生化試劑存在的問題及解決辦法

1、全自動生化分析儀試劑存在的問題及解決方法1 優(yōu)質(zhì)的儀器用水優(yōu)質(zhì)的儀器用水是使用好檢驗試劑的一個十分重要環(huán)節(jié)之一。因為測定離子類的項目：比如銅、鐵、鋅、鈣、Mg、磷。這些項目在使用過程中，儀器用水的質(zhì)量相當(dāng)重要，雖然現(xiàn)在一般醫(yī)院的生化儀都帶有制水系統(tǒng)，但制水系統(tǒng)基本都是制備去離子水，離子交換樹脂在使用一段時間后交換能力明顯下降，需要定期進(jìn)行更換，否則制備的水離子含量多，電導(dǎo)率偏高。使用含離子超標(biāo)的水沖洗儀器，直接影響檢驗結(jié)果。再如血氨、二氧化碳項目，如果水質(zhì)不好，儀器用水中本身含氨和二氧化碳就很高，則檢測該項目的結(jié)果也會受到嚴(yán)重的影響。還有如果血清中含有GLDH，而儀器用水存在氨時，可消耗NAD

2、H，使利用NADH的酶聯(lián)連續(xù)監(jiān)測法結(jié)果偏高。解決辦法：定期監(jiān)測水質(zhì)，當(dāng)儀器用水的電阻小于10M時要更換離子交換樹脂或活性炭。2 標(biāo)本的及時分離及測定標(biāo)本的及時分離及測定是用好檢驗試劑的首要環(huán)節(jié)因為凡是利用NADH轉(zhuǎn)化為NAD 變化率來檢測其物質(zhì)含量的試驗都或多或少受到血液存放時間的影響。原因是全血存放時間越長，紅細(xì)胞利用血清中的糖進(jìn)行無氧酵解產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸使NADH轉(zhuǎn)化為NAD ，這樣使測定結(jié)果假性升高。解決辦法：作好與臨床的溝通，對抽血人員和標(biāo)本運(yùn)送人員(傳遞人員)進(jìn)行培訓(xùn)； 及時分離血清并及時檢測； 也可將全自動生化分析儀上的延遲時間設(shè)置大于60秒，這樣試劑在延遲期內(nèi)消除丙酮酸的干擾，

3、可完全避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。3 交叉污染31 生化分析儀本身的清洗問題造成的交叉污染在使用全自動生化分析儀時，儀器的交叉污染現(xiàn)象是引起實驗結(jié)果偏離的一個原因。由于全自動生化分析儀試劑針需要接觸各種試劑，一般難以徹底清洗干凈，所以容易造成分析項目的攜帶污染而生化項目的測定往往僅需要幾微升樣本，試劑往往需要幾百微升，尤其在沒有自動沖洗程序的流動池式生化分析儀上，由于前帶現(xiàn)象的存在，如果前一個樣本為高值樣本，則接后的第一個低值標(biāo)本結(jié)果應(yīng)慎重報告。不僅沒有沖洗程序的生化分析儀器上有這種現(xiàn)象，就是具有自動沖洗程序的全自動生化分析儀也有交叉污染，例如Beckman全自動生化分析儀CX4，它的試劑吸針(Pr

4、obe)、樣品吸針及反應(yīng)攪拌棒是利用高壓沖洗液沖洗，然后用高壓壓縮空氣吹于，有時由于洗液壓力和壓縮空氣的壓力偏低，使試劑吸針、樣品吸針及反應(yīng)混勻棒沖不干凈、吹不干，從而導(dǎo)致反應(yīng)池之問相互污染、試劑問交又污染，使檢驗結(jié)果偏離。另一個值得注意的問題是許多生化儀器由于長期頻繁的利用，使加樣針和試劑針的注射器磨損加重或注射器的“特氟龍”吸頭不及時更換，使吸樣針或試劑針密封層增大，產(chǎn)生泄漏現(xiàn)象也是造成樣本間及試劑間相互污染的一個重要原因。試劑吸樣或樣品吸樣不準(zhǔn)確，通常導(dǎo)致利用速率法測試的標(biāo)本系統(tǒng)偏低或偏高。眾所周知，速率法計算因子是由加樣體積和試劑體積參與確定的，如果加樣體積或加試劑體積不準(zhǔn)，導(dǎo)致真正速

5、率計算因子和理論計算因子偏離，從而使檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。解決辦法：定期進(jìn)行儀器維護(hù)保養(yǎng)；按要求及時更換零部件；定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)；全自動生化分析標(biāo)本和試劑用量少，殘存少量即會影響測試結(jié)果，每天應(yīng)用無水乙醇擦洗并定期更換干燥棒，保證比色杯清洗后不留殘液，避免比色杯的交叉污染。32 檢驗項目間的交叉污染在全自動生化分析儀的使用中，我們發(fā)現(xiàn)一個項目會影響緊隨其后項目的測試結(jié)果，造成這種影響的原因之一是一種試劑中含有另一試驗的測定物質(zhì)而直接干擾其測試結(jié)果。原因之二是一種試劑中含有改變另一試驗反應(yīng)條件或影響其反應(yīng)進(jìn)程的物質(zhì)而間接干擾其測試結(jié)果。比如：在TP試劑中含有大量的CuSO4，如果將Cu放在TP項目的

6、后面檢測，會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。再如P放在含有磷酸鹽的項目后面，TBA放在含有膽酸鹽的項目后面都會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。GLU放在CK和CKMB的項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。LDH放在AIJT和AST的項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Mg放在ALP等含有鎂離子項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。ca放在aAmy項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Mg試劑(CALMAGITE法)中含有EGTA，會干擾Ca的測定結(jié)果。另外我們發(fā)現(xiàn)相鄰兩個項目的PH值相差太大或反應(yīng)對PH要求嚴(yán)格的項目，也會對測定的結(jié)果產(chǎn)生影響，比如TP和Alb之間PH相差較大，會互相干擾，TB

