癌癥病人術(shù)后主動(dòng)特異性免疫治療

1、癌癥病人術(shù)后主動(dòng)特異性免疫治療 發(fā)表者：張文忠（訪問人次：933） - ndv修飾自體腫瘤 細(xì)胞疫苗中國醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)科技部李剛毅中國人民解放軍總醫(yī)院腫瘤內(nèi)科韓小紅北京朝陽慈濟(jì)醫(yī)院生物治療中心許麗南主 題詞：自體瘤苗（atv）新城雞瘟病毒（ndv） t細(xì)胞（tcell）主動(dòng)特異性免疫 治療（asi）英文縮寫：hn神經(jīng)氨酸酶 濮陽市油e總醫(yī)院普外科張文忠atv-ndv ndv修飾口體腫瘤細(xì)胞疫苗taa腫瘤相關(guān)抗原tata腫瘤相關(guān)移植抗原或腫瘤排斥抗原tcr抗原特異性t細(xì)胞受體mhc主要組織相容性復(fù)合體mltc混合淋巴腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)ctl細(xì)胞毒t淋巴細(xì)胞一、概述在腫瘤基因治療中，經(jīng)常采用的手段就是

2、利用病毒作載體，將保護(hù)性或治療性基因直 接轉(zhuǎn)移至腫瘤細(xì)胞制成瘤苗，但這種手段常受到可感染細(xì)胞的數(shù)量、組織選擇性和應(yīng)用安全 性的限制。本文介紹一種更加安全、有效和組織選擇性好的感染人腫瘤細(xì)胞的方法-新城雞 瘟病毒（ndv）,它是一種禽類的副粘液病毒，具有多組織親和性（pleiotropic）的免疫刺激 特性，能在腫瘤細(xì)胞質(zhì)屮選擇性地復(fù)制而不依賴于細(xì)胞的增殖，使用安全。作為一種佐劑, 這種病毒臨床使用最顯著的特點(diǎn)就是它具有誘導(dǎo)t細(xì)胞共刺激活性、防止無能誘導(dǎo)和誘導(dǎo) 局部趨化因子（如：rantes> ip-10）和細(xì)胞因子（如：ifna、0, tnfa）的產(chǎn)生。因子 影響t細(xì)胞的募集和活化。利用

3、病毒來治療腫瘤的概念可以追索到本世紀(jì)的早期，當(dāng)時(shí)許多有意義的發(fā)現(xiàn)引起了 人們極大的興趣，這就是許多腫瘤患者在自然病毒感染后出現(xiàn)腫瘤緩解和自愈現(xiàn)象。（13） 例如：腮腺炎病毒（4）和風(fēng)疹病毒（3）感染。從此，便開始了將不同病毒用于臨床治療的 嘗試，但是，引起了一系列嚴(yán)重問題和副作用，特別是神經(jīng)毒作用和由于中和抗體的產(chǎn)生而 導(dǎo)致的無效。1994年德國國家癌癥研究所的雜志社論（5）標(biāo)志著利用病毒治療的新紀(jì)元。 在這篇社論中，ndv被認(rèn)為是最有希望的治療性的病毒。以ndv為基礎(chǔ)的疫苗已經(jīng)成為極具經(jīng)濟(jì)價(jià)值的曽醫(yī)藥，許多國家已用它保護(hù)由致病 性ndv引起的非典型性禽類疾?。?）o長期以來，人們已經(jīng)很清楚的

4、知道ndv具有抗哺 乳動(dòng)物（包括人）腫瘤的形成（7）和免疫刺激的特點(diǎn)（8、9）。與其它類病毒相比，ndv 具有相對安全的優(yōu)點(diǎn)，許多感染過ndv的農(nóng)場主和實(shí)驗(yàn)室工作人員都有這樣的經(jīng)驗(yàn)，即使 是感染了野生型的ndv也只是引起輕微的疾病，如輕度關(guān)節(jié)炎和喉炎。利用ndv治療人類腫瘤有三種不同的概念-病毒治療、非特異性免疫治療和主動(dòng)特 異性免疫治療。早期的病毒治療主要是采用ndv73t和ndv italian兩種溶解性毒株，如 ndv73t它能感染人所有類型的腫瘤細(xì)胞并在其屮復(fù)制，引起細(xì)胞與細(xì)胞的融合和多核體的 形成，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。由于ndv不能在正常細(xì)胞中復(fù)制，因此，人們就注意到了 ndv介導(dǎo)

