流式細胞儀檢測凋亡和細胞周期等應用

1、什么是流式細胞儀流式細胞儀實物BD FACSVantageBD-Calibur 4. 4. 應用范圍應用范圍二、流式細胞儀的工作原理和基本結(jié)構二、流式細胞儀的工作原理和基本結(jié)構液柱與激光束相交，細胞上的熒光染料被激發(fā)產(chǎn)生熒光。液柱與激光束相交，細胞上的熒光染料被激發(fā)產(chǎn)生熒光。熒光信號變成電信號輸出到計算機，軟件分析。熒光信號變成電信號輸出到計算機，軟件分析。基本結(jié)構基本結(jié)構三、 流式細胞儀可檢測到的細胞參數(shù)顆粒度顆粒度細胞大小細胞大小血液涂片血液涂片外周全血細胞散射光雙參數(shù)點圖外周全血細胞散射光雙參數(shù)點圖 熒光染料被激發(fā)而發(fā)射的光信號。熒光染料被激發(fā)而發(fā)射的光信號。 定量染色定量染色 熒光信號

2、大小熒光信號大小 被標記組分含量的定量被標記組分含量的定量 多熒光標記胞內(nèi)多種組分，實現(xiàn)多參數(shù)測量多熒光標記胞內(nèi)多種組分，實現(xiàn)多參數(shù)測量二色鏡 1 2 3帶通濾波片光電倍增管激光束細胞收集透鏡前向散射光側(cè)向散射光，熒光光信號分離，導向光信號分離，導向各探測通道接收并轉(zhuǎn)化為電信號。各探測通道接收并轉(zhuǎn)化為電信號。光信號收集光信號收集三三 數(shù)據(jù)處理及數(shù)據(jù)處理及流式報告FSC SSC FSC SSC FL1 FL1 FL2 FL2 FL3FL3對數(shù)對數(shù) 線性線性 線性線性 線線性性 對數(shù)對數(shù)脈沖處理，模數(shù)轉(zhuǎn)換光信號電信號記錄數(shù)據(jù)，顯示結(jié)果（面積，峰高，寬度） 散點圖 密度圖二維等高圖直方圖圖 報告中常

3、見的幾種流式細胞圖R1File: 4Acquisition Date: 06-Mar-03QuadEvents% Gated X MeanY MeanUL2542.4037.47461.36UR106710.08816.86468.89LL529149.9819.574.41LR397537.55418.809.87圖 Annexin V/PI雙標記分析細胞凋亡和壞死流式細胞儀數(shù)據(jù)分析流式細胞儀數(shù)據(jù)分析流式細胞儀數(shù)據(jù)分析流式細胞儀數(shù)據(jù)分析圖中100101（M1）為陰性細胞，101以上的（M2）為陽性細胞 五、 流式細胞術的應用（Propidium iodidePropidium iodide碘

4、化丙啶），碘化丙啶）， 圖中2N代表G0/G1期細胞，4N代表G2/M期細胞，兩者中間代表S期細胞。這是以2倍體和4倍體細胞為主的流式DNA圖 DNADNA細胞周期分析細胞周期分析細胞周期細胞周期 200 400 600 8001000DNADNA含量含量細細胞胞數(shù)數(shù)量量2 2倍體倍體異倍體異倍體4 4倍體倍體腫瘤組織中的各種腫瘤組織中的各種DNADNA倍體倍體含量與凋亡關系含量與凋亡關系1. 1. 腫瘤診斷腫瘤診斷2 2倍體倍體異倍體異倍體4 4倍體倍體腫瘤組織中的各種腫瘤組織中的各種DNADNA倍體倍體2. 2. 凋亡研究凋亡研究Annexin V AssayAnnexin V Assay

5、R1File: 4Acquisition Date: 06-Mar-03QuadEvents% Gated X MeanY MeanUL2542.4037.47461.36UR106710.08816.86468.89LL529149.9819.574.41LR397537.55418.809.87圖 Annexin V/PI雙標記分析細胞凋亡和壞死Date acquired: 14-Jan-03File: 7Gy 4hr.001Source: dongboDIPLOID: 100.00 % Dip G0-G1: 73.12 % at 48.16 Dip G2-M: 9.59 % at 96.

6、33 Dip S: 17.29 % G2/G1: 2.00 Dip %CV: 6.04Apoptosis: 13.66 % Mean: 27.48 R1圖圖 FCMFCM測試細胞周測試細胞周 期分布和凋亡期分布和凋亡根據(jù)凋亡細胞的特點來檢測根據(jù)凋亡細胞的特點來檢測 三）三）R1M1M1流式細胞術檢測細胞表型 四）四）白血病的免疫分型白血病的免疫分型 五）五） 細胞內(nèi)蛋白的分析：細胞內(nèi)蛋白的分析：熒光信號熒光信號熒光樣本制備熒光樣本制備雙色直接染色雙色直接染色 端粒（熒光蛋白）端粒（熒光蛋白） FCM檢測胞內(nèi)鈣離子、膜電位和線粒體功能M1陰性界限劃分完全是根據(jù)陰性對照！如下圖：紅色部分代表陰性對照，即：所檢測的物質(zhì)在陰性組中的基礎表達量，可以理解為背景、靜息狀態(tài)下、基礎水平、未受刺激時等。藍色部分即陽性組，也就是接受刺激后，功能狀態(tài)下、藥物作用后等。 六六. . 分選：分選：488 nm laser488 nm laser+- -Fluorescence Activated Fluorescence Activated Cell SortingCell SortingCharged PlatesCharged PlatesSingle cells sortedSingle