7、A放在Alb后面測定，會使測定結(jié)果偏低等等。解決辦法：調(diào)整實驗的前后順序來消除這種影響；在造成污染的項目和受污染的項目之間設(shè)置清洗劑并設(shè)定進(jìn)行清洗的次數(shù)。4 正確的參數(shù)設(shè)置也是用好檢驗試劑的一個關(guān)鍵因素現(xiàn)代化分析儀上通常有分析程序供用戶設(shè)定，包括樣品量、試劑量、波長、分析方式和延遲時間、測試時間的設(shè)定等。下面我們就延遲時間和加樣程序的設(shè)定來說明正確使用分析參數(shù)對于正確運(yùn)用試劑的作用。比如肌酐苦味酸測定法，我們在設(shè)定延遲時間時應(yīng)注意到苦味酸在堿性條件下50秒前首先快速與如乙酰乙酸等快反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生紅色化合物，而在120秒后堿性苦味酸又能與慢反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生陽性干擾，解決辦法：最好設(shè)定延遲時間為506O

8、秒之間，測定時間小于6O秒，這樣就充分消除了快反應(yīng)和慢反應(yīng)干擾，從而檢測到真正肌酐含量。5 校準(zhǔn)液的正確使用由于目前生產(chǎn)廠家提供的校準(zhǔn)液并非通用的，只適用于某一特定的分析系統(tǒng)。同一項目不同方法學(xué)之間有很大差異，同一項目不同方法學(xué)的校準(zhǔn)液更不能混用，但是在臨床檢驗中經(jīng)常會發(fā)生膽紅素釩酸鹽法用重氮法的校準(zhǔn)液校準(zhǔn)，乳酸脫氫酶LP法用PL法校準(zhǔn)液校準(zhǔn)。TBA循環(huán)酶法用比色法校準(zhǔn)液校準(zhǔn)等都會造成測定結(jié)果不準(zhǔn)確。另外同一方法學(xué)，不同廠家的校準(zhǔn)品和試劑都會有所差異。解決辦法：建議結(jié)合各實驗室條件選擇適合自已實驗室的校準(zhǔn)品，如有條件可進(jìn)行系統(tǒng)溯源；建立滿足在同一方法學(xué)、同一測定條件、與理論計算的factor值

9、差異不大，沒有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素，方可進(jìn)行校正測定；建立一個可靠的參考系統(tǒng)作為準(zhǔn)確性基礎(chǔ)，然后將準(zhǔn)確性轉(zhuǎn)移到“使用方法”測定中去，使“使用方法”測定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準(zhǔn)確性基礎(chǔ)上來。在實現(xiàn)溯源性目標(biāo)過程中，永遠(yuǎn)以患者新鮮標(biāo)本為實驗對象，以方法學(xué)對比試驗方法為驗證手段。采用回歸方程進(jìn)行統(tǒng)計分析，斜率接近1，截距較小，說明“使用方法”對標(biāo)本測定結(jié)果和溯源目標(biāo)參考系統(tǒng)對標(biāo)本檢測結(jié)果非常接近，檢測結(jié)果可靠。6 抗凝劑的使用目前臨床上常用的抗凝劑有EDTA-2K、肝素、草氨酸鈉等，TBA和AFU不能用肝素抗凝劑，因為肝素會使TBA和AFU試劑發(fā)生混濁，導(dǎo)致吸光度假性偏高，從而使檢測結(jié)果偏高。解

10、決辦法：認(rèn)真參閱試劑說明書；作好與抽血人員之間的溝通和培訓(xùn)，使抽血人員知道什么項目用何種標(biāo)本。7 混成單一試劑的問題比如酶法肌酐試劑，第一步R中的酶要消除樣品中內(nèi)源性肌酸的干擾，如果混成單一試劑，則會使檢測結(jié)果偏高，消除法HDL、LDL也不能混成單一試劑，因為它們都要分別清除HDL和LDL以外的脂蛋白，從而達(dá)到檢測的目的，如果混成單一試劑，則會使測定的HDL和LDL不準(zhǔn)確。另外，有的試劑混成單一試劑后，穩(wěn)定性和抗干擾能力也會明顯下降。解決辦法：在儀器通道或試劑位允許的情況下盡量使用雙試劑；如一定要使用單一試劑，最好選擇試劑廠家針對部份項目專門生產(chǎn)好的單一試劑。8 試劑開瓶的問題隨著全自動生化分

11、析儀的普及，“開瓶穩(wěn)定性”也隨之受到了大家的重視，但是就目前有的試劑方法學(xué)來講，還達(dá)不到人們所要求的試劑開瓶后在儀器內(nèi)放很長時間不需要定標(biāo)，比如ALP、TP、GSP等PH為堿性的試劑，開瓶后試劑會吸收空氣中的二氧化碳，使試劑本身的PH值下降，如果長時間開瓶不定標(biāo)或校準(zhǔn)，會使檢測結(jié)果發(fā)生偏離，在國外有的項目有明文規(guī)定，必須72小時之內(nèi)定標(biāo)，比如BUN。但是在國內(nèi)的某些實驗室為了方便，很長時間都不作校準(zhǔn)，導(dǎo)致測定結(jié)果的不準(zhǔn)確。解決辦法：了解試劑的特性，及時對部份項目進(jìn)行校準(zhǔn)，2對于每天標(biāo)本量不多的醫(yī)院，可按12天的用量取用試劑放入儀器。9 不同批號試劑相混的問題目前將不同批號的試劑混合在一起使用的

12、現(xiàn)象在檢驗中經(jīng)常發(fā)生，當(dāng)然這一方面是為了節(jié)省成本，另一方面為了方便。但是不管是什么品牌、什么試劑，由于不同批號的試劑生產(chǎn)時間不同，試劑中工具酶的活性會有差異，會發(fā)生水解的底物濃度隨時間長短也會不同。因此混在一起使用而又不定標(biāo)，可能會導(dǎo)致檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。還有如果有的試劑開瓶時間太長，空氣中的灰塵或細(xì)菌會進(jìn)入瓶中，由于有的試劑含有大量的蛋白質(zhì)和鹽，是細(xì)菌生長的最好條件，雖然有的試劑添加了防腐劑，但防腐劑的防腐也是有一定限度的，而且絕大多數(shù)廠家的試劑中是沒有加防霉劑的。解決辦法： 不同批號試劑建議不要混用，如果混用最好重新定標(biāo)；試劑瓶在儀器內(nèi)使用時間不要過長，及時更換。一般每個試劑瓶內(nèi)由于試劑針不