5、的對人腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷作用（10）。在裸鼠實(shí)驗(yàn)中，人們觀察到了，經(jīng)過 ndv局部治療后，人異種移殖瘤溶解和完全緩解（11）。但是，這種利用病毒直接注射治療 腫瘤的方法沒有進(jìn)入臨床應(yīng)用，僅限于局部治療，因?yàn)橛捎谌搜逯泻涂贵w的存在，病毒不 能到達(dá)腫瘤轉(zhuǎn)移灶。德國癌癥研究中心的進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在人黑色素瘤裸鼠轉(zhuǎn)移模型中， 利用ndv italian毒株進(jìn)行系統(tǒng)治療，沒有觀察到抗轉(zhuǎn)移效果（12）；利用ndv治療人腫瘤 的第二個(gè)概念就是非特異性免疫刺激。在匈牙利，這種治療方法己經(jīng)進(jìn)入臨床評估階段，他 們將減毒的禽類病毒疫苗（吸入劑）用于晚期腫瘤病人的治療。良好的臨床應(yīng)用結(jié)果已經(jīng)發(fā) 表（13）。在體

6、外將非溶解性毒株ndv ulster感染的人黑色素瘤細(xì)胞在注射裸鼠前與過量的 非感染黑色素瘤細(xì)胞混合后，發(fā)現(xiàn)不能發(fā)生種植反應(yīng)。這表明非特界性免疫刺激作用具有很 強(qiáng)的抗腫瘤旁觀者效應(yīng)。（12）這就是眾所周知的，ndv能激活人免疫細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子（8、 9）和抗腫瘤ctl （14）；第三個(gè)概念就是利用ndv作為有效腫瘤疫苗的生物佐劑。其目的 就是聯(lián)合應(yīng)用疫苗表達(dá)腫瘤相關(guān)抗原（taas）的特異組份和增加腫瘤細(xì)胞免疫原性的非特 界組份。在早期的開拓性研究工作中，william a.cassel用腫瘤溶解性毒株ndv73t制備黑 色素瘤裂解物疫苗用于臨床治療（15、16）,他在一系列的模式系統(tǒng)中（17）

7、觀察到病毒增 強(qiáng)了裂解物的抗原性。1983年和1992年，他發(fā)表兩個(gè)令人振奮的改善長期生存率的報(bào)告。 在這個(gè)報(bào)告屮，83例ii期惡性黑色素瘤病人術(shù)后接受免疫治療的五年生存率到達(dá)69%而沒 有接受接種的病人五年生存率只有17% （15、16）。八十年代初，徳國癌癥研究中心的 schirrmacher教授開始了設(shè)計(jì)利用非溶解性毒株修飾腫瘤細(xì)胞的活細(xì)胞疫苗的研究。從此， ndv ulster這個(gè)低致病性毒株便被選擇用于此目的（18、19）。二、atv-ndv的概念和制備兩種組份（特異和非特異）的活細(xì)胞疫苗適用于所有尚未鑒定腫瘤排斥抗原的腫瘤。特異 性組份就是白體腫瘤細(xì)胞，它來自病人手術(shù)的新解組織，因

