常用幾種感受態(tài)區(qū)別

1、常用大腸桿菌感受態(tài) JM109， DH5a ，BL21 的區(qū)別1: DH5a菌株DH5a是一種常用于質(zhì)?？寺〉木辍.coli DH5a在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn) 化時(shí)，可與載體編碼的3-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn) a-互補(bǔ)。可用于藍(lán)白斑篩選 鑒別重組菌株。基因型：F-, © 80dlacZ M, (lacZYAargF)U169, deoR, recAI, endA1, hsdR17(rk-, mk+), phoA, supE44,入，thi-1 , gyrA96, relA1 2：BL21(DE3) 菌株該菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體 T7 啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如 pET 系列)

2、的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位于 入噬菌體DE3區(qū)，該區(qū)整合于BL21的染 色體上。該菌適合表達(dá)非毒性蛋白。基因型： F-，ompT， hsdS(rBB-mB-)，gal， dcm(DE3)3：BL21(DE3) pLysS 菌株該菌株含有質(zhì)粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基 因，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾目的蛋白的表達(dá)。該菌適合 表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白?；蛐停?F-，ompT hsdS(rBB-mB-)，gal， dcm(DE3，pLysS ，Camr 4: JM109菌株該菌株在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)化或用M13 phage載

3、體進(jìn)行轉(zhuǎn)染 時(shí)，由于載體DNA產(chǎn)生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZA M15進(jìn)行a互 補(bǔ)，從而顯示3-半乳糖苷酶活性，由此很容易鑒別重組體菌株基因型： recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,A(lac- proAB)/F'traD3,6proAB+,lacIq,lacZ AM155: TOP10菌株 該菌株適用于高效的 DNA 克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增,能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳?；蛐停篎-, mcrAA (mrr-hsd RMS-mcrBC),© 80, lacZ A M15 AlacX 74,recA1 ，araA139

4、A(a-lreau)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG 6: HB101 菌株該菌株遺傳性能穩(wěn)定，使用方便，適用于各種基因重組實(shí)驗(yàn)基因型: supE44，hsdS20(rB-mB-)，recA13，ara-14，proA2，lacY1， galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-17: M110 或 SCS110大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有 Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在 CCA/TGC序列的第一個(gè)胞嘧 啶C-5位置上引入甲基。 常用的菌株都會(huì)產(chǎn)生dam,dcm,從

5、而受到甲基化的影 響.部分限制性?xún)?nèi)切酶對(duì)甲基化的 DNA不能切割，如Fbal和Mbol等，一般生物公 司提供的內(nèi)切酶說(shuō)明中均有說(shuō)明。大多數(shù)酶切位點(diǎn)的甲基化不影響切割，而有些會(huì)影響，如 Xbal, Bcll 等。而且 甲基化只發(fā)生在特定序列，以 Xbal 為例，只有在位點(diǎn)序列旁出現(xiàn) GA 或 TC， 該 Xbal 位才會(huì)被甲基化。而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法： (1)選用上述酶的同功酶，如 Sau3Al， DNA 識(shí)別切割位點(diǎn)與 Mbol 相同；但 不受甲基化影響；( 2)利用甲基化酶缺失的受體細(xì)胞進(jìn)行DNA 的制備，如 E.coli JM110 和鏈霉菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶

6、已敲出，而后者細(xì)胞內(nèi)本就沒(méi)有甲基化酶， 從這些細(xì)胞中抽提的 DNA 就能被上述酶切割。8：E.coli JM110要排除dam,dcm甲基化的影響，需要用特定的 dam-,dcm-的菌株，女口 JM110 如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株產(chǎn)生的質(zhì)粒，則不會(huì)被甲基化 .各種感受態(tài)細(xì)胞的區(qū)別 用途 特征Xl1-Blue 菌株基因型： endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 FTn10 proAB+ laclq (lacZ)M15 hsdR17(rK mK+)。 特點(diǎn)：具有卡那抗性、四環(huán)素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和質(zhì)粒提

7、取。BL21(DE3)菌株基因型：F-ompT gal dcm Ion hsdSB(rB- mB-)入(DE3 lacI lacUV5T7 gene 1 ind1 sam7 nin5)。特點(diǎn)：該菌株用于以 T7 RNA 聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達(dá)宿 主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達(dá)受控于 入噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動(dòng) 子，該區(qū)整合于 BL21 的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達(dá)。 用途：蛋白質(zhì)表達(dá)。BL21(DE3)ply 菌株基因型：F- ompT gal dcm Ion hsdSB(rB- mB-) 2D(3) pLysS(cmR)。特點(diǎn)：該菌株帶有pLysS，

8、具有氯霉素抗性。此質(zhì)粒還有表達(dá) T7溶菌酶的基 因， T7 溶菌酶能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾 IPTG 誘導(dǎo)的表達(dá)。 適合于毒性蛋白和非毒性蛋 白的表達(dá)。用途：蛋白質(zhì)表達(dá)DH5a菌株基因型：F- endAI glnV44 thi-1 recAI relAI gyrA96 deoR nupG 80dlacZ M15 (lacZYAargF)U169, hsdR17(rK-,入-特點(diǎn)：一種常用于質(zhì)?？寺〉木辍Ｆ?0dlacZ M1基因的表達(dá)產(chǎn)物與pUC 載體編碼的3半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn) a互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和 endA1 的突變有利于克隆 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒

9、 DNA 的提取。 用途：分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。JM109菌株基因型： endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ (-lparcoAB) e14-F traD36 proAB+ lacIq lacZ M15hsdRK+)rK特點(diǎn)：部分抗性缺陷，適合重復(fù)基因表達(dá) , 可用于 M13 克隆序列測(cè)定和藍(lán)白斑 篩選。用途：分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。DH10B 菌株基因型：F- mcrA (mr-rhsdRMS-mcrBC) 80dlacZ M15 lacX74 endA1 recA1 deoR (ara,leu)7697 araD139 g

10、alU galK n upG rpsL-入The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10B 。host for pUC and other -compalementation vectors; pBR322useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues useful for plasmid rescue proceduresELECTROMAX DH10B T1 CELLS說(shuō)明：DH10B細(xì)

11、胞是高轉(zhuǎn)化效率的E. coli，可以完美應(yīng)用于大多數(shù)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。DH10B 基因型具有以下特點(diǎn)：? lacZ M1 用于重組克隆的藍(lán)/白斑篩選?消除了 mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系統(tǒng)，允許構(gòu)建更多具有代表性 的基因組文庫(kù) (1,2)? endA1 突變，可以增加質(zhì)粒產(chǎn)量和數(shù)量?高效率轉(zhuǎn)化大小為150 kb的質(zhì)粒，用于產(chǎn)生cDNA或基因組文庫(kù)DH10B?可以表達(dá)tonA的基因型，tonA能夠提供對(duì)T1和T5噬菌體感染的抗性 (DH10B? T1R)。DH10B?的基因型：F mcrA (hsdRMS-mcrBC) © 80lacZ M15 lacX74 recAI en dA1 araD139