13、能吸完，或多或少都會留有幾毫升的試劑，如果是同一批號可以將未開瓶的同一批號試劑往里倒。但如果不是同一批號的試劑時倒人后最好定標(biāo)，最好的做法是將每個批號的剩余試劑留起來待一定數(shù)量后混在一起，然后重新定標(biāo)后檢測。通過我們這幾年使用伊得利康試劑，參加衛(wèi)生部的室間質(zhì)評都取得很好的成績，確實認(rèn)為該公司試劑質(zhì)量好。純水質(zhì)量對全自動生化分析儀檢測的影響水是實驗室內(nèi)一個常常被忽視但又至關(guān)重要的試劑。在全自動生化分析儀檢測過程中，純水作為生化反應(yīng)的載體或介質(zhì)、樣品或試劑的稀釋液和溶劑、儀器的清洗液甚至反應(yīng)的參與者等貫穿檢測的全過程，其純度的高低直接關(guān)系水是實驗室內(nèi)一個常常被忽視但又至關(guān)重要的試劑。在全自動生化分

14、析儀檢測過程中，純水作為生化反應(yīng)的載體或介質(zhì)、樣品或試劑的稀釋液和溶劑、儀器的清洗液甚至反應(yīng)的參與者等貫穿檢測的全過程，其純度的高低直接關(guān)系到檢測結(jié)果的可信度。目前全國大部分實驗室都使用反滲透的中央純水系統(tǒng)，通過對該系統(tǒng)工作流程的分析以及遇到的實際情況，發(fā)現(xiàn)并總結(jié)了導(dǎo)致水純度不夠的幾種因素及其對全自動生化分析儀檢測的影響。1 純水系統(tǒng)工作流程及影響因素11 原水預(yù)處理原水是指進(jìn)入實驗室的自來水，預(yù)處理就是除去自來水中絕大部分的雜質(zhì)。1.1.1方法：預(yù)處理一般使用機(jī)械過濾法，分三步進(jìn)行：精密濾芯（又稱過濾濾芯、分線繞濾芯和熔噴濾芯）過濾原水中的泥沙等大的顆粒物；活性炭濾芯通過吸附作用去除水中的絕

15、大部分有機(jī)物和重金屬離子等（特別是自來水中的余氯，其對反滲透膜有很大的氧化作用，所以必須經(jīng)由活性炭去除）；反滲透膜(RO)進(jìn)一步去除水中的微觀粒子和鹽分。1.1.2影響因素：自來水水質(zhì)：自來水中雜質(zhì)含量高時會導(dǎo)致預(yù)處理部件使用壽命縮短和處理后水質(zhì)不達(dá)標(biāo)，甚至?xí)氯艿?，?dǎo)致需要更高的進(jìn)水壓才能工作，一般要求自來水中固體溶解物含量(TDS)小于200 mg/L。 預(yù)處理部件使用壽命：精密濾芯、活性炭濾芯、反滲透膜等都是具有相對壽命的材料，其中精密濾芯和活性炭濾芯又對反滲透膜具有保護(hù)作用，如果它們失效，RO 膜負(fù)荷就會加重，壽命就會縮短。由于各廠家產(chǎn)品質(zhì)量各異，RO膜又價格昂貴，因此在實際使用中應(yīng)

16、根據(jù)各地自來水水質(zhì)合理搭配使用。進(jìn)水壓：一般純水系統(tǒng)預(yù)處理都需要用高壓泵維持一定的進(jìn)水壓力(0. lMpa)才能維持正常工作，當(dāng)高壓泵壓力不足時會導(dǎo)致產(chǎn)水量下降。純水系統(tǒng)的維護(hù)：純水系統(tǒng)一般都具有自動反沖洗功能，當(dāng)其設(shè)置不合理或故障以及人工維護(hù)不當(dāng)時也會影響純水機(jī)的正常工作，導(dǎo)致純化效率及水質(zhì)下降。1.2去離子水的制備一般的純水系統(tǒng)由于受到成本限制，RO膜質(zhì)量一般，經(jīng)其處理過的水只能達(dá)到三級純水(電阻率>0. 2MO.cm)的標(biāo)準(zhǔn)。三級純水雖然經(jīng)過預(yù)處理已經(jīng)去除了大部分離子，但其中的離子濃度還較高，還會影響生化分析儀的微量檢測，因此必須將三級純水進(jìn)一步去離子以達(dá)到一級純水(電阻率lOM.

17、cm)的標(biāo)準(zhǔn)才能用于生化檢測。1.2.1方法：離子交換樹脂法是去離子水制備的常用方法，所用的部件就是離子交換柱即純化柱（罐），包括陰離子交換柱、陽離子交換柱和混合柱等，試劑為陰陽離子交換樹脂。陰陽離子交換樹脂一般是由苯乙烯聚合成后再通過二乙烯苯交聯(lián)得到多孔網(wǎng)狀骨架結(jié)構(gòu)，然后在骨架上連接活性基團(tuán)而形成的高分子聚合物。離子交換樹脂所連接的活性基團(tuán)可分為酸性基團(tuán)和堿性基團(tuán)兩大類型。連接酸性基團(tuán)的離子交換樹脂稱為陽離子交換樹脂，連接堿性基團(tuán)的樹脂稱為陰離子交換樹脂。1.2.2原理：陽離子交換柱原理即硬水軟化原理：陽離子交換樹脂中的酸性基團(tuán)有磺酸基(-S03H)、羧基(一COOH)和苯酚基 (-C6H4