8、為它最能代表和體現(xiàn)腫瘤病人個(gè) 體所有腫瘤抗原的免疫原性。具有多種潛在腫瘤相關(guān)抗原的新鮮分離的腫瘤細(xì)胞是一個(gè)具有 許多異質(zhì)性克隆的細(xì)胞簇，這個(gè)總體的細(xì)胞群落都能被非溶解性毒株ndv ulster有效感染 而修飾。因此，細(xì)胞疫苗具有許多優(yōu)越性。第一，無須鑒定特異性taas的存在；第二，經(jīng) 過適當(dāng)修飾的細(xì)胞疫苗可適用多種惡性腫瘤的有效免疫治療。ndv作為修飾劑的顯箸特點(diǎn)是它的細(xì)胞結(jié)合特性，在幾分鐘之內(nèi)，它通過自身的神 經(jīng)氨酸酶分子與包含ndv受體的唾液酸（sialyl -a-2-3-gal pl-4）結(jié)合（20）。而唾液酸是 細(xì)胞表面廣泛存在的神經(jīng)節(jié)昔脂的組份。在雞種蛋里繁殖的具有感染性的ndv u

9、lster標(biāo)準(zhǔn) 株包含有經(jīng)過酶切而具有融合活性的融合蛋白f,病毒與細(xì)胞結(jié)合后，hn和f介導(dǎo)了病毒 外膜和宿主細(xì)胞膜的融合作用。包含病毒負(fù)鏈rna皋因組的病毒核殼體通過宿主細(xì)胞產(chǎn)生 的小孔進(jìn)入宿主細(xì)胞質(zhì)。atv-ndv的制備通常是在pbs的環(huán)境中進(jìn)行，每一千萬個(gè)細(xì)胞與 32hu ndv ulstei溫育1小時(shí)。細(xì)胞疫苗經(jīng)過200gy射線或mmc處理滅能后就可用于癌 癥病人的真皮內(nèi)注射，注射6-24小時(shí)內(nèi)，在接種局部，病毒在感染的腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖, 增加了病毒分子（如hn）的數(shù)量，誘導(dǎo)許多宿主基因產(chǎn)生可溶性因子。女口：細(xì)胞因子、趨 化因子和卩丫片肽等。這些因子共同改變了接種局部的微環(huán)境，導(dǎo)致局部

10、非特異性炎癥反應(yīng)。 t細(xì)胞通過ndv誘導(dǎo)的趨化因子（rantes和ip10）而募集于接種局部，有些t細(xì)胞表 達(dá)t細(xì)胞受體（tcr）,這些受體與腫瘤細(xì)胞表面以mhc-taas復(fù)合物存在的taas肽相互 作用介導(dǎo)第一信號的產(chǎn)生，缺乏共刺激分子的腫瘤細(xì)胞就不能傳遞另外的共刺激信號，因此 就不能活化腫瘤特異的t淋巴細(xì)胞。相反，在atv-ndv接種局部，由于共刺信號的存在， 腫瘤特異性t淋巴細(xì)胞就能夠活化，一種共刺激信號（信號2）是由病毒hn分子與病毒受 體相互作用介導(dǎo)產(chǎn)生，另一種共刺激信號（信號3）是由細(xì)胞因子與其對應(yīng)的受體相結(jié)合產(chǎn) 生的。如ifna與1型ifn受體相結(jié)合。募集于接種位點(diǎn)的腫瘤特異性t

11、淋巴細(xì)胞有兩種類 型，其一是在荷瘤機(jī)體接受過刺激（primed）的記憶細(xì)胞。其二是處女t細(xì)胞。這兩種細(xì)胞 活化后產(chǎn)生腫瘤特異性記憶t細(xì)胞，重新參與體液循環(huán)，再一次接觸taas時(shí)，例如在轉(zhuǎn)移 灶處，就可以通過介導(dǎo)細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生而誘導(dǎo)局部抗腫瘤免疫反應(yīng)，新產(chǎn)生的這 些因子又可進(jìn)一步募集（recruit）其它t細(xì)胞，最終消滅腫瘤，淋巴結(jié)引流區(qū)的處女t細(xì)胞 也可被激活（primed）,隨接種次數(shù)的增加抗腫瘤反應(yīng)性t細(xì)胞的數(shù)量也不斷增加。atv-ndv臨床應(yīng)用的另一個(gè)重要方面就是由于修飾劑（病毒或細(xì)菌）的存在對機(jī)體 反應(yīng)狀態(tài)的逆轉(zhuǎn)。病毒或細(xì)菌感染過中，炎癥原因子的釋放干擾了免疫耐受和自身免疫性

