shù)量一般選用10 105和油倍的

18、稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，而測(cè)定真菌的數(shù)量一般選 用10 io?和104倍稀釋，其原因是()a. 細(xì)菌個(gè)體小，真菌個(gè)體大b.細(xì)菌易稀釋，真菌不易稀釋c.細(xì)菌在土壤中數(shù)量比真菌多d.隨機(jī)的，沒(méi)有原因問(wèn)題導(dǎo)析土壤屮各類微牛物的數(shù)量是不同的,為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度 進(jìn)行分離。解析 土壤中的微生物大約70%90%是細(xì)菌，真菌的數(shù)量要比細(xì)菌少。樣品的柿釋度越高，在平 板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目就越少。在實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證荻 得菌落數(shù)在30300之間，適于平板計(jì)數(shù)，所以細(xì)菌的稀釋倍數(shù)要高于真菌的稀釋倍數(shù)。土壤分離篩選微人為有利于冃的菌株定長(zhǎng)，抑中尿牛.物的原理

19、條應(yīng)制或阻止h他微牛物牛長(zhǎng)索分稀軽涂布#極法.解菌微牛物計(jì)數(shù)方法與原理ta的分離與對(duì)照設(shè)淹與重復(fù)設(shè)置計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)-»實(shí)驗(yàn)方案實(shí)驗(yàn)操作結(jié)果分析1. 通常用來(lái)作為菌種鑒定的重要依據(jù)是（）a. 菌落b.細(xì)菌形態(tài)c.細(xì)菌體積d.細(xì)菌結(jié)構(gòu)解析細(xì)菌個(gè)體非常小，不易直接觀察，不同細(xì)菌菌落的形態(tài)特征不同，而且可以用肉眼觀察，因 此常作為鑒定菌種的依據(jù)。2. 從土壤中分離以尿素為氮源的細(xì)菌，下列實(shí)驗(yàn)操作不正確的是（）a. 將土壤用無(wú)菌水稀釋，制備ict?io”土壤稀釋液b. 將不同濃度的土壤稀釋液涂布于不同平板上c. 用加入剛果紅指示劑的選擇培養(yǎng)基篩選分解尿素的細(xì)菌d. 從周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶的菌落中挑取

20、能夠分泌服酶的菌株解析 從土壤中分離以尿素為氮源的細(xì)菌時(shí)，將土壤用無(wú)菌水稀釋，制備土壤稀釋液；將不同濃度 的土壤稀釋液涂布于不同平板上；用加入酚紅指示劑的鑒別培養(yǎng)基可以鑒別分解尿素的細(xì)菌；從周 圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶的菌落中挑取能夠分泌腺酶的菌株。3. 請(qǐng)選出下列正確的操作步驟（）土壤収樣 稱収10 g 土壤，収出加入盛有90 ml無(wú)菌水的錐形瓶中 吸取0.1 ml 土壤溶液 進(jìn)行平板涂布依次稀釋至10 102> 10 104、10 10 l（f稀釋度a.一一一b.一-*一c.一一一d.一一一4. 在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑的目的是（）a.篩選出能分解尿素的細(xì)菌b.對(duì)分離的菌種作

21、進(jìn)一步鑒定c.作細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)成分d.如指示劑變藍(lán)就能準(zhǔn)確地認(rèn)定該菌能分解尿素解析篩選出能分解尿素的細(xì)菌用選擇培養(yǎng)基即可，不需要加指示劑。加入指示劑的培養(yǎng)基，目的 是對(duì)要分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定。5. 尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，但若不經(jīng)細(xì)菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的 微生物種類和數(shù)量繁多，同學(xué)們?cè)噲D探究土壤中微生物對(duì)尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)， 并成功篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌（目的菌）。培養(yǎng)基成分如下表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如圖所示。請(qǐng)分析 回答。稀并倍數(shù)為的試晉kh2po4na2hpo4mgso4-7h2o葡萄糖尿素瓊脂1.4g0.2 glo.oglog15.0 g將上述物

22、質(zhì)溶解后，用蒸鐳水定容到1 000 ml。土壤 含尿素培養(yǎng)璧此培養(yǎng)基（填“能”或“不能”）用于植物組織培養(yǎng)，理由是.（2）培養(yǎng)基中加入尿素的目的是,這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。“目的菌”生長(zhǎng)所需的氮源和碳源分別來(lái)自培養(yǎng)基中的和,實(shí)驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng)，原因是o（4）圖中將細(xì)菌轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基上時(shí)，可采用或在含尿素的培養(yǎng)基上接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。初步篩選出來(lái)的菌種還需要用生化的方法作進(jìn)一步的鑒定：在 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入指示劑，接種并培養(yǎng)初步篩選的菌種，若指示劑變成色，則可進(jìn)確說(shuō)明該菌種能夠分解尿素。（5）在實(shí)驗(yàn)中，下列材料或用具需要滅菌的是,需要消毒的是（填序號(hào)）。培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿

23、 玻棒、試管、錐形瓶和吸管 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手（6）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行處理后，才能倒掉。解析（1）植物組織培養(yǎng)基中需要含有氮、磷、鉀及鋅、銅、鈿、鐵等元素，需要蔗糖為植物細(xì)胞提 供能量，還需要細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素等植物激素。（2）該培養(yǎng)基中尿素是唯一的氮源，只有能利用尿 素的微生物才能生長(zhǎng)，屬于選擇培養(yǎng)基。（3）“目的菌”生長(zhǎng)所需的氮源和碳源分別來(lái)自培養(yǎng)基中的 尿素和葡萄糖，分解尿素的微生物是需氧型生物，所以在培養(yǎng)過(guò)程中需振蕩。（4）在以尿素為唯一氮 源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)利用尿素的細(xì)菌后，如果ph升高，指示劑將變紅，由此可準(zhǔn) 確地鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。（5）微生物培

24、養(yǎng)時(shí)，一切環(huán)境、物質(zhì)、用具、器材都要消毒或滅菌。 （6）為避免實(shí)驗(yàn)后培養(yǎng)基中的微生物污染環(huán)境，使用過(guò)的培養(yǎng)基必須經(jīng)過(guò)滅菌處理后才能丟棄。強(qiáng)化訓(xùn)練拓展提升40分鐘課時(shí)作業(yè)基礎(chǔ)過(guò)關(guān)知識(shí)點(diǎn)一篩選微生物的研究思路1. 土壤中分解尿素的微生物所需氮源為（）a.硝酸b.氨c.尿素d.蛋白腺解析 只有能合成腺酶的微生物才能分解尿素，以尿素為氮源，缺乏腺酶的微生物由于不能分解尿 素，缺乏氮源使其生長(zhǎng)、發(fā)育及繁殖受到抑制，所以，能夠選擇出分解尿素的微生物。2. 土壤屮的細(xì)菌能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣梢环N（）a.尿素酶b.hr酶 c.蛋白酶 d.肽酶解析能夠分解利用尿素的細(xì)菌，其細(xì)胞內(nèi)含有脈酶，可以把尿素分解成

25、氨，然后進(jìn)一步利用。3. 產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)菌落的細(xì)菌的最初數(shù)忖和培養(yǎng)基分別是（）a.個(gè)細(xì)菌、液體培養(yǎng)基 b.許多細(xì)菌、液體培養(yǎng)基c.一個(gè)細(xì)菌、固體培養(yǎng)基 d.許多細(xì)菌、固體培養(yǎng)基解析 在液體培養(yǎng)基中生活的細(xì)菌，無(wú)論是一個(gè)還是許多，肉眼都是看不見的。在固體培養(yǎng)基上的 細(xì)菌，當(dāng)數(shù)目較少時(shí)也是看不見的。當(dāng)固體培養(yǎng)基上有許多細(xì)菌并且集中在較小范圍內(nèi)時(shí)，肉眼可 見。而菌落是一個(gè)細(xì)菌或幾個(gè)細(xì)菌的子細(xì)胞群體，形成于固體培養(yǎng)基上，有一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，所以 肉眼可見。同種細(xì)菌形成的菌落，形態(tài)結(jié)構(gòu)是相同的。如果有許多細(xì)菌形成的菌落，就不可能有比 較標(biāo)準(zhǔn)的形態(tài)，因?yàn)檫@許多細(xì)菌第一不可能是同一種細(xì)菌，第二不可能在培養(yǎng)基的同

26、一個(gè)點(diǎn)上。4. 可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是（）a. 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑b. 以尿索為唯一氮源的培養(yǎng)基屮加入二苯胺試劑c. 以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基屮加入剛果紅試劑d以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮服試劑解析尿素在尿素分解菌的作用下分解產(chǎn)生氨和co2,氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，ph升高，酚紅指 示劑變紅。知識(shí)點(diǎn)二實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作5. 為了從土壤中分離出尿素分解菌，某同學(xué)按照下列配方配制培養(yǎng)基。下列敘述中，錯(cuò)誤的是（）培養(yǎng)基成分質(zhì)量kh2po41.4gna2hpo42.1 gmgso4-7h2o0.2 g葡萄糖10.0 g尿素l.og水定容到1 000 mlc.該培養(yǎng)基屬