18、0H)等酸性基團(tuán)，其中的氫離子能與溶液中的金屬離子或其他陽離子進(jìn)行交換。例如苯乙烯和二乙烯苯的高聚物經(jīng)磺化處理得到強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂，其結(jié)構(gòu)式可表示為R-SO3H，式中R代表樹脂母體，以Ca2+為例其表達(dá)式為2R-S03H+ Ca2+- (R-SO3 )2Ca+ 2H+。 陰離子交換柱的原理：陰離子交換樹脂中的堿性基團(tuán)有季胺基-N (CH3)30H、胺基(-NHz)和亞胺基(-NHz)等。它們在水中能生成OH-離子，可與各種陰離子起交換作用，以Cl-為例其表達(dá)式為R-N (CH3)30H+Cl-RN(CH3)3Cl+OH-。混合柱：當(dāng)兩者串聯(lián)使用或混合使用時，產(chǎn)物就只有水，總表達(dá)式為：2R-

19、S03H+Ca2+2(CH3)30H+2Cl- - (R-S03)2Ca+2 RN (CH3)3C1+2H影響因素：離子交換樹脂的質(zhì)與量：離子交換樹脂是有壽命限制的，當(dāng)離子交換達(dá)到一定量時就達(dá)到飽和，需要進(jìn)行再生處理，因此質(zhì)量越好總量越大其使用期限越長。陰陽離子交換樹脂的連接方式：復(fù)床式：若干個陽離子交換柱和若干個陰離子交換柱串聯(lián)而成，陽在前陰在后，其優(yōu)點是再生方便，缺點是出水質(zhì)量不高(單級復(fù)床式出水電阻率只有0.5 M.cm，雙級復(fù)床式出水電阻率為2 MO·cm)?；齑彩剑簩㈥栯x子樹脂和陰離子樹脂以1:2容積比均勻混合裝入同一個交換柱內(nèi)而成，優(yōu)點是出水純度高（電阻率

20、1OM.cm），缺點是再生困難。聯(lián)合式：將復(fù)床式和混床式串聯(lián)起來即成，多采用三柱式，出水質(zhì)量高（電阻率最高可達(dá)18. 3M.cm，即超純水），使用壽命長。三級純水的純度：當(dāng)三級純水質(zhì)量不合格，其中一些非離子雜質(zhì)通過離子交換柱時就會影響離子交換柱的使用壽命并造成出水水質(zhì)的降低。該情況主要受預(yù)處理過程的影響，同時有些開放性的純水系統(tǒng)將生成的三級純水儲存于水箱中以備其它用途使用時儲存時間過長或其它原因?qū)е碌亩挝廴疽矔顾兌认陆怠?純水質(zhì)量對生化分析儀及檢測結(jié)果的影響2.1 不合格純水中的雜質(zhì)成分純水質(zhì)量不合格也就意味著純水系統(tǒng)水純化的失敗，可能出現(xiàn)在原水預(yù)處理過程、三級純水的儲存和離子交換過程中

21、的任何一步。無論哪一步失敗，其雜質(zhì)來源無外乎自來水和純水機(jī)水通道的污染物，主要有： 電解質(zhì)，常見的有H+，Na+，K+，NH4+，Mg2+，Ca2+，F(xiàn)e3+，Cu2+，Mn2+，Zn2+，Al3+等陽離子和 F-，CI-,N03-,HC03-,S042-,P043-,H2P04-,HSi03-等陰離子；有機(jī)物質(zhì)，如有機(jī)酸、農(nóng)藥、烴類、醇類和酯類等；顆粒物；微生物；溶解氣體(Nz，02，C1z，HzS，CO，COz，CH4等)；其它。2.2不同雜質(zhì)成分對生化分析儀及檢測結(jié)果的影響2.2.1 電解質(zhì)含量高的影響：最直接的影響就是對血清（漿）中同種離子測定結(jié)果的升高，如對Mg2+，Ca2+，F(xiàn)e3

22、+，Cu2+，Zn2+等的測定，同時也對這些項目的定標(biāo)產(chǎn)生影響。由于很多金屬離子都是酶的輔因子，因此當(dāng)金屬離子含量高時往往影響酶活性的檢測（如Mg2+是多種磷酸化激酶的激活劑，水中含量超標(biāo)時會導(dǎo)致這些酶活性測定值的升高；而許多重金屬離子則對酶有抑制作用，導(dǎo)致酶活性下降）。很多陰離子也作為酶的輔因子存在，對酶活性測定產(chǎn)生影響（如CI-對a-淀粉酶就有激活作用）。電解質(zhì)含量高的水更容易形成結(jié)晶和導(dǎo)致蛋白等有機(jī)物變性附著于管道系統(tǒng)，從而使得生化分析儀管道系統(tǒng)更易堵塞，最終造成測定失真或失敗；同時，在使用其對反應(yīng)杯進(jìn)行清洗時也很難清洗干凈，會加速反應(yīng)杯的老化和損壞，使杯空白升高。2.2.2有機(jī)物質(zhì)的影

23、響：有機(jī)物質(zhì)的影響主要在于對類似物質(zhì)測定時導(dǎo)致類似物質(zhì)測定結(jié)果的升高。同時，有機(jī)物含量升高也會加速管道系統(tǒng)和反應(yīng)杯的清洗困難及老化。2.2.3顆粒物的影響：顆粒物一般很難通過純水系統(tǒng)進(jìn)入生化分析儀管道和反應(yīng)系統(tǒng)，其來源一般都是三級純水或一級純水的儲水箱發(fā)生二次污染，但是一旦進(jìn)入除了會導(dǎo)致吸光度升高外，還很容易堵塞管道和損壞反應(yīng)杯。2.2.4微生物的影響：微生物的去除主要依賴原水的預(yù)處理，有些純水系統(tǒng)還在一級純水或超純水處加裝紫外殺菌或者微濾、超濾等裝置，進(jìn)一步除去水中殘余的細(xì)菌、微粒、熱源等。但一旦預(yù)處理失敗或純水儲存箱被二次污染，微生物及其產(chǎn)物就能進(jìn)入生化分析儀管道系統(tǒng)和反應(yīng)系統(tǒng)，可能出現(xiàn)的