12、疾 病的誘導(dǎo)（21）。因此，利用病毒（如ndv）或細(xì)菌（如bcg （22）修飾自體腫瘤細(xì)胞在 逆轉(zhuǎn)機(jī)體無反應(yīng)狀態(tài)（免疫耐受）方面似乎是非常合理的，這種無反應(yīng)狀態(tài)受到腫瘤特異性 t細(xì)胞的沖擊。三、atv-ndv臨床應(yīng)用安全性下面我們總結(jié)一下ndv ulster感染人腫瘤細(xì)胞的特點(diǎn)。該病毒可以在人的腫瘤細(xì)胞中大量 復(fù)制，這一特點(diǎn)可以采用流式細(xì)胞技術(shù)做定量分析。例如：ndv ulster感染人黑色素瘤細(xì)胞 后，用抗hn單抗染色顯示，細(xì)胞表面熒光強(qiáng)度隨ndv感染劑量的增強(qiáng)，呈劑量依賴性漂 移，用200gy r-射線輻射腫瘤細(xì)胞可以證實(shí)病毒在腫瘤細(xì)胞屮的復(fù)制是非宿主細(xì)胞增殖依賴 性的。因?yàn)樯渚€處理并不影

13、響病毒在宿主細(xì)胞中的復(fù)制，所以射線處理可以在感染腫瘤 細(xì)胞之前或之后進(jìn)行，或者在患者使用前進(jìn)行。至于這種治療手段的安全性問題需要特別指 出的是：ndv ulster基因組不與宿主細(xì)胞dna整合，該病毒不能在人正常細(xì)胞中復(fù)制，刈* 人沒有感染性。另外，感染人腫瘤細(xì)胞后新產(chǎn)生的病毒顆粒沒有感染能力，至少有三種方法 可以證明這一點(diǎn)（23）。如果人們對應(yīng)用活病毒還心存疑慮的話，紫外線滅活是一個(gè)很好的 辦法，因?yàn)閚dv很容易被紫外線滅活而不破壞其細(xì)胞結(jié)合能力和ctl刺激活性（31）。四、ndv感染腫瘤細(xì)胞介導(dǎo)粘附分子、改善抗原呈遞、誘導(dǎo)細(xì)胞因子和趨化因子產(chǎn)生和t 細(xì)胞共刺激活性（一）介導(dǎo)粘附分子，改善抗

14、原呈遞本節(jié)將著重討論atv-ndv的功效、作用機(jī)制和相關(guān)的文獻(xiàn)綜述。1979年日本學(xué)者 kobayashi用鼠friend病毒感染大鼠腫瘤細(xì)胞進(jìn)行腫瘤免疫治療的實(shí)驗(yàn)（24）,為了解釋其免 疫治療效果他首次提出了完整腫瘤細(xì)胞的“異種化”概念，他認(rèn)為實(shí)驗(yàn)中觀察到腫瘤消退現(xiàn)象 是由于t細(xì)胞介導(dǎo)的對外來病每抗原識別的輔助效應(yīng)所致。在此文中kobayashi還報(bào)告了許 多移植瘤實(shí)驗(yàn)的新發(fā)現(xiàn)，即經(jīng)過輻射處理滅活的完整腫瘤細(xì)胞（inactived but live）的免疫原 性要比細(xì)胞裂解物和細(xì)胞膜的免疫原性強(qiáng)。徳國科學(xué)家schirremacher教授在混合淋巴-腫瘤 細(xì)胞培養(yǎng)（mltc）實(shí)驗(yàn)中，也證實(shí)了這