27、于選擇培養(yǎng)基d.需要用剛果紅染色法對(duì)分離的細(xì)菌進(jìn)行鑒定解析 該培養(yǎng)基的目的是分離尿素分解菌，所以應(yīng)為固體培養(yǎng)基，配方中應(yīng)該有瓊脂成分，a正確； 由于該培養(yǎng)基用于分離尿素分解菌，所以尿素應(yīng)為唯一的氮源，且培養(yǎng)基的種類為選擇培養(yǎng)基，b、 c正確；剛果紅染色法可用于鑒定纖維素分解菌，以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑可 對(duì)分離的細(xì)菌進(jìn)行鑒定，故d錯(cuò)誤。6. 下列屬于菌落特征的是（）菌落的形狀菌落的大小菌落的多少隆起程度顏色有無(wú)莢膜a.b.c.d.解析 不同種類的細(xì)菌所形成的菌落大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等方面具有一定特 征，所以，每種細(xì)菌在一定條件下所形成的菌落，可以作為鑒定的重要

28、依據(jù)。單個(gè)細(xì)菌用肉眼是看 不見的，故細(xì)菌的個(gè)體特征不能作為菌落的特征。7. 給無(wú)氮培養(yǎng)基接種土壤稀泥漿的方法是（）a. 打開培養(yǎng)皿蓋，取一根接種環(huán)沾取少許稀泥漿，輕輕地點(diǎn)接在培養(yǎng)基的表而上b. 取一根接種環(huán)在酒精燈的火焰上滅菌后沾取少許稀泥漿，略微打開培養(yǎng)皿蓋，在培養(yǎng)基的表面輕c. 打開培養(yǎng)皿蓋，取一根接種壞在酒精燈的火焰上滅菌后沾取少許稀泥漿，在培養(yǎng)基的表面輕點(diǎn)d. 略微打開培養(yǎng)皿蓋，収一根接種環(huán)在酒精燈的火焰上滅菌，冷卻后沾取少許稀泥漿，在培養(yǎng)基的 表面輕點(diǎn)解析 接種過(guò)程中要防止外來(lái)雜菌的入侵，左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，右手將接種環(huán)在火焰上滅 菌，冷卻后沾取少許稀泥漿，在培養(yǎng)基的表面輕點(diǎn)，

29、用未冷卻的接種環(huán)沾取稀泥漿會(huì)殺滅菌種。&若某一稀釋度下，平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)為8（）,涂布平板時(shí)所用的稀釋液體積為0.1 ml,稀釋 液的稀釋倍數(shù)為1（a則每克樣品中的活菌數(shù)約為（）a.8x108 b.8x 107 c.8x 105 d.8x106解析每克樣品中的活菌數(shù)=（80三0.1） x 10&。能力提升9. 實(shí)驗(yàn)測(cè)定鏈霉素對(duì)3種細(xì)菌的抗生素效應(yīng)，用3種細(xì)菌在事先準(zhǔn)備好的瓊脂平板上畫3條等長(zhǎng)的 平行線（3條線均與圖中的鏈每素帶接觸），將平板置于37 °c條件下恒溫培養(yǎng)3天，結(jié)果如圖所示。 從實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，以下敘述不正確的是（）a.鏈當(dāng)素能阻止結(jié)核桿菌的生長(zhǎng)b.鏈

30、芻素對(duì)結(jié)核桿菌比對(duì)崔亂菌更有效解析 從圖中可以看出，這是含有鏈霉素的選擇培養(yǎng)基，接種的三種細(xì)菌中，霍亂菌和結(jié)核桿菌都 可以被殺滅，并且鏈霉素對(duì)結(jié)核菌殺滅的有效程度大于霍亂菌，而傷寒菌照常生長(zhǎng)不受影響，所以 選項(xiàng)d錯(cuò)。10. 在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)吋，a同學(xué)從對(duì)應(yīng)106倍稀釋培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而 其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。a同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生原因不可能有（）a.由于土樣不同b.由于培養(yǎng)基污染c.由于操作失誤d.沒(méi)有設(shè)置對(duì)照解析實(shí)驗(yàn)結(jié)論是否正確與是否設(shè)置對(duì)照有直接關(guān)系，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果與是否設(shè)置對(duì)照無(wú)關(guān)。11下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，不正確的是（）a. 測(cè)定土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目，常用

31、稀釋涂布平板法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)b. 在對(duì)微生物進(jìn)行培養(yǎng)前，需要對(duì)微生物和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌c. 酵母菌發(fā)酵過(guò)程產(chǎn)生的酒精，對(duì)其他微生物生反有一定的抑制作用d. 分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源解析微生物培養(yǎng)時(shí)，為防止雜菌污染需要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，但是不能對(duì)微生物進(jìn)行滅 菌，否則微生物將被殺死。12用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是（）a. 涂布了 1個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230b. 涂布了 2個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260,取平均值238c.涂布了 3個(gè)平板,d.涂布了 3個(gè)平板,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256,取平均值163 統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240和250,取平均值233 解析 在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性， 所以a、b兩項(xiàng)不正確；c項(xiàng)雖涂布了 3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太 遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤。因此，不能簡(jiǎn)單地