24、情況有兩種： 微生物在管道及反應(yīng)系統(tǒng)孳生，導(dǎo)致管道堵塞，同時令吸光度和杯空白升高；微生物產(chǎn)生特定的酶對生化分析儀酶測定產(chǎn)生影響，具體產(chǎn)生什么影響取決于污染菌的類型。2.2.5溶解氣體：溶解氣體增多產(chǎn)生的影響有：對同種氣體的測定的影響；對水的pH值也產(chǎn)生影響，如C02，Cl2，H2S等溶解增多導(dǎo)致水pH值的下降，也對pH值依賴性較強(qiáng)的生化項目測定產(chǎn)生影響；某些氣體如C12增多，因其自身氧化性較強(qiáng)，會對與氧化還原反應(yīng)相關(guān)的生化測定項目產(chǎn)生影響，如對基于340 nm處NADH和NADPH有吸收峰而建立的ALT，AST，BUN等的測定方法，會導(dǎo)致測定值的升高。2.2.6其它雜質(zhì)的影響：有些純水系統(tǒng)也將

25、最終生成的超純水或一級純水儲存于水箱中，當(dāng)水箱有生銹情況時導(dǎo)致鐵測定不正常；還有當(dāng)機(jī)械裝置密封不嚴(yán)造成的漏油時導(dǎo)致TG測定結(jié)果升高。這些情況雖然少見，但也最容易被忽視。3討論3.1 實驗室常用的自動化純水系統(tǒng)有兩種：大型蒸餾器系統(tǒng)，日出水量在100 L左右，原水利用率10%15%，能耗大，自動化程度低，制備的蒸餾水純度一般較低，適用范圍較窄，現(xiàn)在基本已經(jīng)被淘汰；反滲透的中央純水系統(tǒng)，由機(jī)械過濾、活性炭吸附、反滲透膜和離子交換樹脂等組成，日產(chǎn)水量900 L左右，原水利用率30%40%，自動化程度高，能耗低，主部件可反復(fù)使用，出水純度高，目前使用廣泛。另外，有些實驗室因條件所限，直接購買商品化純凈

26、水使用，但商品化純凈水多為飲用水，其標(biāo)準(zhǔn)與實驗室用水標(biāo)準(zhǔn)有所不同，因此購買前一定要清楚該產(chǎn)品的各項指標(biāo)，避免對檢測造成影響。3.2評價水質(zhì)的常用指標(biāo)電阻率，是衡量實驗室用水導(dǎo)電性能的指標(biāo)，其隨著水內(nèi)無機(jī)離子的減少而增大，但由于水自身的解離作用，電阻率最大只能達(dá)到18.3M.cm左右，是檢測水中離子濃度的主要指標(biāo)；pH值，一級純水及超純水的pH值測定較為困難，測定值浮動范圍較大(67)，主要是因為其中溶質(zhì)極低，導(dǎo)電性差，測定時極易受到外界干擾，但正因如此，水質(zhì)的細(xì)小變化對pH值的影響就很明顯，是評價水質(zhì)的一個非常靈敏的指標(biāo)；www.clin-總有機(jī)碳，是指水中碳的濃度，反映水中有機(jī)化合物的含量；

27、內(nèi)毒素，即革蘭氏陰性細(xì)菌的脂多糖細(xì)胞壁碎片，又稱之為“熱原”。3.3 建議對實驗室超純水進(jìn)行嚴(yán)格規(guī)范的質(zhì)量控制，定時測定純水電阻率和pH值等指標(biāo)，繪制質(zhì)控圖。增強(qiáng)實驗室用水質(zhì)量意識，積極防范因用水而造成的影響和損失。對于開放式水儲存箱的取用水要嚴(yán)格把關(guān)，嚴(yán)防因此而造成的二次污染。要掌握純水機(jī)各部件的使用壽命和維護(hù)方法，積極防范因純水機(jī)部件失效而造成的各種影響水質(zhì)的情況，同時延長或保證RO膜和離子交換樹脂的壽命。要對本地區(qū)自來水水質(zhì)狀況有所了解并評估其對純水機(jī)的影響，如水質(zhì)較硬，應(yīng)考慮加裝前處理設(shè)備。成為醫(yī)學(xué)檢驗人之前必須要知道的幾件事當(dāng)初本科填志愿，其實很大程度上根本不了解醫(yī)學(xué)檢驗這個專業(yè)，班

28、里的同學(xué)第一志愿填報檢驗的也寥寥無幾。有過迷茫，有過失望，一路走來，也有很多體會。在各大專業(yè)論壇上，每年都會有人問，“檢驗可以考醫(yī)師執(zhí)照嗎？”“我是*專業(yè)的，想去檢驗科工作，可以嗎？”這里就說說自己在進(jìn)入醫(yī)學(xué)檢驗這個專業(yè)以后，才知道的一些事情與其中的一些體會，希望對后來人有所幫助，特別是想過從事檢驗專業(yè)的年輕師弟師妹。1、醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)不能考醫(yī)師執(zhí)照這是大3才徹底了解的事實，雖然當(dāng)初我所在的院校（211）給本專業(yè)的定位是檢驗醫(yī)師。但是事實是全國各醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)本科文憑都不能報考執(zhí)業(yè)醫(yī)師，雖然我們學(xué)制5年，雖然我們大綱要求所有的內(nèi)外婦兒傳染等臨床學(xué)習(xí)。但是國家的政策如此，胳膊擰不過大腿。要想考執(zhí)照，

29、你需要考臨床專業(yè)檢驗地 帶網(wǎng)搜集整理的研究生，即使這樣，部分地區(qū)仍有困難，如在上海地區(qū)，這種情況還是不能報考。2、醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)學(xué)制多樣 中山、華西、湘雅醫(yī)學(xué)檢驗5年制，交大、南方醫(yī)醫(yī)學(xué)檢驗4年制，前者拿醫(yī)學(xué)學(xué)位，后者拿理學(xué)學(xué)位。出來除個別單位喜歡5年制以外，找工作無本質(zhì)區(qū)別，誰不知道現(xiàn)在找工關(guān)系第一。貌似醫(yī)學(xué)檢驗全國重點也就是專業(yè)排名第一的重慶醫(yī)科大學(xué)，還有醫(yī)檢7年制，出來是MM，具執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試資格。如此復(fù)雜參差的學(xué)制和培養(yǎng)方法，也難怪國家不給考執(zhí)業(yè)醫(yī)師的資格。3、沒有真正意義上的檢驗醫(yī)師如果你想報考檢驗醫(yī)師，你必須先具有臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師執(zhí)照，按照第1條所說，所以你本科必須是學(xué)臨床然后轉(zhuǎn)入檢驗專業(yè)