15、一點(diǎn)。他們的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，滅能但存活的完整腫瘤細(xì) 胞在產(chǎn)生腫瘤特異性ctl的應(yīng)答方面具有極其重要的作用而細(xì)胞裂解物的免疫原性極低 （25）。在l10豚鼠肝癌模型中，他們觀察到，腫瘤細(xì)胞疫苗屮腫瘤細(xì)胞的活力在形成局部 炎癥應(yīng)答和抗轉(zhuǎn)移治療效果方面具有與上述同等的重要性（22）。進(jìn)而，在一系列動(dòng)物腫瘤 模型免疫/保護(hù)實(shí)驗(yàn)屮證實(shí)，同種同基因腫瘤細(xì)胞系（allogeneic）或同源同基因細(xì)胞系 （syngeneic）間的低交叉反應(yīng)性表明其腫瘤識別和系統(tǒng)保護(hù)性免疫的高特異性，抗高轉(zhuǎn)移鼠 淋巴瘤亞系esb的腫瘤特異性ctl識別i類mhc （kd）限制性腫瘤抗原表位而不與其親代 低轉(zhuǎn)移淋巴瘤細(xì)胞系eb發(fā)生交叉反

16、應(yīng)（26、27）o利用ndv修飾、輻射處理的esb活腫瘤細(xì)胞疫苗，術(shù)后免疫接種發(fā)生微轉(zhuǎn)移同源 同基因小鼠dba/2實(shí)驗(yàn)表明，接種這樣的疫苗能對這些小鼠產(chǎn)生明顯和長時(shí)期的保護(hù)效果（18、19）o所有以上這些實(shí)驗(yàn)和觀察結(jié)果就構(gòu)成了病毒修飾自體腫瘤活細(xì)胞疫苗治療概念 的基礎(chǔ)。在早期的esb腫瘤模型asi研究中，德國學(xué)者觀察到用低劑量ndv ulster修飾比用高 劑量ndv ulster修飾能獲得最佳的治療效果（18）,類似的結(jié)果在大鼠friend病毒修飾的實(shí) 驗(yàn)屮也觀察到了（28）,利用不同劑量ndv修飾的esb腫瘤細(xì)胞的大容量體外mltc研究 揭示了，低劑量病毒修飾在增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞特異性ctl應(yīng)答

17、方面，具有最佳的生物學(xué)功能 （29）。緊接著徳國學(xué)者在有限稀釋分析中發(fā)現(xiàn)ndv對腫瘤細(xì)胞的感染引起ctl的前體細(xì) 胞增加3倍；檢驗(yàn)單個(gè)ctl克隆的特異性發(fā)現(xiàn)，所有克隆都是腫瘤特異性的，而沒有一個(gè) 克隆是識別病毒抗原的（29）。另外，病毒修飾在增強(qiáng)體外免疫應(yīng)答是非常迅速的，而這是 建立在病毒特異性t輔助細(xì)胞（th）誘導(dǎo)基礎(chǔ)上的”異種化“假設(shè)所不能解釋的，也就是從 那時(shí)候開始（1988年）由德國學(xué)者schirremacher教授等提出了由ndv感染介導(dǎo)的t細(xì)胞 共刺激活性概念?，F(xiàn)在我們知道，t細(xì)胞共刺激依賴于腫瘤細(xì)胞表面某些粘附分子作為配體與相應(yīng)的t 細(xì)胞表面上的受體z間的粘附作用。例如cd80和

18、cd86與t細(xì)胞表面上的cd28相互作用 介導(dǎo)了一個(gè)共刺激信號（也稱為cd28途徑）；lfa-3與cd2相互作用介導(dǎo)了另一個(gè)共刺激 信號（t細(xì)胞受體復(fù)合物相關(guān)途徑）。圖2說明了徳國科學(xué)家早期的ndv介導(dǎo)的t細(xì)胞共 刺激活性假說。在提供這一假說的最新實(shí)驗(yàn)證據(jù)以前，我們先來討論直接引起免疫原性和t 細(xì)胞刺激能力改變的ndv感染后腫瘤細(xì)胞表面的分子變化。ndv感染腫瘤細(xì)胞后引入了 一個(gè)新的細(xì)胞表面粘附分子-神經(jīng)氨酸酶（hn）,它增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞表面對淋巴細(xì)胞的粘附作 用，通過各種病毒滅活方法檢驗(yàn)證實(shí)，ndv增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞免疫原性的能力與其腫瘤細(xì)胞表 面的結(jié)合能力密切相關(guān)（30）。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)，hncdn