30、。這在醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)的人看來確實非常不公平和可笑，要承認(rèn)這樣一個事實，很多情況下，臨床專業(yè)的人改行進(jìn)入檢驗專業(yè)，大多是在臨床混的不好，這樣的檢驗隊伍你覺得是壯大了還是魚龍混雜了？而正規(guī)接受醫(yī)學(xué)檢驗培訓(xùn)的人卻沒有資格？另外，即使你成為了一名檢驗醫(yī)師，在絕大多數(shù)時候你從事的是技師的工作。罕見或不見有讓檢驗科人員協(xié)助臨床診斷、治療會診的醫(yī)院單位，檢驗醫(yī)師，名存實無。4、檢驗科在醫(yī)院地位普遍不高輔助科室，地位不高也難怪，看看到處都是的關(guān)于檢驗科室被臨床科室肢解的討論就知道了，不用多說。5、醫(yī)學(xué)檢驗工作相對好找 開始說些這個專業(yè)的好處吧，找工作對于醫(yī)檢專業(yè)的同學(xué)來說，不用像臨床那般發(fā)愁，本科進(jìn)入三甲的機(jī)會

31、很多，碩士基本夠用。公務(wù)員、公司、科研機(jī)構(gòu)，都有不錯的選擇。如果你有好的idea，試劑開放也許可以讓你一夜暴富。6、醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)發(fā)展迅猛所有生物技術(shù)方法上的革新，以及基礎(chǔ)研究上突破，都給醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)帶來了無窮無盡的動力。在這個專業(yè)，可以學(xué)習(xí)最先進(jìn)的醫(yī)學(xué)診斷方法進(jìn)展，而且這些方法的更替日新月異。如果你是個科研愛好者，醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)有得天獨厚的優(yōu)勢，診斷試劑、儀器、病人標(biāo)本，都是你豐富的資源，即使其他科室搞個項目，也免不了需要你的幫忙。7、醫(yī)學(xué)檢驗不用直面冰冷的醫(yī)患關(guān)系不用多說，現(xiàn)實有時候我們無法改變。檢驗專業(yè)只需要在后面認(rèn)真負(fù)責(zé)地處理病人標(biāo)本，用自己的良心報給臨床醫(yī)生準(zhǔn)確的結(jié)果。8、沒有差的專業(yè)，

32、只有差的人看看專業(yè)的大佬們，叢玉隆、王鴻利、倪語星、陳宏礎(chǔ)、仲人前，很多臨床科研的巨擘都烙著醫(yī)學(xué)檢驗的印子，看看他們的工作和經(jīng)歷。最后套用我老板的一句話：做的好做什么都好，做不好做什么都不好全自動生化分析儀及其試劑間化學(xué)污染對檢測結(jié)果的影響臨床實驗室：全自動生化分析儀在各級醫(yī)院現(xiàn)在都普遍使用，并且測試速度越來越快，但是很多醫(yī)院過分依賴儀器，在測試結(jié)果不理想 的情況下，不知如何排除，根據(jù)您多年經(jīng)驗，請您談?wù)劀y試結(jié)果不理想主要都有哪些原因？于主任：全自動生化分析儀在各級醫(yī)院的使用已經(jīng)非常普遍，當(dāng)生化儀保養(yǎng)不當(dāng)時往往會導(dǎo)致：儀器清洗能力下降，比 色杯老化后引起吸附力增加，生化儀內(nèi)灰塵及污物的積聚，常

33、規(guī)清洗不能有效消除交叉污染等，或者測試順序安排不當(dāng)，這些均會增加儀器及試劑間交叉污染的可能 性，引起測定結(jié)果不準(zhǔn)確。常見影響因素及污染來源包括：（1）試劑通道堵塞或試劑針污染：有些試劑易產(chǎn)生結(jié)晶，會使試劑通道部分堵塞，造成試劑加入量不 足，影響實驗結(jié)果；當(dāng)試劑針在清洗不完全或黏附力增加時，殘留試劑可能會對下一檢測結(jié)果造成影響。（2）攪拌棒污染：試劑與樣本、第一試劑與第二試劑的混 勻需要攪拌棒，而攪拌棒如果清洗不完全，或黏附力增加時，殘留試劑可能會對下一檢測結(jié)果造成影響。（3）比色杯污染：生化分析儀的比色杯大體分為兩種，一 種是循環(huán)使用的（如石英比色杯等），另一種是需要定期更換的（如塑料比色杯等

34、），每個比色杯檢測完畢后，進(jìn)行清洗，然后繼續(xù)下一個檢測項目的檢測。當(dāng)由于 各種原因?qū)е履硞€比色杯清洗不完全或該比色杯老化時，吸附在比色杯上的上一個項目的殘留試劑可能會對在這個比色杯中進(jìn)行的下一個項目的檢測結(jié)果造成影響。 根據(jù)經(jīng)驗，比色杯的污染對結(jié)果影響最大，因為比色杯最難以清洗干凈，且在實際工作中難以判斷該比色杯上一測試的項目。（4）燈泡老化：這也是常見影響結(jié)果 的原因，應(yīng)按照要求及時更換燈泡，使儀器處于良好的工作狀態(tài)。臨床實驗室：除了儀器本身設(shè)計方面造成結(jié)果不穩(wěn)定性這個我們不能自己解決的原因，很多讀者反映日常使用時，質(zhì)控往往在控，單獨 測試一個項目時，比如肌酐非常準(zhǔn)確，但是同時測定很多項目，

35、結(jié)果就非常不好，這主要是什么原因（試劑間化學(xué)污染的可能性，引起測定結(jié)果不準(zhǔn)確）？于主任：試劑化學(xué)成分的交叉污染很難發(fā)現(xiàn)，往往質(zhì)控結(jié)果很好，或驗證試驗結(jié)果也良好，但實際測定的個別結(jié)果會誤 差很大。引起試劑間化學(xué)污染的原因很多，主要有兩個，一是試劑中含有下一個檢測所要測定的底物，或是含有的某種試劑成分與下一反應(yīng)的底物有作用，因而直接 干擾下一反應(yīng)的測定結(jié)果；另一種原因是該試劑所引導(dǎo)的反應(yīng)對下一個項目的反應(yīng)進(jìn)程帶來間接的干擾，在有試劑污染的情況下，下一個測試所測定的是前后兩個項 目反應(yīng)的綜合作用結(jié)果。臨床實驗室：造成以上試劑間化學(xué)污染導(dǎo)致測試結(jié)果不穩(wěn)定的種類都有哪些？于主任：根據(jù)試劑化學(xué)成分污染的途

36、徑可分為：（1）試劑成分的直接污染：上一個測定試劑中含有下一個測試所要測 定的物質(zhì)，直接干擾下一檢測的測定結(jié)果。如：淀粉酶（AMY）試劑中含有較高濃度的鈣（Ca 2+ ）；堿性磷酸酶（ALP）（IFCC法）、肌酸激酶（CK）（NAC法）、肌酸激酶-MB（CK-MB）（NAC法）、二氧化碳（CO2） （PEPC法）、AMY（EPS法）、三酰甘油（TG）等試劑中含有鎂（Mg 2+）；葡萄糖（GLU）（氧化酶法）、總蛋白 （TP）與酸性磷酸酶（ACP）試劑中含有較高濃度的鉀（K + ）；膽堿酯酶（ChE）、總膽固醇（CHOL）、GLU（GOD法）、尿酸（UA）（尿酸酶法）、乳酸脫氫酶（LD）（IFC

37、C法）、羥丁酸脫氫酶 （HBDH）（DGKC法）等試劑中含有磷酸緩沖液；CHOL、TG試劑及高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑中含有膽酸鈉；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 （ALT）（IFCC法）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）（IFCC法）試劑中含有高活性的LD；以上試劑的交叉污染就分別會對Ca 2+、Mg 2+、K+（紫外酶法）、磷（P）、總膽汁酸（TBA）及LD的測定結(jié)果造成干擾。（2）試劑成分參與反 應(yīng)：上一個試劑中含有的某種試劑成分與下一反應(yīng)所要測定的底物有作用，因而干擾下一反應(yīng)的測定結(jié)果。如：Mg 2+測定試劑的絡(luò)合 劑亦能與鐵（Fe）結(jié)合，影響鐵與鐵絡(luò)合劑的結(jié)合；直接膽紅素（DBil）（重氮法

38、）試劑含有EDTA，Mg 2+試劑中含有 EGTA，均能與Ca結(jié)合，從而影響Ca的測定；以甘油作為酶保護(hù)劑的試劑，會對TG的測定帶來干擾；鈣（MTB法）試劑對K+有 負(fù)干擾；CHOL試劑中含有膽固醇酯酶，可水解膽固醇酯形成游離膽固醇，而引起對游離膽固醇測定的干擾。（3）反應(yīng)進(jìn)程相同：上一個試劑所引導(dǎo)的反應(yīng)對下 一個項目的反應(yīng)進(jìn)程帶來間接的干擾，下一項目所測定的是前后兩個項目反應(yīng)的綜合作用結(jié)果。如：當(dāng)上一反應(yīng)產(chǎn)物為H2O2時，則對以Trinder反應(yīng)產(chǎn)生 顏色的測定結(jié)果引起干擾，如UA對CHOL結(jié)果的影響，CHOL對肌酐（CREA）（酶法）測定結(jié)果的影響，GLU（氧化酶法）對CREA測定結(jié)果的影

39、 響；CK（NAC法）、CK-MB（NAC法）試劑中含有GLU成分，其分析方法的原理中包含GLU的己糖激酶（HK）反應(yīng)過程，因此可能對GLU的測定 帶來干擾，尤其對GLU的HK法測定可能帶來嚴(yán)重干擾。（4）影響反應(yīng)條件：如上一試劑緩沖液成分改變了下一反應(yīng)的pH環(huán)境，從而改變反應(yīng)速率，如 TP（雙縮脲法）測定需在pH89時，蛋白肽鍵才都能與堿性銅溶液作用生成紫色反應(yīng)，若pH8時，則會導(dǎo)致TP結(jié)果偏低，還直接影響球蛋白、白蛋白/ 球蛋白的結(jié)果；酶活性測定有最適pH，大多數(shù)酶反應(yīng)pH在6.07.5之間，ALP、-GT、LDH則在堿性條件下最適宜；CREA（苦味酸速率法） 反應(yīng)條件為堿性，果糖胺（動力

40、學(xué)法）反應(yīng)條件為酸性，受到污染后反應(yīng)速率會減慢。CREA（酶法）試劑中含有抗壞血酸氧化酶，影響了氧化還原反應(yīng)的進(jìn)程， 會對TBA（酶循環(huán)法）測定結(jié)果有影響。DBil（釩酸鹽氧化法）試劑中含有表面活性劑的酒石酸鹽緩沖液會影響ALT活性，對測定結(jié)果有負(fù)干擾。臨床實驗室：如何判別試劑間存在化學(xué)污染？于主任：由于試劑中化學(xué)成分非常復(fù)雜，各種穩(wěn)定劑、反應(yīng)物質(zhì)、緩沖體系共存，且各品種、各廠商的試劑內(nèi)含物均不 同，因此試劑間的化學(xué)污染往往較難判別。日常工作中往往是儀器評估沒問題，而用戶使用時存有污染；質(zhì)控品和Westgard法則不起作用，質(zhì)控往往在控； 污染具有偶然性，并不是每次都出現(xiàn)。當(dāng)按照日常的分析順序