19、a鼠成纖維細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株比 對照新感染株能結(jié)合更多的淋巴細(xì)胞。當(dāng)抗原特異性t細(xì)胞與特異抗原肽共孵育并允許其 與各自的同一個(gè)細(xì)胞上的i類mhc呈遞的抗原肽相互作用時(shí)，表達(dá)hn的細(xì)胞增強(qiáng)了抗原 呈遞能力（31）。另一個(gè)重要發(fā)現(xiàn)就是，ndv誘導(dǎo)的干擾素（ifns）在抗腫瘤ctl的應(yīng)答 方面具有重要的作用（32）。如果將a、卩干擾索的中和抗體加入mltc的培養(yǎng)液中，發(fā)現(xiàn) ctl活性明顯減小，說明i類干擾素在抗原特界性ctl應(yīng)答方面具有重要的輔助功能。在 基因重組干擾素面世以前，ndv 直是用來生產(chǎn)不同細(xì)胞類型干擾素的最常用的病毒，但 是，干擾素不僅僅是ndv感染腫瘤細(xì)胞所產(chǎn)生的唯一可溶性介質(zhì)。（二）

20、誘導(dǎo)細(xì)胞因子和趨化因子產(chǎn)生業(yè)已證明，在腫瘤細(xì)胞或宿主細(xì)胞感染ndv后可產(chǎn)生的細(xì)胞因子、趨化因子和其它基因 產(chǎn)物達(dá)12種以上，其中：細(xì)胞因子有ifnot、p, tnfa, il-1, il-6；趨化因子有rantes> ip-10 ；其它基因產(chǎn)物如：hsp、acth endorphin,inos,epa/timp, nfkb 等。在本文所涉 及的t細(xì)胞活化和腫瘤細(xì)胞疫苗的主動(dòng)免疫方面起重要作用ndv誘導(dǎo)介質(zhì)是tantes和 ip-10,它們對單核細(xì)胞和t淋巴細(xì)胞在atv-ndv接種位點(diǎn)部位募集發(fā)揮著重要作用。這 一結(jié)論可以用白細(xì)胞募集的海綿基質(zhì)測定實(shí)驗(yàn)所證實(shí)（33）。也可以從癌癥患者免疫接

21、種后 增強(qiáng)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)觀察到（34）。因?yàn)?干擾素和卩-干擾素在t細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答方面的重要作用過去一直 被忽視，這里需要著重指出【型干擾素（ifns）在ctl應(yīng)答和保護(hù)性抗腫瘤免疫方面具有 協(xié)同作用。一個(gè)最顯著的例證就是i型ifn受體基因敲除小鼠，由于受體的缺失導(dǎo)致cd8t 細(xì)胞（即細(xì)胞免疫中的殺傷性t細(xì)胞）降低10倍，這一結(jié)果以及前面所述的抗體阻斷實(shí)驗(yàn) 都表明，t細(xì)胞活化的共刺激信號不僅通過象cd28這樣的粘附分子產(chǎn)生，也通過象ctl 上ifn-r這樣的細(xì)胞因子受體介導(dǎo)產(chǎn)生，這些信號在t細(xì)胞的功能活化和擴(kuò)增等方面都具 有重要作用。ndv能誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞產(chǎn)生*干擾素和卩-干擾素

22、，在體外的mltc-ctl 培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)的保護(hù)性抗腫瘤免疫檢驗(yàn)中都證明了 ifna和ifn（3具有協(xié)同作用（36）0同 樣，病毒誘導(dǎo)的干擾素也增強(qiáng)t輔助細(xì)胞的旁觀者效應(yīng)（35）或者增強(qiáng)對同族cd4t細(xì)胞 的輔助以及cd8t細(xì)胞應(yīng)答。在過繼性抗腫瘤免疫治療屮，也可看到抗腫瘤免疫致敏t細(xì) 胞和ifna/卩的協(xié)同效應(yīng)。（三）誘導(dǎo)t細(xì)胞共刺激活性ndv感染腫瘤細(xì)胞后誘導(dǎo)t細(xì)胞共刺激活性。ndv不僅可以誘導(dǎo)鼠cd4和cd8 t 淋巴細(xì)胞的應(yīng)答，也可以誘導(dǎo)人cd4和cd8t淋巴細(xì)胞的應(yīng)答。關(guān)于cd8t細(xì)胞的應(yīng)答我 們在前血已經(jīng)提到過，ndv來源的hncdna轉(zhuǎn)染至i類mhc-肽抗原呈遞細(xì)胞中，可以刺 激