41、出現(xiàn)異常結(jié)果時，將出現(xiàn)異常結(jié)果的分析項目及其前一個項目單獨復(fù)檢又恢復(fù)正常，多是由于發(fā)生試劑 間交叉污染所致。但由于試劑成分的復(fù)雜多樣性，儀器狀況的獨特性，可能發(fā)生的試劑間交叉污染的情況不盡相同。各個公司所提供的產(chǎn)品說明書常不能夠全面反映 試劑組成的情況，因此需要通過試驗才能發(fā)現(xiàn)試劑交叉污染可能帶來的干擾。一般可以以下試驗及步驟來加以判別：（1）追溯可疑檢測項目的反應(yīng)杯序號，在這之 前該反應(yīng)杯做的是什么項目的檢測，以此來初步估計是什么反應(yīng)或什么物質(zhì)對后項目檢測產(chǎn)生干擾；初步確定后可選擇同類反應(yīng)，有針對性地實施交叉污染試驗加以 驗證，并尋找方法避開此污染。如加做清洗，更換試劑順序，甚至更換檢測試劑

42、或方法。（2）將某一試劑作為樣本進(jìn)行全套項目測定，觀察各項生化結(jié)果的情況， 進(jìn)而確定發(fā)生試劑交叉污染時造成直接干擾的項目。（3）1份樣品分成2份，1份加生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)南♂屢海硪环菁拥攘康哪吃噭?，同時測定，觀察結(jié)果 的變化，進(jìn)而確定可能發(fā)生試劑交叉污染時造成干擾的項目。（4）試劑交叉污染實驗方法：交叉污染初試：假設(shè)有3個項目A、B、C，以一混合血清 作為標(biāo)本，按以下順序測試：A2A5、B2B5、C2C5： 以此4次測定值平均值分別作為A、B、C項目無污染時的均值；AB-A：表示B項目對A項目污染時A項目的測定值，其余表示類同。若（AB- A/A×100）95%或105%則強(qiáng)烈支

43、持B試劑對A有交叉污染。疑似污染確認(rèn)：若上述初試結(jié)果B對A有污染，則可進(jìn)行以下試驗進(jìn)行確認(rèn)。臨床實驗室：如何消除試劑間的化學(xué)污染？于主任：首先要求檢驗人員對儀器工作流程、試劑組成、測定原理要了如指掌，對試劑交叉污染的各種可能性加以考 慮，合理設(shè)計程序。更換試劑時，應(yīng)仔細(xì)研究說明書，發(fā)現(xiàn)和避免可能存在的試劑交叉污染。實際工作中，用全自動生化分析儀進(jìn)行連續(xù)的多個項目的測定，每個反 應(yīng)的詳細(xì)過程難以探知，特別是比色杯的交叉污染無明顯的特征，因此應(yīng)理論分析結(jié)合實際應(yīng)用摸索出一套符合本單位工作的方法：（1）為減少試劑間的化學(xué)污 染，應(yīng)定期對儀器進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋ｐB(yǎng)，如更換管道，用去污劑、酸性洗液清洗比色杯，用

44、去污劑擦清試劑針，用無水乙醇擦洗攪拌棒等。（2）合理安排檢測項目的順 序：一般在安排項目順序時要求兩個項目間至少要有一個非干擾項目，由于各廠商試劑盒原理不同，內(nèi)含成分不同，故無固定的測定順序格式，需要自己摸索。較好 的做法是將被干擾項目置于干擾項目之前，以消除干擾發(fā)生的可能。一般檢測順序有以下原則：不受上一試劑的干擾；不影響下一試劑測定；不影響測試速 度；充分運(yùn)用剩余試劑位開展新項目；利用好儀器的功能。（3）當(dāng)合理設(shè)置測試順序無法消除交叉污染時，可使用生化分析儀的試劑針、比色杯清洗程序，對 試劑針、比色杯進(jìn)行2次或多次清洗。用堿性清洗液及酸性清洗液交叉沖洗試劑針可以有效地避免攜帶污染。（4）選

45、用具有抗交叉污染的試劑盒：如在游離膽固醇 試劑中添加膽固醇酯酶抑制劑，以減少膽固醇酯酶水解膽固醇酯而引起對游離膽固醇測定的污染。（5）部分大型全自動生化分析儀有多個模塊或通道，可以將有化 學(xué)污染干擾的項目排在不同的模塊或通道中檢測。三種肺炎支原體血清學(xué)檢測方法比較（廣告成分嚴(yán)重）肺炎支原體是急性呼吸道感染的常見病原體之一。近年來，已成為小兒肺炎常見的病原體，由其引起的呼吸感染日趨增多。目前，實驗室診斷方法主要依靠血清學(xué)。我們對2002年9月-2003年4月分院收治住院的呼吸道感染患兒進(jìn)行微量顆粒凝集法和酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行肺炎支原體抗體IgM的測試，并且同時檢測冷凝集試驗，現(xiàn)告如下。1材料與方法

46、1.1對象標(biāo)本來源2002年10月2003年4月就診的呼吸道感染癥狀的分院兒科病房呼吸道感染患者216例。每例均于入院2天內(nèi)抽血，。同時用間接血凝法和酶聯(lián)免疫法檢測MP-IgM抗體及冷凝集試驗。1.2 方法1.2.1微量顆粒凝集法測MP-IgM抗體，試劑盒SERODIASMYCO-由日本富士瑞比歐株式會社提供。嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作，每次均設(shè)陰、陽性對照，滴度1：80為陽性。1.2.2ELISA法試劑由美國診斷自動化公司生產(chǎn)，上海領(lǐng)檢科技公司提供，操作嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。1.2.3冷凝集試驗按臨床醫(yī)學(xué)檢驗“冷凝集試驗”進(jìn)行操作，滴度1：64為陽性。2結(jié)果2.1 治療結(jié)果216例受檢樣品中，MP感染和非MP感染患兒MP三種結(jié)果比較見表1。172例疑為MP感染的病例中，PA法陽性占 93.0%，ELISA法占95.3%，CAT法占67.4%。在44