23、鼠抗原特異性ctl前體細(xì)胞的能力增強(qiáng)8倍；至于cd4t細(xì)胞的應(yīng)答，我們也發(fā)現(xiàn)，當(dāng) 與亞適劑量的抗cd3刺激物混合后，ndv對誘導(dǎo)共刺激活性。對于人t細(xì)胞來說，一個(gè)有 趣的發(fā)現(xiàn)是，有些來自于病人的黑色素瘤特異性cd4t輔助細(xì)胞克隆，它們不能被自體黑色 素瘤刺激細(xì)胞刺激，只有以抗cd28抗體形式存在的共刺激信號存在時(shí)才被活化（37）。如 果沒有共刺激信號的存在，這些t細(xì)胞在與腫瘤細(xì)胞相互作用后，不僅不增殖，不產(chǎn)生il-2, 而且變成無反應(yīng)狀態(tài)（無能），之后再遇共刺激信號也無應(yīng)答。在德國癌癥研究中心設(shè)計(jì)的 新檢驗(yàn)系統(tǒng)中可以看到，ndv感染自體黑色素瘤細(xì)胞的共刺激效應(yīng)是：增殖后的t細(xì)胞應(yīng) 答、il-2

24、的產(chǎn)生和阻止無反應(yīng)狀態(tài)的誘導(dǎo)。在圖2所示的模型屮，集屮反映了病毒修飾的腫瘤細(xì)胞和應(yīng)答t細(xì)胞間相互作用的 分子。這個(gè)模型表明了一種機(jī)制。即每個(gè)細(xì)胞引入103-104個(gè)功能hn分子后，瘤苗就能發(fā) 揮最大的生物學(xué)效應(yīng)。副粘液病毒的hn分子在病毒的表面通過二硫鍵形成二聚體和四聚 體，每一個(gè)復(fù)合物代表了一個(gè)起吸附作用位點(diǎn)的分子叢和神經(jīng)氨酸酶活性。表達(dá)于腫瘤細(xì)胞 或抗原呈遞細(xì)胞表面的hn分子，要么以膜整合的形式，要么以非融合病毒子的形式起粘附 分子的作用，這是因?yàn)閔n具有與神經(jīng)節(jié)昔酯上的唾液酸寡糖相結(jié)合的結(jié)構(gòu)域，另外一個(gè) 結(jié)構(gòu)域所表達(dá)的神經(jīng)氨酸酶活性可以導(dǎo)致唾液酸酯解（受體破壞活性），這是病毒除吸附的 正

25、常機(jī)制，細(xì)胞表面負(fù)電荷的移去可以減少細(xì)胞間的電脈沖，增強(qiáng)細(xì)胞的相互作用（30）。最近有報(bào)道指出，共刺激信號使t細(xì)胞的活化域值大大降低（從每細(xì)胞8000個(gè)t細(xì) 胞激發(fā)受體降至1500個(gè)），使t細(xì)胞對抗原的刺激更敏感（38）?？梢韵胂?，在t細(xì)胞受體 激發(fā)的連續(xù)動(dòng)力學(xué)過程中，鄰近hn分子與細(xì)胞表面受體的結(jié)合和破壞功能，可以降低t 細(xì)胞的活化域值從而產(chǎn)生共刺激效應(yīng)。參考文獻(xiàn)1. webb he, smith ce: viruses in the treatment of human cancer.lancet 1: 1206-1208, 1970.2. lindenmann j:viruses as

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